Kekurangan Klotho Meningkatkan Ungkapan IFN- yang disebabkan oleh Hipoksia / Melalui Penyelarasan RIG-I dalam Buah Pinggang
Mar 25, 2022
Abstrak Hipoksia adalah laluan biasa kepada perkembangan peringkat akhirpenyakit buah pinggang.Gen I(RIG-I) boleh diinduksi asid retinoik mengekodkan helikase RNA yang mengenali virus termasuk SARS-CoV2, yang bertanggungjawab untuk penghasilan interferon (IFN)-a/ untuk mencegah penyebaran jangkitan virus. Baru-baru ini, pengaktifan RIG-l didapati di bawah keadaan hipoksik, dan kekurangan klotho ditunjukkan untuk meningkatkan pengaktifan RIG-I dalam otak tetikus. Walau bagaimanapun, peranan fungsi ini dalam keradangan buah pinggang masih sukar difahami. Di sini, untuk kajian in vitro, ungkapan RIG-I dan IFN-a/ telah diperiksa dalam tikus biasabuah pinggang(NRK)-52Sel E diinkubasi dalam keadaan hipoksik (1 peratus O2). Seterusnya, siRNA yang menyasarkan RIG-I atau siRNA hancur telah ditransfeksi ke dalam sel NRK52E untuk memeriksa ekspresi RIG-I dan IFN-a/ß di bawah keadaan hipoksik. Kami juga menyiasat tahap ekspresi RIG-I dan IFN-a/ dalam 33manusiabuah pinggangsampel biopsi yang didiagnosis dengan nefropati lgA. Untuk kajian Vivo, kami menyebabkan hipoksia buah pinggang dengan mengapit arteri buah pinggang selama 10 minit dalam tikus jenis liar (tikus WT) dan tikus Klotho-knockout (KIT / tikus). Pengeraman di bawah keadaan hipoksia meningkatkan ekspresi RIG-lI dan IFN-a/ dalam sel NRK52E. Upregulation mereka telah dihalang dalam sel NRK52E yang ditransfeksi dengan siRNA yang menyasarkan RIG-I. Pada pesakit dengan nefropati IgA, pewarnaan imunohistokimia sampel biopsi buah pinggang mendedahkan bahawa ekspresi RIG-I berkorelasi dengan IFN-a/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">buah pinggangtikus WT hipoksik dan regulasi selanjutnya diperhatikan dalam tikus hipoksik. Penemuan ini mencadangkan bahawa hipoksia mendorong ekspresi IFN-a/ melalui penyelarasan RIG-I dan kekurangan klotho memperhebat ungkapan yang disebabkan oleh hipoksia ini dalambuah pinggang.
Kata kunci:penyakit buah pinggang; sel buah pinggang; penggantian buah pinggang; kerosakan buah pinggang; buah pinggang
CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN FUNGSI BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
pengenalanKronikpenyakit buah pinggang(CKD)menjejaskan 697.5 juta orang di seluruh dunia pada 2017 [1], jadi ia diiktiraf dengan baik sebagai kebimbangan kesihatan utama. Untuk melambatkan perkembangan CKD, perencat laluan sistem renin-angiotensin-aldosteron (RAAS) digunakan dalam keadaan klinikal [2,3]. Walau bagaimanapun, kesan bermanfaatnya adalah terhad dan ramai pesakit akhirnya memerlukan terapi penggantian buah pinggang [4]. Secara patologi, keradangan kronik dan fibrosis interstisial adalah ciri umum CKD, tanpa mengira penyakit utama [5]. Walaupun faktor pertumbuhan mengubah(TGF)- 1 memainkan peranan penting dalam perkembangan fibrosis interstisial [6-8], kajian terdahulu menunjukkan bahawa penyusupan sel radang bertanggungjawab untuk penghasilan TGF{{12} } [9]. Penemuan ini menunjukkan bahawa keradangan adalah peristiwa hulu fibrosis interstisial, dan keradangan itu adalah sasaran terapeutik calon untuk CKD.
Hipoksia adalah keadaan di mana oksigen tidak mencukupi menjadikannya tisu. Sebagai tindak balas selular kepada hipoksia, faktor yang boleh menyebabkan hipoksia (HIF) memainkan peranan penting dalam mencegah kerosakan tisu [10-12]. Walau bagaimanapun, hipoksia teruk membawa kepada penyakit vaskular akut, seperti strok [13], angina pectoris [14], dan penyakit arteri periferal [15]. Baru-baru ini, telah dilaporkan bahawa hipoksia kronik, seperti apnea tidur, juga menyumbang kepada perkembangan pelbagai penyakit [16]. Mengenaibuah pinggang, hipoksia dilaporkan meningkat dengan perkembangan peringkat CKD dan pada masa ini dianggap patofisiologi biasa yang membawa kepada peringkat akhirpenyakit buah pinggang[17]. Seperti yang dinyatakan di atas, keradangan dianggap sebagai peristiwa huluan, jadi mekanisme hipoksia yang mendorong keradangan harus dijelaskan pada peringkat molekul. Keradangan dicirikan oleh rasa sakit, panas, kemerahan, bengkak, dan kehilangan fungsi[18]. Walau bagaimanapun, ia pada asasnya berfungsi untuk menghapuskan punca awal kecederaan sel dan membersihkan sel nekrotik dan tisu yang rosak. Walau apa pun, keradangan bukanlah tindak balas khusus, dan imuniti semula jadi dianggap terutamanya mengambil bahagian dalam proses awal keradangan melalui pengeluaran interferon (IFN)- / [19]. Antara faktor yang terlibat dalam imuniti semula jadi, gen I (RIG-I) yang boleh diinduksi asid retinoik bertanggungjawab untuk tindak balas imun terhadap jangkitan virus[20. Terutama, kajian baru-baru ini telah menunjukkan bahawa hipoksia mengimbangi ekspresi RIG-I dalam otak dan hati, mengakibatkan pengeluaran IFN- / [21,22]. Walau bagaimanapun, peranan hipoksia dalam ungkapan RIG-I-mediated IFN- / B dalambuah pinggangtetap sukar difahami.
Klotho pertama kali dilaporkan sebagai protein anti-penuaan [23]. Malah, tikus yang kekurangan klotho mempamerkan jangka hayat yang dipendekkan disertai dengan fenotip yang menyerupai penuaan manusia. Sebaliknya, tikus transgenik klotho menunjukkan jangka hayat yang panjang [24]. Dari segi kesan renoprotektif, kekurangan klotho telah didapati meningkatkan kerosakan buah pinggang dalam model eksperimen penyakit buah pinggang, manakala klotho overexpression atau pemberian protein klotho memperbaikinya [25]. Protein Klotho wujud dalam tiga bentuk: membran, dirembes, dan koto intrasel. Antaranya, klotho intraselular dilaporkan menekan ekspresi RIG-I bersama-sama dengan keradangan [26], meningkatkan kemungkinan kekurangan klotho memburukkan regulasi RIG-I dan IFN-/in akibat hipoksia.buah pinggang.Penemuan ini membawa kami membuat hipotesis bahawa ekspresi RIG-I dan IFN- / meningkat di bawah keadaan hipoksik dalam barisan sel sel tubular renal dan bahawa regulasi yang disebabkan oleh hipoksia mereka dipergiatkan dalam tikus klotho-knockout (KI-7 tikus). Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa hipoksia mengimbangi RIG-I serta IFN-a/ dalam tikus biasa.buah pinggangsel (NRK-52E) dan buah pinggang tikus. Kami juga menunjukkan bahawa RIG-I bertanggungjawab ke atas regulasi yang disebabkan oleh hyp-oxia IFN-c/ B. Dalam manusia sebenarbuah pinggangsampel daripada pesakit yang didiagnosis dengan nefropati IgA, ekspresi RIG-I didapati berkorelasi positif dengan IFN- / . Akhir sekali, regulasi RIG-I dan IFN- / yang disebabkan oleh hipoksia dipergiatkan dalam KI-/-tikus. Penemuan ini menunjukkan bahawa kekurangan klotho meningkatkan ekspresi IFN- / yang disebabkan oleh hipoksia melalui penyelarasan RIG-I dalambuah pinggang.
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI KEGAGALAN BUAH PINGGANG/BUAH PINGGANG
Bahan dan kaedah HaiwanTikus C57BL/6J jenis liar(WT) jantan (berumur 8 minggu dan seberat20-25 g) diperoleh daripada Charles River Laboratories Jepun (Yokohama, Jepun). Tikus jantan (berumur 6 minggu dan berat kira-kira 15 g) telah dibeli daripada CLEA Japan, Inc. Tikus tersebut ditempatkan di Institut Sains Haiwan Makmal Universiti Hiroshima (Hiroshima, Jepun), seperti yang diterangkan sebelum ini [27]. Semua eksperimen telah diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Penggunaan Haiwan Institusi Universiti Hiroshima (nombor permit: A19-158 dan 2019-156) dan telah dilaksanakan mengikut Garis Panduan Institut Kesihatan Kebangsaan (NIH) mengenai Penggunaan Haiwan Makmal. WT dan KI-'tikus dibahagikan kepada kumpulan kawalan atau kumpulan hipoksia (n=5dalam setiap kumpulan). Keadaan hipoksik disebabkan oleh pengapitan arteri buah pinggang kiri selama 10 min di bawah bius am (0.3 mg/kg medetomidine, 4 mg/kg midazolam dan 5 mg/kg butorphanol)[28]. Tikus dalam kumpulan kawalan menjalani operasi palsu yang merupakan prosedur yang sama seperti pada tikus dalam kumpulan hipoksia, kecuali kekurangan ligation arteri. Selepas 10 minit hipoksia, tikus telah dimatikan dengan tusukan jantung dan merekabuah pinggangtelah dituai. Hipoksia daripadabuah pinggangtelah disahkan oleh western blotting untuk ekspresi erythropoietin (S1 Fig).
Kultur selTikus biasabuah pinggang(NRK)-52Sel E telah dibeli daripada American Type Culture Col. lection (Manassas, VA, USA). Sel NRK-52E telah dikultur dalam medium RPMI-1640yang mengandungi 10 peratus janin serum lembu (FBS)(Nichirei Bioscience, Tokyo, Jepun) dan penicillin/streptomy-cin (Nacalai Tesque, Kyoto, Jepun). Clls ini telah disemai ke dalam hidangan budaya 10cm. Selepas berkembang menjadi subconfluence, sel-sel telah diinkubasi dalam 1 peratus O2Modular Incubator Chamber (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, Amerika Syarikat) selama 30,60,90, dan 120 minit, Lisat sel keseluruhan disediakan dan tertakluk kepada analisis western blot. Hipoksia sel NRK-52E telah disahkan oleh western blotting untuk ekspresi HIF-1 (S2 Fig).
Pemindahan siRNA RIG-ISel NRK52E telah ditransfeksi dengan 20 nM siRNA yang menyasarkan RIG-I (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) atau siRNA kawalan negatif (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, USA) menggunakan Lipofectamine 2000 Transfection Reagent (Thermoficer Fisher) , mengikut arahan pengilang. Selepas 43-45 h, beberapa sel ini diinkubasi di bawah keadaan hipoksik (1 peratus O,) selama 30 minit untuk menilai RIG-I. Sel-sel lain ditukar kepada medium segar. Selepas 24 jam, sel-sel ini diinkubasi di bawah can-ditions hipoksik(1 peratus O2) selama 60 dan 120 minit untuk mengesahkan penindasan IFN-a/ .Lisat seluruh sel telah disediakan dan tertakluk kepada analisis western blot.
Analisis Western blotPengumpulan sampel dan western blotting telah dilakukan mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini[29]. Antibodi anti-RIG-I monoklonal arnab(#3743S; Teknologi Isyarat Sel, Danvers, MA, Amerika Syarikat), antibodi anti-IFN- 11 poliklonal arnab (bs-7023R; Antibodi Bioss, Woburn, MA, USA), antibodi anti-IFN-poliklonal arnab (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, USA), antibodi anti-RIG-I monoklonal arnab (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, Amerika Syarikat), poliklonal arnab antibodi anti-IFN- 2 (ab193055; Abcam, Cambridge, UK), antibodi poliklonal arnab anti-IFN-(PA5-20390; Invitrogen), antibodi klotho anti-manusia monoklonal tikus(KO603; TransGenic, Fukuoka , Jepun), antibodi anti- -aktin monoklonal tetikus (A5316; Sigma-Aldrich, St.Louis, MO, Amerika Syarikat) dan antibodi anti- -tubulin monoklonal tetikus (T9026; Sigma-Aldrich) telah digunakan sebagai antibodi primer. Imunoglobulin G (Dako, Glostrup, Denmark) kambing terkonjugasi peroksidase lobak pedas dan imunoglobulin G (Dako) anti-tikus kambing digunakan sebagai antibodi sekunder. SuperSignal West Dura dan sistem Pico (Thermo Fisher Scientific) digunakan untuk mengesan isyarat. Keamatan setiap jalur diukur oleh perisian ImageJ (versi 1.47y; Institut Kesihatan Kebangsaan, Bethesda, MD, Amerika Syarikat) dan dinormalkan kepada tahap sama ada -actin atau -tubulin.
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI PENYAKIT BUAH PINGGANG/PINGGANG
Analisis imunohistokimia tisu buah pinggang tikusPewarnaan imunohistokimia dilakukan mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini [27]. Sebagai antibodi utama, produk berikut digunakan: antibodi anti-RIG-I monoklonal arnab(#700366; Invitrogen), antibodi anti-IFN- 2 arnab poliklonal (ab193055; Abcam), antibodi anti-IFN- poliklonal arnab ( PA5-20390; Invitrogen), dan antibodi klotho anti-manusia monoklonal tikus(KO603; TransGenic).RIG-I-,IFN-a/ -, dan kawasan klotho-positif dikira sebagai purata 20 medan yang dipilih secara rawak dengan Perisian ImageJ.
Penyata pengumpulan sampel klinikal dan etikaSpesimen buah pinggang diperoleh melalui biopsi buah pinggang di Hospital Universiti Hiroshima antara Ogos 2014 dan November 2016 daripada 33 pesakit yang didiagnosis dengan nefropati IgA. Kajian ini mematuhi prinsip yang terkandung dalam Deklarasi Helsinki dan telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Universiti Hiroshima(E-1718), Persetujuan termaklum diperoleh dalam bentuk memilih keluar pada tapak web(httns:/inzounaika Hiroshima-uaciplresearchl opt out.html).
Analisis imunohistokimia tisu buah pinggang manusiaImunostaining telah dijalankan mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini [27]. Antibodi utama berikut digunakan: antibodi anti-RIG-I monodonal arnab(#700366; Invitrogen), antibodi anti-IFN monoklonal tikus (sc-373757; Bioteknologi Santa Cruz, Dallas,TX, Amerika Syarikat), dan arnab kawasan antibodi anti-IFN-poliklonal(PA5-20390; Invitrogen), RIG-I-dan IFN-a/ -positif dikira sebagai purata lima medan yang dipilih secara rawak dengan perisian Imej].
Analisis statistikKeputusan dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai (SD). Korelasi dikira menggunakan analisis regresi univariat, Untuk pelbagai perbandingan, kami menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) diikuti dengan ujian-t Pelajar dengan pembetulan Bonferroni. Perbezaan antara kedua-dua kumpulan telah dianalisis dengan ujian-t Pelajar.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Keputusan:Hipoksia mengimbangi RIG-I dan IFN-a/ dalam barisan sel tikus sel epitelium buah pinggangUntuk mengenal pasti kesan hipoksia pada ekspresi RIG-I dan IFN- a/ dalam Vitro, kami melakukan analisis western blot untuk protein ini dalam sel NRK-52E yang dibiakkan di bawah keadaan hipoksik. Tahap protein RIG-I memuncak pada 30 minit dan kemudian menurun secara beransur-ansur dalam sel NRK-52E di bawah rangsangan hipoksik （Rajah 1A）. Tahap IFN- / ß meningkat dan memuncak masing-masing pada 120 dan 60 min, dalam NRK -52Sel E dengan rangsangan hipoksik(Eig 1Band1C). Penghancuran RIG-I mengurangkan ekspresi IFN-a/ dalam sel NRK52E dengan hipoksia Untuk menilai sama ada RIG-I mengambil bahagian dalam ekspresi IFN- / dalam keadaan hipoksik, kami menyiasat ekspresinya dalam sel NRK-52E yang ditransfeksi dengan RIG-I siRNA atau negatif
mengawal siRNA. Mula-mula, kami mengesahkan kesan kejatuhan RIG-siRNA dalam sel NRK-52E. Pembuangan Barat untuk RIG-I mendedahkan bahawa siRNA RIG-I menurunkan kawalan ekspresi RIG-I dalam sel NRK-52E sama ada dengan atau tanpa rangsangan hipoksik(Eig 2A). Kami seterusnya menyiasat peranan pengawalseliaan RIG yang disebabkan oleh hipoksia. -I dalam ungkapan IFN- /B dalam sel NRK-52E menggunakan siRNA RIG-I atau kawalan negatif. RIG-siRNA menyekat ungkapan IFN- / dalam NRK-52Ecells (Eig2Band2C).
RIG-I berkorelasi dengan tahap ekspresi IFN- / dalam spesimen buah pinggang manusia nefropati IgAKami memeriksa sama ada tahap ekspresi RIG-Iis dikaitkan dengan IFN-a/ dalam sampel biopsi buah pinggang yang diperoleh daripada pesakit dengan nefropati IgA (n=33). Ciri klinikal terperinci pesakit ini ditunjukkan dalam Jadual S1. Pewarnaan imunohistokimia untuk RIG-I dan IFN- / mendedahkan ekspresi mereka dalam glomeruli dan tubul renal (Rajah 3A), dan menunjukkan bahawa RIG-I berkorelasi positif dengan IFN-o/ (r=0.57,P<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
Hipoksia tidak mengubah tahap ekspresi klotho dalam WT dan K1-/tikusUntuk menentukan kesan rangsangan hipoksik pada ekspresi klotho dalam vivo, kami menyiasat ekspresinya dalam WT dan K-/tikus dengan atau tanpa 10 minit rangsangan hipoksik. Western blotting dan pewarnaan imunohistokimia mendedahkan bahawa ekspresi klotho tidak berbeza antara tikus WT dengan dan tanpa hipoksia dan ekspresi klotho tidak diperhatikan dalam KIT/tikus tanpa mengira kehadiran atau ketiadaan rangsangan hipoksik (Eig 4Aand4B). Dalam tikus WT, klotho protein telah diwarnai dalam sitoplasma sel tiub (Rajah 4B).Ekspresi RIG-I dipergiatkan di bawah keadaan hipoksik dalam K~tikus.Klotho intraselular dilaporkan memberikan keupayaan untuk menindas keradangan RIG-I-mediated, jadi kami memeriksa tahap ekspresi dan penyetempatan RIG-I dalam hipoksiabuah pinggangdaripada tikus WT dan Kl−/−. Western blotting mendedahkan bahawa ekspresi RIG-I meningkat dalam tikus WT dengan rangsangan hipoksik dan ia dipergiatkan dalam tikus Kl - / - (Rajah 5A). Imunohistokimia menunjukkan bahawa kawasan RIG-I-positif meningkat dalam tikus Kl-/-, yang serupa dengan keputusan yang diperoleh daripada pembongkaran barat (Rajah 5B).
IFN- dikawal di bawah keadaan hipoksik dalam KI--tikusUntuk mengenal pasti kesan hipoksia pada ekspresi-a dalam wvo, kami memeriksa tahap ekspresi dan penyetempatannya dalam WT hipoksik dan KI-tikus. Western blotting mendedahkan bahawa ekspresi IFN meningkat dalam tikus WT dengan rangsangan hipoksik dan ia dikawal lebih lanjut dalam tikus (Rajah 6A). Pewarnaan imunohistokimia juga mendedahkan bahawa kawasan positif IFN- -terutama diperhatikan dalam sel tubular, dan tahap ekspresi IFN- menunjukkan kecenderungan yang sama seperti dalam blotting barat (Rajah 6B).
IFN- meningkat di bawah keadaan hipoksik dalam K1T-/tikusSebagai tambahan kepada IFN-c, kami memeriksa tahap ekspresi dan penyetempatan IFN-Bin hypoxic WT dan tikus. Daripada keputusan penghapusan barat, ekspresi IFN meningkat dalam tikus WT dengan rangsangan hipoksik, manakala peningkatan selanjutnya diperhatikan dalam KIT / tikus (Rajah 7A). Apabila mengukur kawasan positif IFN- -, tahap ekspresi IFN- meningkat dalam KI-/-tikus berbanding dengan tikus WT'(Rajah 7B).
diperhatikan dalam Kl−/− tikus tanpa mengira kehadiran rangsangan hipoksik. Kami menunjukkan bahawa hipoksia buah pinggang meningkatkan ekspresi RIG-I dan IFN- / dan ekspresi mereka dipergiatkan lagi dalam tikus Kl−/−. Penemuan ini mencadangkan bahawa kekurangan klotho memperhebatkan ekspresi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia, mengakibatkan regulasi IFN- / . Kami mengenal pasti bahawa hipoksia yang disebabkan oleh ekspresi RIG-I dan IFN- / dalam kedua-dua kajian in vitro dan in vivo. Untuk menyesuaikan diri dengan keadaan hipoksik, HIF distabilkan dan berfungsi sebagai faktor transkripsi [30]. Dalam kajian terdahulu, dilaporkan bahawa RIG-I terlibat dalam molekul yang boleh diinduksi HIF. Walau bagaimanapun, kami tidak dapat mengenal pasti bahawa RIG-I ialah pengesan hiliran HIF. Sebagai tambahan kepada jangkitan virus, ekspresi RIG-I meningkat di bawah keadaan hipoksik [31]. Walaupun kajian terdahulu melaporkan bahawa hipoksia menjejaskan sel epitelium tiub, sel endothelial, pericytes, fibroblas, sel radang, dan sel progenitor dalam buah pinggang [32,33], kami menunjukkan bahawa regulasi RIG-I terutamanya diperhatikan dalam sel epitelium tiub pada tikus. dengan rangsangan hipoksik, serta pada pesakit dengan nefropati IgA. Oleh kerana tubul renal dianggap sebagai tapak kemasukan patogen transurethral [34], RIG-I mungkin memainkan peranan penting dalam tindak balas imun sel epitelium tiub di bawah keadaan hipoksik. Tindak balas imun semula jadi diaktifkan oleh bukan sahaja mikroorganisma tetapi juga isyarat penggera daripada sel yang rosak, cedera, atau tertekan [35]. Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa ekspresi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia mengambil bahagian dalam pengeluaran IFN- / dalam garis sel tikus tubul renal. Data yang dibentangkan menunjukkan bahawa ekspresi RIG-I berfungsi sebagai sistem imun semula jadi sitosol sebagai tindak balas kepada tekanan hipoksik serta jangkitan virus. Kajian terdahulu menggambarkan bahawa hipoksia meningkat semasa perkembangan CKD tanpa mengira penyakit utama dan hipoksia menyumbang kepada perkembangan kerosakan buah pinggang [17]. Dalam kajian klinikal menggunakan pengimejan resonans magnetik yang bergantung pada tahap pengoksigenan darah, hipoksia buah pinggang bukan sahaja dipergiatkan semasa perkembangan CKD tetapi juga meramalkan perkembangan sedemikian [36]. Oleh itu, hipoksia pada masa ini dianggap sebagai laluan biasa kepada perkembangan peringkat akhirpenyakit buah pinggang, jadi keradangan akibat hipoksia harus menjadi sasaran terapeutik untuk menyekat perkembangan CKD.
Kami menunjukkan bahawa hipoksia mendorong pengeluaran IFN- /, yang dikelaskan sebagai interferon jenis 1. Interferon jenis 1 pada asasnya berfungsi untuk menghalang replikasi virus [37] dan untuk menentang imunosupresi yang disebabkan oleh hipoksia [21,22]. Walau bagaimanapun, kajian yang dilakukan sehingga kini telah melaporkan bahawa interferon jenis 1 membawa kepada pengaktifan sel pembunuh semulajadi, memainkan peranan penting bukan sahaja dalam penyingkiran sel yang dijangkiti virus tetapi juga kerosakan tisu [38]. Malah, kajian terdahulu melaporkan bahawa RIG-I menyumbang kepada keradangan dalam pelbagai organ, seperti paru-paru [39],buah pinggang[40], dan sistem saraf [21]. Dalam kajian ini, kami juga menunjukkan bahawa regulasi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia bertanggungjawab untuk pengeluaran IFN- / . Oleh itu, interferon jenis 1 mungkin berfungsi untuk melindungi daripada jangkitan dalam keadaan hipoksia, tetapi ia akan berbahaya di bawah keadaan yang tidak dijangkiti. Selain itu, kajian terdahulu melaporkan bahawa, sebagai tambahan kepada interferon jenis 1, RIG-I terlibat dalam pengeluaran pelbagai sitokin, seperti IL-1 , IL- 6, dan TNF- [41]. Oleh kerana sitokin ini menyebabkan kerosakan tisu, regulasi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia mungkin mengambil bahagian dalam perkembangan CKD. Kami menunjukkan bahawa kekurangan klotho meningkatkan ekspresi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia, yang disertai dengan penyelarasan IFN- / . Ekspresi Klotho dilaporkan berkurangan dengan penuaan dan perkembangan CKD [42,43]. Oleh itu, ekspresi RIG-I mungkin lebih dikawal selia pada pesakit tua dan CKD di bawah keadaan hipoksia, yang membawa kepada pengeluaran IFN- / . Seperti yang dinyatakan di atas, klotho wujud dalam tiga bentuk-membran, dirembeskan, dan klotho intraselular-dengan yang terakhir bertanggungjawab untuk menindas pengeluaran RIG-I-pengantara sitokin keradangan [26]. Dari segi penyetempatan, kami menunjukkan bahawa ekspresi klotho terutamanya berlaku pada sel tubular renal, dengan bukti bahawa ekspresi RIG-I terutamanya dipergiatkan pada sel tubular renal di bawah keadaan hipoksik. Penemuan ini menunjukkan bahawa tahap penurunan ekspresi klotho menyumbang kepada peningkatan pengeluaran RIG-I-mediated interferon jenis 1 di bawah keadaan hipoksia.
CISTANCHE AKAN MEMPERBAIKI SAKIT BUAH PINGGANG/PINGGANG
Ringkasnya, kami menunjukkan bahawa RIG-I dan IFN- / yang disebabkan oleh rangsangan hipoksik dalam buah pinggang tikus dan garisan sel tikus sel tiub buah pinggang, dan bahawa RIG-I terlibat dalam hipoksia yang disebabkan oleh pengawalseliaan IFN- / in vitro. Dalam sampel biopsi buah pinggang daripada pesakit dengan nefropati IgA, ekspresi RIG-I berkorelasi dengan peningkatan regulasi IFN- / . Akhir sekali, ekspresi RIG-I yang disebabkan oleh hipoksia dipergiatkan dalam tikus klotho-knockout, bersama-sama dengan pengawalseliaan IFN- / . Ekspresi interferon jenis 1 yang dimediasi RIG-I meningkat di bawah keadaan hipoksik, dan penyelarasan selanjutnya diperhatikan dalam keadaan klotho downre gulation. Menurut kajian klinikal, hipoksia bertambah teruk dengan peringkat CKD lanjutan [36] dan meramalkan perkembangan jangka panjang CKD [36]. Selain itu, ekspresi klotho berkurangan dengan penurunan fungsi buah pinggang, dan pengurangan ekspresi klotho dikaitkan dengan kerosakan buah pinggang [44]. Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa kekurangan klotho meningkatkan ekspresi IFN- / yang disebabkan oleh hipoksia melalui pengawalan RIG-I dalam buah pinggang dan bahawa ekspresi RIG-I dikaitkan dengan IFN- / pada pesakit sebenar dengan nefropati IgA. Mengambil penemuan ini bersama-sama, kedua-dua hipoksia dan pengurangan klotho dipromosikan semasa perkembangan CKD, dan oleh itu pengaktifan imuniti semula jadi dipertingkatkan dalam pesakit CKD.
