Kesan Rebusan Jianpi Bushen Yiqi Pada Fungsi Imun dan Persimpangan Neuromuskular dalam Tikus EAMG

2.3 Perbandingan Histomorfologi Timus dan Nodus Limfa dalam Setiap Kumpulan Tikus

Seperti yang ditunjukkan dalamRajah 1, korteks timik dan medula dalamkumpulan kawalan kosongtikus telah ditandakan dengan jelas, dengan sel tersusun teratur. Sebaliknya, yangkumpulan kawalan modelmempamerkan sempadan kortikal-medulla yang tidak jelas dan pengedaran sel yang jarang. Berbanding dengan kumpulan model, tikus dalamkumpulan prednisondankumpulan rebusan Jianpi Bushen Yiqi berdos rendah, sederhana dan tinggimenunjukkan sempadan kortikal-medulla yang agak jelas dan sel yang padat dan teratur.

Rajah 2menunjukkan bahawa sel nodus limfa dalam kumpulan kawalan kosong memaparkan struktur yang lengkap dan susunan yang teratur. Folikel limfoid primer kelihatan di korteks, tanpa folikel sekunder atau pusat germinal. Dalam kumpulan model, struktur selular tidak teratur, dengan folikel primer yang berkembang biak dan folikel sekunder yang boleh dilihat dan pusat germinal. Kumpulan prednisone dan Jianpi Bushen Yiqi mempamerkan hiperplasia folikel limfoid yang berkurangan.

Jadual 3menunjukkan bahawa, berbanding kumpulan kawalan kosong, kumpulan model mempunyai nisbah kawasan korteks-ke-medulla yang dikurangkan dalam timus dan peningkatan pusat germinal dalam nodus limfa (P < 0.05 atau P < 0.01). Berbanding dengan kumpulan model, yangprednisondanJianpi dos tinggi

 

 

 

Rajah 1 Perbandingan morfologi histopatologi tisu timus antara kumpulan tikus yang berlainan (pewarnaan HE)

 

Jadual 3. Perbandingan nisbah kawasan kortikal-medulla thymic dan bilangan pusat germinal nodus limfa dalam setiap kumpulan tikus

Unit: (x̄ ± s)

Kumpulan	n	Nisbah Kawasan Korteks Thymic/Medulla	Nombor Pusat Germinal (setiap LN)
Kawalan Kosong	3	3.62 ± 0.18	0.00 ± 0.00
Kawalan Model	3	1.74 ± 0.11 ᵃ	6.47 ± 1.51 ᵃ
Prednison	3	4.62 ± 1.41 ᵇ ᶜ	3.52 ± 0.35 ᵇ ᶜ
Merebus Dos Rendah	3	2.91 ± 0.42 ᶜ	5.77 ± 0.66 ᶜ
Merebus Dos Sederhana	3	3.41 ± 1.05 ᶜ	4.12 ± 0.25 ᶜ
Merebus Dos Tinggi	3	4.60 ± 0.55 ᵇ ᶜ	3.00 ± 0.71 ᶜ

Nota:

ᵃ: P < 0.01 lwn. Kawalan Kosong

ᵇ: P < 0.05 lwn. Kawalan Model

ᶜ: P < 0.01 lwn. Kawalan Model

Bushen Yiqikumpulan menunjukkan nisbah kawasan korteks-ke-medulla yang lebih tinggi. Semua kumpulan intervensi, termasuk prednison dan ketiga-tiga dos merebus, mengurangkan bilangan pusat germinal dengan ketara (P < 0.01). Berbanding dengan kumpulan prednison, rebusankumpulan dos rendah dan sederhanamasih menunjukkan lebih sedikit pusat germinal, manakalakumpulan dos tinggitidak mempunyai perbezaan yang ketara.

Nota: Anak panah hitam menghala ke folikel limfa, dan anak panah merah menghala ke pusat germinal.

Rajah 2 Perbandingan morfologi histopatologi tisu nodus limfa antara kumpulan tikus yang berlainan (pewarnaan HE)

 

 

 

 

2.4 Perbandingan Peratusan Sel Th1, Th2, Th17, Treg dan Tfh dalam Suspensi Sel Limpa

Seperti yang ditunjukkan dalamJadual 4, berbanding kumpulan kawalan kosong, iaitukumpulan modelmenunjukkan peningkatan peratusan sel Th1, Th2, Th17, dan Tfh, dan peratusan Treg menurun (P < 0.05 atau P < 0.01). Berbanding dengan kumpulan model, yangkumpulan merebus dos sederhana dan tinggitelah mengurangkan peratusan Th1 dan meningkatkan peratusan Treg; ketiga-tiga kumpulan rebusan menunjukkan peratusan Th17 dan Tfh berkurangan. Terutama, yangkumpulan prednisonmengurangkan peratusan Treg, menimbulkan kebimbangan tentang potensinya untuk mengganggu homeostasis imun.

Berbanding dengan kumpulan prednison, semua kumpulan merebus menunjukkan pengurangan dalam sel Th2, Th17, dan Tfh. Thekumpulan dos sederhana dan tinggimengurangkan lagi Th1 dan meningkatkan sel Treg (P < 0.05 atau P < 0.01), menunjukkan immunoregulasi yang lebih seimbang.

 

 

 

Nota: NMJ, persimpangan neuromuskular; AChR, reseptor asetilkolin.

Rajah 3 Perbandingan morfologi AChR pada persimpangan neuromuskular kumpulan otot antara kumpulan tikus yang berbeza
(pewarnaan imunofluoresensi, ×100)

 

Jadual 4. Perbandingan peratusan sel Th1, Th2, Th17, Treg, dan Tfh dalam penggantungan sel limpa antara kumpulan tikus yang berbeza

Unit: (% , x̄ ± s)

Kumpulan	n	Th1	Th2	Th17	Treg	Tfh
Kawalan Kosong	6	0.05 ± 0.04	0.03 ± 0.02	0.11 ± 0.06	16.42 ± 2.59	9.45 ± 3.29
Kawalan Model	7	3.43 ± 1.11 ᵃ	0.82 ± 0.22 ᵃ	1.64 ± 0.65 ᵇ	7.99 ± 3.26 ᵃ	18.27 ± 4.21 ᵃ
Prednison	7	1.84 ± 0.26	0.84 ± 0.47	1.03 ± 0.71	5.02 ± 1.58 ᵃ	15.32 ± 3.84
Merebus Dos Rendah	7	1.42 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.60 ± 0.16 ᶜ ᶠ	0.73 ± 0.24 ᶜ ᶠ	14.97 ± 2.11 ᶠ	10.35 ± 3.72 ᶜ ᶠ
Merebus Dos Sederhana	7	1.08 ± 0.59 ᶜ ᵉ	0.47 ± 0.14 ᶜ ᶠ	0.45 ± 0.20 ᶜ ᶠ	13.82 ± 2.21 ᶠ	9.87 ± 3.65 ᶜ ᶠ
Merebus Dos Tinggi	7	1.23 ± 0.62 ᶜ ᵉ	0.32 ± 0.14 ᶠ	0.34 ± 0.22 ᶜ ᶠ	13.50 ± 2.47 ᶠ	7.97 ± 3.60 ᶜ ᶠ

Nota:

ᵃ: P < 0.01 lwn. Kawalan Kosong

ᵇ: P < 0.05 lwn. Kawalan Kosong

ᶜ: P < 0.01 lwn. Kawalan Model

ᵈ: P < 0.05 lwn. Kawalan Model

ᵉ: P <0.05 lwn Prednisone

ᶠ: P <0.01 lwn Prednisone

 

 

2.5 Perbandingan Morfologi AChR di NMJ dalam Setiap Kumpulan Otot

Rajah 3menunjukkan bahawa NMJ AChRs dalam kumpulan kawalan kosong secara struktur utuh dan kelihatan sebagai formasi seperti pretzel yang padat. Dalam kumpulan model, NMJ dalam otot anterior okular, sternokleidomastoid, deltoid, dan tibialis kelihatan berpecah-belah dan cacat, manakala otot pengunyahan, interkostal dan diafragma memaparkan struktur yang sangat terganggu. Semua kumpulan intervensi mempamerkan pelbagai tahap peningkatan dalam morfologi AChR.

Seperti yang ditunjukkan dalamJadual 5, berbanding kumpulan kawalan kosong, kumpulan model telah mengurangkan nisbah kawasan AChR dengan ketara dalam berbilang otot (P < 0.05 atau P < 0.01). Berbanding dengan kumpulan model, yangprednisondanmerebus dos sederhanakumpulan menunjukkan peningkatan kawasan AChR dalam otot okular. Thekumpulan merebus dos rendahkawasan AChR yang lebih baik di deltoid dan tibialis anterior. Thekumpulan dos tinggikawasan AChR yang lebih baik dalam otot anterior okular, sternokleidomastoid, deltoid dan tibialis.

Berbanding dengan prednison,kumpulan dos rendahkawasan AChR yang lebih baik dalam otot okular dan pengunyahan; yangkumpulan dos sederhanadalam otot mengunyah; dankumpulan dos tinggidalam sternokleidomastoid dan tibialis anterior (P < 0.05 atau P < 0.01).

Jadual 5. Perbandingan kawasan AChR di persimpangan neuromuskular dalam setiap kumpulan kumpulan otot tikus

Unit: (% , x̄ ± s)

Kumpulan	n	Otot Okular	Otot Masticatory	Sternocleidomastoid	Otot Deltoid	Otot Intercostal	Diafragma	Tibialis Anterior
Kawalan Kosong	3	3.83 ± 0.28	4.28 ± 0.29	4.48 ± 0.77	3.79 ± 0.12	3.78 ± 0.22	4.80 ± 0.26	3.60 ± 0.32
Kawalan Model	3	2.58 ± 0.34 ᵃ	2.55 ± 0.45 ᵃ	2.15 ± 0.31 ᵇ	2.33 ± 0.15	2.55 ± 0.33	2.98 ± 0.34ᵇ	2.95 ± 0.49
Prednison	3	3.33 ± 0.49ᶜ	2.67 ± 0.55	3.83 ± 0.54	3.49 ± 0.38	3.60 ± 0.16	3.45 ± 0.67	3.02 ± 0.40
Merebus Dos Rendah	3	2.76 ± 0.49ᵉ	3.05 ± 0.37ᵉ	3.77 ± 0.64	2.77 ± 0.44ᶜ	3.03 ± 0.25	3.33 ± 0.33	3.44 ± 0.71ᶜ
Merebus Dos Sederhana	3	3.32 ± 0.40ᶜ	3.27 ± 0.75ᵉ	3.98 ± 0.43	3.27 ± 0.65	3.50 ± 0.28	3.85 ± 0.42	3.56 ± 0.52
Merebus Dos Tinggi	3	3.46 ± 0.37ᶜ	3.34 ± 0.23ᵉ	4.54 ± 0.67ᶜ	3.69 ± 0.39	3.75 ± 0.36	3.75 ± 0.35	3.84 ± 0.52ᶜ

Nota:

ᵃ: P < 0.05 lwn. Kawalan Kosong

ᵇ: P < 0.01 lwn. Kawalan Kosong

ᶜ: P < 0.05 lwn. Kawalan Model

ᵈ: P < 0.01 lwn. Kawalan Model

ᵉ: P <0.05 lwn Prednisone

 

Jadual 6. Perbandingan tahap serum AChR-Ab, IL-6, dan TNF- antara kumpulan tikus yang berbeza

Unit: (x̄ ± s)

Kumpulan	n	AChR-Ab (P⁻¹)	IL-6 (pg·ml⁻¹)	TNF- (pg·ml⁻¹)
Kawalan Kosong	12	1.00 ± 0.13	110.66 ± 30.75	25.84 ± 9.71
Kawalan Model	12	3.13 ± 0.97 ᵃ	327.91 ± 38.71 ᵃ	124.15 ± 37.61 ᵃ
Prednison	11	2.05 ± 0.29 ᵇ ᶜ	487.21 ± 124.09 ᵇ	78.76 ± 22.35 ᵇ ᶜ
Merebus Dos Rendah	13	2.50 ± 0.49ᵉ	306.42 ± 93.91ᶜ	89.14 ± 25.90 ᶜ
Merebus Dos Sederhana	13	1.98 ± 0.34 ᶜ	278.60 ± 63.97ᶜ	80.36 ± 21.95ᶜ
Merebus Dos Tinggi	13	1.42 ± 0.33 ᶜ	224.43 ± 49.03ᶜ	84.26 ± 36.60ᶜ

Nota:

ᵃ: P < 0.01 lwn. Kawalan Kosong

ᵇ: P < 0.01 lwn. Kawalan Model

ᶜ: P < 0.01 lwn. Kawalan Model

ᵈ: P <0.05 lwn Prednisone

ᵉ: P <0.01 lwn Prednisone

2.6 Perbandingan Tahap Serum AChR-Ab, IL-6 dan TNF-

Jadual 6menggambarkan bahawa, berbanding kumpulan kawalan kosong, kumpulankumpulan modelmempunyai tahap AChR-Ab, IL-6 dan TNF- (P < 0.01). Berbanding dengan kumpulan model, yangprednisondankumpulan merebus dos sederhana dan tinggiAChR-Ab berkurangan dengan ketara. Walau bagaimanapun,prednison meningkat IL-6, manakalakumpulan merebus dos tinggi menurun IL-6. Kedua-dua prednison dankumpulan dos sederhana dan tinggimengurangkan TNF- (P < 0.05 atau P < 0.01).

Berbanding dengan prednison,kumpulan merebus dos rendahmempunyai tahap AChR-Ab yang lebih tinggi, tetapisemua kumpulan rebusanmenurunkan IL-6, mengelakkan kesan pro-radang prednison.

3. Perbincangan

Secara klinikal, MG dikategorikan kepada myasthenia gravis okular (oMG) dan MG umum (gMG). oMG terutamanya menjelma sebagai ptosis dan diplopia, dan boleh berkembang menjadi gMG, dicirikan oleh kelemahan otot rangka sistemik [1]. Teori Perubatan Cina Tradisional (TCM) mengaitkan patogenesis MG kepada disfungsi dalamlimpa dan buah pinggang. Limpa mengawal otot dan anggota badan, menjadi akar selepas bersalin dan sumber Qi dan darah. Buah pinggang menyimpan intipati dan mengawal tulang dan sumsum. Kekurangan dalam kedua-duanya membawa kepada kelemahan otot, seperti yang dilihat dalam MG [15-16].

Berdasarkan prinsip TCM "merawat akar,"mengencangkan limpa dan buah pinggangmenjadi pusat. TheAir Rebusan Jianpi Bushen Yiqimerangkumi pendekatan ini. Bahan utamanya,Astragalus membranaceus, meningkatkan Qi limpa dan mengangkat Yang.Gam tempurung kura-kuradangam tanduk rusamemperkayakan intipati buah pinggang dan yang, menguatkan otot dan tulang.Kodonopsis, Angelica sinensis, Bupleurum, Cimicifuga, danlicorice goreng madubekerja secara sinergi untuk menyuburkan darah, menaikkan Yang, dan mengharmonikan formula.

Tambahan utama kepada formulasi ini ialahCistanche deserticola, herba yang terkenal untuktonifying buah pinggang yang dan menambah pati penting. Cistanche telah ditunjukkan untuk meningkatkan modulasi imun dan meningkatkan rintangan keletihan, menjadikannya sesuai untuk keadaan seperti MG. Menurut XJCistanche, ekstrak Cistanche menyokongkecergasan saraf dan otot, mempromosikankeseimbangan neurotransmitter, dan bertambah baikhomeostasis imun-mekanisme yang berkaitan secara langsung dengan patofisiologi MG.

Kajian ini menggunakan model tetikus EAMG untuk menilai kesan merebus merentas dimensi tingkah laku, imun dan struktur NMJ. Keputusan menunjukkan bahawaprednisonmeningkatkan kekuatan cengkaman dan skor Lennon tetapi menyebabkan ketarapenurunan berat badan, konsisten dengan kesan sampingan glukokortikoid yang diketahui [19]. Sebaliknya, semua dos merebusberat badan bertambah, menunjukkan keselamatan yang lebih baik.

Keberkesanan terapeutik adalahbergantung kepada dos, dengankumpulan dos tinggimencapai peningkatan yang setanding dalam kekuatan cengkaman dan skor Lennon dengan tawaran prednison kedua-duanyakeberkesanan dan keselamatan.

Indeks organ imun mendedahkan bahawa prednison mengurangkan indeks timus dan menyebabkan atrofi kortikal-medullary, menjejaskan toleransi pusat [20]. Rebusan itu, bagaimanapun, mengekalkan atau memperbaiki struktur thymic, terutamanya pada dos yang tinggi. Indeks limpa diikuti acorak peraturan dwifasa, dengan dos rendah dan sederhana menyekat percambahan imun yang tidak normal, manakala dos tinggi mengekalkan keseimbangan.

Semua kumpulan merebus mengurangkan hiperplasia folikel nodus limfa, walaupun hanya dos tinggi yang sepadan dengan prednison dalam penindasan pusat germinal, mencadangkan peraturan unggul dos tinggi terhadap imuniti pusat dan periferi.

Oleh kerana ketidakseimbangan sel CD4⁺ T mendasari EAMG [4], keupayaan merebus untukmengimbangi semula Th1/Th2/Th17/Tfh dan Tregsel adalah penting. Tidak seperti prednison, yang mengurangkan Treg, merebus (terutamanya dos sederhana dan tinggi)dipertingkatkan Tregdan menindas subset pro-radang. inimodulasi imun, bukannya penindasan imun, lebih sejajar dengan keperluan penyakit autoimun seperti MG.

Untuk integriti NMJ, rebusan ditunjukkanpembaikan AChR berbilang otot, mengatasi prestasi prednison dalam beberapa kumpulan otot. Lebih-lebih lagi, ia dikurangkan dengan berkesanAChR-Ab, IL-6 dan TNF-, dengan dos tinggi yang menunjukkan kesan anti-radang yang paling komprehensif-tanpa ketinggian IL-6 prednison.

 

Kesimpulan

TheAir Rebusan Jianpi Bushen Yiqi, diperkaya denganCistanche deserticola, memberikan kesan terapeutik berbilang sasaran dalam tikus EAMG. Ia:

Mengimbangi semula paksi Th/Treg dan menyekat pengaktifan sel B pengantaraan Tfh

Mengurangkan antibodi patogen dan sitokin radang

Membaiki struktur NMJ dan memulihkan fungsi otot

Berbanding dengan prednison, ia menawarkan unggulkeselamatan, pemulihan imun, dansasaran pelbagai otot, menonjolkan potensinya sebagai aalternatif klinikalatauterapi tambahanuntuk MG.

Kajian masa depan harus menerokanyasebatian bioaktif, laluan metabolik, dansasaran molekul, mungkin melaluifarmakologi rangkaiandanproteomik, untuk mempercepatkan perkembangannya sebagai terapeutik berasaskan TCM novel.