Penggalak Intramuskular Dengan HIFN-Alpha 2b Meningkatkan Perlindungan Terdorong BCGphipps dalam Model Kusta Murine

Abstrak:

Kekebalan hos kepada Mycobacterium leprae merangkumi spektrum mekanisme yang terdiri daripada perlindungan yang didorong oleh imuniti selular kepada kerosakan yang berkaitan dengan imuniti humoral seperti dalam jenis-2 tindak balas kusta. Walaupun interferon jenis I (IFN) mengambil bahagian dalam menghapuskan patogen intraselular, sumbangan mereka kepada pengeluaran antibodi dan CD3 ditambah FOXP3 serta sel T pengawalseliaan (Tregs) dalam perlindungan pengantaraan vaksin BCG dalam kusta tidak diketahui. Penyebuan BCGphipps (BCGph) diikuti oleh rangsangan hIFN- 2b intramuskular mengurangkan saiz lesi dan pertumbuhan Mycobacterium lepraemurium dalam kulit dengan ketara. Sel pengawalseliaan folikular T (TFR), subset Treg yang disebabkan oleh imunisasi atau jangkitan, berada di pusat germinal (GC) dan memodulasi pengeluaran antibodi.

Kami mendapati induksi Treg terjejas dan GC yang dipertingkatkan dalam menyalirkan nodus limfa BCGph primed dan hIFN- 2b tikus yang dirangsang. Selain itu, tikus ini menimbulkan sejumlah besar IL-4 dan IL-10 dalam serum. Oleh itu, keputusan kami menyokong sifat adjuvant hIFN- 2b dalam konteks penyebuan BCGph untuk meningkatkan imuniti perlindungan terhadap kusta kulit.

Imuniti perlindungan merujuk kepada keupayaan tubuh untuk mempertahankan diri daripada patogen berjangkit dengan menghasilkan antibodi, sel T, dan lain-lain, dan merupakan salah satu mekanisme penting untuk tubuh menentang penyakit. Kekebalan merujuk kepada keupayaan badan untuk mengenali dan bertindak balas terhadap pelbagai bahan asing (termasuk patogen, badan asing, sel tumor, dll.), termasuk imuniti selular dan imuniti humoral. Kekebalan pelindung adalah sebahagian daripada imuniti, dan kedua-duanya berkait rapat. Imuniti yang baik boleh menggalakkan peningkatan imuniti pelindung, untuk lebih mencegah berlakunya penyakit. Pada masa yang sama, peningkatan imuniti pelindung juga boleh meningkatkan imuniti, membolehkan tubuh menghadapi pelbagai cabaran luaran dengan lebih baik. Oleh itu, mengekalkan sistem imun yang sihat, termasuk imuniti pelindung yang baik, adalah sangat penting untuk mengekalkan kesihatan yang baik. Dari sudut pandangan ini, imuniti juga sangat penting. Jika kita ingin meningkatkan imuniti kita, Cistanche boleh meningkatkan imuniti manusia dengan ketara. Polisakarida dalam Cistanche boleh mengawal tindak balas imun sistem imun manusia dan meningkatkan sel imun. Keupayaan tekanan, meningkatkan kesan bakteria sel imun.

Klik manfaat kesihatan cistanche

Kata kunci:

Mycobacterium lepraemurium; kusta murine; interferon alfa; BCGphipps; pusat germinal; sel T pengawalseliaan.

1. Pengenalan

Mycobacterium leprae dan Mycobacterium lepromatosis, agen etiologi kusta manusia [1,2], menjejaskan kulit dan saraf periferal [3]. Walaupun rawatan pelbagai ubat (MDT) untuk kusta tersedia, bilangan kes baharu kekal stabil (700,000 setahun).

Tambahan pula, kekurangan prosedur diagnostik yang berkesan menjadikan pengesanan penghantaran M. leprae sukar [4–7]. Kecenderungan genetik kepada kusta awal [8] menekankan keperluan untuk diagnosis yang sesuai dan pembangunan imunoterapi kos rendah untuk mengurangkan kejadian kusta di negara maju [9,10]. Spektrum manifestasi klinikal dalam kusta berkorelasi dengan jenis tindak balas imun yang ditimbulkan. Sebagai contoh, kusta tuberkuloid (TT), dicirikan oleh tindak balas Th1 yang dominan, menyekat pertumbuhan basil melalui pengaktifan fungsi mikrobisida makrofaj yang didorong oleh IFN. Sebaliknya, pengeluaran sitokin Th2 klasik (IL-4 dan IL-10) telah dikaitkan dengan kehilangan perlindungan dan peningkatan pertumbuhan basil dalam kusta lepromatous tersebar (LL) [10]. Terdapat juga subtipe perantaraan yang mewakili campuran tindak balas Th1 dan Th2 [10].

Jangkitan tikus dengan M. lepraemurium (MLM) [11,12] telah digunakan untuk mengkaji mekanisme imunologi kusta manusia [11-13], walaupun MLM tidak menunjukkan tropisme untuk saraf periferal [11,13] sebagai M. leprae adakah [14]. Walau bagaimanapun, kedua-dua mikobakteria tidak boleh ditanam dan tumbuh perlahan dalam perumah, menggandakan bilangannya dalam 1-3 minggu.

Jangkitan subkutaneus eksperimen dengan dos kecil bakteria rapat meniru penyakit semula jadi yang biasanya berlaku apabila gangguan halangan memudahkan penjajahan mikobakteria, mencetuskan tindak balas imun pada tahap periferal [13,15-17]. Walaupun imuniti pengantaraan sel (CMI) terjejas, imuniti humoral secara praktikalnya tidak terjejas dalam kusta manusia dan murine [18]. Selain itu, sel Th1- atau Th2-, limfosit T lain, membentuk imuniti perumah kepada jangkitan M. leprae [18,19].

Sungguh menarik bagaimana M. leprae mempengaruhi imuniti perumah dalam pelbagai subjenis penyakit mikobakteria. Satu hipotesis ialah patogen merendahkan imuniti humoral dan selular perumah untuk menjangkiti kulit dan saraf periferi [3,14,15]. Terdapat juga bukti bahawa bacillus menjejaskan pengaktifan makrofaj. Ia juga mengurangkan ekspresi TNF-alfa dan molekul seperti prostaglandin yang mendorong pengeluaran IL-1 dan oksigen reaktif dan perantaraan nitrogen (ROI dan RNI), kritikal dalam fungsi mikobakterisida makrofaj [20–22].

Tindak balas humoral yang dihasilkan dalam GC tisu limfoid sekunder dan tertiari mengambil bahagian dalam imuniti perlindungan terhadap patogen [23-26]. Laporan terbaru mengenai kusta menyerlahkan peranan kritikal Tregs dalam perencatan tindak balas sel Th1 dan Th17 [19]. Sesungguhnya, keseimbangan antara subset sel T ini di GC [27-29] menentukan hasil perlindungan atau patologi penyakit berjangkit dan autoimun [30,31] dan penting untuk pembangunan terapi untuk mendorong imuniti perlindungan [26,27]. ].

Khususnya, sel folikel pembantu T (TFH) dan terutamanya sel pengawalseliaan folikel T (TFR) memodulasi tindak balas GC untuk mendorong tindak balas imun humoral yang tahan lama sambil menghalang pengeluaran autoantibodi [32,33]. Memandangkan IFN jenis I dikaitkan dengan penjanaan kedua-dua TFH dan Tregs, ia muncul sebagai pembantu yang menjanjikan untuk merangsang tindak balas TFH dalam GC dalam konteks vaksinasi BCG [34].

Pentadbiran mukosa jenis IFNs mendorong kematangan sel dendritik dan penjanaan CXCR5 ditambah CD4 ditambah TFH, memudahkan pembangunan GC dan pengeluaran antibodi afiniti tinggi dalam nodus limfa [34]. Sebaliknya, IFN jenis I membatalkan imuniti perumah dalam tuberkulosis manusia dengan menghalang pengeluaran sintase nitrik oksida (iNOS), IL-12p40, IL-1A dan IL-1 yang boleh diinduksi sambil mendorong IL-10 dan antagonis IL-1R [35–38]. Oleh itu, penyertaan IFN jenis I adalah bergantung kepada konteks [38-42]. IFN Jenis I dihasilkan pada tahap yang stabil, tetapi apabila patogen intraselular menyerang perumah, beberapa tindak balas semula jadi anti-virus atau anti-bakteria yang heterogen dan kompleks didorong [43-48], termasuk penukaran kelas antibodi, hipermutasi somatik dan peningkatan. ketersediaan antigen dalam GC yang akan membawa kepada tindak balas antibodi yang kuat dan berkesan [34,49].

Kami sebelum ini melaporkan perlindungan yang diberikan oleh peningkatan IFN intramuskular berturut-turut pada tikus yang divaksin dengan Mycobacterium bovis BCG dan dicabar dengan MLM [42] atau terhadap cabaran M. tuberkulosis aerosol [41]. Pada tikus yang dicabar dengan MLM, perlindungan dikaitkan dengan peningkatan pengeluaran antibodi iNOS, nitrik oksida dan IgG3 [42]. Dalam konteks cabaran M. tuberkulosis, tikus yang dilindungi menimbulkan tindak balas Th1 [41].

Dalam kajian yang lebih baru, jenis IFNs memodulasi autophagy dan metabolisme dalam kusta [50]. Kami memutuskan dalam kajian ini untuk menyiasat lebih lanjut perlindungan terhadap kusta murine yang disebabkan oleh vaksinasi dengan M. bovis BCGphipps (BCGph) dan persembahan farmaseutikal IFN manusia- 2b [51]. Dalam kajian terbaru, BCG rekombinan yang menyatakan IFN{3}}b manusia telah digunakan untuk berjaya merawat kanser pundi kencing [51–55]. Selaras dengan data ini, matlamat kami dalam kajian ini adalah untuk menganalisis perlindungan yang disebabkan oleh penyebuan BCGph dan rangsangan hIFN- 2b dalam model kusta murine. Secara keseluruhannya, keputusan kami membayangkan potensi penyebuan subkutaneus BCGph dan rangsangan hIFN- 2b intramuskular untuk mendorong imuniti perlindungan terhadap kusta manusia.

2. Bahan dan Kaedah

2.1. Haiwan

Tikus Balb/c bebas patogen tertentu telah dibiakkan dan ditempatkan di kemudahan Haiwan di Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional di Mexico City.

Semua eksperimen haiwan telah dilakukan selepas kelulusan (07 Mac 2014) oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Pengurusan Haiwan Institusi (CIE-ENCB ZOO 016/2014).

2.2. Mikroorganisma

Strain BCG Phipps (ATCC® 35744™) (BCGph) ialah varian daripada strain BCG yang telah kehilangan rantau RD1 yang mengekodkan ESAT-6 dan CFP10, dengan bilangan epitop sel T yang paling rendah , 316, berbanding BCG Tokyo, 359, dan BCG Pasteur, 331, (Zhang et al., 2013) [51] dan disediakan oleh Dr. Hernández-Pando (INCMNSZ, Mexico City, MX). Penggantungan vaksin kemudiannya disimpan pada –80 ◦C sehingga digunakan. Mycobacterium lepraemurium (MLM) strain tidak boleh ditanam telah diasingkan daripada limpa tikus yang mempunyai jangkitan empat bulan melalui prosedur yang diterangkan oleh Prabhakaran et al., 1976 [56], diikuti dengan pemurnian menggunakan prosedur pengasingan peribadi yang diterangkan oleh Draper P. , 1980 [57]. Secara ringkas, 4 g tisu splenik digantung dalam 20 mL sukrosa 0.2 M dan dikisar dalam penghomogen jenis Potter-Elvehjem kaca. Suspensi yang terhasil telah disentrifugasi selama 20 minit pada 150 × g untuk mengeluarkan serpihan sel (Sorvall RV5B, rotor HB4) (Sorvall Instruments, Wilmington, DE, USA). Kemudian, 9 mL supernatan telah ditindih pada 12 mL sukrosa 0.3 M, dan tiub telah disentrifugasi pada 3500 × g selama 10 minit pada 4-10 ◦C (Sorvall RC5B). Pelet kaya bacilli yang terhasil telah digantung semula dalam 20 mL sukrosa 0.2 M, dan 9 mL aliquot ditindih pada 12 mL 1.5 M KCl.

Kemudian, tiub itu diempar pada 4 ◦C selama 10 min pada 3500× g. Baksil dikumpulkan, dibasuh tiga kali dengan fosfat-buffered-saline (PBS) (0.01 M Na/K fosfat, 0.15 M NaCl, pH 7.4), dan digantung semula dalam 40 mL larutan yang mengandungi campuran Percoll (3 bahagian) dan 0.1 peratus Tween 80 (7 bahagian). Penggantungan telah diempar pada 23,000× g. Pelet bacillary dikumpul dan dibasuh lima kali dengan PBS sehingga menghilangkan Percoll. Ketulenan penyediaan bacillary telah disahkan oleh pewarnaan Ziehl-Neelsen. Suspensi bacillary yang telah dimurnikan telah disediakan dalam medium brothOADC 7H9 Middlebrook sintetik (DIFCO, Detroit, MI, USA) (7H9-medium OADC) dan dikira melalui lengkung rujukan nephelometric yang disediakan dengan kuantiti bakteria yang diketahui. Suspensi bacillary telah diasingkan dan dibekukan pada −20 ◦C, sehingga sedia untuk digunakan.

2.3. Imunisasi

Kumpulan tikus Balb/c (n=6) berumur lapan minggu telah diimunisasi secara subkutan dengan 8 × 103 unit pembentuk koloni (CFU) BCGphipps dalam 200 µL PBS steril. Sebulan kemudian, setiap kumpulan tikus dirangsang secara intramuskular selama tiga hari berturut-turut (30, 31, dan 32 hari selepas vaksinasi) dengan 100 µL PBS atau dengan 100, 200 atau 300 unit antarabangsa (IU) hIFN{{14} }b (Urifron, Probiomed, Azcapotzalco, Mexico City, Mexico).

2.4. Cabaran M. lepraemurium

Untuk eksperimen cabaran, tikus telah diinokulasi secara intradermal dengan 2 × 106 MLM berdaya maju dalam 20 μL PBS. Kemudian, tikus ditempatkan dalam keadaan standard dan dibekalkan dengan air yang disucikan dan kerepek tikus tikus Purina (Cauutitlan Izcalli, Mexico) secara ad libitum. Tikus yang dijangkiti dipantau selama lapan minggu, titik masa apabila lesi jelas pada kulit haiwan yang dijangkiti. Perkembangan penyakit adalah berubah-ubah pada tikus dan dikaitkan dengan terapi eksperimen (PBS, BCGph atau hIFN- 2b).

2.5. Ujian Imunosorben Berkaitan Enzim (ELISA)

Antibodi dalam sera tikus yang dijangkiti MLM diukur dengan ujian imunosorben berkaitan enzim tidak langsung (ELISA). Secara ringkasnya, 96-plat perigi (Nunc, Rochester, NY, USA) disalut semalaman pada suhu 4 ◦C, dengan 1.0 µg peptidoglycolipids dilarutkan dalam etanol [38]. Selepas penyejatan etanol pada suhu bilik [37], pengikatan tidak spesifik telah disekat dengan 3 peratus susu bukan lemak dalam PBS dari 2 hingga 3 jam. Selepas membuang larutan penyekat, 0.1 mL sera yang dicairkan (1:100) dalam 1 peratus susu tanpa lemak dalam PBS telah ditambah ke dalam telaga dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 ◦C.

Kemudian, plat dibasuh secara meluas dengan PBS dan antibodi terikat dikesan dengan {{0}}.1 mL anti-tikus IgG (1:4000, BD 550487, BD Pharmingen, San Diego, CA, USA), IgG1-HRP (1:2500, ab 97240, Abcam, Cambridge, MA, USA), IgG2a-HRP (1:2500, ab97245, Abcam), IgG2b-HRP (1: 2500, ab97250, Abcam), atau IgG3-HRP (1:2500, ab97260, Abcam), atau antibodi monoklonal IgA anti-tikus terkonjugasi biotin (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen), diikuti dengan lobak pedas peroksidase (HRP)-tikus konjugasi anti-tikus antibodi Ig (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen) atau avidin-HRP (ab 59653, abcam) Substrat kromogenik, tetrametil-benzidin dalam 0.05 M sitrat-penampan fosfat 5.2), ditambah dengan 0.01 peratus hidrogen peroksida (H2O2), telah ditambah ke dalam telaga untuk pembangunan warna. Tindak balas dihentikan dengan 1 M H3PO4. Ketumpatan optik diukur pada 450 nm dalam pembaca ELISA microplate (LabSystems Multiskan Plus, LabX, Midland, ON, Kanada). IFN-, IL-4, IL-17, IL-6, TNF- dan IL-10 diukur dalam serum dengan kit ELISA sandwic khusus (PEPROTEC Inc., Cranbury , NJ, Amerika Syarikat). mengikut arahan pengeluar.

2.6. Pengukuran NO dalam Sera Tikus

Secara ringkas, sera telah dirawat dengan etanol (1:1) untuk memendakan protein dan faktor pengganggu yang lain. Selepas sentrifugasi pada 3000 rpm selama 20 minit, 20 µL serum yang diperolehi dimasukkan ke dalam telaga plat ELISA bersama-sama dengan 100 µL reagen Griess, dan 80 µL air suling. Reagen Griess ialah campuran isipadu kepada isipadu larutan A (2 peratus sulfanilamide dalam 5 peratus asid fosforik) dan larutan B (0.1 peratus N-(1-}naphthyl) ethylenediamine, dihydrochloride. Selepas pengeraman selama 30 minit pada 25◦ C, warna merah jambu yang dibangunkan telah didaftarkan dalam pembaca ELISA pada 595 nm. Nilai telah diekstrapolasi kepada lengkung standard natrium nitrit dalam julat 1–100 µM.

2.7. Imunofluoresensi

Antibodi utama diperoleh daripada syarikat berikut: Anti-iNOS kambing (klon M-19, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), Anti-nitrotyrosine Arnab (AB 5411, EMD, Millipore, Burlington, MA, AS ), tikus biotin Ly6C/Ly6G (klon RB6-8C5, BD Pharmingen), epsilon anti-CD3 kambing (Klon M-20, Santa Cruz Bioteknologi), antitikus tikus FoxP3 (klon FJK{{12} }s, eBioscience, San Diego, CA, USA), antigen nuklear sel anti-proliferasi kambing (klon C-20, Bioteknologi Santa Cruz), FITC-peanut agglutinin (L7381- 1MG, SIGMA, St Louis, MO, Amerika Syarikat) dan APC-rat anti-tikus CD45R (klon RA3-6B2, BD Pharmingen).

Antibodi utama telah didedahkan dengan antibodi sekunder berikut: Alexa Fluor 568 keldai anti-kambing IgG (A11057, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Amerika Syarikat), Alexa Fluor 488 keldai anti-arnab IgG (711-546, Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove, PA, USA) dan Alexa Fluor 680 streptavidin (S32358, Thermo Fisher Scientific).

Bahagian parafin tetap formalin lima µm diinkubasi pada suhu 6{11}} ◦C semalaman untuk penyahparafinan. Bahagian tisu segera dipindahkan ke xilena (247642-2.5L, SIGMA) dan dihidratkan dengan merendam slaid secara berurutan ke dalam alkohol mutlak, 96 peratus alkohol, 70 peratus alkohol dan air. Slaid direndam dalam larutan pengambilan antigen, direbus selama 30 minit, dan disejukkan selama 10 minit pada suhu bilik (RT). Slaid dibilas beberapa kali dalam air dan dipindahkan ke PBS. Pengikatan tidak spesifik telah disekat dengan 5 peratus serum keldai biasa dalam PBS yang mengandungi 0.1 peratus Tween 20 dan 0.1 peratus Triton-X-100, selama 30 minit di RT dalam ruang lembap. Antibodi utama telah ditambahkan pada slaid dan diinkubasi semalaman di dalam ruang lembap di RT. Slaid dibasuh perlahan-lahan dalam PBS, dan antibodi sekunder berlabel pendarfluor diinkubasi selama 2 jam, di RT, atau semalaman di dalam ruang lembap.

Akhirnya, slaid dibilas selama 1 jam dalam PBS dan dipasang dengan media pelekap antiludar Vectashield dengan DAPI (H-1200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Gambar diambil dengan mikroskop Zeiss Axioplan. Semua pusat germinal (GC) dalam bahagian nodus limfa diukur dengan alat automatik mikroskop Carl Zeiss, dan purata saiz GC dikira menggunakan perisian Prism. CD3 ditambah FoxP3 ditambah Treg dikira dalam 5 medan rawak 200 × setiap tisu untuk mengira purata bilangan sel positif setiap medan.

2.8. Analisis statistik

Perbezaan ketara secara statistik antara kumpulan telah dikira dengan ANOVA sehala, perbandingan berbilang Newman–Keuls, ujian-t Pelajar dua ekor tidak berpasangan/dua ekor dan nilai P < 0.05 dianggap sebagai signifikan secara statistik. Perbezaan statistik dikira dengan Graph Pad Prism.

3. Keputusan

3.1. BCGphipps (BCGph)-Priming Diikuti oleh Intramuskular hIFN- 2b Boosting Berturut-turut Melindungi Balb/c Tikus daripada Cabaran Intradermal dengan M. lepraemurium.

Kami sebelum ini membangunkan protokol rangsangan utama berdasarkan peningkatan intramuskular berturut-turut IFN selepas vaksinasi BCG tikus [42] dengan hasil perlindungan yang menjanjikan. Kajian terbaru menggunakan rekombinan BCG yang menyatakan IFN- 2b manusia untuk merawat kanser pundi kencing [51,53]. Oleh itu, dalam kajian ini, matlamat kami adalah untuk menganalisis perlindungan yang disebabkan oleh penyebuan BCGph diikuti oleh rangsangan hIFN- 2b dalam model kusta murine, mengikut skema yang digambarkan dalam Rajah 1.

Rajah 1. Protokol Prime-boost untuk menilai perlindungan tikus terhadap cabaran intradermal dengan M. lepraemurium. Kumpulan tikus Balb/c (n=6) telah divaksinasi secara subkutan dengan dos rendah BCGph (8 × 103 CFU). Tikus daripada setiap kumpulan dirangsang secara intramuskular pada hari berturut-turut (30, 31, dan 32 hari selepas vaksinasi) dengan PBS atau hIFN- 2b. Tikus telah dicabar dengan 2 × 106 MLM berdaya maju lapan minggu selepas rangsangan terakhir. Selepas itu, tikus dikorbankan, dan biospesimen dikumpulkan lapan minggu selepas cabaran. Perkembangan lesi kulit dipantau dan diukur seperti yang diterangkan dalam Bahan dan Kaedah.

Secara ringkasnya, tikus dicabar secara intradermal dengan MLM, lapan minggu selepas rangsangan ketiga dengan 300 IU hIFN- 2b. Perkembangan penyakit dipantau selama lapan minggu berikutnya. Pada penghujung tempoh ini, kami mengumpul nodus limfa inguinal untuk mengesan GC dan menghitung Treg dan populasi sel lain dengan imunofluoresensi. Kami juga menggunakan imunofluoresensi untuk menggambarkan pengeluaran iNOS oleh makrofaj yang diaktifkan, lokasi sisa nitrotyrosine (NT) dan pengumpulan Gr-1 serta sel mieloid dalam kulit tikus eksperimen kami. Selain itu, kami mengumpul serum untuk mengukur sitokin dan antibodi kepada glikolipid MLM oleh ELISA (Rajah 1).

Pertama, untuk menilai kesan perlindungan penyebuan BCGph dan peningkatan hIFN{{0}}b terhadap cabaran intradermal tikus dengan MLM, kami mengukur lesi kulit dan menggambarkan kolonisasi basil pada kulit oleh pewarnaan Ziehl–Neelsen (Rajah 2A–E). Kulit tikus unprimed yang hanya menerima kenderaan (PBS), tanpa cabaran MLM, tidak menunjukkan basil (Rajah 2A). Tikus yang disuntik dengan kenderaan dan dicabar dengan MLM menunjukkan jumlah basil MLM yang banyak dalam kulit (Rajah 2B) manakala tikus menyebu dengan BCGph membawa kepada pengurangan pertumbuhan mikobakteria (Rajah 2C). Pentadbiran hIFN- 2b berturut-turut turut mengurangkan pertumbuhan mikobakteria dalam kulit berbanding tikus yang dicabar dengan MLM (Rajah 2D). Tikus yang diberi BCGph dan dirangsang dengan hIFN- 2b mempunyai pertumbuhan mikobakteria yang paling rendah (Rajah 2E). Selaras dengan data ini, tikus yang sihat yang dicabar dengan MLM yang hanya menerima kenderaan (PBS) menghasilkan lesi kulit yang paling meluas (35 ± 9.9 mm2 ), manakala tikus yang diberi BCGph-primed mempunyai lesi kulit yang sama saiz dengan yang dibangunkan di tikus disuntik dengan kenderaan dan dicabar dengan MLM (13.5 ± 4.24 mm2 ) (Rajah 2F). Tikus yang disuntik secara subkutan dengan hIFN- 2b menunjukkan lesi kulit yang lebih kecil (20 ± 1.77 µm2 ). Daripada makluman, tikus yang telah disempurnakan BCGph dan dirangsang dengan hIFN- 2b menunjukkan pengurangan ketara dalam saiz lesi kulit (5 ± 7.07 mm2 ) (p < 0.05) (Rajah 2F).

\

Rajah 2. Lesi kulit dan pertumbuhan mikobakteria dalam Balb/c dicabar dengan M. lepraemurium. Perlindungan tikus dinilai oleh perkembangan lesi kulit dan menggambarkan pertumbuhan mikobakteria dalam lesi kulit pada lapan minggu selepas cabaran dengan MLM. Lesi kulit telah diwarnai dengan Ziehl-Neelsen. Perwakilan 400× gambar pembesaran (A) tetikus yang tidak dibumbui dan tetikus yang tidak dicabar; (B) tikus diinokulasi dengan PBS dan dicabar dengan MLM; (C) tikus diutamakan dengan BCGph dan dicabar dengan MLM; (D) tikus diinokulasi secara intramuskular dengan hIFN- 2b dan dicabar dengan MLM; (E) tikus diutamakan dengan BCGph, dirangsang dengan hIFN- 2b dan dicabar dengan MLM; (F) Perlindungan yang cekap adalah bersamaan dengan sama ada ketiadaan lesi kulit atau pengurangan ketara dalam saiz lesi kulit, dinyatakan dalam mm2, n=6 tikus/kumpulan. * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 dianggap sebagai signifikan secara statistik.

3.2. Patologi Kulit Minimal pada Tikus Disempurnakan dengan BCGphipps dan Dirangsang dengan hIFNa 2b Berkorelasi dengan Penurunan Pengumpulan Nitrotyrosine dan Penyusupan Neutrofil terjejas

Nitrik oksida adalah penting untuk membunuh patogen intraselular. Walau bagaimanapun, pengeluaran berlebihan nitrik oksida, radikal superoksida (O,-, dan hidrogen peroksida membawa kepada penjanaan peroksinitrit toksik dan tidak stabil, molekul yang bertindak balas dengan sisa tirosin pada protein untuk membentuk NT yang stabil 56-601. Walaupun peroksinitrit membunuh mikobakteria, ia juga merosakkan sel imun [57-59].

Oleh itu, kami memutuskan untuk mencari sel penghasil iNOS, dan neutrofil dalam kulit tikus eksperimen kami dengan imunofluoresensi. Kami melihat isyarat latar belakang untuk iNOS dan NT dan sangat sedikit Gr-1 tambah sel dalam kulit tikus yang hanya menerima PBS (Rajah 3A). Peningkatan beban mikobakteria dan lesi nekrotik yang membesar pada kulit berkorelasi dengan pengumpulan sisa NT di kawasan kulit nekrotik (58,59 daripada tikus yang tidak divaksinasi (Rajah 3B) dan tikus prima BCGph yang dicabar dengan MLM (Rajah 3C) Selaras dengan tindak balas keradangan tempatan yang lebih seimbang dan pemulihan patologi kulit, penyusupan NT dan neutrofil telah dikurangkan pada tikus yang menerima inokulasi berturut-turut dengan hIFN- 2b (Rajah 3D) atau tikus BCGph disempurnakan dan dirangsang dengan hIFN 2b (Rajah 3E). Penyusupan terjejas dengan Gr{{11 }} ditambah dengan neutrofil dan kawasan NT yang dikurangkan bertepatan dengan kawasan keradangan terkecil dalam bahagian kulit histologi tikus yang disempurnakan dengan BCGph dan dirangsang dengan hIFN- 2b (Rajah 3F).

Rajah 3. Perlindungan dikaitkan dengan penurunan pengumpulan nitrotyrosine, pengumpulan neutrofil terjejas, dan keradangan kulit yang pulih. Bahagian lesi kulit telah diwarnai dengan gabungan antibodi khusus untuk iNO (merah), NT (hijau) dan Gr-1 (putih). Wakil 200× gambar daripada (A) Kulit tikus yang tidak dicucuk dan tidak dicabar, (B) tikus yang disuntik dengan PBS dan dicabar dengan MLM, (C) tikus yang disiapkan dengan BCGphipps dan dicabar dengan MLM, ( D) tikus diinokulasi secara intramuskular dengan hIFN- 2b dan dicabar dengan MLM dan (E) tikus yang diutamakan dengan BCGph, dirangsang dengan hIFN- 2b dan dicabar dengan MLM; (F, G) kuantiti kawasan keradangan dengan alat automatik mikroskop Zeiss Axioplan, lesi kulit dikumpul pada lapan minggu selepas cabaran dengan MLM, grafik menunjukkan kawasan purata yang diduduki oleh sel radang dalam lesi kulit kusta, dinyatakan dalam µm2. Bar skala=100 µm. n=6 tikus/kumpulan * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 dianggap signifikan secara statistik.

Pengeluaran NO tidak signifikan secara statistik berbanding kumpulan eksperimen yang lain walau bagaimanapun, dalam kumpulan tikus yang diberi BCGph dan dirangsang dengan hIFN- 2b, kepekatan NO adalah lebih tinggi (68.28 µM/L ± 0 .889) berbanding dalam kumpulan PBS dan MLM (62.79 µM/L ± 1.04), BCGph (63.37 µM/L ± 0.225), hIFN- 2b (62.57 µM/L ± 1.028 ) (Rajah 3G).

3.3. Sitokin Anti-Radang Dipertingkatkan dalam Serum Tikus Disalut dengan BCGphipps dan Dirangsang dengan hIFN- 2b

Sitokin pro dan anti-radang diukur dalam serum tikus Balb / c selepas cabaran dengan MLM. Selaras dengan keadaan imunosupresif yang disebabkan oleh MLM, kepekatan sitokin proinflamasi adalah rendah dalam serum tikus Balb/c yang diinokulasi dengan PBS dan dicabar dengan MLM (IFN-, 625 ± 442 pg/mL; TNF-, 697 ± 436 pg/ mL; IL-6, 68 ± 48 pg/mL; IL-17, 95 ± 67 pg/mL). Sebaliknya, mereka mempunyai tahap sederhana sitokin anti-radang dalam serum (IL-10, 1763 ± 124 pg/mL dan IL-4, 1250 ± 173 pg/mL). Walaupun tikus dilindungi oleh penyebuan BCGph dan rangsangan berturut-turut dengan hIFN- 2b, jumlah sitokin proinflamasi sistemik tidak berbeza secara statistik daripada tikus yang diinokulasi dengan PBS dan dicabar dengan MLM. Tanpa diduga, kepekatan untuk IL-4 (1875 ± 352 pg/mL, p < 0.05), dan IL-10 (4250 ± 271 pg/mL) telah meningkat dengan ketara dalam serum tikus ini berbanding dengan tikus yang disuntik dengan PBS dan dicabar dengan MLM (Jadual 1). Keputusan ini menunjukkan bahawa protokol vaksinasi kami mungkin mengaktifkan laluan anti-radang untuk mengelakkan kerosakan tisu.

3.4. Pengumpulan Treg Terjejas dalam Nodus Limfa yang Mengeringkan (DLN) Tikus Disempurnakan dengan BCGphipps atau Dirangsang dengan hIFN- 2b

Memandangkan Tregs menghasilkan IL-10 [61,62], kami memutuskan untuk mengukur CD3 plus FOXP3 plus Tregs dalam nodus limfa yang mengalir (DLN), yang terletak berhampiran tapak vaksinasi. Dalam tikus yang tidak dijangkiti (PBS), Treg masih ada (113 ± 9.8 CD3 ditambah FOXP3 ditambah medan Treg / 200 ×) (Rajah 4A). Seperti yang dijangkakan, Treg meningkat dengan ketara pada tikus yang dicabar dengan MLM yang tidak menerima vaksin (BCGph) atau hIFN- 2b (214 ± 30 CD3 campur FOXP3 tambah medan Tregs/200 ×) (Rajah 4B). Pada masa yang sama, tahap Treg yang lebih rendah diperhatikan pada tikus yang diberi BCGph (160 ± 26 CD3 ditambah FOXP3 ditambah medan Tregs/200 ×) (Rajah 4C) dan tikus yang menerima hIFN- 2b (162 ± 33 CD3 tambah FOXP3 tambah medan Tregs/200 ×) (Rajah 4D); tikus yang diberi BCGph dan dirangsang dengan hIFN- 2b (127 ± 16 CD3 ditambah FOXP3 ditambah medan Tregs/200 ×) (Rajah 4E) mempunyai ketumpatan Treg yang serupa berbanding tikus yang tidak divaksinasi tanpa hIFN- 2b meningkatkan. Walau bagaimanapun, selepas mengira secara membuta tuli CD3 tambah FOXP3 serta Treg dalam DLN tikus percubaan kami, kami mendapati bahawa Treg telah berkurangan dengan ketara dalam DLN tikus selepas penyebuan BCGph (p=0.0013), hIFN- 2 b inokulasi (p=0.0074), atau gabungan penyebuan BCGph dan penggalak hIFN- 2b (p=0.0013) berbanding dengan tikus yang dicabar dengan MLM (Rajah 4E).

Rajah 4. Pengumpulan terjejas sel T pengawalseliaan (Tregs) dalam nodus limfa yang mengalir (DLN) tikus yang disiapkan dengan BCGphipps dan dirangsang dengan hIFN- 2b. Tikus telah dikorbankan, dan DLN dikumpulkan lapan minggu selepas cabaran dengan MLM. DLN telah diwarnai dengan antibodi khusus untuk CD3 (merah) dan FOXP3 (nukleus hijau) untuk mengesan CD3 ditambah FOXP3 ditambah Tregs oleh immunofluorescence. (A) Pengumpulan basal Treg dalam DLN tikus yang tidak divaksinasi; (B) Treg dalam DLN telah meningkat selepas cabaran MLM dan secara perbandingan dikurangkan dalam (C) BCGph-primed, (D) hIFN- 2b inokulasi dan (E) BCGph-primed-hIFN- 2b tikus yang dirangsang; (F) analisis morfometrik menunjukkan pengurangan ketara dalam Treg dalam DLN BCGph primed/hIFN- 2b tikus yang dirangsang. Bar skala=100 µm, n=6 tetikus/kumpulan * p < 0.05; ** p < 0.005; *** p < 0.0005 dianggap signifikan secara statistik.

3.5. BCGphipps Priming dan hIFN- 2b Meningkatkan Pengaruh Respons GC dalam DLN Tetikus

Terdapat Treg khas yang terletak di dalam GC yang dikenali sebagai sel pengawalseliaan folikel T (TFRMereka memodulasi kedua-dua tindak balas GC dan menghalang penjanaan sel plasma autoreaktif (28,33). Treg yang menurun dalam DLN mencadangkan bahawa tindak balas GC boleh dilepaskan pada tikus. disiapkan dengan BCGph dan dirangsang dengan hlFN-a 2b. Selaras dengan ketiadaan rangsangan antigenik, kami tidak mengesan GC dalam DLN tikus yang tidak dijangkitiRajah 5A). GC kecil hadir dalam DLN tikus yang tidak dimakan, dicabar dengan MLMLigure 5B).

Rajah 5. Penyebuan BCGphipps dan penggalak hFN-a 2b mempengaruhi tindak balas GC dalam DLN selepas cabaran MLM. Tikus telah dikorbankan pada lapan minggu selepas cabaran dengan ML M. Nodus limfa yang mengalir (DLN) telah diwarnai dengan penentu antibodi antigen nuklear sel yang membiak (PCNA, nukleus merah), aglutinin kacang tanah (PNA, hijau) dan CD45R (B22{{13 }}, putih) untuk mengenal pasti GC yang mengandungi gugusan padat PCNA*PNA tambah * B220sel GC B rendah. Sel GC B dalam DL Ns daripada (A) tikus yang tidak disemai dan tidak dicabar;(B) tikus yang diinokulasi dengan PBS dan dicabar dengan MLM; (C) tikus mendapat BCGph dan mencabar dengan MLM; (D) tikus dirangsang secara intramuskular dengan hlFN-a 2b dan dicabar dengan MLM; (E) tikus disiapkan dengan BCGphboosted dengan hlFN-a 2b, dan dicabar dengan ML M; (F) GC diukur dalam DL Ns individu tikus eksperimen mengira purata saiz GC. Bar skala=100 um.=6 tikus/kumpulan. " p < 0.05, * p < 0.005; *** y < 0.0005 dianggap sebagai signifikan secara statistik.

Rajah 5. Penyebuan BCGphipps dan rangsangan hlFN-a 2b mempengaruhi tindak balas GC dalam DLN selepas cabaran ML M. Tikus telah dikorbankan pada lapan minggu selepas cabaran dengan ML M. Nodus limfa (DLN) yang mengeringkan telah diwarnai dengan antibodi khusus untuk antigen nuklear sel yang membiak (PCNA, nukleus merah), aglutinin kacang tanah (PNA, hijau), dan CD45R (B22{{ 13}}, putih) untuk mengenal pasti GC yang mengandungi gugusan padat PCNAPNA tambah tambah B220sel GC B rendah. Sel GC B dalam DL Ns daripada (A) tikus yang tidak disemai dan tidak dicabar;(B) tikus yang diinokulasi dengan PBS dan dicabar dengan MLM; (C) tikus diutamakan dengan BCGph dan dicabar dengan MLM; (D) tikus dirangsang secara intramuskular dengan hlFN-a 2b dan dicabar dengan MLM;(E) tikus yang diberi BCGphboosted dengan hlFN-a 2b, dan dicabar dengan MLM; (F) GC diukur dalam DLN individu tikus eksperimen untuk mengira saiz purata GC. Bar skala=100 um. 1=6 tikus/ kumpulan. " y < 0.05. * y < 0.005, *** y < 0.0005 dianggap sebagai signifikan secara statistik.

Menariknya, tikus yang diberi BCGph mempunyai GC yang jauh lebih besar daripada tikus yang dicabar dengan MLM (Rajah 5C). Tikus yang diimunisasi dengan hlFN-a 2b (Rajah 5D) mempunyai GC dengan saiz yang setanding dengan tikus yang dicabar dengan MLM. Tikus-tikus yang menggunakan BCGph dan dirangsang dengan hlFN-a 2b mempunyai GC dengan saiz pertengahan (Rajah 5E). Untuk mendapatkan penilaian yang lebih kuantitatif terhadap respons GC dalam DLN, kami mengira purata saiz GC dalam bahagian DLN individu. Selaras dengan pemerhatian kami, kami mendapati pengurangan ketara dalam saiz GC purata dalam DLN selepas suntikan hlFN-a 2b dan dalam protokol peningkatan BCGph / hIFN-a 2b (Rajah 5E).

3.6. Tahap Setanding Antibodi Khusus Glikolipid dalam Tikus Dicabar dengan M. lepraemurium selepas Penyebuan BCGphipps dan Penggalak hIFN- 2b

Mengikut perbezaan yang diperhatikan dalam pembentukan dan organisasi GC, kami mengukur kepekatan antibodi khusus untuk glikolipid yang diekstrak daripada MLM. Di peringkat global, keputusan kami menunjukkan bahawa jumlah sistemik kelas yang berbeza dan isotip antibodi khusus glikolipid tidak terjejas oleh vaksinasi, pentadbiran berturut-turut hIFN- 2b atau protokol BCGph priming/hIFN- 2b ( Jadual 2). Tikus yang dirangsang hanya dengan hIFN- 2b menimbulkan jumlah antibodi IgG dan IgG1 yang lebih tinggi dalam serum. Walau bagaimanapun, tahap antibodi IgG dan Ig G1 tidak signifikan secara statistik berbanding dengan kumpulan eksperimen lain (Jadual 2).

4. Perbincangan

Dalam kajian ini, kami telah menunjukkan bahawa protokol penggalak utama kami berdasarkan penyebuan BCGphipps subkutan dan rangsangan intramuskular berturut-turut dengan peningkatan jumlah tikus yang dilindungi hIFN- 2b daripada cabaran intradermal dengan MLM.

Protokol penggalak utama menghalang pertumbuhan MLM dalam kulit dan memperbaiki patologi tempatan dengan mengurangkan pengeluaran NT dan keradangan neutrofilik (Rajah 3E). Ia juga mengakibatkan induksi sitokin anti-radang (IL-4 dan IL-10) yang berkemungkinan mengatasi keradangan yang berlebihan pada kulit dan dimanifestasikan secara sistemik. Tanpa diduga, walaupun rejimen terapeutik menurunkan CD3 ditambah FOXP3 ditambah Treg dalam DLN (Rajah 4E), tindak balas GC tidak dipertingkatkan secara drastik (Rajah 5E), dan kepekatan serum antibodi khusus glikolipid adalah serupa dalam semua kumpulan eksperimen kecuali dalam tikus disuntik hanya dengan hIFN{10}}b (Jadual 2). Namun begitu, data eksperimen kami menyokong potensi penggunaan penyebuan BCG yang dibantu dengan rangsangan IFN 2b intramuskular, sebagai imunoterapi yang menjanjikan yang patut diterokai dalam kusta manusia.

Manifestasi klinikal kusta berkorelasi dengan spektrum imunologi yang dikesan pada pesakit dan berkisar dari LL hingga TT [2,4,14,18]. Secara amnya, imuniti perumah kepada M. leprae dicirikan terutamanya oleh tindak balas penolong T terpolarisasi (Th1/Th2). Pada satu sisi spektrum, walaupun LL dicirikan oleh tenaga, masih terdapat beberapa kereaktifan terhadap antigen mikobakteria dan penghasilan IL-4 dan IL-10. Sebaliknya, dalam TT, tindak balas Th1 yang dominan membawa kepada pengaktifan makrofaj yang didorong oleh IFN, yang mempercepatkan penghapusan bacilli. Tikus yang dijangkiti MLM lazimnya menghidap kusta seperti lepromatous tanpa dominasi yang jelas untuk imuniti humoral atau selular [18-20].

Antibodi pelindung yang ditimbulkan oleh jangkitan atau vaksinasi [63] dihasilkan melalui proses yang dipanggil pematangan afiniti, yang berlaku di pusat germinal yang terbentuk di sekunder (limpa, nodus limfa) atau organ limfoid tertier (TLO) yang dihasilkan dalam tisu periferal [23,25] . Ia adalah tepat di GC di mana penghasilan sel B memori dan sel plasma yang merembeskan antibodi tahan lama menyumbang kepada penjanaan imuniti jangka panjang kepada pertemuan masa depan dengan patogen. Induksi tindak balas GC yang cekap bergantung pada kerjasama pelbagai jenis sel, termasuk sel B, sel pembantu folikel T (TFH), makrofaj badan yang boleh diwarnai, dan sel dendritik folikular (FDCs) [64]. Malah, vaksin mencetuskan tindak balas GC yang berjaya, dan pusat germinal ektopik dalam nodus limfa [24,25,31,49].

Selain itu, sel pembantu folikel T dan sel pengawalseliaan folikel T [27–30] mengekalkan keseimbangan halus antara induksi tindak balas antibodi yang berkesan dan autoimun. Walaupun kami tidak menolak induksi autoimun dalam kajian kami, kami masih menumpukan pada kesan protokol rangsangan utama dengan BCGph dan hIFN- 2b pada Treg daripada DLN. Tikus yang dilindungi mempunyai lebih sedikit CD3 ditambah FOXP3 serta Treg dalam DLN mereka. Walau bagaimanapun, kajian lanjut diperlukan untuk menentukan sama ada beberapa Treg ini adalah sel pembantu folikel T yang mengawal tindak balas GC [27-30]. Keputusan ini mungkin membayangkan bahawa induksi imuniti perlindungan yang cekap digabungkan dengan sedikit penurunan Treg dalam DLN diperlukan untuk mengawal pertumbuhan mikobakteria dan untuk mencegah keradangan patologi pada kulit.

Kajian terdahulu telah melaporkan kesan sistemik dan mukosa jenis IFN pada sel pembantu folikel T dan sel pengawalseliaan folikel T [19,32,64]. Sesungguhnya, IFN jenis I secara tidak langsung meningkatkan TFH dalam nodus limfa dengan merangsang penyebuan sel T oleh sel dendritik [34]. Jenis I IFN juga menggalakkan suis isotype dalam GC. Selain itu, kajian terbaru menunjukkan bahawa IFN jenis I mencetuskan pembentukan TLO yang dipacu oleh CXCL13-dalam paru-paru [49].

Oleh itu, induksi CXCL13 mengikut jenis I IFN boleh meningkatkan pengambilan sel B naif kepada organ limfoid sekunder dan meningkatkan pengeluaran sel plasma yang merembeskan antibodi, secara global meningkatkan memori tahan lama dan tindak balas imunologi sel plasma [23-25,64]. ], terutamanya dengan kehadiran adjuvant seperti poli IC [65]. Di samping itu, pentadbiran IFN jenis I mendorong pembentukan GC dalam paru-paru pesakit yang mengalami penyakit autoimun [31] atau tuberkulosis [66,67]. Oleh itu, sekatan CXCL13 boleh membantu merawat gangguan keradangan kronik ini [49]. Dalam konteks ini, kami melihat penurunan yang sangat ringan dalam saiz GC dalam DLN tikus yang didorong utama yang dilindungi (Rajah 5E). Walau bagaimanapun, penyelidikan tambahan diperlukan untuk mentakrifkan dengan lebih baik korelasi antara pembentukan GC dan perlindungan yang disebabkan oleh tikus yang didorong utama tersebut. Di bawah tetapan percubaan penyebuan dengan BCGph dan rangsangan hIFN{15}}b intramuskular (51), tikus dalam kajian kami mengalami perlindungan yang lebih tinggi oleh pentadbiran BCGph-hIFN- 2b (80 peratus ) berbanding dengan BCGph sahaja (60 peratus ), seperti yang ditentukan oleh ketiadaan atau saiz kecil lesi kulit (Rajah 2) dan kuantiti setanding antibodi IgG dan IgG1 khusus untuk glikolipid MLM (Jadual 2). Keputusan kami berbeza dengan peningkatan jumlah IgG pada tikus yang dilindungi oleh vaksinasi dengan strain BCG (Pasteur) yang berbeza [41]. Data ini mencadangkan bahawa jenis strain BCG yang digunakan untuk merumuskan vaksin boleh mempengaruhi hasil tindak balas imun humoral terhadap MLM atau M. leprae [51].

Tambahan pula, beberapa kajian dalam tuberkulosis telah menunjukkan kesan yang berpotensi dan berfaedah daripada strategi peningkatan perdana heterolog dalam induksi tindak balas imun pelindung [68-70]. Selain itu, diketahui umum bahawa jenis dan laluan imunisasi mempengaruhi magnitud antibodi dan tindak balas imun selular. Yang mengejutkan, tikus yang dilindungi menunjukkan IL-4 dan IL-10 yang jauh lebih tinggi dalam serum berbanding dengan tikus yang dirawat hanya dengan PBS, BCGph atau hIFN- 2b sahaja (Jadual 1). Bagaimana sitokin anti-radang mempengaruhi imuniti perlindungan dalam kusta sedang disiasat di makmal kami. Walau bagaimanapun, beberapa kajian telah menunjukkan bahawa imuniti selular yang cekap terhadap mikobakteria bergantung pada keseimbangan yang halus antara perlindungan dan pencegahan patologi [71]. Di samping itu, terdapat bukti induksi kedua-dua jenis sitokin dalam model eksperimen lain [72-75].

Keputusan kolektif kami menunjukkan bahawa kejayaan protokol rangsangan utama kami bergantung pada induksi tindak balas imun yang seimbang yang secara cekap menghapuskan MLM dalam kulit dan mengehadkan kerosakan tisu dengan mendorong sitokin anti-radang (IL-4 dan IL10) yang berkemungkinan melindungi sel imun [76,77]. Sesungguhnya, IL-10 yang dihasilkan oleh Tregs yang diinduksi memodulasi keradangan pada permukaan mukosa, khususnya yang berkaitan dengan penyakit radang usus [77,78]. Penemuan ini memerlukan kajian kinetik terperinci tentang pengaktifan sel B, pembentukan GC dan pengawalseliaan, penjanaan sel pengawalseliaan folikel T dan pengaktifan NF-κB dalam sistem rangsangan utama kami dengan BCGph dan hIFN- 2b diikuti oleh jangkitan MLM kepada mempunyai pemahaman yang lebih mekanistik tentang peranan sel imun dan laluan NF-κB dalam induksi imuniti pelindung pada kulit dan nodus limfa selepas cabaran MLM.

5. Kesimpulan

Daripada data ini, kita boleh menyimpulkan bahawa rangsangan intramuskular berturut-turut dengan hIFN- 2b meningkatkan vaksinasi M. bovis BCG, melindungi daripada cabaran intradermal dengan MLM dan mendedahkan sifat pembantu IFN-a 2b manusia yang menjanjikan dalam konteks BCG vaksinasi untuk mencegah jangkitan kusta di kawasan endemik. Untuk pengetahuan terbaik kami, ini ialah laporan pertama keberkesanan terapeutik BCGphipps dalam kombinasi dengan persembahan farmaseutikal hIFN- 2b dalam model praklinikal penyakit seperti kusta.

Sumbangan Pengarang:

Reka bentuk kajian, GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.; kelakuan belajar, GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.; analisis data: GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.; tafsiran data, GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.; merangka manuskrip, GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.;menyemak kandungan manuskrip, GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M.; GGG, OR-E., SOI-T. dan JR-M. bertanggungjawab ke atas integriti analisis data. Semua pengarang telah membaca dan bersetuju dengan versi manuskrip yang diterbitkan.

Pembiayaan:

GGG dan OR-E. telah disokong oleh SNI, CONACYT (Mexico City, Mexico). GGG menerima sokongan daripada Perfil Prodep 2019–2022, dan JR-M. telah disokong oleh dana dalaman daripada Jabatan Perubatan Universiti Pusat Perubatan Rochester dan RO1AI111914.

Penyata Lembaga Semakan Institusi:

Semua eksperimen haiwan telah dilakukan selepas diluluskan oleh Jawatankuasa Penjagaan dan Pengurusan Haiwan Institusi (ZOO-010-2020). ZOO CIE-ENCB 016/2014, 07 Mac 2014.

Kenyataan Persetujuan Termaklum:

Tidak berkaitan.

Penyata Ketersediaan Data:

Data akan dikongsi mengikut garis panduan institusi.

Penghargaan:

Kami berterima kasih kepada Ricardo Villalobos atas bantuan dengan IHC, dan Rogelio Hernandez Pando (INCMNSZ, Mexico City), yang menyediakan strain BCGphipps.

Konflik Kepentingan:

Penulis mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.

Rujukan

1. SIAPA. Pertubuhan Kesihatan Sedunia: Tuberkulosis—Fakta Global 2011/2102. Geneva: WHO Hentikan TB Dep. 2012. Tersedia dalam talian: http://www.who.int/tb/publications/2011/factsheet_tb_2011.pdf (diakses pada 1 Februari 2021).

2. Baik, Kusta PE: Apakah yang sedang "dihapuskan"? lembu jantan. Organ Kesihatan Sedunia. 2007, 85, 1–2. [CrossRef]

3. Rambukkana, A. Bagaimanakah Mycobacterium leprae mensasarkan sistem saraf periferi? Trend Microbiol. 2000, 8, 23–28. [CrossRef]

4. Rodriguez, JIA; Triellato, GL; Meirelles, NML; Teixeira, CC; Lyon, S.; Esteves, kaedah klasifikasi ARM Leprosy: Kajian perbandingan dalam watak rujukan di Brazil. Int. J. Jangkitan. Dis. 2016, 45, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Geluk, A.; van der Ploeg, J.; Teles, OBR; Kees, L.; Franken, MC; Prins, C.; Wouter, DJ; Sarno, NE; Sampaio, EP; Otenhoff, THM Gabungan rasional peptida yang diperoleh daripada protein Mycobacterium leprae yang berbeza meningkatkan sensitiviti untuk imunodiagnosis jangkitan M. leprae. Clin. Vacc. Immunol. 2008, 15, 522–533. [CrossRef] [PubMed]

6. Geluk, A.; Bobosha, K.; Schip, JJVDP-V.; Spencer, JS; Banu, S.; Martins, MVSB; Cho, SN; Franken, KLMC; Kim, HJ; Bekele, Y.; et al. Biomarker Baharu dengan Kaitan dengan Diagnosis Kusta Berkenaan di Kawasan Hiperendemik untuk Kusta. J. Immunol. 2012, 188, 4782–4791. [CrossRef]

7. Geluk, A. Biomarker untuk Kusta: Adakah anda lebih suka T (sel)? Lepr. Wahyu 2013, 84, 3–12. [CrossRef] [PubMed]

8. Alcaïs, A.; Alter, A.; Antoni, G.; Orlova, M.; Nguyen, VT; Singh, M.; Vanderborght, PR; Katoch, K.; Mira, MT; Vu, HT; et al. Replikasi secara berperingkat mengenal pasti alel limfotoksin yang menghasilkan rendah sebagai faktor risiko utama untuk kusta awal. Nat. Genet. 2007, 39, 517–522. [CrossRef] [PubMed]

9. Avanzi, C.; Singh, P.; Truman, RW; Suffys, PN Molekul epidemiologi kusta: Kemas kini. Jangkitan. Genet. Evol. 2020, 86, 104581. [CrossRef]

10. Lastoria, JC; Abreu, MA Kajian kusta mengenai aspek klinikal dan etnopatogen epidemiologi-bahagian 1. Bras. Dermatol. 2014, 89, 205–218. [CrossRef]

11. Rojas-Espinosa, O. Topik Semasa tentang Profil Tindak Balas Imunologi Hos kepada Jangkitan Mikobakteria; Buku Semakan; Tomioka, H., Ed.; Tiang Tanda Penyelidikan: Trivandrum, India, 2009; ms 97–140.

12. Adams, LB; Pena, TM; Sharma, R.; Hagge, AD; Schurr, E.; Truman, RW Wawasan daripada model haiwan mengenai imunogenetik kusta. Satu Tinjauan. Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 2012, 107, 197–208. [CrossRef]

13. Rojas-Espinosa, O.; Becerril-Villanueva, E.; Wek-Rodriguez, K.; Arce-Paredes, P.; Reyes-Maldonado, E. Palsi anggota belakang dalam tikus yang dijangkiti Mycobacterium lepraemurium hasil daripada kerosakan tulang dan bukan daripada penglibatan saraf. Clin. Exp. Immunol. 2005, 140, 436–442. [CrossRef]

14. Modlin, LR Tindak balas imun semula jadi dalam kusta. Curr. Pendapat. Immunol. 2010, 22, 48–54. [CrossRef]

15. Oliveira, RB; Ochoa, MT; Sieling, PA; Rea, TH; Rambukkana, A.; Sarno, EN; Modlin, RL Ekspresi Reseptor Seperti Tol 2 pada Sel Schwann Manusia: Mekanisme Kerosakan Saraf dalam Kusta. Jangkitan. imun. 2003, 71, 1427–1433. [CrossRef] 16. MacMicking, J.; Xie, QW; Nathan, C. Nitrik oksida dan fungsi makrofaj. Annu. Rev. Immunol. 1997, 15, 323–350. [CrossRef]

17. Evans, T.; Mentega, L.; Tukang Kayu, A.; Springall, DR; Polak, J.; Cohen, J. Neutrofil Manusia yang Dirawat dengan Sitokin Mengandungi Sintase Nitrik Oksida Terinduksi Yang Menghasilkan Nitrasi Bakteria Termakan. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 9553–9554. [CrossRef] [PubMed]

18. Fonseca, AB; Simon, MD; Cazzaniga, RA; de Moura, TR; de Almeida, RP; Duthie, MS; Reed, SG; de Jesus, AR Pengaruh tindak balas imun semula jadi dan penyesuaian terhadap hasil klinikal pembezaan kusta. Jangkitan. Dis. Kemiskinan 2017, 6, 5–13. [CrossRef] [PubMed]

19. Sadhu, S.; Khaitan, BK; Joshi, B.; Sengupta, U.; Nautiyal, AK; Mitra, DK Timbal Balik antara Sel T Kawal Selia dan Sel Th17: Kaitan dengan Kekebalan Terpolarisasi dalam Kusta. PLoS Negl. Trop. Dis. 2016, 10, e0004338. [CrossRef] [PubMed]

20. Rojas-Espinosa, O.; Wek-Rodríguez, K.; Arce-Paredes, P. Kesan peroksidase eksogen pada evolusi kusta murine. Int. J. Lepr. Mycobact lain. Dis. 2002, 70, 191–200.

21. Ischiropoulos, H. Biological Tyrosine Nitration: Fungsi Patofisiologi Oksida Nitrik dan Spesies Oksigen Reaktif. Gerbang. Biokim. Biophys. 1998, 356, 1–11. [CrossRef]

22. Muda, DB Leprosy lipid menyediakan kunci kepada kemasukan sel Schwann. Trend Microbiol. 2001, 9, 52–54. [CrossRef]

23. Bannard, O.; Pusat Cyster, JG Germinal: Diprogramkan untuk kematangan afiniti dan kepelbagaian antibodi. Curr. Pendapat. Immunol. 2017, 45, 21–30. [CrossRef] [PubMed] 24. Victora, DG; Nussenweig, pusat MC Germinal. Annu. Rev. Immunol. 2012, 30, 429–457. [CrossRef] [PubMed]

25. Cirelli, KM; Crotty, SH Peningkatan pusat Germinal dengan ketersediaan antigen lanjutan. Curr. Pendapat. Immunol. 2017, 47, 64–69. [CrossRef]

26. Good-Jacobson, KL; Szumilas, CG; Chen, L.; Sharpe, AH; Tomayko, MM; Shlomchik, MJ PD-1 mengawal kemandirian sel B pusat germinal dan pembentukan serta pertalian sel plasma yang berumur panjang. Nat. Immunol. 2010, 11, 535–542. [CrossRef]

27. Wollenberg, I.; Agua-Doce, A.; Hernández, A.; Almeida, C.; Oliveira, VG; Faro, J.; Graca, L. Peraturan Reaksi Pusat Germinal oleh Foxp3 ditambah Sel T Regulasi Folikular. J. Immunol. 2011, 187, 4553–4560. [CrossRef] [PubMed]

28. Litterman, MA; Pierson, W.; Lee, SK; Kallies, A.; Kawamoto, S.; Rayner, TF; Srivastava, M.; Divekar, DP; Beaton, L.; Hogan, JJ; et al. FOXP3 ditambah sel T pengawalseliaan folikel mengawal tindak balas pusat germinal. Nat. Med. 2011, 17, 975–982. [CrossRef]

29. Miles, B.; Connick, E. Kawalan Pusat Germinal oleh Sel T Regulasi Folikular Semasa Jangkitan. Depan. Immunol. 2018, 9, 2704–3710. [CrossRef]

30. Fu, W.; Liu, X.; Lin, X.; Feng, H.; Matahari, L.; Li, S.; Chen, H.; Tang, H.; Lu, L.; Jin, W.; et al. Kekurangan dalam sel pengawalseliaan folikel T menggalakkan autoimun. J. Exp. Med. 2018, 215, 815–825. [CrossRef]

31. Pitzalis, C.; Jones, GW; Bombardieri, M.; Jones, SA Struktur seperti limfoid ektopik dalam jangkitan, kanser dan autoimun. Nat. Rev. Immunol. 2014, 14, 447–462. [CrossRef]

32. Aloulou, M.; Carr, EJ; Gador, M.; Bignon, A.; Liblau, RS; Fazilleau, N.; Linterman, MA Sel T pengawalseliaan folikular boleh khusus untuk antigen imunisasi dan berasal daripada sel T naif. Nat. Commun. 2016, 7, 10579–10589. [CrossRef]

33. Vinuesa, CG; Sanz, I.; Cook, MC Disregulasi pusat germinal dalam penyakit autoimun. Nat. Rev. Immunol. 2009, 9, 845–857. [CrossRef]

34. Cucak, H.; Yrlid, U.; Reizis, B.; Kalinke, U.; Johansson-Lindborn, B. Isyarat Interferon Jenis I dalam sel Dendritik merangsang perkembangan sel pembantu folikel T Residen Nodus Limfa. Kekebalan 2009, 31, 491–501. [CrossRef]

35. Desvignes, L.; Serigala, AJ; Ernst, JD Peranan Dinamik IFN Jenis I dan Jenis II dalam Jangkitan Awal dengan Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 2012, 188, 6205–6215. [CrossRef]

36. Teles, MBR; Graeber, GT; Krutzik, RS; Montoya, D.; Schenk, M.; Lee, JD; Komisopoulou, E.; Kelly-Scumpia, K.; Chun, R.; Iyer, SS; et al. Interferon Jenis I Menekan Tindak Balas Anti-Mikobakteria Manusia yang Dicetuskan Interferon Jenis II. Sains 2013, 339, 1448–1453. [CrossRef]

37. Ji, DX; Yamashiro, LH; Chen, KJ; Mukaida, N.; Kramnik, I.; Darwin, KH; Vance, Kerentanan dipacu interferon Jenis I RE kepada Mycobacterium tuberculosis dimediasi oleh IL-1Ra. Nat. mikrobiol. 2019, 4, 2128–2135. [CrossRef]

38. Manca, C.; Tsenova, L.; Bergtold, A.; Freeman, SH; Tovey, M.; Musser, MJ; Barry, EC, ke-3; Freedman, HV; Kaplan, G. Virulensi pengasingan klinikal Mycobacterium tuberculosis pada tikus ditentukan oleh kegagalan untuk mendorong imuniti jenis Th1 dan dikaitkan dengan induksi IFN- / . Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007, 98, 5752–5757. [CrossRef] [PubMed]

39. Telesca, C.; Angelico, M.; Piccolo, P.; Nosotti, L.; Morrone, A.; Longhi, C.; Carbone, M.; Baiocchi, L. Interferon-alpha rawatan hepatitis D mendorong keterukan batuk kering pada pendatang. J. Jangkitan. 2007, 54, e223–e226. [CrossRef] [PubMed]

40. Giacomini, E.; Remoli, SAYA; Gafa, V.; Pardini, M.; Fattorini, L.; Coccia, EM IFN- meningkatkan imunogenik BCG dengan bertindak pada kematangan DC. J. Leukoc. biol. 2008, 85, 462–468. [CrossRef] [PubMed]

41. Rivas-Santiago, CE; Guerrero, GG IFN- Meningkatkan Mycobacterium bovis Bacillus Calmette Güerin-Vaccine Digalakkan Tindak Balas Selular Jenis Th1 dan Perlindungan terhadap Jangkitan M. tuberkulosis. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 6760. [CrossRef]

42. Guerrero, GG; Rangel-Moreno, J.; Islas-Trujillo, S.; Rojas-Espinosa, O. Penggalak Intramuskular Berturut-turut dengan IFN-Alpha Melindungi Mycobacterium bovis Tikus yang Divaksin BCG terhadap jangkitan M. lepraemurium. BioMed Med. Res. Int. 2015, 2015, 414027.

43. McNab, F.; Mayer-Barber, K.; Sher, A.; Wack, A.; O'Garra, A. Jenis I interferon dalam penyakit berjangkit. Nat. Rev. Immunol. 2015, 15, 67–103. [CrossRef]

44. O'Shea, JJ; Visconti, R. IFN Jenis I dan pengawalseliaan respons TH1: Enigmas telah diselesaikan dan muncul. Nat. Immunol. 2000, 1, 17–19. [CrossRef]

45. González-Navajas, JM; Lee, J.; David, M.; Raz, E. Fungsi imunomodulator interferon jenis I. Nat. Rev. Immunol. 2012, 12, 125–135. [CrossRef]

46. ​​Le Bon, A.; Sukar, interferon DF Jenis I sebagai rangsangan untuk penyebuan silang. Fakta Pertumbuhan Cytokine Rev. 2008, 19, 33–40. [CrossRef]

47. Bracci, L.; Canini, I.; Puzelli, S.; Sestili, P.; Venditti, M.; Spada, M.; Donatelli, I.; Belardelli, F.; Proietti, E. Jenis I IFN ialah adjuvant mukosa yang berkuasa untuk vaksinasi intranasal terpilih terhadap virus influenza pada tikus dan menjejaskan penangkapan antigen pada tahap mukosa. Vaksin 2005, 23, 2994–3004. [CrossRef]

48. Pelamin, RB; Atmar, RL; Cate, TR; Quarles, JM; Keitel, WA; Arden, NH; Wells, J.; Niño, D.; Wyde, PR Kesan kontras jenis I interferon sebagai pembantu mukosa untuk vaksin influenza pada tikus dan manusia. Vaksin 2009, 27, 5344–5348. [CrossRef] [PubMed]

49. Denton, AE; Innocentin, S.; Carr, EJ; Bradford, BM; Lafouresse, F.; Mabbott, NA; Mörbe, U.; Ludewig, B.; Pengantin Lelaki, JR; Good-Jacobson, KL; et al. Interferon jenis I mendorong CXCL13 untuk menyokong pembentukan pusat germinal ektopik. J. Exp. Med. 2019, 216, 621–637. [CrossRef]

50. Toledo, PTG; Batista-Silva, LR; Medeiros, RCA; Lara, FA; Moraes, Interferon Jenis I MO, Autophagy dan Metabolisme Hos dalam Kusta. Depan. Immunol. 2018, 23, 806–817. [CrossRef]

51. Zhang, W.; Zhang, Y.; Zheng, H.; Pan, Y.; Liu, H.; Du, P.; Wan, L.; Liu, J.; Zhu, B.; Zhag, G.; et al. Penjujukan genom dan analisis strain vaksin BCG. PLoS ONE 2013, 8, e071243. [CrossRef]

52. Wek-Rodriguez, K.; Silva-Miranda, M.; Arce-Paredes, P.; Rojas-Espinosa, O. Kesan perantara oksigen reaktif terhadap daya maju dan infektiviti Mycobacterium lepraemurium. Int. J. Exp. Pathol. 2007, 88, 137–145. [CrossRef]

53. Kim, SH; Cohen, B.; Novick, D.; Rubinstein, M. Reseptor Interferon Jenis Mamalia I Terdiri daripada Dua Subunit: IFN- R1 dan IFN- R2. Gene 1997, 196, 279–286. [CrossRef]

54. Luo, Y.; Chen, X.; Han, RA; O'Donnell, M. Recombinant bacillus Calmette-Guérin (BCG) yang mengekspresikan interferon-alpha 2B manusia menunjukkan imunogenisiti yang dipertingkatkan. Clin. Exp. Immunol. 2001, 123, 264–270. [CrossRef] [PubMed]

55. Matahari, E.; Nian, X.; Liu, C.; Kipas, X.; Han, R. Pembinaan manusia rekombinan IFN -2b BCG dan kesan antitumornya pada sel-sel kanser pundi kencing secara in vitro. Genet. Mol. Res. 2015, 14, 3436–3449. [CrossRef] [PubMed]

56. Prabhakaran, K.; Harris, EB; Kirchheimer, WF Pengikatan dopa berlabel 14C oleh Mycobacterium leprae in vitro. Int. J. Lepr. Mycobact lain. Dis. 1976, 44, 58–64.

57. Draper, P. Pemurnian Mycobacterium leprae. Dalam Prosiding Lampiran 4 Laporan Mesyuarat Kelima Kumpulan Kerja Saintifik Mengenai Imunologi Kusta (IMMLEP), Geneva, Switzerland, 24–26 Jun 1980; Pertubuhan Kesihatan Sedunia: Geneva, Switzerland, 1980.

58. Ischiropoulos, H.; Nelson, J.; Duran, D.; Al-Mehdi, A. Tindak balas nitrik oksida dan peroksinitrit dengan molekul organik dan ferrihorseradish peroksidase: Gangguan dengan penentuan hidrogen peroksida. Radic Percuma. biol. Med. 1996, 20, 373–381. [CrossRef]

59. Schön, T.; Hernandez-Pando, R.; Negesse, Y.; Leekassa, R.; Sundqvist, T.; Britton, S. Ungkapan sintase nitrik oksida dan nitrotirosin yang boleh diinduksi dalam lesi kusta sempadan. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 809–815. [CrossRef]

60. Silva-Miranda, M.; WeK-Rodriguez, K.; Martinez, CE; Rojas-Espinosa, O. Ungkapan siklooksigenase-2, alfa 1-glikoprotein asid dan sintase nitrik oksida yang boleh diinduksi dalam lesi kusta murine yang sedang berkembang. Int. J. Exp. Laluan. 2006, 87, 485–494. [CrossRef]

61. Hernández-Pando, R.; Schön, T.; Orozco, EH; Serafín, T.; Estrada-Garcia, I. Ungkapan sintase nitrik oksida dan nitrotirosin yang boleh diinduksi semasa evolusi batuk kering pulmonari eksperimen. Exp. Toksik. Pathol. 2001, 53, 257–265. [CrossRef]

62. Izcue, A.; Coombes, JL; Powrie, F. Regulatori Limfosit, dan Keradangan Usus. Annu. Rev. Immunol. 2009, 27, 313–338. [CrossRef]

63. Sakaguchi, S.; Miyara, M.; Costantino, CM; Hafler, DA FOXP3 ditambah sel T pengawalseliaan dalam sistem imun manusia. Nat. Rev. Immunol. 2010, 10, 490–500. [CrossRef]

64. Plotkin, SA Menghubungkaitkan Perlindungan yang Disebabkan oleh Pemvaksinan. Clin. Vaksin Immunol. 2010, 17, 1055–1065. [CrossRef] [PubMed]

65. Wu, H.; Chen, Y.; Liu, H.; Xu, L.-L.; Teuscher, P.; Wang, S.; Lu, S.; Dent, AL Sel T pengawalseliaan folikel menindas pengeluaran sitokin oleh sel T pembantu folikel dan mengoptimumkan tindak balas IgG pada tikus. Eur. J. Immunol. 2016, 46, 1152–1161. [CrossRef] [PubMed]

66. Jeyanathan, M.; Damjanovic, D.; Shaler, CR; Lai, R.; Wortzman, M.; Yin, C.; Zganiacz, A.; Lichty, D.; Xing, Z. Imuniti semula jadi yang dicetak secara berbeza oleh vaksin rangsangan mukosa menentukan hasil perlindungan imun antituberkulosis, bebas daripada imuniti sel T. Immunol mukosa. 2013, 6, 612–625. [CrossRef] [PubMed]

67. Jeyanathan, M.; Shao, Z.; Yu, X.; Harkness, R.; Jiang, R.; Li, J.; Xing, Z.; Zhu, T. AdHu5Ag85A Imunisasi Peningkatan Mukosa Pernafasan Meningkatkan Perlindungan terhadap Tuberkulosis Pulmonari dalam Primat Bukan Manusia Berbakar BCG. PLoS ONE 2015, 10, e0135009. [CrossRef]

68. Afhami, S.; Drumond, VA; D'Agositnio, MR; Jeyanathan, M.; Gillgrass, A.; Xing, Z. Memajukan Strategi Vaksin Imunoterapeutik Terhadap Tuberkulosis Pulmonari. Depan. Immunol. 2020, 11, 557809. [CrossRef]

69. Torrado, E.; Robinson, RT; Cooper, AM Respons selular terhadap mikobakteria: Mengimbangi perlindungan dan patologi. Trend Immunol. 2011, 32, 66–72. [CrossRef]

70. Xu, X.; Gao, W.; Cheng, S.; Yin, D.; Li, F.; Wu, Y.; Matahari, D.; Zhou, S.; Wang, D.; Zhang, Y.; et al. Mekanisme anti-radang dan imunomodulator atorvastatin dalam model murine kecederaan otak traumatik. J. Neuroinflamm. 2017, 14, 167–182. [CrossRef]

71. Azeem, W.; Maukon, BR; Appel, S.; Maegrete, AO; Kalland, KH Dual Pro- dan Ciri-ciri Anti-Radang Sel Dendritik MonocyteDerived. Depan. Immunol. 2020, 11, 438–453. [CrossRef]

72. Sultana, S.; Bishay, B. Peneutralan TNFR-1 dan TNFR-2 memodulasi arthritis septik yang disebabkan oleh S. aureus dengan mengawal selia tahap sitokin pro-radang dan anti-radang semasa perkembangan penyakit. Immunol. Lett. 2018, 196, 33–51. [CrossRef]

73. Pornografi, D.; Gilligan, MM; Huang, S.; Gartung, A.; Cortes-Puch, I.; Sime, PJ; Phipps, RP; Serhan, CHN; Hammock, BD Penyelesaian Inflammation: Pendekatan dwi-cabang untuk mengelakkan ribut sitokin dalam COVID-19 Metastasis Kanser Rev. 2020, 39, 337–340. [CrossRef]

74. Longhi, MP; Trumpfheller, C.; Idoyaga, J.; Caskey, M.; Matos, I.; Kluger, C.; Salazar, AM; Colonna, M.; Steinman, RM Sel dendritik memerlukan tindak balas interferon jenis I sistemik untuk mematangkan dan mendorong imuniti CD4 ditambah Th1 dengan poli IC sebagai adjuvant. J. Exp. Med. 2009, 206, 1589–1602. [CrossRef]

75. Khader, SA; Guglani, L.; Rangel-Moreno, J.; Gopal, R.; Junecko, BAF; Air Pancut, JJ; Martino, C.; Mutiara, JE; Tighe, M.; Lin, Y.-Y.; et al. IL-23 Diperlukan untuk Kawalan Jangka Panjang Mycobacterium tuberculosis dan Pembentukan Folikel Sel B dalam Paru-paru yang Dijangkiti. J. Immunol. 2011, 187, 5402–5407. [CrossRef] [PubMed]

76. Choreño-Parra, JA; Bobba, S.; Rangel-Moreno, J.; Ahmed, M.; Mehra, S.; Rosa, B.; Martin, J.; Mitreva, M.; Kaushal, D.; Zúñiga, J.; et al. Jangkitan Mycobacterium tuberculosis HN878 Menginduksi Folikel Sel B Seperti Manusia dalam Tikus. J. Jangkitan. Dis. 2020, 221, 1636–1646. [CrossRef] [PubMed]

77. Schmidt, EG; Haribhai, D.; Williams, JB; Aggarwal, P.; Jia, S.; Charbonnier, LM; Yan, K.; Lorier, R.; Turner, A.; Ziegelbauer, J.; et al. IL-10 yang dihasilkan oleh sel iTreg mengawal kolitis dan bekas patogen. Sel Treg semasa imunoterapi. J. Immunol. 2012, 189, 5628–5648. [CrossRef]

78. Rubtsovo, YP; Rasmussen, JP; Chi, Y.; Fontenot, J.; Castelli, I.; Ye, X.; Treuting, P.; Siewe, I.; Roers, A.; Henderson, WRJ; et al. Interleukin terhasil sel T pengawalseliaan-10 mengehadkan keradangan pada antara muka persekitaran. Kekebalan 2018, 28, 546–558. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com