Bagaimana Nitric Oxide Synthase Mempengaruhi Buah Pinggang?

Hubungi: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Kajian Molekul Ketoksikan Diazinon Berdasarkan Ekspresi Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) dalam Hepatosit dan Histopatologi Buah Pinggang Tikus (Rattus norvegicus)

Abstrak

Diazinon ialah racun serangga organofosfat yang digunakan secara meluas untuk membasmi perosak tetapi mempunyai ketoksikan yang lebih tinggi daripada racun serangga lain. Diazinon yang secara tidak sengaja dimakan secara lisan mempunyai kesan ke atas peningkatan spesies oksigen reaktif (ROS) dalam badan. Spesies oksigen reaktif(ROS) akan mengaktifkan sitokin pro-radang yang akan mendorong induksiNitric Oxide Synthase(iNOS) di mana iNOS (Nitric Oxide Synthase) akan menghasilkanNitrik Oksida(NO) sebagai radikal bebas. Tahap ROS yang tinggi akan menyebabkan kerosakan pada sel. Kajian ini bertujuan untuk menentukan kesan ketoksikan diazinon terhadap iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi dalam hati danbuah pingganghistopatologi tikus (Rattus norvegicus). Tikus dibahagikan kepada 4 kumpulan yang terdiri daripada kumpulan kawalan negatif dan tiga kumpulan eksperimen yang diberi diazinon 20 mg/kg BW(P1), 40 mg/kg BW(P2), dan 60 mg/kg BW (P3). Parameter yang diperhatikan dalam penyelidikan ini ialah ungkapan iNOS (Nitric Oxide Synthase)dalam hati menggunakan pewarnaan Imunohistokimia kemudian dianalisis menggunakan ANOVA sehala diikuti dengan ujian Tukey (a=0,05), danbuah pingganghistopatologi yang dicerap menggunakan pewarnaan Hematoxylin-Eosin dan dianalisis secara deskriptif secara kualitatif. Keputusan menunjukkan bahawa pemberian diazinon secara lisan telah meningkat dengan ketara iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan (hlm<0,001)in the="" liver="" and="" caused="" damage="" to="" the="">buah pinggangkorteks yang ditunjukkan oleh penyusupan sel radang, nekrotikbuah pinggangsel tubulus, dan pendarahan dalam ruang antara tiub.

Kata kunci:Diazinon, Organofosfat, iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan,buah pingganghistopatologi.

Cistanche meningkatkan fungsi buah pinggang

1. Pengenalan

Penggunaan racun serangga telah dirasai dapat meningkatkan pengeluaran terutamanya sebagai pencegahan terhadap perosak dan rumpai (Kusriani, 2012). Walau bagaimanapun, penggunaan racun yang kerap boleh menyebabkan racun perosak ini menjadi toksik kepada pengguna, termasuk haiwan sama ada secara sedutan, mulut, dan melalui kulit (Ameriana, 2006). Satu racun perosak yang biasa digunakan ialah diazinon. Diazinon adalah racun perosak organofosfat yang mempunyai mekanisme dengan menghalang fungsi enzim kolinesterase. Racun perosak ini juga kurang memberi kesan kepada organisma bukan sasaran dan lebih toksik kepada haiwan vertebrata berbanding organoklorin (Luthfanto, 2014). Biasanya racun perosak akan dineutralkan dalam hati oleh hepatosit melalui detoksifikasi, tetapi sebatian ini juga mampu membentuk radikal bebas akibat kerosakan sel. Pendedahan organofosfat yang berlaku secara berterusan boleh mencetuskan kerosakan hati sebagai organ yang berperanan dalam proses detoksifikasi (Ginting, 2014). Organofosfat yang telah dimetabolismekan dalam hati mempunyai potensi untuk menghalang enzim AChE. Perencatan enzim ini secara langsung mengakibatkan peningkatan paras asetilkolin dalam sistem saraf dan sistem neuromuskular. Peningkatan AChE boleh menyebabkan ion dalam sel menjadi tidak stabil dan mencetuskan pembentukan Spesies Oksigen Reaktif(ROS)(Uchendu,2012). Peningkatan ROS akan mencetuskan pengeluaran sitokin proinflamasi. Naik dan Vishva (2011) menyatakan bahawa ROS mempengaruhi transkripsi sitokin proinflamasi di mana tahap ROS yang tinggi akan diikuti oleh tahap sitokin proinflamasi yang tinggi serta jika pengeluaran ROS dihalang oleh perencat akan menjejaskan penurunan pengeluaran sitokin proinflamasi seperti sebagai IL-6 dan TNF. Peningkatan pengeluaran sitokin proinflamasi akan mendorong iNOS (Nitric Oxide Synthase)dan membentuk NO dalam jumlah yang berlebihan (Aktan, 2004).

Thebuah pinggangadalah organ utama yang mengekalkan keseimbangan Cecair Selular Tambahan (ECF) dengan menjalankan fungsinya dalam perkumuhan dan metabolisme (Curthoys, 2014). Perkumuhan atau penyingkiran hasil metabolisme xenobiotik dijalankan dalambuah pinggang. Thebuah pinggangkerosakan boleh mengurangkan tahap perkumuhan bahan kimia tanpa meningkatkan ketoksikan bahan toksik (Gupta, 2012). Keadaan tegasan oksidatif akan memulakan proses peroksidasi lipid dengan mengambil ion hidrogen daripada ikatan Asid Lemak Tak Tepu Poli (PUFA) untuk membentuk molekul yang lebih stabil. Proses pemecahan ikatan pada PUFA boleh menyebabkan nekrosis sel atau tisu (Sharma et al..2003).

Kajian ini dijalankan untuk menentukan kesan ketoksikan diazinon terhadap iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi dalam histopatologi hati dan buah pinggang tikus.

Nitric Oxide Synthase menjejaskan fungsi buah pinggang

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Model Haiwan dan Reka Bentuk Eksperimen

Dua puluh ekor tikus (Rattus norvegicus) dibahagikan kepada 4 kumpulan: kumpulan kawalan negatif (tikus sihat). Kumpulan P1, P2, dan P3 ditadbir dengan diazinon selama 8 minggu secara lisan menggunakan tiub suapan dengan dos 20 mg/kg BW, 40 mg/kg BW, dan 60 mg/kg BW masing-masing. Diazonium 600EC dicampur dengan air suling sehingga ia mengandungi 5 mg diazonium dalam 1 mL (Baconi et al., 2013).

Tikus-tikus tersebut telah disesuaikan selama seminggu sebelum menerima rawatan. Semua syarat dan pengendalian haiwan telah dijalankan dengan protokol yang diluluskan oleh Jawatankuasa Pembersihan Etika Universiti Brawijaya (No: 732-KEP-UB).

2.2.Penyediaan dan Pemerhatian Histopatologi Buah Pinggang

Persediaan untukbuah pingganghistopatologi terdiri daripada peringkat berikut: fiksasi, dehidrasi, pembersihan, pembenaman, pemotongan, melekat pada objek kaca mengikut Muntiha (2001). Pemerhatian terhadapbuah pingganghistopatologi telah dijalankan menggunakan mikroskop cahaya binokular dengan pembesaran mikroskop 100x diikuti sehingga 400x. Pemerhatian dilakukan pada glomerulus renal dan tubulus renal.

2.3.Analisis Ungkapan iNOS (Nitric Oxide Synthase) pada Hati

iNOS (Nitric Oxide Synthase)Ekspresi pada hati dianalisis dengan kaedah imunohistokimia, menggunakan anti iNOS (Nitric Oxide Synthase) sebagai antibodi primer dan anti-arnab IgG biotin dilabelkan sebagai antibodi sekunder. Pengukuran iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi pada hati telah dijalankan menggunakan perisian Immunoratio. Keputusan kawasan peratusan ekspresi iNOS dianalisis secara kuantitatif menggunakan ujian Analisis Varians (ANOVA) sehala dan diikuti dengan ujian Tukey.

3. Keputusan dan Perbincangan

3.1.Analisis ekspresi iNOS (Nitric Oxide Synthase) pada hati

Untuk menganalisis ungkapan iNOS (Nitric Oxide Synthase)pada sel hati dilakukan menggunakan kaedah imunohistokimia. Ungkapan iNOS (Nitric Oxide Synthase)boleh ditunjukkan sebagai ekspresi warna coklat pada hepatosit, yang boleh dilihat dalam Rajah 1.

Rajah 1. iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi pada hati.

(1) Kumpulan kawalan negatif (K-). (2)P1(Diinduksi dengan diazinon 20 mg/kg BW. (3) P2 (diinduksi dengan diazinon 40 mg/kg BW).

(4) P3 (diinduksi dengan diazinon 60 mg/kg BW. Bulatan putih menunjukkan luas iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan.

Keputusan imunohistokimia dianalisis secara kualitatif dan menunjukkan terdapat peningkatan keamatan warna coklat (Rajah 1). Keputusan ini menunjukkan bahawa terdapat peningkatan dalam iNOS (Nitric Oxide Synthase)tahap ekspresi dalam kumpulan rawatan berbanding dengan kumpulan kawalan.

Untuk mengukur tahap iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi pada hepatosit menggunakan perisian imunoreaksi. Keputusan analisis kuantitatif iNOS (Nitric Oxide Synthase)ekspresi dalam hati tikus dapat dilihat dalam Jadual 1 dan dapat disimpulkan bahawa terdapat perbezaan yang signifikan (p<0.001) between="" the="" treatment="" groups="" compared="" to="" the="" negative="" control="" group="" (k-).="" in="" the="" negative="" control="" group="" that="" was="" the="" group="" without="" diazinon="" organophosphate="" induction,="" the="" average="" percentage="" area="" of=""> (Nitric Oxide Synthase)Jantina ialah 1.340 ±0.092 peratus .Dalam kumpulan rawatan 1(P1) iaitu kumpulan yang disebabkan oleh organofosfat diazinon pada dos 20 mg/kg BW, purata peratusan luas iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan ialah 4.184±1.041 peratus . Kumpulan rawatan 2(P2) ialah kumpulan yang diinduksi oleh organofosfat diazinon pada dos 40 mg / kg BW dan purata iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan ialah 7.496±0.997 peratus . Kumpulan rawatan 3(P3) ialah kumpulan yang diinduksi oleh organofosfat diazinon pada dos 60 mg/kg BW dan purata iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan ialah 11.604 ± 0.864.

Pada kumpulan kawalan negatif menunjukkan iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan dalam keamatan rendah(1,340 ± 0.092 peratus ). McNaughton et al.(2002)mendapati bahawa iNOS (Nitric Oxide Synthase)dinyatakan dalam acini hati biasa. Penyebaran iNOS (Nitric Oxide Synthase)dalam hati biasa menunjukkan kawasan sekitar portal dengan ekspresi paling kuat dan intensiti berkurangan di sepanjang acini hati. Menurut Kubes (2000), iNOS (Nitric Oxide Synthase)boleh memberikan kesan terapeutik jika ia dikawal dalam jumlah dan lokasi yang betul, iNOS mempunyai peranan positif termasuk penyembuhan kulit dan mukosa usus, melawan bakteria tertentu, potensi dalam pengawalan percambahan sel T, dan pembezaan, dan mengawal pengambilan leukosit. .

Kumpulan rawatan menunjukkan peningkatan yang ketara dalam peratusan kawasan iNOS (Nitric Oxide Synthase) (p<0,001). diazinon="" such="" as="" organophosphate="" in="" general="" will="" be="" metabolized="" which="" mainly="" takes="" place="" in="" the="" liver.="" the="" metabolism="" that="" occurs="" in="" phase="" 1="" metabolism="" is="" an="" oxidation="" process,="" where="" organophosphate="" will="" be="" broken="" down="" into="" oxon-organophosphate="" metabolites="" and="" free="" sulfur="" ions="" with="" the="" help="" of="" cytochrome="" enzymes(cyp)(gupta,="" 2009).="" metabolites="" from="" phase="" 1="" metabolism="" are="" free="" radicals,="" unstable="" substances="" that="" have="" no="" electron="" pairs.="" free="" radicals="" will="" produce="" reactive="" oxygen="" species="" (ros)such="" as="" superoxide,="" hydroxyl="" radicals,="" and="" hydrogen="" peroxide="" through="" interactions="" with="" other="" molecules.="" free="" radicals="" react="" with="" phospholipids="" from="" the="" plasma="" membrane,="" endoplasmic="" reticulum="" membrane,="" or="" mitochondrial="" membrane="" and="" cause="" cell="" death="" (gupta,="" 2012).="" organophosphate="" pesticides="" can="" also="" cause="" oxidative="" stress(mishra,="" 2013).="" this="" oxidative="" stress="" condition="" is="" caused="" by="" diethyl="" as="" an="" organophosphate="" free="" radical(diazinon)that="" is="" capable="" to="" produce="" large="" amounts="" of="" ros.="" oxidative="" stress="" is="" an="" impaired="" balance="" between="" prooxidants="" and="" antioxidants="" that="" causes="" potential="" damage="" (uchendu="" et="" al.,="">

Peningkatan ROS akan mencetuskan pengeluaran sitokin proinflamasi. Spesies Oksigen Reaktif menjejaskan transkripsi sitokin proinflamasi di mana tahap ROS yang tinggi akan diikuti oleh tahap sitokin proinflamasi yang tinggi, begitu juga, jika pengeluaran ROS dihalang dengan perencat juga akan menjejaskan penurunan pengeluaran sitokin proinflamasi seperti IL{{0 }} dan TNF (Naik dan Vishva, 2012). Dunlop et al.(2014) dan Pahan et al.(2000) menyatakan bahawa TNF- dan IL-1 memainkan peranan dalam meningkatkan ekspresi iNOS (Nitric Oxide Synthase)dalam tisu melalui pengaktifan Nappar Kappa B(NF-kB) di mana NF-kB memasuki nukleus dan mengikat ke kawasan promoter iNOS (Nitric Oxide Synthase). Peningkatan pengeluaran sitokin proinflamasi akan mendorong iNOS (Nitric Oxide Synthase)dan membentuk jumlah yang berlebihan daripadaNitrik Oksida(NO) (Aktan, 2004).

3.2.Analisis Histopatologi Buah Pinggang

Hasil kajian ini mengenai kesan ketoksikan diazinon terhadapbuah pinggangCiri histopatologi menggunakan pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE) ditunjukkan dalam Rajah 2. Gambar histologi korteks buah pinggang tikus dalam kumpulan kawalan negatif (K-) telah menunjukkan keadaan normal dan tiada keabnormalan ditemui. Ini dibuktikan dengan penampilan korpus renal, tubul konvulsif proksimal dan distal dengan lapisan sel epitelium kuboid (Rajah 2(1)).

Gambar histopatologi korteks buah pinggang tikus dalam kumpulan P1 menunjukkan keabnormalan, yang dicirikan oleh kehadiran sel yang menjalani karyolisis dan hipertrofi. Sel karyolisis dicirikan oleh kehilangan nukleus sel, manakala sel epitelium yang mengalami hipertrofi mempunyai ciri saiz sel yang diperbesarkan sehingga struktur tubulus renal kelihatan tidak teratur. Eritrosit dalam ruang antara tiub boleh dilihat dalam gambar ini yang menunjukkan kehadiran pendarahan (Rajah 2(2). Gambar histopatologi dalam kumpulan P2 menunjukkan keabnormalan seperti kumpulan P1. Keabnormalan yang boleh diperhatikan pada korteks buah pinggang. tikus P2 termasuk penampilan sel yang menjalani karyolisis, sel hipertrofi, dan pendarahan. Selain itu, strukturbuah pinggangtubul kelihatan tidak teratur, berbanding kumpulan K- (Rajah 2(3)). Gambar histopatologi korteks buah pinggang tikus dalam kumpulan P3 menunjukkan keabnormalan seperti yang dilihat dalam gambar histopatologi korteks buah pinggang pada tikus Pl dan P2, yang dicirikan oleh penampilan sel hipertrofi, karyolisis, dan eritrosit dalam ruang antara tiub (pendarahan). ). Ia juga boleh diperhatikan kehadiran penyusupan sel radang dalam tisu (Rajah 2(4)).

Diazinon organofosfat yang diberikan kepada tikus secara lisan akan dicernakan oleh saluran pencernaan yang kemudiannya akan diserap oleh usus terutamanya oleh duodenum. Metabolisme organofosfat terutamanya berlaku di hati, tetapi pada tahap yang lebih rendah metabolisme juga berlaku di tapak tangan dan usus. Organofosfat akan mengalami metabolisme fasa 1 iaitu proses pengoksidaan di mana organofosfat akan dipecahkan kepada metabolit oxon-organophosphate dan ion sulfur bebas dengan bantuan enzim cytochrome (CYP) (Gupta, 2009; Elersek dan Metka 2011). Metabolit oxon-organophosphate kemudian memasuki aliran darah dan pergi ke hati untuk metabolisme selanjutnya. Di dalam hati, metabolit oxon-organophosphate akan dihidrolisiskan dengan bantuan enzim carboxylesterase(CE)dan paraoxonase (PON), berpecah kepada dialkil fosfat, dan meninggalkan kumpulan. Dialkylphosphatase kemudiannya akan dimangkinkan oleh enzim dalam metabolisme fasa 2 yang akan menghasilkan molekul yang hidrofilik dan boleh dikumuhkan dalam air kencing sambil meninggalkan kumpulan (dalam bentuk dietil) yang boleh menyebabkan tekanan oksidatif dalam badan. Dietil adalah molekul yang sangat reaktif dan boleh bertindak balas dengan kumpulan radikal hidroksil (-OH) untuk membentuk radikal bebas baru (Elersek dan Metka, 2011). Bilangan radikal bebas yang tinggi dalam badan tidak dapat dineutralkan oleh antioksidan endogen, mengakibatkan ketidakseimbangan antara radikal bebas dan antioksidan yang menyebabkan kerosakan oksidatif (Caramori dan Papi, 2004). Kerosakan oksidatif ini berlaku kerana dietil-hidroksil sebagai radikal bebas daripada diazinon organofosfat mampu menghasilkan ROS dalam jumlah yang banyak (Uchendu et al., 2012). Peningkatan ROS kemudiannya akan menyebabkan keadaan tegasan oksidatif dan memulakan proses peroksidaan lipid dengan mengambil ion hidrogen daripada Asid Lemak Tak Tepu Poli (PUFA) untuk membentuk molekul yang lebih stabil. Proses pemecahan ikatan PUFA boleh menyebabkan nekrosis sel atau tisu (Sharma et al., 2003).

Keabnormalan berlaku dalambuah pinggangepitelium tiub disebabkan oleh sentuhan langsung epitelium dengan bahan toksik diazinon, dan dalambuah pinggangtubulus, terdapat proses penyerapan semula dan pembesaran dalam proses pembentukan air kencing (Mescher, 2010). Bahan toksik diazinon yang masih berada di dalam saluran darah akan bersentuhan langsung dengan endothelium, sehingga menyebabkan gangguan kebolehtelapan membran vaskular. Pendarahan dalam ruang antara tiub disebabkan oleh gangguan kebolehtelapan membran saluran darah (kapilari peritubular) sehingga eritrosit boleh memasuki tisu (Djumadi et al., 2008). Kecederaan pada sel endothelial memulakan tindak balas keradangan, mengakibatkan pengumpulan makrofaj dan platelet di luar dan di dalam arteri. Kemunculan penyusupan sel radang dalam tisu yang rosak menunjukkan bahawa metabolit daripada diazinon menyebabkan ketoksikan kepadabuah pinggang(Khudair et al., 2017).

Berdasarkan keputusan penampilan histopatologi, korteks buah pinggang dalam kumpulan rawatan mengalami kelainan berbanding kumpulan K. Kumpulan P1 dengan dos terendah 20 mg/Kg BW diketahui telah menunjukkan kerosakanbuah pinggangsel tiub berbanding kumpulan K.

Cistanche meningkatkan fungsi buah pinggang

4. Kesimpulan

Pemberian diazinon dengan dos terendah 20 mg/kg BW telah ditunjukkan mempunyai kesan toksik pada tikus seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan ketara dalam iNOS (Nitric Oxide Synthase)ungkapan (hlm<0.001)and showed="" the="" damage="" of="" the="" renal="" cortex="" in="" the="" form="" of="" renal="" tubular="" cell="" necrosis,="" hemorrhage,="" and="" renal="" tubular="" cell="">

5. Rujukan

[1] Aktan, F 2004 iNOS (Nitric Oxide Synthase)-Pengantaraan Nitric Oxide Production and It's Regulation. Sains Hayat,75:639-653.

[2] Ameriana, M. 2006. Perilaku Petani Sayuran dalam Menggunakan Pestisida Kimia.J. Hort.18(1):95-106,2008.

[3] Arthur,CGand EHJohn.1997.Fisiologi Kedokteran.EGC.Edisi9.1997.

[4] Aulanni'am, A. Rosdiana, dan NL Rahmah.2012. Potensi Ekstrak Bory pendua Sargassum pada Terapi Penyakit Ekstrak Usus Radang dalam Rattus norvegicus.Journal of Life Sciences 6:144-154.

[5] Caramori, G.and A. Papi.2004.Antioksidan dalam Keracunan Sebatian Organophosphorus. IntJ Pharm Bio Sci,59 (2): 170-173.

[6] Cox, C.2000.Diazinon: Toxicology.Journal of Pesticide Reform/ Summer 20(2).

[7] Curthoys, NP dan WM Orson.2014. Fungsi Tubul Proksimal dan Tindak Balas terhadap Asidosis. Persatuan Nefrologi Amerika. Jurnal Klinikal Persatuan Nefrologi Amerika 9:1627-1638

[8] Djumadi, H., dan H. Sugiyono.2008. Pengaruh Pemberian Insektisida Diazinon dan Kurkumin Kunyit(Curcuma domestica) Per-Oral terhadap Perubahan Struktur Histologis Duodenum Mencit (Mus musculus).Jurnal Penelitian Sains & Teknologi,Vol.9(1):62-83.

[9] Dunlop, K., G.Kiranjot, K. Crystal, I.Julijana, D.Rupinder, D.Jean-Francois, ACKim, J. Amish, PJ McNamara, dan PJ Robert. 2014. Hiperkapnia Terapeutik Menghalang Disfungsi Sistolik Ventrikel Kanan yang Disebabkan Nitrik Oksida Tersedut dalam Tikus Juvana. Elsevier Inc. Biologi dan Perubatan Radikal Bebas 9: 35-49.

[10] Elersek,T.and F.Metka.2011.Racun Perosak: Kesan Pendedahan Racun Perosak.InTech Europe. Rijeka.

[11] Frazier,SK, CSJohn,CHGordon,B.Graham, B.Roger, N.Shinji, N.Akiyoshi, D.Beate, dan B. Axel.2012. Lesi Proliferatif dan Bukan Proliferatif Sistem Kencing Tikus dan Tikus. Patologi toksikologi, 40:14S-86S

[12] Georgievskii, V.1., BNAnnenkov, dan VTSamokhin.2013. Pemakanan Bahan Haiwan: Kajian dalam Sains Pertanian dan Makanan. Butterworths & Co.(Publishers)Ltd.London. 160-161.

[13] Gupta, RC2012.Toksikologi Veterinar Edisi Kedua.Elsevier inc. Waltham.Amerika Syarikat.

[14]Hubrecht,R., dan J.Kirkwood. 2010.The UFAW: Buku Panduan Penjagaan dan Pengurusan Makmal dan Haiwan Penyelidikan Lain. Persekutuan Universiti untuk Kebajikan Haiwan. United Kingdom.

[15]Khudair, ZW, ASHanan, dan KE Manal.2017. Perubahan Histopatologi Yang Tercetus dalam Organ Dalaman Tikus Putih Selepas Terdedah kepada Diazinon.Bas..Vet.Res. 1(2)

[16] Kubes, P.2000.Inducible Nitric Oxide Synthase: Sedikit Kebaikan dalam Kita Semua. http://dx.doi.org/10.1136/gut.47.1.6 [24 Julai 2019].

[17] McNaughton, L., P.Lakshmi, AMMaria, K. Norm, M. Irvin, M. Redwan, H. Outayba, dan WR Marek.2002. Taburan Nitric Oxide Synthase dalam Hati Manusia Normal dan Sirosis. Prosiding Akademi Sains Kebangsaan Vol.99, No.26 17161-17166.

[18] Mescher, AL2010. Histologi Asas Junqueira: Teks &Atlas Edisi 12. The McGraw-Hill Companies, Inc.Amerika Syarikat.

[19] Mishra, BP 2013. Status Antioksidan dan Tekanan Oksidatif dalam Keracunan Racun Perosak Organofosfat.IOSR.Journal of Dental and Medical Sciences (IOSR-JDMS)e-ISSN:2279-0853, p-ISSN:2279-0861 .Jilid 7, Isu 6(Mei-Jun.2013), PP 20-24