Host Tindak Balas Kekebalan Terhadap Permukaan S-Layer Protein (SLP) Clostridioides Difficile

Abstrak:

Clostridioides difficile, patogen nosokomial, ialah patogen usus yang muncul menyebabkan cirit-birit yang berkaitan dengan antibiotik. Jangkitan C. difficile melibatkan kolonisasi usus dan gangguan pada penghalang epitelium usus, yang membawa kepada induksi tindak balas keradangan/imun. Ekspresi dua eksotoksin utama, TcdA dan TcdB adalah punca utama patogenik C. difficile. Lampiran protein dinding sel yang banyak bakteria atau protein lapisan S (SLP) permukaan seperti SlpA dengan sel epitelium perumah adalah penting untuk virulensi. Sebagai tambahan kepada toksin, komponen permukaan ini telah terbukti sangat imunogenik. Kajian terbaru menunjukkan bahawa C. difficile SLPs memainkan peranan penting dalam lekatan bakteria pada sel epitelium usus, gangguan persimpangan ketat, dan modulasi tindak balas imun sel perumah. Protein ini mungkin berfungsi sebagai sasaran baharu untuk vaksin dan ejen terapeutik baharu. Kajian ini meringkaskan pemahaman semasa kami tentang peranan imunologi SLP dalam mendorong imuniti perumah dan penggunaannya dalam pembangunan vaksin dan terapeutik baru untuk memerangi jangkitan C. difficile.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Minta lebih lanjut】 E-mel:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Kata kunci:

cirit-birit yang berkaitan dengan antibiotik; protein dinding sel; terapeutik; Protein lapisan S; vaksin

1. Pengenalan

Clostridioides difficile, bakteria anaerobik penghasil toksin, merupakan patogen oportunistik dan nosokomial penting dalam usus yang menyebabkan gejala penyakit akibat gangguan dalam mikrobiom sihat disebabkan oleh pelbagai faktor, termasuk penggunaan antibiotik, genetik, eksposom, mikrob, dan faktor perumah yang lain [1]. Pemilihan dan percambahan C. difficile mencetuskan keadaan mengancam nyawa kolitis pseudomembranous [2,3]. Menurut anggaran terkini daripada laporan Pusat Kawalan dan Pencegahan Penyakit 2019, C. difficile menyebabkan 223,900 jangkitan dan 12,800 kematian pada 2017 dengan kerugian $1 bilion di Amerika Syarikat sahaja [4]. Rawatan episod pertama jangkitan C. difficile (CDI) dicapai dengan antibiotik. Walau bagaimanapun, penyakit ini mempunyai tahap berulang yang tinggi-20-30% selepas rawatan pertama CDI awal dan lebih daripada 50% selepas berulang pertama [5]. Oleh itu, campur tangan terapeutik segera diperlukan untuk memerangi CDI di seluruh dunia. Salah satu faktor molekul utama untuk patogenesis C. difficile ialah ekspresi dan rembesan dua toksin utama, TcdA dan TcdB, yang dikodkan oleh gen yang terletak dalam lokus patogenisitas 19.6-kb (PaLoc) dalam C. difficile genom [6]. Peraturan pengeluaran toksin dan pelbagai faktor transkripsi yang terlibat dalam pengeluaran toksin telah disemak secara meluas oleh Chandra et al. tempat lain [6].

Patogenesis CDI bermula dengan pengambilan/percambahan spora C. difficile ke dalam sel vegetatif, yang bercambah di dalam usus di mana ia membiak dan menjajah mukosa usus [1,6]. Penghalang mukosa usus (IMB) adalah barisan pertama pertahanan semula jadi terhadap patogen. Hos IMB terdiri daripada pelbagai jenis sel epitelium yang bercantum kuat antara satu sama lain melalui persimpangan yang ketat dan ditutup dengan lapisan mukus pelindung tebal yang dirembeskan oleh sel goblet [1]. Gangguan IMB membolehkan C. difficile melekat pada permukaan sel epitelium di mana penghuraian faktor virulensinya membawa kepada kerosakan dan manifestasi patogenik C difficile [1,6]. Dinding sel bakteria dalam banyak spesies Gram-positif dan negatif, termasuk C. difficile, dikaitkan dengan lapisan molekul protein terdedah permukaan yang banyak dipanggil protein lapisan permukaan (protein lapisan S atau SLP), yang kebanyakannya terdiri daripada banyaknya. protein SlpA yang terdiri daripada domain berat molekul rendah dan tinggi, yang disusun sebagai tatasusunan dua dimensi biasa parakristalin seperti yang dilihat oleh mikroskop elektron [7]. Komponen protein dinding sel (Cwp) lain pada lapisan SLP kurang banyak dan kurang dicirikan tetapi juga memainkan peranan penting dalam kepatogenan CD. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, penyelidikan mengenai SLP telah mendapat perhatian yang lebih tinggi, kerana protein ini telah ditunjukkan memainkan peranan penting dalam lekatan permukaan, pengaktifan reseptor seperti Tol, induksi pengeluaran sitokin, dan pengaktifan inflammasom sebagai sebahagian daripada tindak balas imun hos selain mereka. peranan dalam pertumbuhan dan kemandirian bakteria [7-9].

Dalam ulasan ini, kami membincangkan tindak balas imun hos kepada komponen SlpA utama dan Cwps lain yang kurang banyak berdasarkan pengetahuan terkini tentang C. difficile SLP dan menyerlahkan potensi mereka untuk digunakan sebagai vaksin baru dan sasaran terapeutik yang sangat relevan dalam patogenesis CDI.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

2. Host Respons Imun Semula Jadi terhadap CDI

Telah ditunjukkan bahawa strain C. difficile (NTCD) bukan toksik apabila dijajah dalam model haiwan memberikan perlindungan terhadap strain patogen C. difficile. Pada awal 1980-an, Wilson dan Sheagren melaporkan bahawa hamster yang dijajah oleh strain NTCD selepas disterilkan dengan cefoxitin antibiotik telah dilindungi apabila dicabar dengan strain C. difficile (TCD) toksigenik [10]. Walau bagaimanapun, rawatan dengan spesies lain, seperti C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes, dan strain NTCD yang tidak toksik yang dibunuh haba, gagal melindungi daripada CDI. Tambahan pula, perlindungan telah hilang apabila NTCD yang menjajah telah disterilkan menggunakan rawatan vankomisin sebelum cabaran [11]. Digalakkan oleh penemuan ini, spora strain NTCD-M1 telah digunakan dalam sebilangan terhad pesakit klinikal yang mengalami CDI berulang (rCDI) dengan kejayaan yang besar (kira-kira 50%) [12]. Pada masa ini, pilihan rawatan CDI adalah terhad dan sangat bergantung pada penggunaan antibiotik, seperti vancomycin, fidaxomicin, dan metronidazole [13,14]. Penggunaan antibiotik yang berlebihan membawa kepada dysbiosis mikrobiom yang sihat dan seterusnya membantu dalam pemilihan patobion seperti C. difficile yang boleh berulang kemudian [1,15]. Untuk mengelakkan cabaran ini dengan berkesan, kaedah rawatan alternatif memerlukan perhatian segera. Beberapa pilihan rawatan ini termasuk peneutralan toksin C. difficile menggunakan antibodi monoklonal terhadap TcdB, seperti infusi bezlotoxumab, yang menghalang kerosakan pengantara toksin pada epitelium usus [16]. Kaedah lain yang menarik ialah pemulihan mikrobiom yang sihat menggunakan pemindahan mikrobiota najis (FMT) daripada penderma yang sihat di kalangan ahli keluarga terdekat. FMT telah menunjukkan hasil yang menjanjikan terhadap CDI berulang dengan kadar kejayaan sehingga 90% [17,18]. Malangnya, kajian ini tidak menangani peranan tindak balas imun hos dalam perlindungan pesakit ini. Oleh itu, boleh dikatakan bahawa NTCD hidup merembeskan beberapa antigen/komponen dinding sel yang mendorong tindak balas imun yang kuat terhadap TCD toksik. Begitu juga, perlindungan FMT kurang ditakrifkan. Oleh itu, memahami bagaimana pengenalan FMT mendorong tindak balas hos mungkin membantu dalam mengenal pasti antigen utama, yang seterusnya boleh membantu dalam pemahaman yang lebih baik tentang tindak balas imun dan pembangunan vaksin baru terhadap CDI.

Dalam usus, sistem imun semula jadi hos adalah barisan pertahanan pertama terhadap patogen yang menyerang, yang memainkan peranan penting dalam membentuk dan memasang tindak balas imun adaptif hos yang teguh [1]. Tindak balas semula jadi terdiri terutamanya daripada tiga bahagian: (i) epitelium usus dan lapisan mukosa (penghalang fizikal), (ii) peptida antimikrob, yang merupakan produk perkumuhan sel epitelium, sel Paneth, dan beberapa ahli mikrobiota usus (kimia). penghalang), dan (iii) tindak balas selular dengan pengambilan sel imun semula jadi seperti neutrofil, eosinofil, makrofaj, sel limfoid semula jadi (ILC), dan sel dendritik (DC) yang diatur oleh pelbagai laluan isyarat semula jadi untuk memerangi patogen yang menyerang. 1]. Sel hos menanggung Reseptor Pengecaman Corak (PRR), seperti TLR, pada permukaannya yang mengecam tandatangan bakteria terpelihara tertentu pada mikrob yang dipanggil corak molekul berkaitan patogen (PAMP). PRR ini juga dikenali sebagai Reseptor Seperti Tol (TLR). Selepas pengiktirafan isyarat bahaya (PAMP) ini oleh TLR, sel hos mencetuskan tindak balas imun. Dalam hal ini, Reseptor seperti Tol 4 (TLR4) telah ditunjukkan untuk mengenali isyarat bahaya C. difficile, tindakan yang mengambil bahagian dalam permulaan tindak balas keradangan perumah. Dalam konteks ini, SLP C. difficile telah ditunjukkan untuk berinteraksi dengan TLR hos-4 manakala C. difficile flagella berinteraksi melalui TLR5 [19,20].

manfaat cistanche untuk lelaki-menguatkan sistem imun

3. Protein lapisan S (SLP) dalam C. difficile

Dalam dekad kebelakangan ini, protein lapisan permukaan (lapisan S) C. difficile telah mendapat perhatian yang besar. SLP pertama kali dikenal pasti oleh Kawata et al. pada tahun 1984 dan menyumbang kira-kira 15% daripada jumlah jisim sel [21,22]. SLP terdapat dalam banyak spesies prokariotik yang pelbagai. Majoriti SLP disusun pada permukaan paling luar sel sebagai protein tunggal dalam tatasusunan parakristalin dua dimensi [7]. Dalam C. difficile, lapisan S terdiri terutamanya daripada protein SlpA heterodimerik. SlpA ialah heterodimer yang terdiri daripada protein berat molekul tinggi (HMW) dan protein berat molekul rendah (LMW) yang dikodkan oleh gen slpA tunggal; LMW SLP membentuk lapisan atas terdedah manakala HMW SLP membentuk lapisan bawah. LMW SLP adalah unik dalam C. difficile. Dalam terikan C. difficile 630, lokus slpA ialah rantau 36.6 kb yang mempunyai 11 paralog slpA. Tambahan pula, terdapat tambahan 17 paralog yang tersebar di seluruh genom [23,24]. Gen paralog ini kini dinamakan protein dinding sel clostridial (CwpX), di mana X menandakan nombor paralog yang dikenal pasti (X=1–29) dan diterangkan dalam Jadual 1. Walau bagaimanapun, empat Cwps berciri sebelum ini dikenali sebagai SlpA, Cwp66, Cwp84, dan CwpV dinamakan sebelum konvensyen penamaan baru ini diterima pakai [23]. Semua Cwps adalah protein tipikal yang mengandungi peptida isyarat N-terminal dan tiga domain pengikat dinding sel putative dengan persamaan yang ketara dengan HMW SLP [25,26]. Strain C. difficile yang berbeza telah menunjukkan variasi dalam lokus slpA dan kira-kira 12 jenis kaset lapisan S yang berbeza telah didokumenkan. 28 Cwps yang lain bertindak sebagai komponen aksesori, yang berlabuh dalam lapisan parakristalin terpolimer, yang menyumbang ~ 5-20% daripada lapisan S [7].

Jadual 1. Fungsi Putatif bagi 29 gen cawan yang terdapat dalam genom Clostridium difficile 630.

Jadual 1. Samb.

4. Ekspresi dan Variasi Terikan Protein Dinding Sel

Dalam C. difficile strain 630, telah dilaporkan bahawa kira-kira sembilan gen pengekodan Cwps dinyatakan [25]. Manakala gen cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24, dan cwp25 diekspresikan pada permukaan sel dalam keadaan pertumbuhan normal [44], gen cwp66 dan cwp5 dinyatakan tetapi tidak ditemui dalam ekstrak permukaan sel. Dalam kajian berasingan, Biazzo et al. cawan dianalisis yang bertaburan di seluruh genom C. difficile. Mereka memerhatikan bahawa gen cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24, dan cwp25 dinyatakan dan mempunyai jujukan yang dipelihara dengan baik, manakala cwp17, cwp26, cwp20, cwp22, cwp287, dan cwp287 gen yang ketara dalam ekspresi gen yang ketara. ribotip dan kurang dipelihara [45]. Banyak gen lokus slpA menunjukkan variasi ketara antara strain, terutamanya kawasan permukaan terdedah. Contohnya, slpA, cwp66, secA2 dan cwp2, telah ditunjukkan mempunyai variasi yang tinggi dalam lokus slpA (yang membentuk kaset 10-kb); setakat ini 12 varian mencapah kaset ini telah ditemui hasil daripada penggabungan semula homolog antara genotip yang berbeza [46]. Menurut Karjalainen et al., cwp66 menunjukkan hanya 33% identiti antara strain [26]. Varian cwp2 telah digantikan oleh gugusan gen glikosilasi lapisan S 23.8 kb yang diramalkan dalam lokus slpA [46]. SlpA ialah SLP yang paling banyak ditemui dalam ekstrak permukaan sel C. difficile dan merupakan konstituen utama C. difficile SLP. Protein matang dibelah selepas rembesan menjadi protein HMW dan LMW terbentuk melalui tindakan protease Cwp84 untuk membentuk kompleks H/L kompleks heterodimerik, yang berpolimer membentuk lapisan S [47] (Rajah 1). Penyahaktifan gen cwp84 dalam C. difficile 630∆erm menghasilkan lapisan S yang hanya terdiri daripada rantai tunggal SlpA yang tidak matang dengan morfologi koloni yang diubah, mencadangkan peranan penting Cwp84 dalam pembentukan lapisan S matang [32]. Kehadiran gen secA2 dalam lokus slpA adalah penting untuk pengangkutan SlpA dan Cwps lain merentasi membran sitoplasma [48].

Rajah 1. SLP C. difficile mengantara lekatan dan pengaktifan sel imun. Peptida SlpA Nascent dibelah oleh protease Cwp84 ke dalam subunit LMW dan HMW, yang membentuk kompleks SlpA matang dari lapisan SLP dinding sel [31-33]. SLP mengantara lekatan melalui TLR4 mengganggu persimpangan ketat sel epitelium usus dan seterusnya mengaktifkan sel dendritik/makrofaj, yang seterusnya menghasilkan pelbagai sitokin dan kemokin yang membawa kepada induksi Th1/Th2 dan tindak balas humoral [9,27]. Interleukin (IL), sel Dendritik (DC), Berat molekul rendah (LMW), Berat molekul tinggi (HMW), Reseptor seperti tol 4 (TLR4).

5. Fungsi S-Layer Protein

SLP terlibat dalam pelbagai fungsi dalam biologi C. difficile (Lihat Jadual 1), seperti integriti sel, pengangkutan, pembentukan liang dan penambat, degradasi, pelekatan / pencerobohan sel perumah, pengelakan sistem imun, dan perlindungan daripada mikroorganisma yang bersaing [22] . Pechineet al. mengesan antibodi terhadap domain N-terminal dan C-terminal antigen Cwp66 dalam sera pesakit Clostridium difficile-associated disease (CDAD) [49]. Dalam kajian lain, Wright et al. memisahkan Cwps menggunakan 2D-PAGE dan mengenal pasti beberapa Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19) yang bertindak balas dengan sera pesakit yang dijangkiti dengan strain C. difficile ribotype 017 yang mencadangkan induksi tindak balas imun yang kuat terhadap SLP [50]. Baru-baru ini, Kirk et al. mengenal pasti dua strain C. difficile yang tidak mempunyai lapisan S dan yang tidak terdedah kepada bakteriosin yang membentuk liang dan mendepolarisasi sel bakteria yang bersaing. Walau bagaimanapun, strain C. difficile ini menunjukkan kecenderungan meningkat dengan ketara kepada lisozim dan peptida antimikrob LL-37 dan tidak menghasilkan simptom penyakit CDI dalam model jangkitan hamster [51]. Satu kajian baru-baru ini menyiasat kesan SlpA yang diasingkan daripada tiga strain toksikogenik (RT126, RT001, RT084) pada ekspresi protein simpang ketat (TJ) dan induksi sitokin pro-radang dalam saluran sel karsinoma kolon manusia HT-29 . Rawatan SlpA dengan ketara mengurangkan tahap ekspresi keluarga claudin dan protein simpang ketat JAM-A (Rajah 1) [9]. Selain itu, protein SlpA meningkatkan tahap ekspresi TLR-4 dan mendorong rembesan TNF- , IL-1 dan IL-8. Keputusan ini menunjukkan bahawa patogenesis pengantara protein SlpA dan tindak balas keradangan yang disebabkan dalam usus [9]. Oleh itu, adalah munasabah untuk berhujah bahawa SLP adalah penting untuk patogenik C. difficile dan tindak balas imun.

cistanche tubulosa-meningkatkan sistem imun

6. Tindak Balas Kekebalan terhadap SLP

Penyiasatan terkini telah menunjukkan peranan penting SlpA bukan sahaja dalam kemandirian dan pertumbuhan bakteria tetapi juga dalam membentuk tindak balas imun hos. Pendekatan berasaskan imunoproteomik telah menunjukkan kehadiran antibodi anti-SLP dalam sera enam pesakit yang dijangkiti C. difficile ribotype 017, menunjukkan bahawa protein SLP adalah imunodominan dan dinyatakan semasa jangkitan [50]. Kajian yang diketuai oleh Bruxelles et al. menunjukkan tahap antibodi anti-SlpA yang tinggi dalam pesakit CDI berbanding pesakit yang sihat [52]. Dalam kajian lain, Negm et al. mengesan antibodi IgG dalam sera daripada sejumlah 327 individu dengan CDI terhadap ekstrak SLP daripada pelbagai strain C. difficile [53]. Sebagai tambahan kepada SlpA, domain terminal-C terdedah bagi protein kedua paling banyak Cwp66 adalah sangat berubah-ubah manakala domain terminal-N dipelihara dengan baik. Domain C-terminal pembolehubah Cwp66 dan Cwp84 telah ditunjukkan sebagai imunogenik pada manusia [49,54]. Di samping itu, dalam pesakit CDI, jumlah purata tahap anti-Cwp66 dan anti-Cwp84 adalah lebih rendah daripada kumpulan kawalan sihat yang mencadangkan sifat perlindungan antibodi. Oleh itu, SLP, khususnya SlpA, dan komponen lain mempunyai peranan penting dalam pertahanan imun dan merupakan sasaran yang berpotensi untuk pembangunan imunoterapeutik dan vaksin seperti yang diterangkan dalam bahagian berikut.

7. SLPs Mediate C. difficile Adhesion

C. difficile memulakan jangkitan dengan melekat pada sel epitelium usus yang membawa kepada penjajahan. Dalam hal ini, SLP bakteria seperti SlpA dan Cwp66 memainkan peranan penting dalam lekatan. Telah dilaporkan bahawa variasi dalam SLP khususnya SlpA dalam strain C. difficile terpencil menunjukkan perubahan dalam pematuhan [55]. SLP telah ditunjukkan untuk mengikat garisan sel yang berbeza, seperti garisan sel gastrousus manusia sel Hep-2 dan Vero, dan banyak protein matriks ekstraselular. Selanjutnya, rawatan dengan antibodi anti-HMW-SLP menghalang pematuhan C. difficile. Di samping itu, pra-rawatan sel hos dengan sama ada subunit SlpA yang disucikan atau antibodi anti-SlpA juga menghalang pematuhan C. difficile [55]. Ahli homolog terbesar keluarga protein SlpA ialah protein CwpV, yang dinyatakan dalam cara pembolehubah fasa. Dalam kajian berasingan, ditunjukkan bahawa domain berulang terminal C bagi protein CwpV menjadi pengantara pengagregatan C. difficile. Tambahan pula, domain ini berbeza antara strain dan lima jenis ulangan yang berbeza secara antigen telah dikenalpasti [40].

Satu lagi protein imunogenik bernama Cwp66 telah terbukti mempunyai sifat lekatan. Cwp66 yang telah disucikan dan antibodi terhadap domain terminal-N dan terminal-C menghalang pematuhan C. difficile kepada sel Vero berbudaya yang menunjukkan sifat lekatan Cwp66 [29].

8. Induksi Tindak Balas Radang

Bianco et al. menunjukkan peranan SLP dalam proses keradangan. Dalam kajian itu, SLP daripada strain hypervirulent dan epidemic (H/E) atau bukan H/E C. difficile telah dimurnikan dan dikaji dalam monosit manusia dan sel dendritik terbitan monosit (MDDCs) dari segi induksi sitokin imunomodulator [interleukin. (IL)-1 , IL-6 dan IL- 10] [56]. Kajian itu menunjukkan bahawa SLP bukan sahaja mendorong kematangan MDDC, dengan aktiviti penyampaian antigen yang dipertingkatkan tetapi juga mendorong rembesan tahap IL yang tinggi-10. Walau bagaimanapun, tiada perbezaan ketara ditemui dalam pengaktifan monosit dan MDDC oleh persediaan SLP daripada strain H / E dan bukan H / E yang menunjukkan bahawa SLP tidak menyumbang kepada peningkatan keterukan penyakit [56]. Dalam kajian lain, Ausiello et al. mengekstrak SLP daripada pencilan klinikal C253 dan menunjukkan bahawa SLP mendorong rembesan tahap dipertingkatkan sitokin pro-radang IL{- dan IL-6 dalam monosit berehat dan mendorong kematangan MDDC manusia serta meningkatkan percambahan T sel [57]. Selanjutnya, MDDC yang dirawat ini juga mengeluarkan jumlah IL-10 dan IL-12p70 yang tinggi dan mendorong tindak balas imun Th1/Th2 bercampur. TLR-4 memainkan peranan penting dalam pengaktifan pengantaraan SLP bagi DC. Telah ditunjukkan bahawa SLP tidak dapat mengaktifkan DC yang diasingkan daripada tikus TLR4-mutant C3H/HeJ dan gagal untuk mendorong tindak balas imun Th berikutnya yang menunjukkan bahawa SLP mengaktifkan imuniti semula jadi dan adaptif yang dimediasi oleh reseptor TLR4 [19]. Dalam kajian lain, ia telah ditunjukkan dalam makrofaj bahawa SLP daripada C. difficile mendorong tindak balas pelepasan dari segi rembesan sitokin dan kemokin pro-radang dengan peningkatan penghijrahan makrofaj dan aktiviti fagositosis [58]. Rawatan dengan perencat p38 membalikkan tindak balas ini menunjukkan peranan molekul isyarat dalam tindak balas pengantara SLP [58]. Kajian terbaru melaporkan pengaktifan inflammasom oleh C. difficile SLPs dalam cara yang bergantung kepada dos. Selanjutnya, telah ditunjukkan bahawa mikrodomain yang kaya dengan kolesterol (rakit lipid) pada membran sel membantu dalam pengikatan SLP ke membran sel. Ini berdasarkan mikroskop pendarfluor, di mana ia menunjukkan bahawa rawatan metil- -siklodekstrin (M CD) yang menghabiskan kolesterol membran mengurangkan pengikatan SLP yang menunjukkan bahawa SLP merekrut rakit lipid, kritikal untuk penjajahan C. difficile dan pengaktifan inflammasom [59 ]. Kajian-kajian ini berpendapat bahawa C. difficile SLP boleh mengaktifkan tindak balas imun semula jadi dan adaptif, yang sebahagiannya dimediasi oleh TLR4, mencadangkan peranan penting SLP dalam mendorong tindak balas imun. Oleh itu, keputusan ini juga mencadangkan potensi SLP sebagai calon vaksin terhadap CDI.

9. Tindak balas Antibodi terhadap CDI

Beberapa kajian imunologi menunjukkan bahawa jangkitan dan hasil C. difficile bergantung pada keamatan tindak balas imun hos, faktor utama dalam patogenik CDI. Oleh itu, ketidakupayaan untuk membangunkan tindak balas antibodi yang teguh mungkin merupakan prognosis untuk keterukan dan pengulangan penyakit [60]. Dalam hal ini, tahap antibodi terhadap toksin utama telah dikaitkan dengan pengulangan dan keterukan penyakit [61,62]. Antibodi terhadap komponen permukaan C. difficile telah dilaporkan dalam serum pesakit CDI dalam kajian terdahulu juga [63]. Drudy et al. menilai tindak balas imun humoral terhadap ekstrak C. difficile SLP dalam kohort 146 pesakit yang terdiri daripada 55 pesakit dengan cirit-birit berkaitan C. difficile (CDAD), 34 pesakit dengan pembawa tanpa gejala, dan 57 subjek kawalan [64]. Kajian itu mengasingkan pengekstrakan pecahan MW tinggi dan rendah bagi SLP, yang mengandungi terutamanya protein SlpA yang banyak. Mereka mengukur antibodi serum menggunakan ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA) dalam kohort ini dan mendapati tiada perbezaan ketara dalam tahap antibodi IgM, IgA atau IgG serum. Menariknya, pesakit dengan episod berulang CDAD mempunyai tahap IgM-anti-SLP yang jauh lebih rendah daripada pesakit dengan episod tunggal. Kajian itu menyimpulkan bahawa kajian lanjut perlu dilakukan untuk menentukan tindak balas antibodi anti-SLP khusus dan kajian perlindungan menggunakan C. difficile SLPs [64].

Imunisasi pasif dan aktif menggunakan ekstrak terpencil HMW dan LMW SLP telah menunjukkan hasil yang memberangsangkan dengan kadar kemandirian yang dipertingkatkan dalam model cabaran hamster maut. O'Brien et al. menunjukkan tindak balas perlindungan antibodi anti-SLP pada jangkitan C. difficile dalam hamster, di mana kelangsungan hidup berpanjangan dengan ketara dalam kumpulan yang dirawat anti-SLP berbanding dengan kumpulan kawalan [65]. Kesan perlindungan antiserum ditunjukkan melalui peningkatan C. difficile fagositosis [65]. Eidhin et al., menggunakan imunisasi aktif, menguji ekstrak SLP mentah yang mengandungi jumlah equimolar komponen LMW dan HMW peptida SlpA sebagai vaksin dengan adjuvant sistemik dan mukosa yang berbeza dalam hamster Golden Syria dan model tetikus BALB/c. Kajian itu melaporkan rangsangan antibodi sederhana hingga lemah dalam rejimen yang berbeza dan model tetikus menunjukkan tindak balas antibodi yang lebih kuat terhadap SLP berbanding hamster [66]. Dalam kajian lain, Brunet al. memeriksa aktiviti adjuvant in vivo dua peptida yang terdiri daripada domain pengikat reseptor toksin A (TxA (C314)) dan serpihan SLP-36 kDa daripada terikan C. difficile C253 terhadap protein pengikat fibronektin A (FnbpA ), antigen vaksin pelindung terhadap Staphylococcus aureus [67]. Mereka menilai tindak balas menggunakan laluan intranasal dan subkutan dan mendapati bahawa kedua-dua serpihan meningkatkan pengeluaran anti-FnbpA IgG dan IgA yang beredar. Mereka menyimpulkan bahawa serpihan ini apabila digunakan sebagai adjuvant berbeza mempengaruhi dan mempolarisasi sistem imun [67]. Dalam kajian lain, Shirvan et al. menjana dan menyatakan antibodi rekombinan khusus terhadap SLP seperti Cwp66 dan SlpA daripada protein C. difficile 630 menggunakan paparan phage dan menunjukkan bahawa antibodi rekombinan ini bertindak balas terhadap SLP dan komponennya dalam cara khusus terikan dengan kekhususan yang tinggi [68].

Tindak balas dan perlindungan imun dalam model hamster menggunakan protease Cwp84 sebagai antigen telah dinilai oleh beberapa laluan imunisasi [69]. Kajian itu mendapati titer antibodi berbeza berdasarkan laluan imunisasi. Perlindungan terbaik diperhatikan melalui laluan rektum imunisasi. Selanjutnya, kumpulan hamster yang diimunisasi menghasilkan kolonisasi usus C. difficile 26% lebih lemah dan perlahan selepas cabaran C. difficile dengan kadar kemandirian yang jauh lebih tinggi (33% lebih besar) daripada kumpulan yang tidak diimunisasi [69].

sistem imun yang meningkatkan tumbuhan cistanche

10. Anti-C Berasaskan SLP. difficile Therapeutics

Terapeutik berasaskan antibodi khusus untuk meneutralkan C. difficile mungkin merupakan strategi yang berkesan. Kandalaft et al. menggunakan antibodi domain tunggal untuk menyasarkan SLP [70]. Kumpulan itu menyediakan panel antibodi domain tunggal (VHH) khusus SLP daripada C. difficile hypervirulent strain QCD-32g58 (027 ribotype). Keputusan mereka menunjukkan beberapa VHH yang terikat pada epitop QCD-32g58 yang terletak pada subunit LMW SLP dengan pertalian tinggi. Selanjutnya, mereka melaporkan bahawa VHH ini mempunyai kekhususan yang mengikat kepada ribotip 001, dan 027, dan subset antibodi VHH ini secara meluas reaktif silang kepada ribotip 012, 017, 023, dan 078. VHH ini juga ditunjukkan untuk menghalang pergerakan C. difficile QCD-32g58 secara in vitro [70].

Pembangunan satu lagi agen antibakteria ketepatan Av-CD291.2 oleh Kirk et al. telah dilaporkan yang secara khusus membunuh C. difficile dan menghalang penjajahan pada tikus [51]. Av-CD291.2 telah ditunjukkan untuk membunuh pelbagai pencilan C. difficile berdasarkan kehadiran jujukan SLP dalam strain C. difficile. Penulis mendakwa telah mengenal pasti mutan nol SLP yang mengandungi mutasi titik dalam gen slpA, yang tahan terhadap agen Av-CD291.2. Mutan ini juga mempunyai kecacatan sporulasi tetapi dapat menjajah saluran usus walaupun pengecilan virulensi dalam model hamster [51]. Tambahan pula, mereka membina panel Avidocin-CD yang membunuh pelbagai strain C. difficile dalam cara yang bergantung pada urutan SLP yang mencadangkan peranan penting antibakteria ini berdasarkan SLP untuk mencegah CDI [51].

11. Ucapan Penutup dan Soalan Kritikal Belum Dijawab

Hos membangunkan tindak balas imun spesifik yang teguh terhadap toksin C. difficile dan komponen permukaan. SLP telah ditunjukkan mempunyai peranan dalam lekatan sel, induksi pelbagai sitokin melalui pengaktifan TLR4, dan pengaktifan kedua-dua tindak balas imun semula jadi dan humoral. Walau bagaimanapun, kajian mengenai pengaktifan tindak balas sel T oleh SLP diperlukan untuk membedah lebih lanjut peranan sel CD4 dan CD8. Berdasarkan pengaktifan tindak balas humoral, antibodi peneutral ini terhadap toksin dan komponen permukaan boleh menghalang tanda-tanda klinikal CDI. Kajian menggunakan imunisasi aktif atau pasif terhadap SLP telah menunjukkan hasil yang memberangsangkan, menunjukkan bahawa strategi itu boleh dikembangkan lagi menjadi terapeutik baru terhadap patogenik CDI. Banyak perhatian telah diberikan kepada SlpA sebagai calon vaksin; bagaimanapun, disebabkan kebolehubahan jujukan tinggi SlpA antara strain, vaksin mungkin tidak berkesan terhadap semua ribotaip. Oleh itu, vaksin berasaskan epitope mungkin diperlukan untuk memintas masalah ini. Dalam hal ini, antibodi domain tunggal (VHH) terhadap SLP adalah pilihan yang berdaya maju, yang mengikat subunit LMW-SLP C. difficile dengan kekhususan yang tinggi dan telah ditunjukkan untuk menghalang motilitas strain C. difficile. Pada masa ini, pemahaman tentang peranan mekanistik SLP dan paralognya dalam patogenesis CDI, lekatan, dan tindak balas sel T masih di peringkat awal dan sebahagian besarnya masih belum diterokai. Kajian lanjut diperlukan untuk membedah fungsi molekul dan tindak balas imun spesifik SLP, untuk membantu memupuk perkembangan pesat sasaran vaksin/ubat baru dan terapeutik untuk memerangi jangkitan C. difficile.

Rujukan

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, OH; Matahari, X.; Shukla, P. Patobionts: Mekanisme kelangsungan hidup, pengembangan dan interaksi dengan hos dengan tumpuan pada Clostridioides difficile. Mikrob Usus 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, PA; Citron, DM; Tyrrell, KL; Finegold, SM Pengelasan Semula Clostridium difficile sebagai Clostridioides difficile (Hall dan O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, Pemberitahuan GM mengenai perubahan pendapat taksonomi yang diterbitkan sebelum ini di luar IJSEM. Int. J. Syst. Evol. mikrobiol. 2018, 68, 2137–2138. [CrossRef]

4. Pusat Kawalan dan Pencegahan Penyakit. Ancaman Rintangan Antibiotik di Amerika Syarikat, 2019. 2019. Tersedia dalam talian: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (diakses pada 8 September 2022).

5. Shields, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Jangkitan Clostridium difficile berulang: Dari penjajahan hingga sembuh. Anaerobe 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. Faktor transkripsi pengawalseliaan patogenesis Clostridioides difficile dengan tumpuan kepada peraturan toksin. Crit. Mikrobiol Rev. 2022. [CrossRef]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwinska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Baslé, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; et al. Struktur dan pemasangan lapisan S dalam C. difficile. Nat. Commun. 2022, 13, 970. [CrossRef]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Ciri dan Peranan Imunologi Protein Lapisan Permukaan dalam Clostridium difficile. Ann. Makmal. Med. 2018, 38, 189–195. [CrossRef] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Protein lapisan permukaan A daripada ribotip Clostridioides difficile hypervirulent mendorong perubahan ketara dalam ekspresi gen persimpangan ketat dan tindak balas keradangan dalam sel epitelium usus manusia. Mikrobiol BMC. 2022, 22, 259. [CrossRef]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Antagonisme Clostridium difficile toksik oleh C. difficile bukan toksik. J. Jangkitan. Dis. 1983, 147, 733–736. [CrossRef]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Perlindungan hamster terhadap Clostridium difficile ileocolitis oleh kolonisasi terdahulu dengan strain bukan patogen. J. Med. mikrobiol. 1985, 19, 339–350. [CrossRef]

12. Meterai, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Rawatan cirit-birit Clostridium difficile berulang dengan pemberian strain bukan toksik. Eur. J. Clin. mikrobiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Lavergne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, CP; Wilcox, Garis Panduan Amalan Klinikal MH oleh Persatuan Penyakit Berjangkit Amerika (IDSA) dan Persatuan Epidemiologi Penjagaan Kesihatan Amerika (SHEA): Garis Panduan Kemas Kini Berfokus 2021 mengenai Pengurusan Jangkitan Clostridioides difficile pada Dewasa. Clin. Jangkitan. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Norén, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; et al. Persatuan Mikrobiologi Klinikal dan Penyakit Berjangkit Eropah: Kemas kini 2021 pada dokumen panduan rawatan untuk jangkitan Clostridioides difficile pada orang dewasa. Clin. mikrobiol. Jangkitan. 2021, 27 (Bekalan 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, KA; Patouni, K.; Rafailidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Kegagalan rawatan dan berulangnya jangkitan Clostridium difficile selepas rawatan dengan vancomycin atau metronidazole: Kajian sistematik bukti. Int. J. Antimikrob. Ejen 2012, 40, 1–8. [CrossRef]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Terapi antibodi monoklonal yang muncul untuk pencegahan jangkitan Clostridium difficile berulang. Biologi 2018, 12, 11–21. [CrossRef]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Kajian sistematik dengan meta-analisis: Hasil jangka panjang pemindahan mikrobiota tahi untuk jangkitan Clostridium difficile. Makanan. Pharmacol. Di sana. 2016, 43, 445–457. [CrossRef]

18. Quraisy, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Harga, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Kajian sistematik dengan meta-analisis: Keberkesanan pemindahan mikrobiota tahi untuk rawatan jangkitan Clostridium difficile yang berulang dan refraktori. Makanan. Pharmacol. Di sana. 2017, 46, 479–493. [CrossRef]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smith, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; et al. Peranan untuk TLR4 dalam jangkitan Clostridium difficile dan pengiktirafan protein lapisan permukaan. Pathog PLoS. 2011, 7, e1002076. [CrossRef]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, PA; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile flagella kebanyakannya mengaktifkan laluan NF-κB berpaut TLR5-dalam sel epitelium. Anaerobe 2016, 38, 116–124. [CrossRef]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Demonstrasi dan pencirian awal tatasusunan biasa dalam dinding sel Clostridium difficile. Mikrobiol FEMS. Lett. 1984, 24, 323–328. [CrossRef]

22. Sára, M.; Sleytr, UB S-Layer protein. J. Bakteria. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Satu tatanama yang dicadangkan untuk protein dinding sel Clostridium difficile. J. Med. mikrobiol. 2011, 60, 1225–1228. [CrossRef]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Valenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Notasi semula jujukan genom strain Clostridium difficile 630. J. Med. mikrobiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Ward, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Pencirian molekul protein lapisan permukaan daripada Clostridium difficile. Mol. mikrobiol. 2001, 40, 1187–1199. [CrossRef]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Analisis molekul dan genomik gen yang mengekodkan protein berlabuh permukaan daripada Clostridium difficile. Jangkitan. imun. 2001, 69, 3442–3446. [CrossRef]

27. Bersedia, SE; Candela, T.; Shaw, HA; Seager, Z.; Mesej, S.; Fagan, RP; Fairweather, protein permukaan NF Clostridium difficile dilabuhkan pada dinding sel menggunakan motif CWB2 yang mengenali polimer anionik PSII. Mol. mikrobiol. 2015, 96, 596–608. [CrossRef]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Bersinar, CC; Acharya, KR Cwp2 dari Clostridium difficile mempamerkan tiga lipatan domain lanjutan dan lekatan sel secara in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [CrossRef]

29. Waligora, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Pencirian protein permukaan sel Clostridium difficile dengan sifat pelekat. Jangkitan. imun. 2001, 69, 2144–2153. [CrossRef]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Hey.; Yu, W.; Cui, G.; et al. Gen cwp66 Mempengaruhi Lekatan Sel, Toleransi Tekanan dan Rintangan Antibiotik dalam Clostridioides difficile. mikrobiol. Spectr. 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, RP; Stock, EM; Sembuh, WP; Janoir, C.; Fairweather, NF; Tate, EW Kuar kimia bagi biogenesis lapisan permukaan dalam Clostridium difficile. ACS Chem. biol. 2010, 5, 279–285. [CrossRef]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, protease sistein yang berkaitan dengan permukaan, memainkan peranan dalam pematangan lapisan permukaan Clostridium difficile. J. Biol. Kimia. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, protein Clostridium difficile yang berkaitan permukaan, ialah protease sistein dengan aktiviti merendahkan pada protein matriks ekstraselular. J. Bakteria. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Miheliˇc, M.; Lindiˇc, N.; Borisek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. Modul Penambat Dinding Sel CWB2 Didedahkan oleh Struktur Kristal Protein Dinding Sel Clostridium difficile Cwp8 dan Cwp6. Struktur 2017, 25, 514–521. [CrossRef]

35. Eddy, SR Model kebarangkalian penjajaran jujukan tempatan yang memudahkan anggaran kepentingan statistik. Pengiraan PLoS. biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey, EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Haynes, CA; Finlay, BB; Strynadka, NC Struktur kristal kompleks reseptor Escherichia coli enteropatogenik enteropatogenik. Alam 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Bersedia, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Peranan sistein protease Cwp84 dan Cwp13 dalam biogenesis dinding sel Clostridium difficile. J. Bakteria. 2011, 193, 3276–3285. [CrossRef]

38. Mayer, BJ SH3 domain: Kerumitan secara sederhana. J. Sel Sci. 2001, 114, 1253–1263. [CrossRef]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Novel Peranan Domain SH2 dan SH3 dalam Pengikat Lipid. Sel 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emerson, JE; de la Riva, L.; Fagan, RP; Fairweather, NF Protein dinding sel Clostridium difficile CwpV secara antigen berubah antara strain tetapi mempamerkan fungsi menggalakkan pengagregatan yang terpelihara. Pathog PLoS. 2011, 7, e1002024. [CrossRef]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Bersinar, CC; Acharya, KR Struktur molekul domain hidrolase glikosida Cwp19 daripada Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [CrossRef]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; Hey.; Sun, X. Cwp22, enzim penghubung silang peptidoglycan novel, memainkan peranan pleiotropik dalam Clostridioides difficile. alam sekitar. mikrobiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, SR; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, SC; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; et al. Pangkalan data keluarga protein Pfam: Ke arah masa depan yang lebih mampan. Asid Nukleik Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Tunggu, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Analisis proteomik protein permukaan sel daripada Clostridium difficile. Proteomics 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Kepelbagaian lokus cwp dalam pengasingan klinikal Clostridium difficile. J. Med. mikrobiol. 2013, 62, 1444–1452. [CrossRef]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, MA; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; et al. Penukaran rekombinasi lapisan S Clostridium difficile dan gugusan gen glikosilasi novel yang didedahkan oleh penjujukan genom keseluruhan berskala besar. J. Jangkitan. Dis. 2013, 207, 675–686. [CrossRef]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, KA; Fairweather, NF Cerapan struktur ke dalam organisasi molekul lapisan S daripada Clostridium difficile. Mol. mikrobiol. 2009, 71, 1308–1322. [CrossRef]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile mempunyai dua sistem rembesan Sec selari dan penting. J. Biol. Kimia. 2011, 286, 27483–27493. [CrossRef]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, M.; Collignon, A. Sifat imunologi protein permukaan Clostridium difficile. J. Med. mikrobiol. 2005, 54, 193–196. [CrossRef]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF protein dinding sel imunoreaktif Clostridium difficile yang dikenal pasti oleh sera manusia. J. Med. mikrobiol. 2008, 57, 750–756. [CrossRef]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Kelas baharu antimikrobial ketepatan mentakrifkan semula peranan Clostridium difficile S-lapisan dalam virulensi dan daya maju. Sci. Terjemahan Med. 2017, 9, eaah6813. [CrossRef]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Sifat imunogenik lapisan permukaan prekursor Clostridium difficile dan ujian vaksinasi dalam model haiwan. Anaerobe 2016, 37, 78–84. [CrossRef]

53. Negm, OH; Hamed, MR; Dilnot, EM; Bersinar, CC; Marszalowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwards, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, MH; et al. Memprofilkan Tindak Balas Kekebalan Humoral terhadap Antigen Khusus Clostridium difficile oleh Analisis Mikroarray Protein. Clin. Vaksin Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Kebolehubahan protein permukaan Clostridium difficile dan tindak balas antibodi serum khusus pada pesakit dengan penyakit berkaitan Clostridium difficile. J. Clin. mikrobiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Protein lapisan permukaan A (SlpA) ialah penyumbang utama kepada pematuhan sel hos Clostridium difficile. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [CrossRef]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Aktiviti imunomodulator protein lapisan permukaan yang diperoleh daripada strain Clostridium difficile epidemik dan hipervirulen. J. Med. mikrobiol. 2011, 60, 1162–1167. [CrossRef]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Protein lapisan permukaan daripada Clostridium difficile mendorong sitokin radang dan pengawalseliaan dalam monosit manusia dan sel dendritik. Jangkitan Mikrob. 2006, 8, 2640–2646. [CrossRef]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszalowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Protein lapisan permukaan yang diasingkan daripada Clostridium difficile mendorong tindak balas pelepasan dalam makrofaj. Jangkitan Mikrob. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, LK; Wu, HY; Hsu, CY; Tsai, YS; Ko, tandas; Tsai, Kolesterol Membran PJ Adalah Penting untuk Pengikatan Protein Lapisan Permukaan Clostridium difficile dan Mencetuskan Pengaktifan Inflammasom. Depan. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Bolehkah kita mengenal pasti pesakit yang berisiko tinggi untuk jangkitan berulang Clostridium difficile? Clin. mikrobiol. Jangkitan. 2012, 18 (Bekalan 6), 21–27. [CrossRef]

61. Wullt, M.; Norén, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. Tindak balas antibodi IgG terhadap toksin A dan B pada pesakit dengan jangkitan Clostridium difficile. Clin. Vaksin Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [CrossRef]

62. Leav, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, CP; Katchar, K.; Baxter, R.; et al. Antibodi anti-toksin B serum berkorelasi dengan perlindungan daripada jangkitan Clostridium difficile (CDI) berulang. Vaksin 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Immunoblot analisis tindak balas imunoglobulin serum G terhadap protein permukaan Clostridium difficile pada pesakit dengan cirit-birit yang berkaitan dengan antibiotik. J. Clin. mikrobiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Tindak balas antibodi manusia terhadap protein lapisan permukaan dalam jangkitan Clostridium difficile. FEMS Immunol. Med. mikrobiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonald, GS; DB, NE; Kelleher, DP Imunisasi pasif hamster terhadap jangkitan Clostridium difficile menggunakan antibodi kepada protein lapisan permukaan. Mikrobiol FEMS. Lett. 2005, 246, 199–205. [CrossRef]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Imunisasi aktif hamster terhadap jangkitan Clostridium difficile menggunakan protein lapisan permukaan. FEMS Immunol. Med. mikrobiol. 2008, 52, 207–218. [CrossRef]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 dan SLP-36kDa meningkatkan tindak balas imun terhadap antigen yang ditadbir bersama. J. Med. mikrobiol. 2008, 57, 725–731. [CrossRef]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Pengasingan antibodi rekombinan yang ditujukan terhadap protein permukaan Clostridium difficile. Braz. J. Mikrobiol. 2016, 47, 394–402. [CrossRef]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Imunisasi hamster terhadap jangkitan Clostridium difficile menggunakan protease Cwp84 sebagai antigen. FEMS Immunol. Med. mikrobiol. 2011, 63, 73–81. [CrossRef]

70. Kandalaft, H.; Hussack, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logan, SM; Tanha, J. Menyasarkan protein lapisan permukaan dengan antibodi domain tunggal: Pendekatan terapeutik yang berpotensi terhadap penyakit berkaitan Clostridium difficile. Appl. mikrobiol. Bioteknol. 2015, 99, 8549–8562. [CrossRef]