P16INK4a Tinggi, Penanda Senescence Selular, Dikaitkan Dengan Kecederaan Buah Pinggang, Kemerosotan Dan Hasil dalam Nefritis Lupus
Mar 24, 2022
CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN PENYAKIT BUAH PINGGANG / BUAH PINGGANG
PENGENALANLupus nefritis (LN) adalah komplikasi teruk lupus erythematosus sistemik (SLE), yang dimulakan oleh pemendapan kompleks imun atau autoantibodi dalam membran basal glomerular, diikuti dengan pengambilan sel keradangan.Kecederaan buah pinggangmembawa kepada fibrosis yang tidak dapat dipulihkan, mengakibatkan kehilangan fungsi buah pinggang. LN dirawat dengan kortikosteroid dos tinggi dan agen imunosupresif lain. Satu pertiga daripada pesakit bagaimanapun menunjukkan penurunan dalamfungsi buah pinggang, dengan 5%-10% membangunkan peringkat akhirPenyakit buah pinggangdalam tempoh 10 tahun." Penanda prognostik yang akan membolehkan peningkatan atau pengubahsuaian rawatan tepat pada masanya dicari dengan penuh semangat, seperti sasaran terapeutik baru. Senescence selular, yang dicetuskan oleh rangsangan seperti hakisan telomer, tekanan oksidatif, dan keradangan kronik, akhirnya membawa kepada penangkapan pertumbuhan yang tidak dapat dipulihkan melalui pengumpulan perencat kinase yang bergantung kepada kitaran (CDKK) termasuk protein pl6Na (CDKN2A): ciri utama sains selsenes. Sel-sel senescent kekal aktif secara metabolik dan menjalani beberapa perubahan morfologi dan fisiologi termasuk peningkatan aktiviti β-galactosidase dan pemerolehan fenotip rahsia yang berkaitan dengan radang, profibrotic senescence (SASP)." Walaupun penting dalam pembaikan dan pembentukan semula tisu (contohnya, semasa embriogenesis), senescence selular boleh memberi kesan buruk dalam penyakit yang berkaitan dengan penuaan dan kronik serta kanser.' pl6Nk atau sel positif β-galactosidase telah diperhatikan dalamBuah pinggangpenuaan dan penyakit buah pinggang tertentu, dan dikaitkan dengan lesi histologi danBuah pinggangKemerosotan. Kehadiran sel-sel positif β-galactosidase yang dikaitkan dengan proteinuria dalam tikus yang terdedah kepada MRL/lprlupus°; Walau bagaimanapun, senescence selular masih belum ditunjukkan dengan jelas dalam LN positif. Di sini, kami melaporkan berlakunya pl6ka. sel dalam biopsi buah pinggang dari (n = 40) pesakit dengan LN aktif, dan kaitannya dengankecederaan buah pinggangdan kerosakan fungsi.
Kata kunci:fungsi buah pinggang; penyakit buah pinggang; biopsi buah pinggang; kecederaan buah pinggang; Buah pinggang
CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN DIALISIS BUAH PINGGANG / BUAH PINGGANG
KAEDAH:Pesakit dan biopsi buah pinggangPesakit direkrut di Jabatan Rheumatologi, Cliniques Universitaires Saint-Luc (Brussels, Belgium). Semua memenuhi kriteria klasifikasi ACR yang disemak semula pada tahun 1982 untuk SLE dan mempunyai LN yang terbukti biopsi. Biopsi buah pinggang parafin-embedded (FFPE) formalin-tetap adalah bahan koperal sisa yang dikumpulkan untuk tujuan diagnostik antara Januari 1996 dan November 2019. Anggaran nilai penapisan glomerular (eGFR) dikira menggunakan formula Kerjasama Epidemiologi Penyakit Buah Pinggang Kronik (CKD-EPI). Persetujuan pesakit tidak diperlukan untuk penggunaan bahan koperal sisa, selaras dengan peraturan Belgium mengenai kajian manusia.
Histologi dan imunohisokimiaKlasifikasi ISN/RPS 2003 bagi SLEBuah pinggangbiopsi, skor sklerosis separa kuantitatif, dan indeks aktiviti Institut Kesihatan Nasional (NH) (AI) dan indeks kronik (C) diambil dari rekod perubatan. Latihan imun dengan anti-CD8(C8/144B, Dako)dan anti-p16INK4 (E6H4, Roche Ventana CINtec Histology)dan Picrosirius Red (PSR) pewarnaan dilakukan pada bahagian siri 5μm FFPE. Slaid telah didigitalkan pada pengimbas SCN400 (Leica Biosystems, Jerman)atau pengimbas slaid Pannoramic Confocal (3DHistech, Hungary)at×20magnification. Pengkuantifikasi bantuan komputer seluruh permukaan bahagian dilakukan menggunakan Pengarang V2017.2 (Visi Biopharm, Denmark). Keputusan yang ditunjukkan adalah bilangan sel pl6K atau CD8-positif setiap μm² tisu. Skor PSR separa kuantitatif (skala: 2-6) adalah skor median (glomerular +interstitial fibrosis) dari tiga (buta) penjaring. Maklumat lanjut disediakan dalam kaedah supple-mental dalam talian 1, angka tambahan dalam talian 1.Analisis statistikAnalisis statistik dilakukan pada GraphPad Prism V.9.1.0: Ujian peringkat ditandatangani pasangan Mann-Whitney atau Wilcoxon untuk perbandingan dua kumpulan, Kruskal-Wallis untuk perbandingan berbilang kumpulan dan pekali korelasi pesanan pangkat Spearman.
KEPUTUSAN:sel p16k4-positif dalam biopsi buah pinggang dari pesakit dengan LN aktifKami menilai protein p16Nk oleh imunohistokimia padaBuah pinggangbiopsi yang diambil pada diagnosis daripada 40 pesakit dengan LN aktif, termasuk nefritis kejadian (n = 31) dan kambuh (n = 9). Data demografi, biologi, dan klinikal diringkaskan dalam jadual tambahan dalam talian 1.p16INkA. sel-sel positif dikesan dalam semua, tetapi dengan kebolehubahan yang besar antara sampel: dari hampir tidak ada sel-sel yang tersebar sekali-sekala, ke sel-sel yang sangat positif (angka lA, angka tambahan dalam talian 2A-D). Kuantifikasi pl6staining mengesahkan heterogenitas biopsiLN (julat:: 1.76×10~-260×10~,median:14.7×10-sel/μm)(angka 1B,C). Sel bernoda termasuk sel mesangial, sel endothelial atau podocytes dalam glomeruli, sel epitel parietal dalam kapsul Bowman, sel tiub proksimal atau distal, dan sel interstisial (ID angka). Walaupun ketumpatan sel pl6-positif (setiap μm) jauh lebih tinggi dalam glomeruli berbanding dalam interstitia (angka 1C), nilai-nilai ini (setiap sampel)menunjukkan korelasi positif yang ketara (r = 0.7591, p<0.0001)(online supplemental="" figure="" 3).="" importantly,="" pl6ka="" accumulation="" was="" not="" associated="" with="" patient="" age,="" gender,="" or="" ethnicity="" (online="" supplemental="" figure="">
CISTANCHE AKAN MENINGKATKAN JANGKITAN BUAH PINGGANG / BUAH PINGGANG
p16"K4 dikaitkan dengan kerosakan buah pinggang pada garis dasar dan 5 tahun selepas rawatanpositiviti p16INKEa dikaitkan dengan terjejasfungsi buah pinggang: biopsi daripada pesakit dengan eGFR<60 at="" the="" time="" of="" sampling="" had="" significantly="" higher="" pl6inf-positive="" cells/μm²，="" and="" conversely，="" samples="" with="" high(="">Persentil ke-75)p16a dikaitkan dengan garis dasar eGFR yang jauh lebih rendah (angka 2AB). Perkaitan dengan eGFR adalah benar untuk kedua-dua glomerular dan interstisial pl6a (angka tambahan dalam talian 5A,B). Menariknya, manakala glomerular p16 yang tinggi juga dikaitkan dengan proteinuria yang jauh lebih tinggi (protein kencing / nisbah kreatinin), yang terutamanya mencerminkan glamour-tidak (kecederaan suppleular dalam talian, pl6ka angka mental interstisial 5C,D). Berbeza dengan hubungannya dengan tidak dikaitkan dengan miskinfungsi buah pinggang,pl6NK4a parameter penyakit sistemik seperti serum anti-double-stranded DNA antibodi atau tahap C3, atau dengan klasifikasi ISN/RPS (angka tambahan dalam talian 6A-D). Sedikit (tidak ketara)pl6k yang lebih tinggi diperhatikan dalam biopsi daripada pesakit dengan tempoh yang lebih lama antara diagnosis SLE dan LN, dan berulang berbanding dengan nefritis kejadian (angka tambahan dalam talian 7A,B). Yang penting, analisis hanya kes LN kejadian yang menyokong hubungan antara pl6 dan eGFR (angka supple-mental dalam talian 7C), menunjukkan ia tidak hanya bergantung kepada tempoh penyakit buah pinggang. Akhirnya, p16Nkia yang tinggi dalam biopsi garis dasar juga dikaitkan dengan eGFR yang lebih rendah pada 5 tahun selepas rawatan (tetapi tidak pada tahun), mencadangkan ia mungkin meramalkan jangka panjang yang lemahBuah pinggangevolusi (angka 2C,D).
Rajah 1 p16NK43-sel positif dalam biopsi buah pinggang daripada pesakit dengan LN aktif. (A) p16, CD8 dan PSR mengotorkan bahagian bersiri FFPE dari biopsi garis dasar buah pinggang LN. Gambaran keseluruhan (panel kiri), jarak dekat (kanan)menunjukkan sel positif p16 dalam glomerulus, sel positif CD8 periglomerular, dan deposit kolagen di dalam dan sekitar kapsul Bowman glomerulus yang sama. (B) Kuantifikasi p16xa (sel positif/μm²mengajukkan tahap heterogeniti di kalangan sampel. (C) Kuantifikasi p16< （positive="" cells/um²）="" in="" glomerular="" vs="" interstitial="" areas="" of="" the="" same="" samples.p-value:="" wilcoxon="" matched-pair="" signed-rank="" test.="" (d)="" representative="" image="" from="" a="" sample="" showing="" p16-positive="" cells="" within="" glomeruli="" (#),="" in="" bowman's="" capsules="" (filled="" star),="" proximal="" tubules(filled="" arrow),="" distal="" tubules(arrow)="" and="" dispersed="" in="" the="" interstitium="" (arrowhead).ffpe,="" formalin-fixed="" paraffin-embedded;="" ln,="" lupus="" nephritis;="" psr,="" picrosirius="">
p16NK43 dikaitkan dengan penyusupan sel CD8* T buah pinggang dan fibrosis p16MaTelah ditunjukkan bahawa CD8tTlymphocytes adalah jenis sel imun utama yang menyusup ke buah pinggang LN dan kehadiran mereka dikaitkan denganPenyakit buah pinggangketerukan Kami mendapati bahawa biopsi pl6 tinggi memaparkan penyusupan sel CD8t T yang jauh lebih tinggi (angka 3A). Mereka juga dikaitkan dengan peningkatan fibrosis: kolagen
pemendapan seperti yang ditunjukkan oleh skor separa kuantitatif pewarnaan PSR, dan skor sklerosis dan NH CI yang disediakan oleh ahli neuropatologi (angka 3B-D). Skor NIH AI, sebaliknya, tidak jauh berbeza antara kumpulan p16INK4a s (data tidak ditunjukkan). Sungguh menarik, dalam memeriksa bahagian tisu, kami melihat apa yang seolah-olah menjadi pengedaran bersama spatial antara pewarnaan pl6k yang kuat (yang cenderung menjadi glomerular) dan sel-sel CD8-positif berkelompok (paling kerap periglomerular)dalam biopsi LN tertentu (angka IA, angka tambahan dalam talian 2). Oleh itu, kami. mengukur bilangan sel CD8* T yang terletak dalam radius 30μm di sekitar setiap glomerulus, ketebalan kapsul Bowman, dan bilangan sel positif pl6k di dalamnya (angka tambahan dalam talian 1). Ini dilakukan pada semua glomeruli yang kelihatan pada tiga bahagian bersiri, di semua sampel. Glomeruli dengan pengumpulan sel pl6K4-positif tinggi dipaparkan sel-sel CD8 T Perigo-macular yang jauh lebih tinggi (angka 3E), serta peningkatan ketebalan kapsul Bowman, mencerminkan fibrosis glomerular (angka 3F).
PERBINCANGANIni adalah demonstrasi pertama, dalam satu siri besar pesakit, bahawa pl6Na, ciri utama senescence selular, dikaitkan dengan keterukan penyakit di LN. IHC untuk protein pl16 digunakan secara meluas untuk menilai untuk senescence ex vivo, dan telah dikaitkan dengan keterukan lainBuah pinggangpenyakit.'Penghapusan terpilih sel-sel pl6-positif dalam model tetikus penuaan dan nefropati yang disebabkan telah ditunjukkan untuk melegakan lesi fibrotik dan bertambah baikfungsi buah pinggang,' mencadangkan peranan penting dalamBuah pinggangpatogenesis. Mengapa senescence selular mungkin berlaku di LN tidak diketahui. Persekitaran keradangan, oksidatif buah pinggang LN mungkin menjadi sumber tekanan sel. Beberapa faktor proradang telah terlibat dalam induksi senescence,14inchuding interferon-B3yang telah dikaitkan dengan fenotip senescent sel stem mesenchymal sumsum tulang dari pesakit dengan SLE15Walaupun kajian kami menyerlahkan hubungan yang signifikan antara banyak sel pl6-positif dan keterukan LN, penggunaan penanda tambahan senescence selular, dalam kohort yang lebih besar, adalah penting untuk mengesahkan kaitannya dalam LN. Jika dan bagaimana senescence selular menyumbang kepada perkembangan penyakit (atau sama ada ia hanya mencerminkan kecederaan tisu) masih perlu disiasat. Kesan buruk boleh dikenakan melalui rahsia profibrotic,proinflam-matory (SASP) khas sel senescent. Selaras dengan hipotesis ini, kami menerangkan taburan bersama ruang yang ketat antara sel positif pl6Nk, fibrosis dan penyusupan sel CD8* T dalam buah pinggang LN. Mekanisme patogen lain mungkin melibatkan pengumpulan sel-sel yang tidak cekap secara fungsional, misalnya,Buah pinggangsel nenek moyang (RPC, subset sel epitel parietal yang terletak di kapsul glomeruli Bowman).'" Walaupun RPC yang sihat menjana semula glomerular dan tiub struc-tures berkat keupayaan mereka untuk berkembang biak dan berbeza-berbeza ke dalamBuah pinggangsubset sel,'" RPC senescent boleh menghalang pembaikan tisu." Akhirnya, sementara SASP adalah partic-ularly sesuai untuk melibatkan sistem immume (termasuk CD8t T limfosit)'8untuk pelepasan sel senescent, yang terakhir boleh meningkatkan proses dengan menghalang celk cyto lyic. Telah dicadangkan bahawa kegigihan sel senescent (disebabkan oleh tindak balas immume yang luar biasa atau perencatan) mengurangkan keseimbangan daripada positif kepada kesan negatif." Eksperimen in vitro selanjutnya diperlukan untuk membedah peranan sel-sel pl6Nk-positif dalam patogenesis LN. Ini mungkin mempunyai implikasi penting untuk terapi, kajian perintis label terbuka pertama menggunakan ubat senolytic dasatinib plus quercetin (DQ) telah menunjukkan hasil yang menjanjikan dalam fibrosis pulmonari idiopatik dan penyakit buah pinggang diabetes.Akhirnya persatuan garis dasar tinggi pl6INk4 dengan terjejasfungsi buah pinggang5 tahun selepas rawatan initia tion menunjukkan ia mungkin peramal yang menjanjikan keterukan penyakit. Adalah menarik untuk menilai untuk pl6 dan penanda yang berkaitan (fibrosis dan CD8 T sel infiltra tion)dalam biopsi susulan 1 tahun serta dalam kohort yang lebih besar, kerana evolusi penanda ini dari garis dasar ke lyear mungkin lebih baik mencerminkan tindak balas rawatan daripada mana-mana titik masa sahaja.
