Ekstrak Herba Cistanche Meningkatkan Penjanaan ATP Mitokondria dalam Hati Tikus Dan Sel H9c2
Mar 04, 2022
Hubungi: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko
Untuk memetik artikel ini: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Ekstrak Herba Cistanche Meningkatkan Penjanaan ATP Mitokondria dalam Hati Tikus dan Sel H9c2, Biologi Farmaseutikal, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/1388020080202008020
Abstrak
Untuk menyiasat asas farmakologi tindakan "Yang- mencergaskan" Herbal Cistanche [seluruh tumbuhan kering Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], dalam perubatan Cina, kesan ekstrak metanol Herba Cistanche pada kapasiti penjanaan ATP mitokondria adalah diperiksa menggunakan model jantung tikus ex vivo dan ujian sel H9c2 in situ. Rawatan dengan ekstrak Herba Cistanche meningkatkan kapasiti penjanaan ATP miokardium miokardium dalam cara yang bergantung kepada dos pada tikus, seperti yang dinilai oleh pengukuran in vitro. Rangsangan kapasiti penjanaan ATP dikaitkan dengan peningkatan selari dalam pengangkutan elektron mitokondria yang disokong oleh piruvat tetapi bukan suksinat. Rawatan Herba Cistanche juga meningkatkan aktiviti kompleks miokardium mitokondria I dan kompleks III, dengan tahap rangsangan pada aktiviti kompleks I menjadi lebih besar. Rawatan Herba Cistanche menghasilkan peningkatan dos dan bergantung masa dalam kapasiti penjanaan ATP mitokondria dalam sel H9c2. Keputusan menunjukkan bahawa rawatan Herba Cistanche boleh meningkatkan penjanaan ATP mitokondria dalam hati tikus ex vivo dan sel H9c2 in situ, mungkin melalui peningkatan fosforilasi oksidatif.
Kata kunci:ATP, Cistanche deserticola, sel H9c2, jantung, mitokondria.
pengenalan
"Yang invigoration," yang merangkumi peningkatan umum fungsi badan dalam perubatan Cina, melibatkan penggunaan tenaga dalam memacu pelbagai proses biokimia. Dalam hal ini, ATP, yang merupakan mata wang universal tenaga dalam menyemarakkan fungsi selular, dijana terutamanya melalui fosforilasi oksidatif dalam mitokondria. Kami telah menyatakan bahawa herba "Yang mencergaskan" mempunyai keupayaan untuk meningkatkan kapasiti penjanaan ATP mitokondria (Ko et al., 2004). Ini disokong oleh penemuan kami baru-baru ini bahawa herba tonifikasi Cina "Yang-mencergaskan" tetapi tidak "berkhasiat Yin" boleh meningkatkan kapasiti penjanaan ATP miokardium dalam hati tikus ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, keseluruhan tumbuhan parasit kering (tidak termasuk bunga) Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), diklasifikasikan sebagai herba tonifying 'Yang-mencergaskan' dalam perubatan tradisional Cina (Chen, 1998), dan ia muncul sebagai yang paling popular. ramuan dalam beberapa formulasi paten Cina yang digunakan untuk Yang-invigoration'. Di China dan Jepun, Herba Cistanche digunakan secara meluas untuk rawatan pelbagai gejala kekurangan Yang. Kajian farmakologi menunjukkan bahawa Herba Cistanche boleh menghilangkan radikal bebas (Xiong et al., 1996), menghasilkan sedatif (Lu, 1998), antipenuaan (Lee et al., 1990), kesan antinociceptive dan anti-radang (Lin et al., 2002). ), dan meningkatkan fungsi imun (Wu et al., 2005). Bahan aktif utama Herba Cistanche ialah phenylethanoid glycosides (Ouyang et al., 2003), yang didapati mempunyai ciri antibakteria, antistress, dan antioksidatif (Xiong et al., 1998), serta kesan anti-apoptosis pada kultur. neuron (Tian & Pu, 2005). Dalam kajian semasa, untuk menyiasat asas farmakologi tindakan Herba Cistanche yang mencergaskan Yang, kesan rawatan Herba Cistanche pada kapasiti penjanaan ATP dalam mitokondria yang diasingkan daripada hati tikus ex vivo dan kardiomiosit H9c2 berbudaya in situ telah diperiksa. Untuk meneroka mekanisme biokimia yang mendasari tindakan peningkatan penjanaan ATP, kesan rawatan Herba Cistanche pada pengangkutan elektron mitokondria dan aktiviti I-IV yang kompleks juga diperiksa dalam hati tikus.
Ekstrak cistanche deserticola
Bahan dan Kaedah
Bahan kimia, kultur sel dan bahan herba ATP, ADP, dan 3-[4,5-dimethylthiozol-2-yl]-2,5-difenil-tetrazolium bromida ( MTT) telah dibeli daripada Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Penyelesaian Luciferase (ATPlite) diperoleh daripada PerkinElmer (Boston, MA, USA). Medium Eagle's modified Dulbecco (DMEM) dan serum bovine fetal (FBS) telah dibeli daripada GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). Talian sel H9c2 telah dibeli daripada ATTC (Rockville, MD, Amerika Syarikat). Herba Cistanche dibekalkan oleh peniaga herba tempatan (Lee Hoong Kee). Herba itu telah disahkan oleh pembekal, dan spesimen baucar (HKUSTY00301) telah disimpan di Jabatan Biokimia, Universiti Sains & Teknologi Hong Kong (HKUST).
Perahan herba
Herba Cistanche (100 g) dipotong menjadi kepingan kecil dan kemudian diekstrak dengan memanaskan di bawah refluks dalam 300 mL metanol
pada 65◦C selama 2 jam. Prosedur itu diulang dua kali. Ekstrak terkumpul telah dikeringkan dengan menyejat pelarut di bawah tekanan yang dikurangkan, dan ekstrak metanol Herba Cistanche diperoleh pada hasil 39 peratus (b/b). Analisis kimia menunjukkan bahawa ekstrak metanol Herba Cistanche mengandungi jumlah saponin, jumlah flavonoid, jumlah lignan, dan polisakarida pada kepekatan 1.62 peratus (b/b), 0.08 peratus , 0.15 peratus , dan 75.6 peratus , masing-masing.
Penjagaan haiwan
Tikus Sprague-Dawley jantan dewasa (8–10 minggu; 250–300g) dikekalkan di bawah 12-h kitaran gelap/cahaya dalam bilik terkawal udara/kelembapan pada suhu kira-kira 22◦C dan membenarkan makanan dan air secara ad libitum dalam Kemudahan Penjagaan Haiwan
di HKUST. Protokol eksperimen telah diluluskan oleh Jawatankuasa Amalan Penyelidikan di HKUST.
Rawatan dadah
Haiwan dibahagikan secara rawak kepada kumpulan, dengan lima hingga enam haiwan dalam setiap satu. Dalam kumpulan rawatan, tikus diberikan secara intragastrik dengan ekstrak metanol Herba Cistanche (dilarutkan/digantung dalam air) pada peningkatan dos harian ({{0}}.031–0.5 g/kg) selama 3 hari. Haiwan kawalan menerima air sahaja. Dua puluh empat jam selepas dos terakhir, jantung diperoleh daripada haiwan phenobarbital-bius dan tertakluk kepada analisis biokimia.
Penyediaan pecahan mitokondria dan pengukuran kapasiti penjanaan ATP (ATP-GC) ex vivo
Sampel tisu ventrikel kiri jantung telah dipotong dan dibilas dengan penimbal isotonik sejuk ais (0.32 M sukrosa, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7.4). Pecahan mitokondria jantung telah disediakan melalui sentrifugasi pembezaan dalam penimbal isotonik pada 4◦C. Homogenat jantung 10 peratus (w/v) telah disediakan dengan menghomogenkan tisu ventrikel cincang dengan homogenizer kaca Teflon pada 4000 rpm untuk 20-30 pukulan lengkap. Homogenat telah disentrifugasi pada 600 g selama 10 minit untuk mengeluarkan nukleus dan serpihan sel. Supernatan itu kemudiannya disentrifugasi pada 8000 g selama 30 minit untuk mengendapkan mitokondria (Evan, 1992). Pelet digantung semula dalam 1 mL penimbal isotonik dan membentuk semula pecahan mitokondria. ATP-GC mitokondria haiwan yang tidak dirawat diukur dengan kaedah Leung et al. (2005).
Pengukuran pengangkutan elektron mitokondria
Pengukuran pengangkutan elektron dalam mitokondria terpencil, yang berdasarkan pengurangan MTT, telah dilakukan seperti yang diterangkan oleh Cohen et al. (1997). Mitokondria disediakan pada kepekatan protein 1 mg/mL dengan penimbal pengeraman (25{15}} mM sukrosa, 5{17}} mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4) . Satu aliquot (40 µL) mitokondria dicampur dengan 100 µL setiap satu daripada 15 mM piruvat atau 0.5 mM suksinat dan 0.42 mg/mL MTT. Campuran tindak balas telah diinkubasi pada suhu 37◦C selama 10 minit dengan goncangan lembut. Selepas pengeraman, campuran tindak balas ditamatkan dengan penambahan 100 µL penimbal lisis (10 peratus , b/v, natrium dodesil sulfat, dan 45 peratus dimetilformamida, diselaraskan kepada pH 4.7 dengan asid asetik glasier). Selepas berdiri selama 5 minit, bacaan penyerapan campuran tindak balas diambil dengan pembaca plat mikrotiter (Bio-Rad, Hercules, CA, Amerika Syarikat) dan dilaporkan sebagai perbezaan antara 570 nm dan 630 nm. Data dinyatakan sebagai peratusan nilai min bagi kumpulan kawalan (iaitu, Herba Cistanche-tidak dirawat).
Kultur sel
Sel H9c2, garisan sel kekal yang diperolehi daripada myoblast jantung (Hescheler et al., 1991), telah dikultur sebagai satu lapisan dalam DMEM ditambah dengan 10 peratus (v/v) FBS. Medium mengandungi glukosa (4.5 g/L) dan glutamin (4.5 mM), ditambah dengan NaHCO3 (17 mM), penisilin (100 IU/mL), dan streptomisin (100 µg/mL). Semua sel telah ditanam di bawah atmosfera 5 peratus (v/v) CO2 di udara pada suhu 37◦C. Medium digantikan dengan medium segar setiap 2 atau 3 hari. Stok sel telah ditanam dalam kelalang kultur 75 cm2 dan dibelah sebelum bercantum pada nisbah subkultur 1:10. Untuk ujian ATP-GC, sel H9c2 telah disemai pada ketumpatan 2.5 104 sel/telaga ke dalam 24-plat perigi. Selepas lampiran sel, ekstrak Herba Cistanche (larut dalam garam penampan fosfat; PBS) digunakan dalam medium, dan sel-sel diinkubasi untuk tempoh yang semakin meningkat (2-16 jam) masa. Sel kawalan (tidak dirawat) diberi PBS sahaja.
Pengukuran ATP-GC in situ
Selepas tempoh pengeraman yang dinyatakan dengan ekstrak Herba Cistanche pada kepekatan meningkat (5{{10}}–300 µg/mL), ujian ATP-GC telah dilakukan. Medium telah disedut dan sel telah dirawat dengan digitonin (50 µg/mL) dalam penimbal inkubasi (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0.1 mM MgCl2, 0.5 peratus BSA, pH 37.4) untuk . min pada 37◦C. Selepas menyedut digitonin, glutamat (5 mM), malat (5 mM), dan ADP (60μM) telah ditambah ke dalam sel untuk penjanaan ATP mitokondria, yang dipantau pada peningkatan selang masa antara 0 hingga 15 minit. Tindak balas telah ditamatkan dengan penambahan 60 µL asid perklorik (30 peratus , w/v), dan campuran tindak balas kemudiannya disentrifugasi pada 600g selama 10 minit pada 4◦C. Satu aliquot (120 µL) supernatan dicampur dengan 90 µL 1.4 M KHCO3 untuk peneutralan. Campuran telah disentrifugasi semula pada 600 g pada 4◦C, dan supernatan diukur untuk kandungan ATP seperti yang diterangkan sebelum ini. ATP-GC bagi sel yang tidak dirawat dianggarkan dengan mengira kawasan di bawah lengkung graf (AUC1) yang memplot ATP yang dijana (protein nmol/mg) melawan masa (0-15 min) dan dinyatakan dalam unit sewenang-wenangnya. Untuk sel yang dirawat Herba Cistanche, nilai AUC1 peningkatan masa inkubasi (3, 5, 7, 10, dan 15 min) telah dinormalisasi kepada nilai kawalan min masing-masing daripada sampel yang tidak dirawat dan dinyatakan sebagai kawalan peratus. Kemudian, kawasan di bawah lengkung (AUC2) graf yang memplot nilai kawalan peratus terhadap masa inkubasi (3-15 min) telah dikira dan ditekan dalam unit sewenang-wenangnya. Data kumpulan yang dirawat Herba Cistanche dinyatakan sebagai peratusan kawalan daripada persamaan:
[AUC2(HerbaCistanche − dirawat)/AUC2(tidak dirawat)]×100 peratus .
Pengukuran aktiviti kompleks I–IV dan sintase sitrat
Aktiviti rantai pengangkutan elektron (ETC) kompleks I– III mitokondria diukur dengan kaedah spektrofotometri menggunakan substrat khusus kompleks (NADH untuk kompleks I, suksinat untuk kompleks II, dan decylubiquinol untuk kompleks III) seperti yang diterangkan (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al., 2005; Mark et al., 2001). Aktiviti IV kompleks diukur menggunakan kit ujian cytochrome c oxidase dari Sigma. Aktiviti sintase sitrat mitokondria diukur dengan kaedah Srere (1969).
Ujian protein
Kepekatan protein pecahan mitokondria dan lisat sel ditentukan menggunakan kit ujian protein BioRad menggunakan albumin serum lembu sebagai piawai ({{0}}.038–0.600 mg/mL).
Analisis statistik
Semua data dinyatakan sebagai ralat piawai min bagi min (SEM). Mereka dianalisis dengan analisis varians sehala (ANOVA). Perbandingan berbilang post hoc dilakukan dengan LSD. nilai P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">
Keputusan
Kesan rawatan Herba Cistanche pada miokardium mitokondria ATP-GC dalam tikus
Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1, rawatan dengan ekstrak Herba Cistanche pada dos sehingga 0.5 g/kg meningkatkan ATP-GC miokardium miokardium dalam cara yang bergantung kepada dos pada tikus, dengan tahap rangsangan ialah 89 peratus pada dos 0.5 g/kg.
Kesan rawatan Herba Cistanche pada pengangkutan elektron mitokondria dalam hati tikus
Tahap pengangkutan elektron dalam mitokondria terpencil diukur dengan memantau pengurangan MTT. Substrat yang digunakan untuk ujian adalah sama ada piruvat atau suksinat. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2a, bergantung kepada dos rawatan Herba Cistanche meningkatkan tahap pengangkutan elektron mitokondria yang disokong oleh piruvat dalam hati tikus, dengan rangsangan optimum boleh diperhatikan pada dos 0.5 g/kg. Walau bagaimanapun, tiada perubahan ketara dalam tahap pengangkutan elektron mitokondria yang disokong oleh suksinat dikesan dalam hati tikus yang dirawat Herba Cistanche (Rajah 2b).
Kesan rawatan Herba Cistanche terhadap aktiviti kompleks pernafasan mitokondria dalam hati tikus
Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, rawatan Herba Cistanche pada dos optimum 0.5 g/kg telah meningkatkan aktiviti kompleks I (34 peratus ) dan kompleks III (22 peratus ) yang ketara dengan ketara dalam hati tikus. Aktiviti sitrat sintase, enzim utama untuk kitaran asid trikarboksilik, tidak terjejas oleh rawatan Herba Cistanche (Rajah 3). Analisis Western blot menunjukkan bahawa tahap protein kompleks I dan III tidak terjejas oleh rawatan Herba Cistanche (data tidak ditunjukkan).
Kursus masa perubahan akibat Herba Cistanche dalam ATP-GC mitokondria dalam sel H9c2
Perubahan dalam ATP-GC telah diperiksa dalam sel yang dirawat Herba Cistanche (50 dan 150 µg/mL) selepas 2 hingga 16 jam pengeraman. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, rawatan Herba Cistanche meningkatkan ATP-GC dalam cara yang bergantung pada masa dan dwifasa dalam sel H9c2, dengan rangsangan maksimum (masing-masing 44 peratus dan 89 peratus) boleh diperhatikan selepas pengeraman 8 jam untuk kedua-dua kepekatan ubat. ATP-GC kemudiannya kembali kepada nilai kawalan yang tidak dirawat apabila masa inkubasi dilanjutkan kepada 16 jam. Permulaan rangsangan lebih awal berlaku apabila sel dirawat dengan kepekatan yang lebih tinggi (150 µg/mL) ekstrak Herba Cistanche.
Kepekatan-pergantungan Herba
Peningkatan yang disebabkan oleh cistanche dalam ATP-GC dalam sel H9c2
Sel H9c2 dirawat dengan peningkatan kepekatan (50– 300 µg/mL) ekstrak Herba Cistanche selama 4 jam. Rajah 5 menunjukkan bahawa rawatan Herba Cistanche meningkatkan ATP- GC dalam cara yang bergantung kepada kepekatan, dengan rangsangan maksimum (82 peratus) boleh diperhatikan pada kepekatan 300 µg/mL.
Ekstrak cistanche meningkatkan pengeluaran ATP
Perbincangan
Penyelarasan aktiviti selular untuk meningkatkan fungsi badan seperti pengecutan otot dan tindak balas imun oleh pencergasan Yang memerlukan peningkatan dalam penggunaan ATP, yang seterusnya disokong oleh fosforilasi oksidatif mitokondria. Dalam kajian semasa, rawatan Herba Cistanche didapati bergantung kepada dos meningkatkan kapasiti penjanaan ATP mitokondria ex vivo dalam hati tikus. Pemerhatian ini konsisten dengan penemuan kami sebelum ini bahawa antara herba tonifying Cina yang mencergaskan Yang, rawatan Herba Cistanche menghasilkan tahap rangsangan yang agak besar pada penjanaan ATP mitokondria dalam hati tikus (Ko et al., 2006). Peningkatan penjanaan ATP mitokondria adalah selari dengan peningkatan pengangkutan elektron mitokondria yang didorong oleh piruvat tetapi tidak suksinat, seperti yang dinilai oleh pengurangan MTT. Keputusan yang diperoleh daripada pengukuran kinetik kompleks mitokondria I–IV menunjukkan bahawa aktiviti kedua-dua kompleks I dan III telah meningkat dalam hati yang dirawat Herba Cistanche, dengan tahap rangsangan pada aktiviti kompleks I lebih besar daripada kompleks III. Oleh kerana aktiviti sitrat sintase, enzim utama kitaran asid trikarboksilik, tidak terjejas, peningkatan kapasiti penjanaan ATP mitokondria oleh rawatan Herba Cistanche mungkin disebabkan terutamanya oleh rangsangan aktiviti kompleks I dan/atau III. Kebanyakan keperluan ATP jantung dipenuhi oleh mitokondria, yang bergantung hampir sepenuhnya pada pengoksidaan asid lemak dan glukosa yang berkaitan dengan kompleks I (NADH) (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Kompleks I, yang menunjukkan aktiviti yang lebih rendah daripada kompleks pernafasan lain, dianggap sebagai faktor penting dalam pengawalan fosforilasi oksidatif. Oleh itu, rangsangan atau perencatan aktiviti kompleks I boleh memberi impak yang besar kepada tenaga jantung. Walaupun analisis Western blot tidak mendedahkan sebarang perubahan dalam tahap protein kedua-dua kompleks ini (data tidak ditunjukkan), peningkatan aktiviti enzim mungkin disebabkan oleh perubahan dalam status protein tiol dan/atau persekitaran lipid (Davey et al., 1998; Paradies et al., 2004).
Ekstrak Herba Cistancheboleh menghasilkan kesan peningkatan penjanaan ATP dalam sel H9c2 berbudaya in situ. Permulaan tindakan stimulasi yang agak awal yang dihasilkan oleh rawatan Herba Cistanche, terutamanya pada dos yang tinggi, adalah konsisten dengan pemerhatian daripada kajian ex vivo yang menunjukkan bahawa sintesis protein kompleks I dan III tidak mungkin terlibat dalam penjanaan ATP-meningkatkan. tindakan. Demonstrasi peningkatan yang disebabkan oleh Herba Cistanche dalam penjanaan ATP dalam keadaan situ menyokong tanggapan bahawa peningkatan kapasiti penjanaan ATP mitokondria, seperti yang dinilai oleh pengukuran ex vivo, mungkin hanya mencerminkan kesan selari yang dihasilkan oleh rawatan ubat dalam keadaan vivo. Pengukuran penjanaan ATP dalam mitokondria terpencil dan sel kultur menggunakan malat dan glutamat sebagai substrat adalah ukuran tidak langsung respirasi mitokondria keadaan 3 (Chen et al., 2003). Menggunakan ujian ATP bioluminescent yang sama, kadar penjanaan ATP mitokondria dalam pelbagai tisu tikus yang tidak dirawat, seperti yang dilaporkan sebelum ini di makmal kami (Leung et al., 2005), adalah dalam persetujuan yang baik dengan data yang diterbitkan baru-baru ini (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). Kapasiti penjanaan ATP dianggarkan oleh penyepaduan dua langkah perubahan bergantung masa dalam tahap ATP dalam kedua-dua ujian ex vivo dan in situ. Oleh itu, kesan rangsangan akibat dadah yang diperhatikan diperbesarkan demi perbandingan. Peningkatan kapasiti penjanaan ATP oleh rawatan Herba Cistanche dalam mitokondria jantung tikus ex vivo adalah selari dengan rangsangan penjanaan ATP dalam sel H9c2 in situ. Memandangkan kehadiran aktiviti peningkatan penjanaan ATP dalam herba tonifying Cina yang menyegarkan Yang, termasuk Herba Cistanche, dalam hati tikus ex vivo (Ko et al., 2006), keputusan menunjukkan bahawa pengukuran kapasiti penjanaan ATP dalam sel H9c2 dalam situ boleh digunakan sebagai ujian farmakologi untuk herba tonifying Cina atau formula herba yang menyegarkan Yang.
Kesimpulannya, rawatan dengan ekstrak Herba Cistanche boleh meningkatkan kapasiti penjanaan ATP mitokondria dalam hati tikus ex vivo dan dalam sel H9c2 in situ. Penemuan menyokong postulat kami bahawa asas farmakologi Yang-invigoration melibatkan peningkatan fungsi badan melalui merangsang pengeluaran ATP mitokondria.
Ekstrak Herba Cistanche meningkatkan kapasiti penjanaan ATP mitokondria
Rujukan
Chen P (1998): Herba Tonik. Siri TCM Lanjutan. Beijing, China, Science Press, hlm. 233–320.
Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Pengeluaran spesies oksigen reaktif oleh mitokondria: peranan utama kompleks III. J Biol Chem 278: 36027– 36031.
Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Penyakit Parkinson: Pautan baru antara monoamine oxidase dan aliran elektron mitokondria. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.
Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Ambang tenaga dalam mitokondria otak. Penglibatan berpotensi dalam neurodegenerasi. J Biol Chem 273: 12753–12757.
Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Kaedah untuk mengukur pengeluaran ATP dalam mitokondria terpencil: Pengeluaran ATP dalam mitokondria otak dan hati tikus Fischer-344 dengan sekatan umur dan kalori. Am J Physiol Regul Integr Comp Phys- iol 285: R1259–R1267.
Evan WH (1992): Pengasingan dan pencirian membran dan organel sel. Dalam: Rickwood D, ed. Emparan Persediaan: Satu Pendekatan Praktikal. New York, Oxford University Press, hlm. 223–270.
Grad LI, Lemire BD (2004): Mutasi kompleks mitokondria I dalam Caenorhabditis elegans menghasilkan kekurangan sitokrom c oksidase, tekanan oksidatif dan asidosis laktik yang responsif terhadap vitamin. Genetik Mol Manusia 13: 303–314.
Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Pencirian morfologi, biokimia dan elektrofisiologi bagi garisan sel klon (H9c2) daripada jantung tikus.Circ Res 69: 1476–1486.
Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): Kekurangan glutathione mengakibatkan perencatan kompleks mitokondria terpilih dalam sel dopaminergik adalah melalui laluan pengantara NO yang tidak melibatkan peroksinitrit: Implikasi untuk penyakit Parkinson. J Neurochem 92: 1091– 1103.
Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Satu tindakan farmakologi ciri herba tonifikasi Cina 'Yang- mencergaskan': Peningkatan kapasiti penjanaan ATP miokardium. Phytomedicine 13: 636– 642.
Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Asas farmakologi 'Yang-invigoration' dalam perubatan Cina. Trend Pharmacol Sci 25: 3–6.
Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Kajian tentang kesan anti-penuaan Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.
Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Peraturan metabolik glikosida phenylethanoid daripada cistanches Herba dalam gastrousus anjing. Yao Xue Xue Bao 36: 432– 435
Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Formula herba Cina yang menyegarkan Yang meningkatkan keupayaan fungsi mitokondria dan kapasiti antioksidan dalam pelbagai tisu tikus jantan dan betina. Rejuven Res 8: 238–247.
Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Aktiviti antinociceptive dan anti-radang yang disebabkan oleh Cistanche deserticola dalam tikus. J Ethnopharmacol 83: 177– 182.
Lu MC (1998): Kajian tentang kesan sedatif Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.
Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Menguji aktiviti kompleks pernafasan mitokondria dalam mitokondria yang diasingkan daripada sel dan tisu manusia. Meth Cell Biol 65: 97–117.
Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Kesan unsur nadir bumi terhadap pertumbuhan sel deserticola Cistanche dan penghasilan glikosida phenylethanoid. J Biotek 102: 129–134.
Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Penurunan dalam kompleks mitokondria I aktiviti dalam jantung tikus iskemia/reperfused: Penglibatan spesies oksigen reaktif dan cardiolipin. Circ Res 94: 53– 59.
Srere PA (1969): Sintase sitrat. Kitaran asid sitrik. Meth Enzymol 13: 3–11.
Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Peraturan metabolisme karbohidrat miokardium di bawah keadaan normal dan iskemia. Potensi untuk campur tangan farmakologi. Kardiovasc Res 33: 243–257.
Taegtmeyer H (1998): Metabolisme substrat tenaga sebagai sasaran untuk farmakoterapi dalam otot jantung iskemia dan reperfused. Metab Jantung 1: 5–9.
Tian XF, Pu XP (2005): Glikosida phenylethanoid daripada salsa Cistanches menghalang apoptosis yang disebabkan oleh 1-metil-4- ion fenilpiridinium dalam neuron. J Ethnopharmacol 97: 59–63.
Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Arabinogalaktan yang diasingkan daripada batang Cistanche deserticola mendorong pembiakan limfosit berbudaya. Int J Biol Macromol 37: 278–282.
Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Aktiviti hepatoprotektif phenylethanoids dari Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120– 125.
Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Kesan antioksidan fenilethanoid daripada Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.
