Sintesis Hijau Dan Pencirian Zarah Nano Besi Disintesis Daripada Ekstrak Daun Berair Vitex Leucoxylon Dan Aplikasi Bioperubatannya

Abstrak:Kaedah pengekstrakan sejuk digunakan untuk mendapatkan ekstrak akueusVitex leucoxylondaun dalam nisbah 1:10. Nanopartikel besi (FeNPs) telah disintesis menggunakan ekstrak daun berair daripadaV. leucoxylonsebagai agen pengurangan. Pendekatan phytomedicine digunakan untuk membuat FeNPs dengan mencampurkan 1 mL ekstrak tumbuhan dengan 1 mM feri sulfat. Mengimbas mikroskop elektron (SEM), spektroskopi inframerah transformasi Fourier (FTIR), spektroskopi boleh dilihat Ultraviolet (UV-Vis), dan spektroskopi sinar-X penyebaran tenaga digunakan untuk memeriksa FeNP yang disintesis. Reaksi pengurangan ditunjukkan oleh perubahan dalam warna larutan, dan pembentukan warna hitam mengesahkan bahawa FeNP telah terbentuk. Puncak penyerapan terbesar (maks) didapati pada 395 nm dalam analisis spektrum UV-Vis. Spektrum FTIR bagiV. leucoxylonekstrak daun akueus menunjukkan anjakan pada beberapa puncak iaitu 923.96 cm−1 dan 1709.89 cm−1, dengan kumpulan berfungsi asid karboksilik, aldehid tak tepu, dan keton, yang kurang dalam spektrum FTIR FeNPs dan bertanggungjawab untuk pembentukan FeNPs. FeNP dengan diameter antara 45 dan 100 nm diperhatikan dalam imej SEM. Penciptaan FeNP telah disahkan oleh EDX, yang menunjukkan isyarat kuat di kawasan besi logam pada 6-8 Kev. XRD mendedahkan sifat kristal dan diameter purata 136.43 nm.Antioksidan,anti-radang, sitotoksik danpenyembuhan lukaujian in vitro melaporkan aktiviti penting FeNPs. Penemuan kumulatif kajian ini menunjukkan bahawa sintesis hijau FeNPsmeningkatkan aktiviti biologinyadan boleh berfungsi sebagaiagen penyembuhan luka dermal yang mungkindanagen sitotoksik terhadap kanser. Kajian masa depan diperlukan mengenai pengenalpastian mekanisme yang terlibat dalam sintesis FeNPs olehV. leucoxylondan aplikasi bioperubatannya.

Kata kunci:Vitex leucoxylon; zarah nano besi; SEM; penyembuhan luka; sitotoksik

FAEDAH CISTANCHE UNTUKANTIOKSIDAN,ANTI RADANG, CYTOTOXIC, DANPENYEMBUHAN LUKA

1. Pengenalan

Aplikasi nanoteknologi dalam sains dan teknologi untuk mengeluarkan bahan baharu pada peringkat skala nano adalah bidang yang berkembang pesat [1]. Nanoteknologi berurusan dengan bahan pembuatan di peringkat atom untuk mendapatkan sifat tersendiri, yang boleh dimanipulasi untuk aplikasi pilihan. Bidang ini berkembang pesat dengan aplikasinya dalam sains dan teknologi untuk mengeluarkan bahan baharu pada tahap skala nano [2]. Pelbagai sektor perindustrian telah menerima teknologi nano sejak beberapa tahun kebelakangan ini kerana aplikasinya dalam bidang sistem storan elektronik [3], bioteknologi [4], pengasingan magnet dan prapemusatan analit sasaran, penghantaran ubat yang disasarkan [5], dan kenderaan untuk gen dan ubat. penghantaran [3,5,6]. Akibatnya, zarah-zarah ini berpotensi untuk memberi kesan yang besar kepada masyarakat hasil daripada pelbagai aplikasi yang boleh digunakan. Nanopartikel (NPs) ialah jisim zarah yang mempunyai saiz kurang daripada seratus nanometer dan dianggap sebagai jisim struktur utama dalam bidang nanoteknologi. Aktiviti NP yang lebih tinggi adalah kedua-dua ciri yang menentukan dan kualiti yang mana mereka paling ketara [7]. NP organik dan bukan organik adalah dua klasifikasi utama yang boleh digunakan untuk nanopartikel. Nanopartikel bukan organik mungkin termasuk NP magnetik, NP logam mulia (seperti emas dan perak), dan NP semikonduktor (seperti titanium dioksida dan zink oksida). Nanopartikel organik mungkin termasuk NP karbon. Nanopartikel bukan organik menarik perhatian besar kerana ia menawarkan sifat bahan yang unggul bersama-sama dengan serba boleh berfungsi. Mereka telah disiasat sebagai alat yang mungkin untuk pengimejan perubatan serta untuk rawatan penyakit kerana ciri saiz yang mereka miliki [8]. Sifat kimia, fizikal dan biologi yang pelbagai NP sangat dipengaruhi oleh pelbagai parameter, termasuk saiz dan morfologi zarah nano, serta salutan permukaan, yang biasanya ditentukan semasa sintesis nanozarah. Kehilangan aktiviti biologi yang dimaksudkan adalah disebabkan oleh penurunan kestabilan koloid. pH, kekuatan ionik dan sebilangan besar protein yang berinteraksi dengan AgNP dalam keadaan yang berkaitan semuanya mempunyai kesan ke atas kestabilan koloid. Akibatnya, pemilihan teknik sintesis yang betul adalah penting untuk mendapatkan ciri zarah yang dikehendaki untuk aplikasi tertentu [9].

Pada masa ini, terdapat pelbagai jenis NP yang boleh disintesis menggunakan pelbagai proses fizikal, kimia, biologi dan hibrid. Menurut penemuan sejumlah besar kajian penyelidikan, proses fizikal dan kimia untuk menghasilkan zarah nano termasuk penggunaan pelarut organik, sebatian berbahaya, jumlah tenaga yang ketara, dan agen penstabil yang tidak boleh terbiodegradasi [10]. Oleh itu, dalam bidang nanoteknologi hijau, sintesis NP menggunakan bahan yang tersedia secara semula jadi seperti ekstrak tumbuhan, pelbagai mikroorganisma, metabolitnya, dan beberapa bahan humik semulajadi [11,12] sebagai agen pengurangan dan penyekat semakin popular. Kaedah sintesis yang mesra alam telah digunakan untuk menghasilkan pelbagai jenis nanozarah logam, termasuk perak, emas, besi, kuprum dan zink. Pembangunan kaedah yang mudah dan diterima oleh alam sekitar untuk sintesis NP adalah salah satu fokus utama nanoteknologi. Biobahan seperti mikroorganisma dan ekstrak tumbuhan boleh digunakan dalam proses penyediaan pelbagai jenis NP [13,14]. Walau bagaimanapun, kerana sesetengah organisma adalah patogen, adalah berbahaya untuk mengendalikannya. Untuk berkembang maju, mikroorganisma perlu dikekalkan dalam kultur dan tertakluk kepada keadaan yang dikawal dengan teliti, termasuk suhu, pH dan parameter lain. Kerana ia menghapuskan proses yang sukar untuk mengekalkan budaya mikrob, sintesis NP menggunakan bahagian tumbuhan kadang-kadang boleh terbukti lebih berfaedah daripada proses biologi lain [15]. Akibatnya, ia telah mendapat banyak perhatian kerana ciri-ciri yang wujud, termasuk penggunaan sumber asli, kepantasan, mesra alam, dan kemurahan. Ciri-ciri memikat ini amat diperlukan untuk digunakan dalam aplikasi perubatan. Nanozarah yang dihasilkan oleh sintesis hijau mempunyai saiz yang jelas dan terkawal, ia bebas daripada bahan pencemar, dan kaedahnya mudah untuk ditingkatkan. Ini adalah beberapa faedah tambahan sintesis hijau [16]. Aktiviti biologi zarah nano yang disintesis sebahagian besarnya ditentukan dan diperhalusi oleh bahan hijau yang digunakan untuk kestabilan dan pengurangan ion logam. Salah satu sifat ideal NP adalah bahawa ia mesti mempunyai kapasiti yang luar biasa untuk mendiskriminasi antara sasaran yang berpotensi (patogen) dan sel mamalia (tuan rumah) [17].

Oleh sebab itu, ekstrak akueus daun V. leucoxylon telah disiasat untuk potensinya untuk memudahkan pembentukan zarah nano besi (FeNPs) dalam penyelidikan semasa. Besi adalah salah satu unsur yang boleh didapati dalam kelimpahan terbesar di Bumi. Baru-baru ini, ia telah diiktiraf sebagai kelas baharu NP penting kerana fakta bahawa ia memiliki pelbagai sifat unik, termasuk paksaan tinggi dan superparamagnetisme. Cataly sis, peranti elektronik, storan maklumat, penderia, teknologi penghantaran ubat, bioperubatan, peranti rakaman magnetik, dan pembersihan alam sekitar hanyalah sebahagian daripada banyak aplikasi menarik yang telah menggunakan FeNPs [18]. Selain itu, menurut beberapa kajian, FeNP boleh dihasilkan daripada pelbagai ekstrak tumbuhan. Ekstrak tumbuhan ini termasuk daun Eucalyptus globulus [19], daun delima [20], dan abu kulit pisang [21]. Tumbuhan V. leucoxylon, yang digunakan dalam kajian semasa, adalah ahli keluarga Verbenaceae. Ia juga dikenali sebagai pokok suci berdaun lima (Kannada: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) dan boleh ditemui di rantau ini di sepanjang tebing sungai di hutan malar hijau dan separa hijau dan hutan luruh lembap di sepanjang sungai. Ia boleh mencapai ketinggian sehingga 20 m dan diklasifikasikan sebagai pokok luruh sederhana hingga besar. Di sepanjang hutan Ghats Barat India, ia boleh ditemui dalam jumlah yang besar. Penyerapan ekstrak daun V. leucoxylon telah dilaporkan mempunyai pelbagai jenis aktiviti farmakologi seperti aktiviti anti-radang, antioksidan, antipsikotik, antidepresan, antiparkinson, dan antihiperlipidemik [22]. Produk semulajadi telah, sepanjang sejarah dan khususnya dalam perubatan rakyat, telah digunakan untuk rawatan pelbagai jenis penyakit dan penyakit. Amalan ini bermula sejak zaman dahulu. Kaedah kimia produk semula jadi yang telah wujud sejak sekian lama telah memungkinkan untuk mencari pelbagai jenis metabolit sekunder bioaktif yang berasal dari sumber daratan dan marin. Sebilangan besar bahan semulajadi ini kini sedang dipertimbangkan untuk digunakan sebagai farmaseutikal yang berpotensi [23].

Terdapat sejumlah besar bahan kimia dan nutrien semula jadi yang masih belum ditemui yang berguna kepada manusia. Akibat daripada ini, terdapat permintaan segera untuk penyelidikan dan pembangunan pilihan terapeutik inovatif yang boleh digunakan dengan jayanya dalam intervensi terapeutik sambil mencipta jumlah minimum kesan buruk.

Proses sintesis hijau yang dicadangkan pada masa ini untuk FeNP adalah berbeza dan kos efektif. Dalam kajian semasa, percubaan telah dibuat untuk mencipta nanopartikel pada suhu bilik tanpa menggunakan sebarang bahan kimia atau teknik fizikal. Loji leucoxylon Vitex telah dipilih dalam usaha untuk mensintesis nanozarah besi, dan model in vitro sistematik yang komprehensif telah dijalankan untuk menilai potensi nanozarah besi. Hanya sebilangan terhad kajian penyelidikan mengenai konsep nanozarah dan aplikasi bioperubatannya telah diterbitkan pada tumbuhan ini. Akibatnya, kami memutuskan bahawa adalah berfaedah untuk menjalankan penyelidikan ini dengan mengambil kira matlamat berikut: penyaringan untuk fitokimia dan mengukur bilangan metabolit sekunder dalam V. leucoxylon; sintesis hijau dan pencirian FeNP daripada V. leucoxylon; kajian perbandingan kesan antioksida dan antiradang V. leucoxylon dan FeNPsnya secara in vitro; aktiviti sitotoksik in vitro ekstrak daun berair V. leucoxylon dan FeNPnya terhadap kanser kulit, kanser paru-paru dan kanser mulut; aktiviti penyembuhan luka in vitro ekstrak daun berair V. leucoxylon dan FeNP sintetiknya melalui ujian calar.

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Koleksi Bahan Tumbuhan

Pada bulan Mac 2022, daun segar V. leucoxylon telah dipetik dari kawasan hutan Anshi di Ghats Barat di Daerah Uttar Kannada di negeri Karnataka di India. Daun itu dikenal pasti dan disahkan oleh Dr. Kotresha K., Pakar Taksonomi, Jabatan Botani, Kolej Sains Karnataka, Dharwad; Karnataka, dengan merujuk kepada spesimen baucar yang disimpan di Jabatan Botani, Kolej Sains Karnataka, Dharwad, Karnataka. Selepas dikumpulkan, bahan daun tumbuhan segar dicuci di bawah air paip yang mengalir, dijemur, dan kemudian dikisar menjadi serbuk kasar menggunakan pengisar mekanikal. Serbuk disimpan di dalam bekas yang ditutup pada suhu bilik supaya ia boleh digunakan kemudian dalam proses pengekstrakan pelarut mentah.

2.2. Penyediaan Ekstrak Tumbuhan

Menggunakan peranti Soxhlet, 25 g daun serbuk diekstrak selama 48 jam dengan 250 mL air suling. Ekstrak akueus dipekatkan lagi menggunakan penyejat roto, dan kemudian dikeringkan dalam desikator sebelum disimpan dalam botol tertutup pada suhu 4 ◦C sehingga digunakan. Untuk sintesis FeNPs, ekstrak akueus digunakan sebagai agen pengurangan dan penstabil.

2.3. Pelarut dan Reagen

Semua bahan kimia dan pelarut yang digunakan adalah berkualiti analitikal dan dibeli daripada Hi-media (Hubli, India).

2.4. Analisis Fitokimia

Mengikuti prosedur yang diterangkan oleh Deepti et al. (2012), ekstrak daun akueus mentah V. leucoxylon telah diuji secara kualitatif untuk kehadiran pelbagai juzuk fitokimia seperti flavonoid, alkaloid, fenol, glikosida, sterol, lignin, saponin, antrakuinon, tanin, dan gula penurun [24].

2.5. Sintesis Nanozarah Besi

Mula-mula, 1 mL ekstrak daun berair V. leucoxylon ditambah kepada 10 mL larutan akueus 0.05 mM FeSO4, dan campuran digoncang. Pada suhu bilik dan dalam persekitaran yang gelap, proses campuran tindak balas yang lengkap telah dijalankan. Tindak balas pengoksidaan/penurunan jelas kelihatan selepas campuran tindak balas tidak berwarna telah diinkubasi dan bertindak balas untuk jumlah masa yang diperlukan [25]. Untuk mengeluarkan sebarang kesan ekstrak akueus daripada FeNP yang baru disintesis, yang dibenarkan kering dalam serbuk selepas sentrifugasi pada 10,000 rpm selama sepuluh 10 minit semasa tempoh tindak balas yang diingini, campuran akueus yang mengandungi FeNPs telah disentrifugasi. kali kedua dan tersebar semula dalam air suling dua kali dan dikeringkan [26].

2.6. Pencirian FeNPs

Beberapa kaedah, seperti spektroskopi Ultraviolet-visible (UV-Vis), Fourier-transform infrared spectroscopy (FTIR), mikroskop elektron pengimbasan, dan spektroskopi sinar-X penyebaran tenaga, Difraksi sinar-X (XRD), penganalisis saiz zarah dan zeta potensi, telah digunakan untuk mencirikan FeNPs.

2.6.1. Analisis Berasaskan Spektroskopi-UV

Pertama, 1 mL aliquot larutan FeNP koloid dalam kuvet kuarza dinilai menggunakan spektroskopi boleh dilihat UV (U-3310, Hitachi, Tokyo, Jepun), menggunakan air suling sebagai rujukan dan 0.05 mM FeSO4 sebagai kosong, untuk mengesahkan pengurangan ion ferik dalam larutan koloid [27].

2.6.2. Analisis Berasaskan FTIR

Kumpulan fungsi (kumpulan) yang terikat pada permukaan besi dan terlibat dalam sintesis FeNP telah dikenal pasti menggunakan spektroskopi FTIR (S700, Nicolet, MA, USA), [28]. Selepas 72 jam pengeraman, FeNP telah diasingkan dengan sentrifugasi berulang (3–4 kali) campuran tindak balas pada 10,000 rpm selama 15 minit. Supernatan digantikan dengan air ternyahion dan pelet disimpan sebagai serbuk. Selepas dikeringkan, FeNP dimasukkan melalui analisis FTIR menggunakan proses pelet kalium bromida pada nisbah 1:100.

2.6.3. Analisis Berasaskan-Elektron-Mikroskopi Pengimbasan

Mengimbas mikroskop elektron (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, Amerika Syarikat), digunakan untuk memeriksa zarah nano dan mewujudkan bentuk permukaannya. Substrat disediakan pada substrat Si 5 mm × 5 mm bersih yang dibelah daripada wafer diameter 100 mm. Substrat dibenarkan bertindak balas selama 2 jam hingga 6 jam dan sampel disediakan dengan mengempar larutan koloid pada 10,000 rpm selama 5 minit. Pelet telah dikeringkan selepas dicakar baru berkali-kali, selepas itu ia disebarkan semula dalam air ternyahion dan prosedur diulang. Akhirnya, pelet kering diperolehi, yang selanjutnya tertakluk kepada pencirian struktur oleh analisis SEM mengikut prosedur yang diterangkan oleh Institut Piawaian dan Teknologi Kebangsaan, NIST-2007 [29].

2.6.4. X-ray Penyebaran Tenaga

Selepas pengeringan pada grid kuprum bersalut karbon, FeNP yang dikurangkan dianalisis menggunakan EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA), yang juga membenarkan komposisi unsur ditentukan.

2.6.5. Potensi Zeta

Pemerhatian NP Potensi zeta ialah alat yang berguna untuk mendapatkan pandangan tambahan tentang kestabilan NP koloid. Amplitud potensi zeta memberikan petunjuk tentang kemungkinan kestabilan koloid. Menurut Meléndrez et al. (2010), zarah dianggap sebagai stabil jika nilai potensi zetanya sama ada lebih positif daripada tambah 30 mV atau lebih negatif daripada 30 mV [30]. Fakta ini harus diambil kira. Meter zeta laser telah digunakan untuk memperoleh bacaan potensi zeta permukaan (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, UK). Sampel cecair nanozarah, berjumlah 5 mililiter, dicairkan dengan 50 mililiter air suling dua kali, dan 2 mm setiap meter persegi natrium klorida digunakan sebagai larutan elektrolit terampai. Selepas itu, pH diubah suai sehingga mencapai tahap yang dikehendaki. Sampel digoncangkan selama 30 minit. Selepas menggoncang bekas, pH pada keseimbangan dicatatkan, dan potensi zeta zarah logam ditentukan. Untuk tujuan menentukan potensi permukaan FeNPs, potensi zeta telah digunakan. Dalam setiap contoh, nilai yang dinyatakan ialah purata keputusan tiga ukuran individu. Apabila nilai potensi zeta berjulat daripada lebih tinggi daripada tambah 30 mV hingga lebih rendah daripada 30 mV, kriteria untuk kestabilan NP ditentukan [31].

2.6.6. Penganalisis Saiz Zarah

Untuk menentukan saiz zarah sampel, ujian PSA telah dilakukan ke atasnya selepas ia telah diliofilkan dan kemudian tersebar menggunakan ultrasonikator (SZ-100, Horiba, Kyoto, Jepun).

2.6.7. Analisis X-ray Difraction Analysis (XRD).

Nanozarah besi tersintesis daripada ekstrak daun akueus V. leucoxylon telah tertakluk kepada analisis XRD (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Jepun) untuk menentukan sifat serta saiz purata nanozarah.

2.7. Penentuan Aktiviti Antioksidan dengan Menggunakan Kaedah In Vitro

2.7.1. Ujian Kuasa Antioksidan Pengurang-Ion Ferrik (FRAP)

Menurut Oyaizu (1986), dengan pengubahsuaian kecil, kuasa pengurangan ion ferik telah dinilai [32]. Selama 30 min pada 50 ◦C, 2.5 mL penimbal fosfat 20 mM dan 2.5 mL 1 peratus kalium ferricyanide telah ditambah kepada 2.5 mL ekstrak daun V. leucoxylon dan FeNP tersintesisnya dicampur dengan gabungan itu. Selepas tempoh pengeraman, campuran telah ditambah dengan 2.5 mL 10 peratus b/v asid trikloroasettik dan 0.5 mL 0.1 peratus b/b ferik klorida sebelum diinkubasi selama 10 minit tambahan. Akhirnya, spektrofotometer UV-V digunakan untuk mengesan penyerapan pada 700 nm. Sebagai standard, asid askorbik telah digunakan. Setiap sampel diuji tiga kali.

2.7.2. Hidrogen Peroksida Scavenging Assay

Berdasarkan keupayaan ekstrak daun akueus V. leucoxylon dan FeNP sintetiknya untuk menghilangkan hidrogen peroksida, aktiviti antioksidan sebatian ini dinilai. Pertama, {{0}}.6 mL penimbal fosfat (pH—7.4) yang mengandungi 4 mM H2O2 telah ditambah kepada 0.5 mL asid askorbik standard pada kepekatan yang diketahui, serta tiub yang mengandungi ekstrak tumbuhan pada pelbagai kepekatan antara 100 µL hingga 500 µL (pH—7.4). Menggunakan penimbal fosfat dan larutan kosong bebas hidrogen-peroksida, kami menilai penyerapan larutan pada 230 nm selepas 10 minit. Penampan fosfat digunakan untuk mencipta kawalan dan bukannya sampel atau standard [33]. Setiap sampel diuji tiga kali. Pendekatan formula digunakan untuk mengira peratusan perencatan.

2.7.3. DPPH Free-Radical-Scavenging

Ekstrak daun leucoxylon Assay V. dan FeNP yang disintesis telah diuji untuk keupayaan mereka untuk menghilangkan radikal bebas menggunakan radikal DPPH sebagai reagen [34]. Sampel digabungkan dengan larutan radikal DPPH (60 M) dalam etanol (100 µL) pada kepekatan berbeza (w/v). Spektrofotometer UV-Vis digunakan untuk mengukur penyerapan campuran pada 517 nm selepas 30 minit pengeraman dalam gelap pada suhu bilik. Asid askorbik digunakan sebagai standard untuk eksperimen. Persamaan berikut telah digunakan untuk menentukan setiap aktiviti penghapusan DPPH sampel:

di mana Ac mewakili penyerapan tindak balas kawalan, yang dilakukan dengan mencampurkan 100 L etanol dengan 100 L larutan DPPH, dan At mewakili penyerapan sampel ujian. Eksperimen telah dijalankan dalam kembar tiga. Nilai IC50 telah dikira untuk setiap sampel. Tahap aktiviti radikal bebas yang lebih tinggi ditunjukkan oleh campuran tindak balas yang mempunyai penyerapan yang lebih rendah.

2.7.4. Ujian Phosphomolybdenum (PM).

Jumlah aktiviti antioksidan telah ditentukan menggunakan teknik standard Prieto et al., 1999. Setiap tabung uji yang mengandungi 3 mL air suling dan 1 mL larutan reagen molibdat menerima ekstrak daun berair V. leucoxylon dan FeNPsnya dalam kepekatan berbeza antara 100 µL hingga 500 µL. Tiub ini diinkubasi selama 90 minit pada suhu 95 ◦C. Penyerapan campuran tindak balas diukur pada 695 nm selepas tiub ini diselaraskan ke suhu bilik selama 20-30 minit selepas pengeraman. Piawaian rujukan ialah asid askorbik [35].

2.8. Penilaian Aktiviti Anti-Radang In Vitro

Kesan anti-radang ekstrak daun berair V. leucoxylon dan FeNP yang dihasilkan telah dinilai menggunakan kaedah denaturasi protein yang digariskan oleh Elias et al., 1988, dengan sedikit pengubahsuaian [36]. Sebagai ubat standard, natrium diklofenak telah digunakan. Campuran tindak balas yang terdiri daripada 2 mL kepekatan FeNP yang telah diketahui (100 g/mL) dengan natrium diklofenak standard (100 g/mL) dan 2.8 mL garam penimbal fosfat (pH 6.4) dicampur dengan 2 mL telur ayam segar. albumin (1 mM) dan diinkubasi pada 27 ± 1 ◦C selama 15 min. Denaturasi telah diinduksi dengan meletakkan campuran tindak balas dalam mandi air pada suhu 70 ◦C selama 10 minit. Selepas penyejukan, penyerapan pada 660 nm diukur menggunakan air suling berganda sebagai kosong. Setiap ujian dijalankan tiga kali. Formula berikut digunakan untuk mengira peratus perencatan denaturasi protein:

di mana, Pada=penyerapan sampel ujian; Ac=penyerapan kawalan.

2.9. Penentuan Aktiviti Sitotoksik dan Antikanser Nanozarah Besi Menggunakan Ujian MTT

Kesan V. leucoxylon dan FeNP tersintesisnya terhadap daya maju sel fibroblas bukan kanser L292 dan aktiviti antikansernya terhadap kanser kulit (A375), kanser paru-paru (A549) dan kanser mulut (KB-3-1) telah dinilai menggunakan ujian MTT standard, menurut Carmichael et al., (1987) [37]. Semua garisan sel diperoleh dari Pusat Sains Sel Kebangsaan (NCCS), Pune, India. Nilai peratusan perencatan pertumbuhan sel (IC50) diperoleh menggunakan lengkung tindak balas dos untuk setiap baris sel, dan formula berikut digunakan untuk mengira peratusan perencatan pertumbuhan. Penukaran MTT kepada produk formazan ungu oleh dehidrogenase mitokondria sel sihat adalah asas eksperimen ini [38].

2.10. Kajian Penyembuhan Luka In Vitro dengan Menggunakan Ujian Ujian Scratch

Keupayaan penyebaran dan penghijrahan sel garisan sel L292 yang disebabkan oleh sampel dengan kepekatan ekstrak tumbuhan dan nanozarah besi yang diketahui telah diperiksa dalam penyiasatan semasa [39]. Plat kultur sel haiwan dengan media DMEM ditambah dengan 10 peratus FBS dan 2 peratus antibiotik Pen-Strep (Darmstadt, Jerman) telah digunakan untuk memulakan proses kultur sel. Hujung pipet plastik steril telah digunakan untuk menggaru konfluen monolayer sel selepas ia membesar kepada kira-kira 50,000 sel setiap mL. Penyelesaian PBS digunakan untuk mengeluarkan sebarang serpihan sel yang tidak diingini. Sebagai kawalan negatif, sel yang tidak dirawat digunakan, manakala asid askorbik standard digunakan sebagai kawalan positif untuk sampel polimer yang diketahui kepekatannya. Untuk 24 jam seterusnya, sel disimpan pada suhu 37 ◦C dengan 5 peratus CO2. Untuk pemeriksaan penghijrahan sel relatif dan penutupan luka, lapisan sel yang tercalar diinkubasi dan digambarkan pada selang antara 0 jam hingga 6 jam hingga 12 jam dan 24 jam. Pengukuran Perisian MagVision (X64, 2016, Magnus, New Delhi, India) pada resolusi 4× digunakan untuk mengukur jarak jurang. Untuk menentukan penutupan luka dan kadar migrasi, formula yang ditunjukkan di bawah telah digunakan:

berkenaan dengan perkara berikut: A0h=kawasan luka diukur serta-merta selepas menggaru; Ath=kawasan luka diukur selepas h jam; Rm=kadar penghijrahan (µm/j); Wf=lebar luka awal (µm); dan T=masa penghijrahan (jam).

2.11. Analisis statistik

Data dibentangkan sebagai sisihan piawai min dan ralat piawai, dan setiap eksperimen telah dijalankan tiga kali. Perisian SPSS versi 20 digunakan untuk melakukan analisis varians sehala (ANOVA) terhadap perbezaan skor min yang wujud antara kumpulan.

Minta lebih lanjut:

E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: tambah 86 15292862950

KEDAI:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop