Penilaian Lanjutan Salvia Haenkei Sebagai Strategi Inovatif Untuk Mengatasi Penuaan Foto Kulit Dan Memulihkan Integriti Penghalang

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

abstrak:Kulit adalah penghalang penting tubuh manusia yang melakukan pelbagai fungsi. Faktor endogen, bersamaan dengan serangan luaran, terus menjejaskan integriti kulit, membawa kepada perubahan struktur yang berbeza yang mempengaruhi bukan sahaja penampilan kulit tetapi juga pelbagai fungsi fisiologinya. Perubahan pada fungsi penghalang membawa kepada peningkatan risiko penyakit dan tindak balas sampingan, justeru kepentingan mengekalkan integriti penghalang epidermis dan melambatkan proses penuaan kulit adalah jelas.pertumbuhan zakar cistancheSalvia hankie (SH) baru-baru ini dikenal pasti sebagai agen anti-penuaan yang berpotensi; ekstraknya mampu menurunkan tahap sel senescent dengan menjejaskan pelepasan ll.1a dan mengurangkan penjanaan spesies oksigen reaktif (ROS). Dalam kajian ini, ekstrak SH telah diuji pada garisan sel keratinosit manusia (HaCaT) yang terdedah kepada faktor tekanan yang berkaitan dengan penuaan pramatang sel seperti radikal bebas dan sinaran ultraungu B. Kami mengesahkan bahawa SH bertindak sebagai pemusnah ROS dan mendapati keupayaannya untuk memulihkan integriti penghalang kulit dengan mengukuhkan struktur sitoskeleton, menutup persimpangan yang ketat, dan meningkatkan kadar penghijrahan sel. Memandangkan keputusan ini, kerja ini menjadi relevan, mengenal pasti Salvia hankie sebagai sebatian yang berguna untuk rawatan kulit anti-penuaan dalam prestasi klinikal.

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

pengenalan

Kulit yang sihat dan berfungsi adalah penting untuk melindungi dehidrasi dan penembusan pelbagai daripada 100 peratus , mikroorganisma, alergen, perengsa dan radiasi. Pendedahan harian kepada agen ekstrinsik digabungkan dengan beberapa faktor intrinsik, seperti genetik, metabolisme selular, hormon, dan proses metabolik, membawa kepada penuaan semula jadi kulit [1]. Khususnya, fenomena penuaan kulit sangat berkaitan dengan sinaran ultraungu, pencemaran, penggunaan otot yang berulang, dan graviti [2, 3]. Penuaan kulit, oleh itu, hasil daripada perubahan struktur dan fisiologi terkumpul dan modulasi progresif lapisan kulit [2, 4, 5]. Walaupun penuaan tidak dianggap sebagai keadaan patologi, sebaliknya proses biologi dan tidak dapat dielakkan, korelasinya dengan pelbagai penyakit kulit kini sudah mantap. Memandangkan penyakit kulit yang paling berkaitan dengan usia adalah gangguan degeneratif, neoplasma jinak dan malignan, dsb., kepentingan penjagaan kulit untuk merawat atau mencegah gangguan kulit tertentu dapat dilihat dengan jelas.[6-8]. Pada masa kini, strategi anti-penuaan kulit bertindak untuk membalikkan tanda-tanda penuaan kulit dan epidermis foto/kronologi. Berdasarkan pendekatan mereka, mereka boleh dikelaskan seperti berikut: penjagaan kosmetologi, agen topikal, prosedur invasif, agen sistemik, mengelakkan faktor eksogen penuaan, pembetulan gaya hidup dan tabiat, dan perubatan pencegahan [9]. Terdapat dua kumpulan utama agen yang boleh digunakan sebagai komponen formulasi anti-penuaan: 1. Pengawal selia sel, seperti retinol, peptida, dan faktor pertumbuhan, bertindak secara langsung pada metabolisme dan pengeluaran kolagen; 2. Antioksidan, seperti vitamin, polifenol, dan flavonoid, mampu mengurangkan degradasi kolagen [9].

Bukti yang kukuh menyokong idea bahawa penuaan kulit terutamanya didorong oleh ROS, yang dihasilkan semasa metabolisme sel oksidatif endogen [10,11]. Adalah diketahui bahawa pengumpulan ROS bertanggungjawab untuk kerosakan sel termasuk peroksidasi lipid, kerosakan protein membran, dan mutasi DNA yang membawa kepada perubahan struktur dan fungsi kulit. Dalam perjalanan masa, sel manusia menyokong peningkatan semula jadi tahap ROS, yang dikaitkan dengan kehilangan separa pertahanan antioksidan. Keadaan yang tidak dapat dielakkan ini dipupuk lagi oleh penyinaran ultraungu harian (UVR) yang mendorong sintesis matriks metalloproteinase (MMPs) dan, akibatnya, pemusnahan kolagen pengantara MMP [12, 13]. Kajian in vivo menunjukkan hubungan sebab akibat antara kerosakan oksidatif mitokondria, penuaan selular, dan fenotip penuaan [10, 14].

Penuaan selular ditakrifkan sebagai penangkapan pertumbuhan sel yang stabil yang berlaku dalam semua sel manusia semasa penuaan [15-17]. Akibat peristiwa tekanan, seperti ekspresi berlebihan onkogen, penjanaan ROS, dan kerosakan DNA (contohnya disebabkan oleh UVR, khususnya oleh cahaya UVB), sel-sel mungkin menjadi tua sebelum waktunya [18].faedah cistanche salsaDalam senario ini, nampaknya jelas kepentingan membangunkan strategi inovatif yang dapat menghalang pengumpulan sel senescent atau membunuhnya secara selektif, sekali gus mengatasi masalah penuaan dan penuaan yang berkaitan dengan penuaan. Baru-baru ini, kami mengenal pasti Salvia hankie(SH), tumbuhan Bolivia yang kaya dengan vitamin B dan sifat antioksidan, sebagai agen anti-penuaan yang berpotensi [18].

Pengumpulan sel senescent dari masa ke masa diketahui sebagai salah satu mekanisme yang paling penting di mana tisu menjalani proses penuaan, yang nampaknya dicetuskan terutamanya oleh kegigihan status keradangan biasa. Malah, walaupun sel senescent tidak dapat membiak, mereka mempunyai aktiviti metabolik yang tinggi dan mereka cekap menghasilkan beberapa molekul pro-radang [19]. Dengan menggunakan model kulit epidermis manusia (EpiSkin), ia sememangnya menunjukkan bahawa ekstrak SH mengurangkan tahap sel senescent dengan menjejaskan pelepasan ILla dan mengurangkan penjanaan ROS [18].

Di bawah keadaan homeostatik, kulit adalah penghalang yang cekap yang melindungi daripada serangan luaran dan faktor endogen dan mengawal kehilangan cecair, elektrolit dan protein. Tugas penting ini terutamanya dikaitkan dengan epidermis, epitelium yang dinamik dan sangat berstrata. Dua konstituen epidermis utama ialah stratum korneum, lapisan luar, dan persimpangan ketat (TJs), persimpangan antara sel yang mengelak keratinosit bersebelahan dalam stratum granulosum [20]. Lekatan sel sel diperlukan untuk mengekalkan integriti penghalang epidermis.cistanche tubulosa dos redditFungsi penting ini dipenuhi oleh persimpangan sel-sel khusus: persimpangan melekat (AJs), desmosom dan persimpangan ketat. Struktur ini bukan sahaja membenarkan sambungan fizikal antara sel, tetapi secara keseluruhannya menyusun elemen sitoskeletal, dan memodulasi laluan isyarat yang terlibat dalam pembangunan tisu, struktur dan fisiologi. Kajian genetik baru-baru ini secara tidak dijangka mendedahkan peranan bukan kanonik protein simpang, membawa kepentingan crosstalk simpang, saling bergantung, dan pampasan untuk membolehkan keteguhan tisu [21].

Di sini kami mengkaji aktiviti ekstrak Salvia haenkei untuk memahami mekanisme molekul yang bertanggungjawab terhadap kesan perlindungannya terhadap penuaan kulit foto/kronologi. Dengan perspektif ini, keratinosit manusia yang diabadikan secara spontan (HaCaT) digunakan sebagai model in vitro, dan mekanisme tindakan SH dianalisis di bawah rejimen basal serta dalam keadaan tekanan yang disebabkan oleh penyinaran H202 dan/atau UVB.

KEPUTUSAN

Profil selamat ekstrak SH dan sifat antipenuaan Tekanan oksidatif dalam kulit memainkan peranan utama dalam proses penuaan dan dalam patogenesis beberapa gangguan kulit [22]. Matic et al. telah menunjukkan aktiviti anti-senescence Salvia haenkei juga berkorelasi dengan sifat pemulungnya [18]. Kesan perlindungan ini mungkin dieksploitasi untuk membangunkan rawatan pembaikan kulit baru yang dapat memelihara integriti penghalang. Dengan tujuan untuk menyiasat secara mendalam sifat SH, aktiviti ekstrak pada daya maju sel dan penjanaan ROS dalam model sel HaCaT telah disahkan terlebih dahulu.

Cistanche boleh anti-penuaan

Ujian daya maju sel dilakukan untuk menangani kemungkinan kesan sitotoksik ekstrak Salvia haenkei pada keratinosit. Sel HaCaT dirawat dengan ekstrak SH （0.01-10 ug/ml） selama 24 dan 48 jam. Daya maju sel telah dinilai oleh Ujian Pengecualian biru Trypan. Rajah 1A dan 1B menunjukkan bahawa rawatan dengan ekstrak SH tidak menjejaskan daya maju sel yang mengesahkan profil keselamatan ekstrak pada sel HaCaT di bawah keadaan eksperimen yang digunakan.

Aktiviti ekstrak Salvia haenkei pada penjanaan ROS telah diuji dalam sel HaCaT selepas 3-24 jam rawatan dan sebelum dan selepas pendedahan H2O2.

Keputusan dalam Rajah 2A menunjukkan bahawa SH mampu mengurangkan tahap ROS asas dalam sel, terutamanya semasa 3-masa rawatan jam. Selain peningkatan ketara dalam tahap ROS selepas rangsangan H-Oz (Rajah 2C), SH mampu menghalang pengeluaran ROS. Ekstrak SH (0.01 ug/ml) berkurangan dengan ketara (-25 peratus ) Penjanaan ROS yang disebabkan oleh rangsangan oksidatif (Rajah 2B), menunjukkan kesan yang setanding dengan NAC selepas 3 jam rawatan. Rawatan SH selama 24 jam nampaknya lebih berkesan melawan kenaikan ROS, dengan ketara mengurangkan tahap ROS pada 1 dan 10 ug/ml (Rajah 2B). Keputusan ini mengesahkan Salvia haenkei

kesan antioksidan, seperti yang diperhatikan sebelum ini [18], menunjukkan kesan asas antioksidan yang sudah bermula daripada rawatan singkat; kesan dalam mencegah peningkatan akibat rangsangan oksidatif adalah paling relevan untuk masa rawatan yang lebih lama.

Dilaporkan bahawa sinaran ultraungu mendorong peningkatan tahap intrasel ROS dalam kulit manusia yang menyebabkan kerosakan dan penuaan pramatang dan patologi lain [23-25]. Oleh itu, kesan ekstrak SH pada pengeluaran ROS pengantara UVB telah dinilai. Seperti yang dijangkakan, keputusan dalam Rajah 3C menunjukkan peningkatan ketara dalam tahap ROS intraselular berikutan rangsangan UVB. Rawatan dengan SH, yang mendorong kecenderungan untuk mengurangkan tahap ROS basal dalam sel (Rajah 3A), mampu menghalang peningkatan yang disebabkan oleh rangsangan UVB (Rajah 3B). 3 jam rawatan SH mendorong kecenderungan untuk mengurangkan tahap ROS; rawatan SH yang lebih lama adalah lebih berkesan dalam mengatasi tekanan oksidatif, menunjukkan penurunan yang ketara seperti yang dilaporkan dalam Rajah 3A. Data ini menggariskan aktiviti antioksidan Salvia haenkei juga dalam tekanan oksidatif pengantara UVB.

Seperti yang dinyatakan, peningkatan bukti menunjukkan bahawa sel-sel senescent terkumpul dalam kulit secara kronologi dan foto, menyumbang kepada perubahan dan patologi kulit yang berkaitan dengan usia [26]. Oleh itu, kesan Salvia hankie dinilai pada penanda penuaan p21 dan p27 (yang menghalang fosforilasi protein retinoblastoma (Rb) dan dengan aktiviti perencatan pada CDK2-siklin E, masing-masing [27]) selepas tekanan foto yang disebabkan oleh radiasi ultra ungu. Keputusan dalam Rajah 4 menunjukkan bahawa penyinaran UVB mendorong peningkatan ketara dalam paras mRNA p21 dan p27 berbanding dengan kawalan yang tidak dirangsang.cistanche แอ ม เว ย์Trend yang sama dalam pencegahan peningkatan diperhatikan dalam sel yang dirawat dengan SH. SH 1 ug/ml mendorong pengurangan ketara paras p21 berbanding kawalan rangsangan UVB, manakala kepekatan lain mendorong kecenderungan untuk mengurangkan (Rajah 4A). Tahap P27 dikurangkan dengan ketara melalui prarawatan dengan SH 0.01,0.1 dan 10 ug/ml (Rajah 4B).

Ia juga mendapati bahawa sel senescent memberi kesan negatif kepada persekitaran mikro dengan merembeskan campuran pro-radang kemokin, sitokin, hormon pertumbuhan dan protease, yang dikenali sebagai fenotip rembesan berkaitan penuaan (SASP) [28]. Keputusan dalam Rajah 5 menunjukkan bahawa rangsangan UVB mendorong peningkatan ketara dalam tahap ILla (A), IL6 (B), dan IL18 (C) mRNA berkenaan dengan kawalan yang tidak dirangsang. Prarawatan dengan SH memberikan aktiviti yang kuat dalam mengatasi peningkatan paras sitokin. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5A, SH 10 ug/ml menurunkan tahap ILla dengan ketara; peningkatan dalam IL6 dilawan dengan ketara oleh SH 0.01,0.1 dan 10 ug/ml (Rajah 5B) manakala semua kepekatan yang diuji mampu mengurangkan tahap IL18 dengan ketara (Rajah 5C). Penyelenggaraan penghalang kulit Memandangkan keputusan yang dilaporkan di atas pada garisan sel epitelium, kesan ekstrak SH pada beberapa protein dan proses yang terlibat dalam penyelenggaraan penghalang kulit dan pembaikan kerosakan tisu telah dinilai.

Ungkapan Sirtuin-1.

Beberapa kajian in vitro melaporkan bahawa sinaran UVB mendorong penurunan tahap protein Sirtuinl (SIRT1) fibroblas manusia, menunjukkan penglibatan SIRT1 dalam kerosakan yang dimediasi UVB [29]. Jadi, kesan ekstrak Salvia haenkei pada ekspresi protein Sirtuinl telah dinilai oleh assay blot barat (Rajah 6). Seperti yang dijangkakan, rangsangan UVB menyebabkan penurunan ketara dalam ekspresi protein SIRTI dalam sel HaCaT. Oleh itu, aktiviti ekstrak SH pada tahap SIRT1 telah disiasat. Menariknya, keputusan menunjukkan bahawa 1 ug/ml ekstrak SH, berbanding dengan kawalan, mendorong peningkatan ekspresi SIRTl (tambah 4{10}} peratus ) di bawah keadaan asas, menunjukkan potensi kesan rangsangan pada tahap SIRT1. Seperti yang dijangkakan, rangsangan UVB mendorong pengurangan ketara tahap SIRT1. Keputusan menunjukkan bahawa prarawatan dengan ekstrak SH 0.01 ug/ml mempamerkan kesan amelioratif dalam tahap Sirtuin 1, berbanding kawalan yang dirawat UVB.

Ujian penyembuhan luka

Keratinosit adalah konstituen utama epidermis, menyediakan penghalang antara organisma dan persekitaran. Oleh itu, percambahan dan penghijrahan mereka memainkan peranan penting dalam mengekalkan penghalang yang berkesan dan dalam penyembuhan luka berikutan kecederaan [30, 31]. Oleh itu, kesan SH pada penghijrahan sel HaCaT dinilai. Imej dalam Rajah 7A menunjukkan bahawa rawatan dengan SH membawa kepada pengurangan ketebalan calar yang menunjukkan kesan pada penghijrahan sel HaCaT. Rajah 7B melaporkan pembinaan kymogram bagi halaju penghijrahan sel HaCaT; imej menunjukkan peningkatan yang bergantung kepada kepekatan dalam penghijrahan sel. Graf dalam Rajah 7C menunjukkan peningkatan ketara dalam kelajuan penghijrahan sel selepas 4-8 jam rawatan dengan ekstrak SH 0.01 ug/ml. Peningkatan maksimum dicapai dalam selang 8-12 jam, di mana kadar dalam sel kelajuan penghijrahan sel adalah kira-kira 165 peratus berkenaan dengan kawalan. Data ini, sebagai keputusan yang diperoleh pada percambahan sel, menunjukkan bahawa kepekatan terendah ekstrak SH mampu mendorong peningkatan kelajuan penghijrahan sel yang tidak berkaitan dengan fenotip hiperproliferatif.

Penyelenggaraan simpang yang ketat

Selain stratum korneum, persimpangan ketat (TJ) memainkan peranan penting dalam integriti kulit, bertindak sebagai penghalang untuk air dan bahan terlarut, dan terlibat dalam pembezaan, percambahan, kekutuban sel, dan proses transduksi isyarat sel. Kajian terbaru menunjukkan bahawa cahaya UV mengubah ekspresi dan penyetempatan protein tunggal struktur TJ, yang seterusnya mengganggu fungsi penghalang kulit [32].

Untuk menilai kesan ekstrak Salvia haenkei sebagai agen pelindung yang mungkin terhadap gangguan TJ, ekspresi occludin diukur oleh imunositokimia berikutan pendedahan kepada sinaran UVB. Imej dalam Rajah 8A, dan 8B menunjukkan bahawa rawatan dengan kedua-dua kepekatan SH mendorong peningkatan ekspresi protein occludin, menggalakkan pembentukan simpang berguna untuk mengekalkan integriti penghalang epidermis. Seperti yang dijangkakan, selepas pendedahan kepada sinaran UVB, sel menunjukkan cincin membran yang tidak teratur dan tidak jelas (Rajah 8A). Rawatan SH, terutamanya pada kepekatan yang lebih tinggi, mengekalkan morfologi membran mengekalkan struktur yang setanding dengan kawalan yang tidak dirangsang. Ekstrak SH menggalakkan tetulang simpang dan menghalang kerosakan yang disebabkan oleh pendedahan UVB, mengekalkan fungsi penghalang kulit.

Ungkapan Filaggrin

Kesan ekstrak Salvia haenkei pada ekspresi protein filaggrin (FLG) dinilai oleh imunositokimia. Filaggrin adalah asas protein struktur dalam pembangunan dan penyelenggaraan penghalang kulit. Keputusan dalam Rajah 9A, dan 9B menunjukkan peningkatan yang bergantung kepada kepekatan dalam ekspresi protein filaggrin selepas rawatan selama 24 jam dengan ekstrak SH. Tambahan pula, ungkapan protein F-aktin menunjukkan pengedaran sel yang tetap, mengikuti rawatan dengan SH, yang membawa kepada kesinambungan struktur yang teratur bagi penghalang epitelium. Data ini menunjukkan bahawa SH mempunyai kesan yang baik pada penghalang kulit, meningkatkan ekspresi filaggrin, yang penting untuk pembentukan dan fungsi kulit yang betul.

Ekspresi metalloproteinase

Pendedahan kulit kepada sinaran ultraungu menyebabkan kerosakan pada matriks ekstraselular (ECM) menyebabkan kulit berkedut, kendur, dan kelonggaran, ciri utama penuaan kulit. Matrix metalloproteinases (MMPs) adalah prinsipal yang bertanggungjawab untuk merendahkan komponen ECM seperti kolagen, elastin, fibronektin, dan proteoglikan [33].berapa banyak cistanche yang perlu diambilSebilangan besar kajian menggariskan bahawa pendedahan kulit kepada penyinaran UV mendorong penyelarasan MMP yang berbeza, memberi kesan kepada penampilan dan kesihatan kulit [34-37].

Keputusan dalam Rajah 10 menunjukkan bahawa sinaran UVB meningkatkan ekspresi mRNA gelatinase MMP-2 yang merendahkan kolagen membran bawah tanah dan kolagen struktur ternyahatur [38]. Rawatan dengan SH mampu mengurangkan tahap mRNA MMP-2 dengan ketara (SH 0.01-0.1-10 ug/ml） menunjukkan aktiviti ekstrak SH dalam penyelenggaraan integriti struktur kulit, rosak oleh tekanan foto.

PERBINCANGAN

Penuaan kulit adalah kesan kumulatif faktor intrinsik dan ekstrinsik yang membawa kepada kemerosotan kulit, mendorong penipisan, kekakuan, dan kehilangan kelenturan. Kulit adalah penghalang pertama antara organisma dan persekitaran, jadi pengekalan integriti fungsi dan anatominya adalah penting. Selain proses penuaan semula jadi dan keadaan berkaitan penuaan seperti diabetes, menopaus, dsb., faktor ekstrinsik boleh selaras dalam mempengaruhi struktur kulit; khususnya faktor kerosakan foto, pencemaran, atau gaya hidup (merokok, diet, tekanan emosi, dll.) boleh menghalang struktur dan fungsi kulit [39,40]. Keratinosit adalah juzuk utama epidermis, menyediakan asas selular untuk penghalang paling luar; Dalam kerja ini, barisan sel keratinosit manusia HaCaT telah terdedah kepada faktor tekanan, seperti radikal bebas dan sinaran ultraviolet B, untuk meniru penuaan kulit semula jadi, sekali gus mengubah fungsi penghalang. Salvia hankie baru-baru ini dikenal pasti sebagai agen anti-penuaan yang berpotensi mencadangkan penggunaannya dalam penuaan kulit dan gangguan berkaitan penuaan kulit; oleh itu, kesan ekstrak tumbuhan ini telah disiasat secara mendalam pada parameter yang berkaitan dengan penuaan kulit, pengekalan integriti kulit dan keadaan fisiologi. Pengeluaran spesies oksigen reaktif atau radikal bebas melalui proses metabolik endogen biasa atau UVR dan pencemaran dianggap menyumbang kepada proses penuaan kulit. Kulit terdedah kepada pelbagai tindak balas redoks, dan keseimbangan redoks adalah penting dalam penyelenggaraan homeostasis kulit. Kepekatan ROS yang rendah menimbulkan aktiviti fisiologi, tetapi peningkatan tahap spesies ini terlibat dalam pengaktifan laluan yang mengakibatkan peningkatan degradasi kolagen, pengumpulan elastin, pengaktifan metalloprotease yang merendahkan matriks, dll. [41]. Selain itu, ROS memainkan peranan penting dalam proses patologi termasuk penuaan, keradangan, kecederaan, dan patogenesis beberapa penyakit kulit seperti psoriasis dan vitiligo [42]. Menariknya, ekstrak Salvia haenkei telah ditunjukkan untuk mengurangkan tahap ROS dalam keadaan basal, keadaan tekanan oksidatif, dan keadaan tekanan yang disebabkan oleh penyinaran UVB, menunjukkan kesan perlindungan yang berpotensi terhadap perubahan yang dimediasi ROS [22].

Untuk menyokong kesan antipenuaan Salvia hankie yang diperhatikan sebelum ini, dalam kerja ini, kami membuktikan keupayaan ekstrak SH untuk mengurangkan penuaan dalam keratinosit yang dirangsang oleh sinaran UVB. Keputusan menunjukkan bahawa SH mampu mengurangkan ekspresi gen penanda penuaan p21 dan p27, yang dirangsang oleh sinaran UVB. Menariknya, ekstrak SH menunjukkan aktiviti yang menjanjikan dalam mengurangkan tindak balas keradangan yang dipupuk oleh kerosakan foto dalam sel, dengan menurunkan transkripsi interleukin. Tambahan pula, kami telah menunjukkan dengan menarik bahawa ekstrak Salvia haenkei mendorong ekspresi protein Sirtuinl bukan sahaja selepas tekanan tetapi juga di bawah keadaan asas, menunjukkan aktiviti yang menjanjikan dalam melambatkan proses penuaan. Keluarga Sirtuin, dan khususnya SIRT1, telah terbukti memainkan peranan dalam penuaan-fotopenuaan, terutamanya melalui perencatan MMP dan degradasi kolagen yang seterusnya; berbilang kajian menggariskan peranan pelindungnya dalam photoaging UVB-mediated. Sebatian semula jadi seperti juglone (5-hidroksi-1,4-napthalenedione) telah ditunjukkan untuk memulihkan SIRT1 kepada paras normal selepas rawatan UVB, menunjukkan bahawa SIRTI mungkin memainkan peranan dalam mencegah karsinogenesis yang disebabkan oleh UVB [29]. Keputusan kami juga menunjukkan, kemungkinan penglibatan sirtuin dalam proses pembaikan selepas tekanan UVB dan peranannya dalam penyelenggaraan homeostasis epidermis.

Gangguan kulit radang yang biasa, seperti dermatitis atopik dan psoriasis, serta proses penuaan, mempamerkan penurunan fungsi penghalang, dan tindak balas sel epidermis terhadap gangguan halangan boleh memburukkan, mengekalkan, atau bahkan memulakan keadaan sedemikian. Hasil kerja ini mendedahkan keupayaan kuat SH untuk memulihkan integriti penghalang kulit dengan modulasi beberapa protein yang terlibat dalam proses ini. Khususnya, ia telah diperhatikan rangsangan occludin dan transkripsi filaggrin menunjukkan tindakan pengukuhan pada lekatan antara sel. Kekurangan filaggrin yang diwarisi dan diperolehi menjejaskan halangan epidermis, mengubah organisasi

filamen keratin sitoskeleton dan struktur sampul kulit berkorban [43]. Tambahan pula, kecacatan dalam ekspresi FLG menyebabkan penurunan dalam bilangan butiran keratohyalin, kejatuhan ketara dalam kepekatan faktor pelembab semulajadi(NMF), dan pengalkalian pH kulit [44]. Selain itu, perubahan dalam protein claudin dan occludin, yang tergolong dalam protein Tight junctions (TJs), diterangkan dengan baik mengenai proses penuaan. TJs bertanggungjawab untuk menutup ruang antara sel antara sel epitelium, untuk membentuk penghalang berfungsi, dan terlibat dalam percambahan dan pembezaan sel [45]. Ekstrak Salvia haenkei telah ditunjukkan untuk meningkatkan ekspresi filaggrin dan untuk mengekalkan penyetempatan occludin pada membran sel, terjejas oleh sinaran UVB. Aktiviti tambahan ekstrak SH dalam penyelenggaraan kulit yang sihat telah dibuktikan dengan keupayaannya untuk mengurangkan transkripsi metalloproteinase matriks 2(MMP-2), yang dirangsang oleh sinaran UVB. Penyelarasan MMP memudahkan penuaan dan patologi kulit, dengan merendahkan kolagen dan elastin yang menyebabkan kerosakan pada matriks ekstraselular (ECM) [33, 38], oleh itu pengurangan proteinase ini adalah bernilai dalam konteks penuaan kulit.

Kesan positif rawatan SH yang diperhatikan dalam kajian ini ke atas parameter molekul kulit yang paling biasa telah disahkan juga oleh percubaan klinikal baru-baru ini, yang dilaksanakan dalam kohort lima puluh wanita Kaukasia berumur antara 45 dan 60 [46]. Salvia hankie telah diberikan dalam formulasi krim dan beberapa parameter, seperti kemerahan dan keanjalan kulit, kedalaman kedutan, dan potensi antioksidan, telah dinilai oleh kedua-dua penilaian klinikal dan instrumental serta penilaian kendiri oleh subjek. Keputusan kajian ini mendedahkan keberkesanan SH dalam memperbaiki kemerosotan kulit apabila digunakan setiap hari dalam konteks penuaan kulit yang sederhana. Malah, selepas 84 hari penggunaan, kulit wanita menjadi lebih anjal dan menunjukkan bilangan kawasan merah yang lebih rendah dan kedutan yang lebih cetek. Selain itu, kajian itu menunjukkan peningkatan progresif dalam keupayaan antioksidan kulit berikutan penggunaan krim harian [46].

Sebagai tempat perlindungan untuk badan daripada persekitaran luaran, kulit sentiasa terdedah kepada potensi kecederaan, dan dengan itu penyembuhan luka adalah proses penting untuk kemandirian semua organisma. Memandangkan keupayaan SH yang terbukti dalam mengekalkan kulit yang sihat dan tidak bercacat, kami menganggap bahawa ekstrak ini boleh membantu untuk meningkatkan pertumbuhan semula kulit dengan berguna dalam pembaikan lesi kulit. Oleh itu, aktiviti SH pada penghijrahan keratinosit, sebagai langkah utama dalam memulihkan halangan kulit selepas kecederaan, akhirnya dipertimbangkan. Rawatan ekstrak SH mendedahkan aktiviti menarik yang dapat meningkatkan kelajuan penghijrahan HaCaT, menunjukkan kesan kuat ke atas pembentukan semula kecederaan epitelium selepas lesi. Oleh kerana penghijrahan adalah elemen kritikal dalam proses penyembuhan luka, data kami, juga mempertimbangkan aktiviti bukan hiperproliferatif ekstrak, menunjukkan potensi kesan ekstrak SH dalam mengatasi lebih cepat kesan kecederaan pada penghalang kulit, mengurangkan risiko jangkitan.

Data kami menunjukkan ekstrak Salvia haenkei sebagai sebatian berguna untuk sama ada membantu pembentukan semula halangan atau melembapkan tindak balas tekanan epidermis. Seiring dengan percubaan baru-baru ini pada manusia, kerja ini memberikan gambaran lanjut tentang mekanisme yang terlibat dalam kesan positif ekstrak pada penuaan kulit.

Kerja ini, untuk menyokong karya sebelumnya [18, 46], mengenal pasti dengan cara yang lebih pelik mekanisme molekul yang dikaitkan dengan keberkesanan Salvia hankie dalam memodulasi parameter kulit, menggariskan kaitan Salvia hankie sebagai agen menarik yang berguna untuk anti-penuaan. dan gangguan kulit yang berkaitan dengan penuaan.

BAHAN DAN KAEDAH Kultur sel dan penyinaran UVB

Sel HaCaT (keratinosit yang diabadikan secara spontan manusia) telah dibiakkan dalam medium Helang yang diubah suai Dulbecco (DMEM) glukosa tinggi ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2 mM glutamin, 100 U/ml penisilin dan 100 ug/ml streptomycin (Lonza, Basilea, Switzerland). Sel dikekalkan di bawah suasana lembap sebanyak 5 peratus CO2 di udara dan diinkubasi pada 37 darjah .

Apabila diminta oleh protokol percubaan, sel telah terdedah kepada sinaran 30 KJ/m²UVB, dibekalkan oleh lampu PL-S UVB Narrowband Perubatan Philips. Untuk mengelakkan penyerapan cahaya oleh medium kultur tisu, ini telah dikeluarkan sebelum penyinaran, dan digantikan dengan DMEM FBS dan bebas fenol merah, mengikut protokol penyinaran [47]. Selepas penyinaran UVB, sel diberi makan dengan medium pertumbuhan segar atau digunakan untuk eksperimen mengikut protokol.

Daya maju sel-Ujian pengecualian biru Trypan 35 x10³ sel disalut pada 12 plat perigi dan, selepas pengeraman semalaman, telah terdedah kepada kepekatan ekstrak hidroetanol Salvia haenkei yang berbeza mengikut protokol percubaan. Ekstrak ini telah disediakan oleh IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Itali) dan membentangkan kandungan asid rosmarinik penanda 0.6 peratus b/b oleh HPLC. Selepas rawatan, sel telah dibasuh, ditanggalkan dengan 0.25 peratus trypsin-0.2 peratus EDTA dan digantung dalam trypan blue (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Amerika Syarikat) pada nisbah l: I dalam larutan sederhana. Sel dikira menggunakan hemocytometer Burker chamber.

Ujian pendarfluor ROS

ROS dikira menggunakan 2', 7'-dichlorofluorescein-diacetate (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Amerika Syarikat), seperti yang diterangkan sebelum ini [48]. Secara ringkas, sel (5x10') telah disemai ke dalam 96-plat perigi, dibenarkan melekat semalaman, dan kemudian didedahkan kepada ekstrak SH selama 3 atau 24 jam. N-acetylcysteine ​​​​5mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) digunakan sebagai kawalan positif.

Untuk keadaan tegasan oksidatif, tahap ROS diukur selepas penambahan 50 μM Hz-DCF-DA tanpa kehadiran atau kehadiran H2Oz [48]. Keamatan pendarfluor DCF diukur pada pengujaan 485 nm-pelepasan 535 nm, menggunakan Pembaca Plat Berbilang Label VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, Amerika Syarikat).

Untuk penilaian tahap ROS dalam keadaan tekanan UVB, protokol telah diubah suai sedikit, dengan mengeram sel dalam rawatan SH - 50 μM Hz-DCF-DA penyelesaian dalam PBS. Selepas 25 minit pengeraman pada 37 darjah, plat terdedah kepada sinaran UVB dan keamatan pendarfluor DCF segera diukur pada pengujaan 485 nm-pelepasan 535 nm, menggunakan Pembaca Plat Berbilang Label VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, Amerika Syarikat).

Mikroskopi imunofluoresensi

10x104 sel telah disemai pada slip penutup kaca yang telah disalut dengan kolagen dalam 24-plat perigi, dibenarkan untuk melekat semalaman dan dirawat dengan ekstrak SH mengikut protokol. Untuk pengesanan protein -catenin dan occludin, sel telah terdedah kepada sinaran UVB, seperti yang diterangkan dalam protokol di atas. Selepas penyinaran, sel diberi makan dengan medium pertumbuhan segar atau digunakan untuk eksperimen mengikut protokol. Untuk ujian imunofluoresensi, 4 jam selepas penyinaran UVB, sel-sel telah dibasuh, difiksasi dengan 4 peratus formaldehid, telap dengan 0.1 peratus Triton X-100 dalam PBS dan diwarnakan selama 1 jam pada 37 darjah dengan antibodi khusus protein yang berbeza: anti-okludin monoklonal tetikus (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, Amerika Syarikat), anti-filaggrin tetikus (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Amerika Syarikat). Selepas mencuci PBS, sel diinkubasi dengan antibodi sekunder/fluorescein isothiocyanate (Alexa Fluor 488 anti-tikus atau Alexa Fluor 536 anti-arnab immunoglobulin G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) dan dengan phalloidin selama 1 jam pada suhu bilik. Selepas 10 minit rawatan dengan RNase, slip penutup telah dipasang pada slaid kaca dengan menggunakan Mowiol 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, Amerika Syarikat) dan menambah propidium iodide. Imej diperoleh melalui mikroskop confocal LSM 800, pembesaran 60X, perisian ZN 2.1 Edisi biru (Carl Zeiss, Jena, Jerman) dan dikira menggunakan perisian ImageJ.

Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan menggunakan GraphPad Prism versi 7.02 untuk Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Melainkan dinyatakan sebaliknya, keputusan dibentangkan sebagai min campur SEM. Ujian-t Pelajar telah digunakan dan nilai p<0.05 were="" considered="" statistically="">

Singkatan

AJ:persimpangan mematuhi; ECM: matriks ekstraselular;FLG: filaggrin; Hz-DCF-DA: 2',7'-dichlorofluorescein-diacetate; H2Oz: Hidrogen Peroksida; MMP: matriks metalloproteinase; NAC: N-acetylcysteine; NMF:faktor; ROS: pelembap semula jadi oksigen reaktif

spesies; SIRTl: Sirtuinl; SH: Salvia hankie; TJ: simpang ketat; UVB: Sinaran ultraungu B.

Artikel ini dipetik daripada www.aging-us.com