Kajian Eksperimen Mengenai Kesan Perlindungan Cistanche Total Glycosides(CTG) Pada Kecederaan Reperfusi Iskemia Buah Pinggang

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

ZHU Jun, ZHAO Xi

Abstrak:Objektif Untuk mewujudkan model tikus kejutan hemoragik dan resusitasi untuk melihat kesan perlindunganjumlah glikosida cistanche( CTG)pada buah pinggangkecederaan iskemia-reperfusi. Tikus SD meth ods telah rawak ke dalam kumpulan operasi palsu －, kumpulan kejutan dan resusitasi (kumpulan eksperimen), dan kumpulan CTG, dengan 10 tikus dalam setiap satu. Selepas pemodelan, tikus dalam kumpulan CTG menerima suntikan intraperitoneal CTG 400 mg/kg. Dalam kumpulan eksperimen dan kumpulan operasi sham, salin fizikal 3 ml telah disuntik. Tahap Cr, BUN, dan Cys － C ditentukan untuk mengesan fungsi buah pinggang dalam setiap kumpulan. Sitometri aliran digunakan untuk mengesan kadar apoptosis sel buah pinggang. ELISA digunakan untuk mengesan ekspresi XIAP dalam tisu buah pinggang. Keputusan Berbanding dengan kumpulan eksperimen, tahap Cr, BUN dan Cys － C nampaknya berkurangan dalamCTGkumpulan ( P ＜ {{0}}.01), dan apoptosis sel renal telah dikurangkan ( P ＜ 0.01). CTG meningkat dengan ketara ekspresi XIAP(P<0.05). conclusion="">CTGmembawa kesan perlindungan padareperfusi iskemiakecederaan buah pinggang pada tikus, yang mungkin berkaitan dengan promosi ekspresi XIAP.

【Kata kunci】 Buah pinggang; Kecederaan Reperfusi Iskemia; Cistanche Jumlah Glikosida; XIAP; Apoptosis Sel

Jumlah glikosida cistanche

Kecederaan iskemia-reperfusi (I/R).adalah fenomena patofisiologi biasa kerosakan buah pinggang dalam proses kejutan hemoragik, trauma teruk, pemindahan buah pinggang, dan pembedahan tumor buah pinggang. Kajian telah menunjukkan bahawa apoptosis adalah pautan penting dalam kerosakan fungsi buah pinggang yang disebabkan oleh kecederaan I/R [1]. Perencat protein apoptosis (XIAP) berkaitan kromosom X adalah salah satu perencat endogen terkuat apoptosis yang ditemui setakat ini [2]. Terdapat beberapa kajian mengenai kesan anti-apoptosis XIAP dalam tisu buah pinggang selepas kecederaan I/R.Jumlah glikosida cistanche(CTG) adalah daripada senarai sebatian Phenylethanol glikosida yang diekstrak daripadaCistanchemempunyai fungsi biologi yang pelbagai. Terdapat beberapa kajian mengenai perlindungan buah pinggang selepas kecederaan I/R. Dalam eksperimen ini, model tikus resusitasi kejutan hemoragik telah ditubuhkan, dan model kecederaan I/R sistemik telah ditubuhkan untuk meneroka kesan perlindungan prarawatan CTG pada buah pinggang daripada kecederaan I/R dan meneroka kemungkinan mekanismenya.

Kesan cistanche: mencegahKecederaan iskemia-reperfusi (I/R).

1 Bahan dan kaedah

1.1 Bahan eksperimen

1.1.1 Haiwan makmal 30 ekor tikus SD jantan sihat gred bersih, disediakan oleh Pusat Eksperimen Universiti Perubatan Tradisional Cina Shanghai, nombor sijil haiwan: SYXK (Shanghai) 2009-0069, berat badan (320 ± 30) g.

1.1.2 Reagen eksperimenCTG(dibeli daripada Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., nombor kelompok: 20081516); natrium pentobarbital (nombor kelompok: P3761), propidium iodide (PI), Rhodamin123 (kedua-duanya dibeli (Dari Sigma, Amerika Syarikat); Kit penentuan Rat XIAP Kit ELISA (dibeli daripada Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., nombor kelompok CSB-ELO26172MO) .

1.1.3 Alat makmal Pembaca plat mikro (American Thermo Company); Pengesan fisiologi berbilang parameter (dibeli daripada Syarikat NIHON KOHDEN, Jepun); Flow Cytometer (dibeli daripada Syarikat Becton-Dickinson, Amerika Syarikat); 24 G trocar ( Syarikat Peralatan Perubatan Shandong Jierui).

1.2 Kaedah eksperimen

1.2.1 Penyediaan tikus SD model haiwan dipuasakan 12 jam sebelum eksperimen dan dibius dengan suntikan intraperitoneal natrium pentobarbital (50 mg/kg). Tikus-tikus itu diletakkan dalam kedudukan terlentang, dan hirisan 3 cm dibuat di bahagian bawah abdomen kiri dan dipisahkan. Dalam arteri femoral, trocar 24 G dimasukkan, penguji fisiologi berbilang parameter disambungkan, picagari 20 ml heparinized, dan tekanan darah turun kepada 40 mm Hg. Tekanan darah turun kepada 40 mm Hg. Ia dianggap bahawa kejutan telah bermula, dan tekanan darah dikekalkan selama 90 minit. Ia adalah (13 ± 3) ml, dan kemudian darah autologous dalam picagari perlahan-lahan dikembalikan. Ia mengambil masa kira-kira 30 minit untuk memulihkan tekanan darah kepada lebih daripada 90 peratus daripada nilai asas. Ia dianggap bahawa resusitasi berjaya [3]. Tarik jarum trocar, ikatkan arteri femoral, dan jahit hirisan. Selepas tikus terjaga, mereka dikembalikan ke sangkar untuk pemerhatian, dan mereka mempunyai akses percuma kepada makanan dan air. 24 jam selepas resusitasi, tikus telah dibius dengan natrium pentobarbital (50 mg/kg) melalui suntikan intraperitoneal, laparotomi, dan 5 ml darah dikumpulkan dari vena kava inferior. Tikus-tikus itu dibunuh serta-merta, dan buah pinggang kiri dan kanan dikeluarkan untuk digunakan.

1.2.2 Kumpulan dan pentadbiran haiwan 30 ekor tikus dibahagikan secara rawak kepada kumpulan pembedahan palsu, kumpulan resusitasi kejutan (kumpulan eksperimen), dan kumpulan CTG, dengan 10 ekor tikus dalam setiap kumpulan.

Kumpulan eksperimen telah disuntik secara intraperitoneal dengan 3 ml garam biasa 2 jam sebelum pendarahan. Di dalamCTGkumpulan, CTG diberikan 2 jam sebelum pendarahan tikus, dan dos disuntik ke dalam rongga perut pada dos 400 mg/kg. Kumpulan operasi palsu hanya menjalani anestesia, laparotomi dan pemisahan penempatan trocar arteri femoral dan hirisan jahitan, dsb., pendarahan dan resusitasi tidak dilakukan, dan selebihnya adalah sama dengan kumpulan eksperimen.

1.3 Petunjuk dan kaedah ujian

1.3.1 Penentuan kreatinin darah (Cr), nitrogen urea (BUN), cystatin C Cr, BUN, dan cystatin C ditentukan oleh makmal hospital kami. Cystatin C ialah penanda endogen bagi perubahan dalam kadar penapisan glomerular. Apabila fungsi buah pinggang terjejas, kadar penapisan glomerular berkurangan dan kepekatan cystatin C dalam darah boleh meningkat lebih daripada 10 kali ganda. Ketepatan diagnostik cystatin C adalah jauh lebih baik daripada kreatinin serum.

1.3.2 Penentuan kadar apoptosis sel Sitometri aliran digunakan untuk mengesan kadar apoptosis sel buah pinggang. Ambil buah pinggang dan potong dengan pisau, tambah sedikit PBS dan pindahkan ke dalam tabung uji. Tambahkan 0.3 peratus trypsin untuk penghadaman dalam tab mandi air 37 darjah dan eramkan selama 20 min. Apabila bahan dalam tabung uji menjadi keruh, tambah dua kali ganda PBS untuk menghentikan penghadaman, tapis dengan jaring nilon 300 mesh, buang kekotoran dan gunakan Centrifuge bersuhu rendah pada 1500 g / s untuk 5 min, buang supernatan, laraskan kepekatan sel kepada 1 × 106 ~ 1.5 × 106 / ml, ambil 0.4 ml penggantungan sel di atas, dan tambah 10 ul / ml Rhodamin123 0 ．4 ml, eramkan dalam Mandian air 37 darjah dilindungi daripada cahaya, tutup tabung uji, bilas dengan dua kali PBS selepas 30 minit, kemudian sentrifuge pada 1500 g/s selama 5 minit, buang supernatan, dan bilas semula dengan cara yang sama. Tambah PI 0.4 ml, pewarna selama 15 minit, dan semak peratusan sel normal, nekrotik dan apoptosis dalam buah pinggang. Mengikut pertalian kedua-dua pewarna ini dalam pelbagai jenis sel, diketahui bahawa hanya sel berwarna PI adalah sel mati, hanya sel berwarna Rhodamin123 adalah sel hidup, dan kedua-dua sel berwarna adalah sel apoptosis.

1.3.3 Enzyme-linked immunoassay (ELISA) telah digunakan untuk mengesan ekspresi XI-AP dalam tisu buah pinggang tikus. Buah pinggang setiap kumpulan telah diambil, dan tisu buah pinggang segar dirawat dengan tisu lisat. Empar pada 1500 g/s dalam emparan suhu rendah selama 5 min. Ambil supernatan dan kendalikan mengikut arahan Kit ELISA XI-AP. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. bertanggungjawab untuk ujian.

1.4 Pemprosesan statistik

Semua data telah dianalisis secara statistik menggunakan perisian SPSS17.0 dan data dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai (x ± s) dan P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

jumlah glikosida cistanche

2 keputusan

2.1 Indeks fungsi buah pinggang Cr, BUN, Cystatin C Perbandingan Cr, BUN, Cystatin C dalam kumpulan eksperimen adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan operasi palsu (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">

Berbanding dengan kumpulan eksperimen, nilai Cr, BUN, dan Cystatin C dalamCTGkumpulan telah berkurangan dengan ketara, dan perbezaannya adalah signifikan secara statistik (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Jadual 1 Perbandingan indeks fungsi buah pinggang Cr, BUN, dan Cystatin C tikus dalam setiap kumpulan (x ± s)

Nota: Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, P＜{{0}}.01; berbanding dengan kumpulan eksperimen, bP＜0.01

2.2 Kadar apoptosis sel renal dan ekspresi XIAP dalam tisu renal. Hanya beberapa sel dalam tisu buah pinggang kumpulan operasi palsu menjalani apoptosis.

Bilangan apoptosis dalam kumpulan eksperimen meningkat dengan ketara, dan perbezaannya adalah signifikan secara statistik berbanding dengan kumpulan operasi palsu (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>

Kumpulan operasi palsu hanya mempunyai ekspresi XIAP yang lemah, manakala kumpulan eksperimen mempunyai peningkatan yang ketara dalam ekspresi XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">

Jadual 2 Perbandingan kadar apoptosis dan ekspresi XIAP sel buah pinggang tikus dalam setiap kumpulan (x± s)

Nota: Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, aP＜{{0}}. 01; Berbanding dengan kumpulan eksperimen, b P＜0. 05, cP<0.>

3 Perbincangan

Mekanisme kecederaan buah pinggang I/R adalah sangat rumit. Ia adalah proses patologi yang berlaku melalui banyak laluan di bawah tindakan pelbagai faktor, seperti beban ion kalsium, kerosakan peroksidasi lipid, apoptosis, dan nekrosis, antaranya caspases endogen apoptosis yang bergantung kepada Caspase adalah salah satu bentuk utama epitelium tubular renal. kerosakan sel yang disebabkan oleh kecederaan buah pinggang I/R [4]. Inhibitor keluarga protein apoptosis (IAP) adalah satu-satunya perencat caspase yang terdapat dalam sel mamalia setakat ini, yang boleh mencegah berlakunya apoptosis dengan berkesan. XIAP ialah ahli perencatan caspase terkuat dalam keluarga IAP, yang boleh menghalang apoptosis sel yang disebabkan oleh pelbagai rangsangan patologi dan memainkan kesan perlindungan pada organ yang rosak [5].

Pada masa ini, kaedah untuk mewujudkan model haiwan kecederaan I/R buah pinggang kebanyakannya adalah untuk mengeluarkan satu sisi buah pinggang dan mengapit sisi lain pedikel buah pinggang atau arteri buah pinggang [6] untuk mensimulasikan keadaan pemindahan buah pinggang. Penulis menggunakan model kejutan hemoragik/resusitasi dalam kajian ini, yang lebih dekat dengan proses patofisiologi iskemia-reperfusi sistemik yang berlaku dalam kejutan traumatik klinikal. Dalam eksperimen ini, BUN darah, Cr, dan cystatin tikus SD Jumlah C meningkat dengan ketara dan fungsi buah pinggang terjejas teruk. Ia adalah model haiwan yang ideal untuk mengkaji kecederaan buah pinggang I/R.

CTG adalah komponen perubatan penting dalam perubatan tradisional CinaCistanche. Cistanche, yang bersifat hangat, manis dan masin, tergolong dalam meridian buah pinggang dan usus besar dan pada asalnya terkandung dalam Materia Medica Shennong. "Ben Jing," berkata: "Mengekalkan lima bersalin dan tujuh kecederaan, menyuburkan bahagian tengah, menyuburkan lima organ dalaman, menguatkan yin, dan menyuburkan intipati dan qi." Juga."Cistanchetelah digunakan di negara saya selama dua ribu tahun. Ia menduduki tempat pertama dalam formula meningkatkan kekuatan pada masa lalu, dan kedua hanya untuk ginseng dalam formula berkhasiat.Cistanchebolehmeningkatkan fungsi seksual, mengawal neuroendokrin, dan meningkatkan fungsi imun badan. Antioksidan, menggalakkan metabolisme bahan, melindungi miokardium iskemia dan fungsi lain. Sebagai ramuan perubatan utamaCistanche, CTG mempunyai banyak fungsi. Penyelidikan mengenai serebrumiskemia-reperfusimodel

Kajian mendapati bahawaCTGboleh mengurangkan asid amino pengujaan dalam tisu otak selepas iskemia-reperfusi dan melindungi tisu otak tikus SD [7]. CTG mempunyai kesan antioksidan pada tisu tikus dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada hipoksia serebrum akut pada tikus dan kerosakan otot jantung pada tikus [8]. CTG boleh meningkatkan dengan ketara tingkah laku neurotik model Parkinson dan menghalang penurunan bilangan neuron dopamin dalam substantia nigra [9]. Dengan meningkatkan aktiviti enzim penghapus radikal bebas, menghalang peroksidasi lipid, menghalang pemendapan peptida -amyloid dalam otak, dan menghalang apoptosis sel otak, CTG meningkat dengan ketara -amyloid peptide-induced Alzheimer's disease tikus Kemampuan pembelajaran dan ingatan [10]. Kajian ini menunjukkan bahawa selepas penggunaan prarawatan CTG, kandungan BUN darah, Cr, dan cystatin C tikus SD menurun dengan ketara, dan kerosakan fungsi buah pinggang berkurangan. CTG meningkatkan XIAP protein yang menghalang apoptosis dalam tisu buah pinggang kecederaan I/R dan menyekat sel. Kejadian apoptosis memainkan peranan perlindungan dalam merosakkan buah pinggang.

rujukan

[1] Cassis P, Azzollini N, Solini S, et al. Kedua-dua darbepoetin alfa dan carbamylated erythropoietin menghalang disfungsi cantuman buah pinggang akibat iskemia/reperfusi pada tikus ［J］． Pemindahan, 2011, 92 (3): 271-279.

[2] West T, Stump M, Lodygensky G, et al. Kekurangan perencat protein apoptosis berkaitan X membawa kepada peningkatan apoptosis dan kehilangan tisu berikutan kecederaan otak neonatal［J］． ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.

[3] Fu X, Tian H, Wang D, et al. Kecederaan dan kegagalan berbilang organ yang disebabkan oleh kejutan dan reperfusi selepas luka tembakan［J］． J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.

[4] Padanilam BJ. Kematian sel yang disebabkan oleh kecederaan buah pinggang akut: perspektif mengenai sumbangan apoptosis dan nekrosis［J］． Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.

[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Kesan sitoprotektif IAP didedahkan oleh antagonis molekul kecil［J］． Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.

[6] Wu Jianguo, Zhang Dan, Wu Xinsheng, dsb., Penubuhan dan pengalaman model kecederaan buah pinggang iskemia-reperfusi akut pada tikus [J]. Maklumat Perubatan: Buku Panduan Pembedahan, 2007, 20 (12): 1103-1105.

[7] Zhu Zheng. Kesan Cistanche Glycosides pada Asid Amino Excitatory dalam Tisu Otak Tikus selepas Iskemia dan Reperfusi Serebrum [J]. Perubatan Anhui, 2010, 14 (12): 1393 -1394.

[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Kesan perlindungan jumlah glikosida cistanche deserticola terhadap kekurangan oksigen ［J］． Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.

[9] Li Wenwei, Yang Ru, Cai Dongfang, et al. Kesan perlindungan jumlah glikosida cistanche pada neuron dopaminergik dalam substantia nigra tikus model penyakit Parkinson MPTP

[10] Liu Fengxia, Wang Xiaowen, Luo Lan, dll. Kesan dan mekanisme jumlah glikosida cistanche pada pembelajaran dan ingatan model tetikus penyakit Alzheimer yang disebabkan oleh peptida -amyloid [J]. Buletin Farmakologi Cina, 2006, 22 (5): 595-599.