Kajian Eksperimen Kesan Perlindungan Prarawatan Cistanche Glycosides Pada Kecederaan Reperfusi Iskemia Buah Pinggang

untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com

Zhu Jun, Zhao Ximin

(Jabatan Pembedahan, Hospital Daerah Baoshan Perubatan Tradisional Cina dan Barat Bersepadu, Shanghai 201900)

【Abstrak】Objektif Untuk mewujudkan model resusitasi kejutan hemoragik pada tikus dan memerhatikan kesan perlindungan daripadaCistanchejumlah glikosida (CTG) pada kecederaan iskemia-reperfusi buah pinggang. Kaedah Tikus SD dibahagikan secara rawak kepada 3 kumpulan: kumpulan operasi palsu, kumpulan eksperimen (kumpulan resusitasi kejutan), kumpulan rawatan CTG, 10 tikus dalam setiap kumpulan. Kumpulan eksperimen dan kumpulan rawatan CTG menubuhkan model reperfusi iskemia buah pinggang. Tikus dalam kumpulan rawatan disuntik dengan CTG 400 mg/kg secara intraperitoneal, dan kumpulan eksperimen dan kumpulan operasi palsu disuntik dengan garam. Kandungan miokardium darah, kandungan nitrogen urea dan cystatin C setiap kumpulan dikesan untuk menentukan fungsi buah pinggang, analisis sitometri aliran digunakan untuk mengesan kadar apoptosis sel renal; Enzim-linked immunoassay (ELISA) digunakan untuk mengesan kaitan kromosom X dalam tikusbuah pinggangtisu Ungkapan perencat berkaitan X protein apoptosis (XIAP). Keputusan Membandingkan kumpulan CTG dengan kumpulan eksperimen, Cr darah, BUN, dan Cystatin C dikurangkan dengan ketara (P<0.01), renal="" cell="" apoptosis="" was="" reduced=""><0.05), ctg="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). conclusion="" the="" total="" glycosides="" of="">cistanchemempunyai kesan perlindungan pada kecederaan reperfusi iskemia buah pinggang pada tikus, yang mungkin berkaitan dengan promosi ekspresi XIAP.

[Kata kunci] buah pinggang; kecederaan iskemia-reperfusi; jumlah glikosida cistanche; perencat berkaitan kromosom protein apoptosis; apoptosis; tikus

[Nombor Klasifikasi Perpustakaan Cina] R692 [Kod Penandaan Dokumen] A [Nombor Artikel] 1008 -0392 (2015) 02-0037 -04

Klik untuk Cistanche EXTRACT POWDER untuk buah pinggang

Kecederaan iskemia-reperfusi (I/R) adalah fenomena patofisiologi biasa kerosakan buah pinggang dalam proses kejutan hemoragik, trauma teruk,buah pinggangpemindahan, danbuah pinggangpembedahan tumor. Kajian telah menunjukkan bahawa apoptosis adalah bahagian penting kerosakan fungsi buah pinggang yang disebabkan oleh kecederaan I/R (1). Perencat protein apoptosis (XIAP) berkaitan X ialah salah satu perencat apoptosis endogen terkuat yang ditemui setakat ini (2). Terdapat beberapa kajian mengenai kesan anti-apoptosis XIAP dalam tisu buah pinggang selepas kecederaan I/R.Cistanchejumlah glikosida (CTG) ialah sebatian jumlah glikosida phenylethanoid yang diekstrak daripadaCistanche, yang mempunyai pelbagai fungsi biologi. Terdapat beberapa kajian mengenai perlindungan buah pinggang selepas kecederaan I/R. . Kajian ini mewujudkan model resusitasi kejutan hemoragik pada tikus dan menubuhkan model kecederaan I/R sistemik untuk meneroka kesan perlindungan jumlah glikosida hernia daging padabuah pinggangdaripada kecederaan I/R dan meneroka kemungkinan mekanismenya.

1Bahan dan kaedah

1.1 Haiwan dan kumpulan

Terdapat 30 ekor tikus jantan yang bersih dan sihat disediakan oleh Pusat Eksperimen Universiti Perubatan Tradisional Cina Shanghai, seberat (320 ± 30) g. Secara rawak dibahagikan kepada 3 kumpulan: kumpulan operasi palsu, kumpulan eksperimen (kumpulan resusitasi kejutan), kumpulan CTG, masing-masing dengan 10 ekor tikus.

1.2 Reagen dan instrumen utama

Jumlah glikosida beras pulut (nombor kelompok: 20081516) telah dibeli daripada Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd.; natrium pentobarbital, Hoechst 33258, dan propionil iodida dibeli dari Sigma, Amerika Syarikat; tetikus X chromosome-linked apoptosis inhibitor Kit Assay Protein (XIAP) dan Kit ELISA telah dibeli daripada Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd.; pembaca plat mikro telah dibeli daripada Syarikat Thermo, Amerika Syarikat; pengesan fisiologi pelbagai parameter telah dibeli daripada Syarikat Nihon Kohden, Jepun; flow cytometer BDFACSAria telah dibeli dari Becton, USA -Syarikat Dickinson; Trocar 24G telah dibeli daripada Syarikat Peranti Perubatan Shandong Jierui.

1.3 Kaedah eksperimen

1.3.1 Penyediaan tikus SD model haiwan dipuasakan 12 jam sebelum eksperimen dan dibius dengan suntikan intraperitoneal natrium pentobarbital (50 mg/kg).

Tikus diletakkan dalam kedudukan terlentang, hirisan 3 cm dibuat di bahagian bawah abdomen kiri, arteri femoral dipisahkan, trocar 24G dimasukkan, dan pengesan fisiologi berbilang parameter disambungkan. Purata tekanan darah tikus diukur sebagai (113 ± 15) mmHg, 20 ml picagari heparin Tekanan darah diturunkan kepada 40 mmHg (l mmHg=0. 133 kPa) dengan sambungan kimia peranti tiga hala. Kejutan dianggap telah bermula, dan tekanan darah dikekalkan selama 90 minit. Jumlah darah keluar adalah (13 ± 3) ml, dan kemudian darah autologous dalam picagari Infusi semula perlahan mengambil masa kira-kira 30 minit, dan tekanan darah kembali kepada lebih daripada 90 peratus daripada nilai asas, dan resusitasi dianggap berjaya (3) . Trocar ditarik keluar, arteri femoral diikat, dan hirisan dijahit. Selepas tikus terjaga, mereka dikembalikan ke sangkar untuk pemerhatian, dan mereka bebas makan dan minum. 24 jam selepas resusitasi, suntikan intraperitoneal natrium pentobarbital (50 mg/kg) digunakan untuk anestesia, laparotomi, 5 ml darah dikumpulkan dari vena cava inferior, tikus segera dikorbankan, dan buah pinggang kiri dan kanan dikeluarkan untuk guna.

1.3.2 Kaedah Ubat Kumpulan rawatan CTG diberi CTG 2 jam sebelum darah tikus dan disuntik ke dalam rongga perut pada dos 400 mg/kg. Kumpulan eksperimen disuntik secara intraperitoneal dengan 3 ml garam biasa 2 jam sebelum darah mengalir; kumpulan operasi palsu hanya menjalani anestesia, laparotomi dan pemisahan arteri femoral, penempatan trocar, dan jahitan hirisan, tetapi tiada pendarahan atau resusitasi. Selebihnya adalah sama dengan kumpulan eksperimen.

1. 4 penunjuk dan kaedah pengesanan

1.4.1 Penentuan kandungan BUN, Cr, dan cystatin C darah Cystatin C ialah penanda endogen perubahan dalam kadar penapisan glomerular. Apabila fungsi buah pinggang terjejas, kadar penapisan glomerular berkurangan, kepekatan cystatin C dalam darah boleh meningkat 10 kali ganda, dan ketepatan diagnostik cystatin C adalah jauh lebih baik daripada mabuk otot serum. Kandungan darah BUN, Cr, dan Cystatin C telah diserahkan ke makmal hospital kami untuk penentuan.

1.4.2 Penentuan kadar apoptosis sel Sitometri aliran digunakan untuk mengesan kadar apoptosis sel buah pinggang. Ambil buah pinggang dan potong dengan pisau, tambah sedikit PBS dan pindahkan ke dalam tabung uji. Tambahkan 0.3 peratus trypsin untuk dihadam dalam tab mandi air 37 P, eramkan selama 20 min, apabila kandungan dalam tabung uji menjadi keruh, tambah 2 kali PBS untuk menghentikan penghadaman, tapis dengan jaring nilon 3{29}}0 mesh, buang kekotoran dan emparan dalam emparan suhu rendah. Jejari emparan 8 cm, 12,000 r/min, emparan selama 5 minit, buang supernatan, laraskan kepekatan sel kepada 1 ~ 1.5 x 106/ml, ambil 0.4 ml ampaian sel di atas dan tambah 1.2 ml Hoechst 33258 (10 pil/ml), gelap 37 t: inkubasi dalam tab mandi air, tutup tabung uji, bilas dengan PBS selepas 5 minit, jejari emparan 8 cm, 12 000 r/min, emparan selama 5 minit , buang supernatan, Bilas lagi dengan cara yang sama. Tambah 0.4 ml PI, diwarnakan selama 5 minit, dan mengesan peratusan sel normal, nekrotik dan apoptosis dalam buah pinggang. Mengikut pertalian kedua-dua pewarna pelbagai jenis sel, diketahui bahawa hanya sel berwarna PI adalah sel mati, hanya sel berwarna Hoechst 33258 adalah sel apoptosis, dan kedua-duanya tidak berwarna sel hidup normal.

1.4.3 Enzyme-linked immunoassay (ELISA) untuk mengesan ekspresi XIAP dalam tisu buah pinggang tikus Ambil setiap kumpulan buah pinggang dan rawat tisu buah pinggang segar dengan tisu lisat. Empar dalam emparan suhu rendah pada 12 000 r/min selama 5 min. Ambil supernatan dan kendalikan mengikut arahan kit XIAP ELISA Kit. Shanghai Jiaotong University Fenghe Technology Co., Ltd. bertanggungjawab untuk ujian.

1.5 Pemprosesan statistik

Data percubaan setiap kumpulan diwakili oleh Yuan soil s, dan perisian SPSS 17. 0 digunakan untuk analisis statistik. P<0.05 indicates="" that="" the="" difference="" is="" statistically="">

Cistanche boleh meningkatkan fungsi seksual

2 keputusan

Nilai indeks fungsi buah pinggang Cr, BUN dan Cystatin C adalah signifikan secara statistik (F<0.01); the="" experimental="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" the="" sham="" operation="" group="" (p=""><0.01), indicating="" that="" the="" rat="" the="" kidney="" i/r="" model="" was="" successfully="" prepared;="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" values="" of="" cr,="" bun="" and="" cystatin="" c="" in="" the="" ctg="" group="" were="" significantly="" reduced=""><0.01). renal="" cell="" apoptosis="" rate:="" in="" the="" sham-operated="" group,="" only="" a="" few="" cells="" in="" the="" kidney="" tissue="" experienced="" apoptosis.="" apoptotic="" cells="" accounted="" for="" 0.42%="" ±="" 0.08%,="" and="" the="" experimental="" group="" had="" a="" significant="" increase="" in="" apoptosis,="" accounting="" for="" 18.="" 22%="" ±="" 5.="" 32%="" (p=""><0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" showed="" apoptosis="" the="" number="" decreased="" to="" 12.71%="" ±="" 3.81%="">< 0.01).="" the="" effect="" of="" ctg="" on="" the="" expression="" of="" xiap="" in="" i/r="" injured="" renal="" tissue:="" the="" sham="" operation="" group="" only="" had="" weak="" xiap="" expression,="" while="" the="" experimental="" group="" xiap="" expression="" increased="" significantly,="">< 0.01).="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap="" (f=""><0.05), see="" table="">

Jadual 1 Fungsi buah pinggang mengindeks nilai Cr, BUN dan Cystatin-C tikus dalam setiap kumpulan Tab. 1 Indeks fungsi buah pinggang dalam tiga kumpulan

Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, *P<0.01; compared="" with="" the="" experimental="" group,=""><0.05><>

Mekanisme kecederaan buah pinggang iskemia-reperfusi adalah sangat rumit. Ia adalah proses patologi yang berlaku dalam pelbagai cara di bawah tindakan pelbagai faktor, seperti kelebihan ion kalsium, kerosakan peroksidasi lipid, apoptosis sel dan nekrosis, antaranya apoptosis sel yang bergantung kepada caspase adalah salah satu bentuk utama sel epitelium tubular renal. kerosakan yang disebabkan oleh kecederaan buah pinggang I/R (4). Inhibitor keluarga protein apoptosis (IAP) adalah satu-satunya perencat caspase endogen yang terdapat dalam sel mamalia setakat ini, yang dapat mencegah berlakunya apoptosis sel secara berkesan. XIAP ialah ahli yang mempunyai kesan perencatan paling kuat pada caspase dalam keluarga IAP. Ia boleh menghalang apoptosis sel yang disebabkan oleh pelbagai rangsangan patologi dan memainkan kesan perlindungan pada organ yang rosak (5).

Pada masa ini, kebanyakan kaedah untuk mewujudkan model haiwan kecederaan I/R buah pinggang adalah dengan membuang satu buah pinggang dan mengapit bahagian lain pedikel buah pinggang atau arteri renal ⑹ untuk mensimulasikan keadaan pemindahan buah pinggang. Kajian ini menggunakan model kejutan hemoragik/resusitasi, yang lebih dekat dengan proses patofisiologi iskemia-reperfusi sistemik yang berlaku dalam kejutan traumatik klinikal. Dalam eksperimen ini, paras BUN darah, Cr, dan cystatin C tikus SD Peningkatan ketara, fungsi buah pinggang terjejas teruk, adalah model haiwan yang ideal untuk mengkaji kecederaan buah pinggang I/R.

CTG adalah ramuan perubatan penting pes gadis daging perubatan tradisional Cina. Pes terung, yang bersifat hangat, manis dan masin, kembali ke meridian buah pinggang dan usus besar dan pada asalnya terkandung dalam Materia Medica Shennong. "Ben Sutra": Utama lima buruh dan tujuh kecederaan, menyuburkan bahagian tengah, menyuburkan lima organ dalaman, menguatkan yin, menyuburkan intipati dan qi;Cistanchetelah digunakan di negara saya selama dua ribu tahun. Ia berada di kedudukan No. 1 dalam formula meningkatkan kekuatan pada masa lalu dan kedudukan No. 2 dalam formula berkhasiat selepas ginseng. Kajian telah menunjukkan bahawaCistanchebolehmeningkatkan fungsi seksual, mengawal selia neuroendokrin, danmeningkatkan fungsi imun. , Antioksidan, menggalakkan metabolisme bahan, melindungi miokardium iskemia dan fungsi lain. Sebagai bahan perubatan utama puree keluarga daging, CTG mempunyai banyak fungsi. Penyelidikan mengenai model reperfusi iskemia serebrum mendapati bahawa CTG boleh mengurangkan asid amino pengujaan dalam tisu otak selepas reperfusi iskemia dan melindungi tisu otak tikus SD (7). CTG mempunyaikesan antioksidanpada tisu tikus dan mempunyai kesan perlindungan tertentu pada hipoksia serebrum akut pada tikus dan kerosakan otot jantung pada tikus (9). CTG boleh meningkatkan dengan ketara tingkah laku neuroParkinsonmodel tikus dan menghalang penurunan bilangan neuron dopamin dalam substantia nigra (9). Dengan meningkatkan aktiviti enzim penghapus radikal bebas, menghalang peroksidasi lipid, menghalang pemendapan peptida B-amyloid dalam otak, dan menghalang apoptosis sel otak, CTG dengan ketara meningkatkan pembelajaranPenyakit Alzheimertikus disebabkan oleh B-amyloid peptide Keupayaan ingatan w. Kajian ini menunjukkan bahawa selepas penggunaan prarawatan CTG, kandungan BUN darah, Cr, dan cystatin C tikus menurun dengan ketara, dan kerosakan buah pinggang berkurangan. CTG meningkatkan XIAP protein yang menghalang apoptosis dalam tisu buah pinggang yang cedera I/R dan apoptosis sel yang disekat. Kejadian kematian mempunyai kesan perlindungan terhadap kerosakan pada buah pinggang.