Kajian Eksperimen Mekanisme Biect Anti-Sukan Keletihan Cistanche Deserticola

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

YANG Hong-Xin,YANG Yong²,YAN Xiao-hong'

Abstrak:Objektif Mengkaji kesan daripadacistanche deserticolapada laktat dehidrogenase (LDH) isoenzim, glikogen, dan nitrik oksida sintase 3 (NOS3) hati dalam berenang beban tikus dan meneroka mekanisme molekul yang berkaitankeletihan anti-sukan. Kaedah Tikus dibahagikan kepada kumpulan kawalan biasa, kumpulan kawalan sukan, dan kumpulan kawalancistanche deserticolakumpulan eksperimen. Setiap tetikus kumpulan kawalan biasa dan kumpulan kawalan sukan diberi salin 0.2 mL sehari. Setiap tetikus kumpulan eksperimen cistanche deserticola diberi air rebusancistanche deserticola0.2 mL(3 g/kg sehari. Pemberian adalah selama 15 hari. Beban berenang selama 90 minit telah dilakukan pada tikus kumpulan kawalan sukan dancistanche deserticolakumpulan eksperimen pada 1 jam selepas pentadbiran terakhir. Hati tikus dikeluarkan selepas 10 jam berenang. Satu bahagian hati telah ditetapkan dalam cecair formalin neutral untuk menyediakan bahagian parafin dan yang lain digunakan untuk pengukuran aktiviti LDH. Struktur hati diperhatikan dengan pewarnaan HE dan glikogen hati diukur dengan pewarnaan glikogen. NOS3 diperiksa dengan kaedah imunohistokimia SP. Rei Struktur hati kumpulan kawalan sukan mengalami kecederaan serius, isoenzim LDH4 dan LDH5 lebih tinggi, glikogen hati adalah lemah, NOS3 menurun berbanding kumpulan kawalan biasa (P<0.05). the="" liver="" structure="" of="" the="" cistanche="" deserticola="" experimental="" group="" was="" good,="" ldh5="" isoenzyme="" was="" low,="" the="" glycogen="" was="" rich="" and="" expression="" of="" nos3="" was="" upregulated="" compared="" with="" the="" sport="" control="" group=""><0.05). conclusion:="">Cistanche deserticolaboleh mengurangkan LDH5, melindungi hati daripada berenang beban tikus, dan mempercepatkan pengumpulan glikogen dengan meningkatkan ekspresi NOS3 untuk melindungi hati dan meningkatkan pemulihan kapasiti fizikal.

Kata kunci; cistanche deserticola;glikogen hati; nitrik oksida sintase 3; tikus

Cistanche, juga dikenali sebagai Dayun, adalah herba parasit dua tahun dari keluarga Lydanaceae. Ia mempunyai batang berisi kering dengan sisik. Ia dihasilkan terutamanya di tanah berpasir dan padang rumput separa berpasir di Mongolia Dalam, Gansu, Xinjiang, dan Qinghai.Cistanchedi Inner Mongolia mempunyai kualiti terbaik di kalangan kawasan pengeluaran.Cistanchebersifat manis, masin dan hangat. Ia memasuki buah pinggang dan meridian usus besar. Fungsi utamanya adalah untuk mencergaskan buah pinggang dan menguatkan yang, menyuburkan intipati dan darah, dan menyuburkan usus. Ia sering digunakan untuk merawat mati pucuk, kemandulan, kelemahan pada pinggang dan lutut, kelemahan otot dan tulang, usus kering, dan sembelit. . Tujuan kajian ini adalah untuk melihat kesan daripadaCistanchepada hati laktat dehidrogenase (LDH), glikogen hati dan nitric oxide synthase 3 (NOS3) dalam tikus renang yang menanggung berat melalui ujian renang yang menanggung beban pada tikus, dan untuk meneroka mekanisme perlindungannya pada hati, Menyediakan asas teori untuk penyelidikan, pembangunan, dan penggunaan yang mendalamCistanchedalam makanan kesihatan sukan.

1 Bahan eksperimen

1.1 Haiwan 30 tikus Kunming jantan, gred bersih, berat (20±0.5) g, disediakan oleh Pusat Haiwan Universiti Mongolia Dalam.

1.2 Ubat Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma) dihasilkan di Ejina Banner, Inner Mongolia, dan telah dikenal pasti. Mengikut bahan perubatan asal: air=100g: 400mL, rendam selama 30 minit, panaskan dan rebus, kemudian rebus dengan api suam selama 30 minit, tuangkan larutan ubat dan hias semula pada nisbah 100g: 200mL. Campurkan kedua-dua rebusan bersama-sama, tapis dengan dua lapisan kain kasa, dan kemudian pekatkannya kepada setara dengan 1g bahan ubatan asal bagi setiap mililiter rebusan asal, dan simpan di dalam peti sejuk pada suhu 4 darjah . 1.3 Reagen dan instrumen antibodi poliklonal NOS3 telah dibeli daripada Wuhan Boster Bioengineering Co., Ltd. Kit SP dibeli daripada Syarikat Fujian Maixin Reagent. Kit isoenzim dehidrogenase laktat telah dibeli daripada Inner Mongolia Tongri Reagent Co., Ltd (dimiliki sepenuhnya oleh Nissan). Nanjing JD{12}} penganalisis imej warna. Sistem analisis imej gel UVP Amerika.

Anti-keletihansuplemen cistanche

2. Kaedah eksperimen

2.1 Pengelompokan dan pentadbiran Tikus Kunming dibahagikan secara rawak kepada kumpulan kawalan biasa, kumpulan kawalan senaman, danCistanchekumpulan percubaan, setiap satu dengan 10 tikus. Kumpulan kawalan biasa dan kumpulan kawalan senaman diberi garam biasa sekali sehari, 0.2mL/masa; yangCistanchekumpulan eksperimen diberi rebusan cistanche (ambil 3mL air rebusan asal dan tambahkan air kepada 10 mL), sekali sehari, 0 ．2mL/kali, dos harian 3g/kg, pentadbiran berterusan selama 15 hari. Satu jam selepas pemberian terakhir, tikus dalam kumpulan kawalan senaman dan kumpulan eksperimen Cistanche telah dimuatkan dengan berat plumbum 1g pada ekor mereka, dan mereka diletakkan di dalam kolam dengan ketinggian 50cm, panjang 50cm, dan lebar 35cm untuk berenang. Suhu dikekalkan pada (30±0.5) darjah dan dikekalkan malar. Perhatikan tetikus, jika didapati tetikus berhenti berenang, gunakan batang kayu untuk merangsang pergerakannya selama 90 minit. Selepas bersenam, makan diet biasa, berehat selama 10 jam dan bunuh tikus bersama-sama tikus kumpulan kawalan biasa dengan kaedah de-leher, keluarkan hati, baiki bahagian dengan 10 peratus formaldehid neutral, dehidrasi, lutsinar, rendam dalam lilin , dan benamkan untuk membuat 4 Slice berterusan tebal, gunakan kaedah pewarnaan HF untuk memerhatikan struktur tisu hati setiap kumpulan: bahagian yang lain dicuci dengan garam biasa, dibekukan pada 20 darjah , dicairkan pada suhu bilik semasa pengukuran, dikeringkan dengan kertas penapis dan ditimbang, dan kemudian homogenat hati disediakan dengan garam biasa, 3500r Centrifuge selama 15 min pada / min, dan mengambil supernatan untuk mengukur aktiviti isoenzim dehidrogenase laktat melalui elektroforesis.

2.2 Penentuan aktiviti dehidrogenase laktat Menggunakan elektroforesis gel poliakrilamida, isoenzim LDH diasingkan mengikut perbezaan mobiliti elektroforesisnya. Kepekatan gel pengasingan sampel ialah 7 peratus, pH 8.9, dan kepekatan gel pekat ialah 4 peratus, pH 6.8.10. Sampel dicampur dengan 1 titik gliserin dan penunjuk biru bromofenol. Penampan elektrod ialah Tris-Glycine (pH 8.7), mula menstabilkan tekanan pada 1o0-150V, tambahkannya kepada 2o0-250V selepas 30 minit dan lakukan elektroforesis selama 4j. Selepas elektroforesis, ia diwarnakan dengan Kit Isoenzim Dehidrogenase Laktat, diwarnakan pada 37 darjah selama 30 minit, menunjukkan jalur isoenzim dehidrogenase laktat biru, kemudian dibilas dengan air, diperbaiki dengan asid asetik glasier, dan menggunakan sistem analisis imej gel UVP Lakukan analisis data .

2.3 Pewarnaan glikogen Bahagian bersiri setebal 4um dideparafin secara konvensional kepada air, dimasukkan ke dalam larutan asid berkala 1 peratus pada 37 darjah selama 15 minit, dibilas dalam air mengalir, dimasukkan ke dalam larutan Schiff selama 60 minit, dibilas dalam air mengalir, didehidrasi oleh kecerunan etanol, xilena adalah lutsinar, neutral Pasang slaid dengan gusi dan perhatikan hasil pewarnaan di bawah mikroskop.

2.4 Bahagian pewarnaan imunohistokimia secara rutin dinyahparafinkan kepada air, dan antigen dibaiki dengan gelombang mikro penimbal asid sitrik, dan peroksidase endogen dikeluarkan oleh cecair A selama 10 minit, dan kemudian disekat dengan cecair B (serum kambing cair) selama 10 minit. Tambah antibodi primer semalaman pada 4 darjah dalam kotak lembap, basuh dengan larutan pH 7.4 PBS selama 5 min×3 kali pada hari kedua, tambah larutan berlabel biotin C (larutan kerja antibodi sekunder) selama 10 minit, basuh dengan larutan PBS selama 5 min×3 kali, dan tambahkan larutan D berlabel peroksidase lobak dieram selama 10min, dibasuh dengan larutan PBS selama 5minX3 kali, dan akhirnya dibangunkan dalam larutan DAB selama 5min, dicuci dengan air paip, HE diwarnakan balas, didehidrasi dengan alkohol kecerunan, lutsinar dengan xilena, dan dipasang dengan getah neutral. Selepas memasang filem, amati di bawah mikroskop cahaya. Dalam setiap kumpulan eksperimen, garam penampan fosfat (PBS) digunakan sebagai kawalan negatif dan bukannya antibodi utama.

2.5 Analisis ekspresi nitrik oksida sintase 3 Diperhatikan secara awal dengan kaedah separa kuantitatif visual di bawah mikroskop cahaya, hasil positif NOS3 berwarna coklat gelap atau kuning keperangan, dan produk positif terletak di dalam sitoplasma hepatosit atau antara hepatosit. . Dalam sitoplasma sel endothelial, latar belakang biru adalah negatif. Kemudian, sistem analisis imej berwarna digunakan untuk mengukur nilai kelabu bahan tindak balas positif, dan parameter 4 medan pandangan diukur secara rawak untuk setiap filem di bawah 40-lensa objektif lipatan, dan nilai purata ialah diambil. Parameter ini digunakan untuk mencerminkan perubahan keamatan pewarna NOS3. 2.6 Kaedah statistik Semua data diwakili oleh. SPSS11.0 pakej perisian statistik digunakan untuk ujian-t dan P<0.05 is="" considered="" a="" significant="">

Anti-keletihan

3 Keputusan

3.1 Pemerhatian struktur tisu di bawah mikroskop cahaya Dalam kumpulan kawalan biasa, struktur lobulus hati adalah jelas, tali sel disusun dengan kemas, sinusoid hati adalah normal, sel hati tidak mempunyai lesi yang jelas, dan struktur nuklear adalah jelas. Dalam kumpulan kawalan senaman, struktur tisu normal hilang, lobulus tidak jelas, kord sel tidak teratur, kebanyakan sinusoid hati hilang, dan hepatosit adalah degenerasi vakuolar yang meluas, ditunjukkan oleh peningkatan jumlah sel, sitoplasma longgar, pewarnaan cahaya, malah jelas dan telus. Sesetengah sel hati menunjukkan perubahan seperti belon yang tipikal, dengan sejumlah kecil nekrosis fokus atau punctate. Sel-sel hati daripadaCistanchekumpulan eksperimen agak keruh, tetapi mereka disusun secara teratur, tiada vakuol yang jelas dan kelonggaran dalam sel, tali sel disusun dengan kemas, dan struktur nukleus adalah jelas.

3.2 Kesan ke atas aktiviti isoenzim dehidrogenase laktat hati dalam tikus di bawah latihan beban (lihat Jadual 1)

Jadual 1 Kesan daripadaCistanchepada isoenzim dehidrogenase laktat hati Xiaofeng (x±s) yang dimuatkan

Nota: Berbanding dengan kumpulan kawalan biasa, P<0, 05;="" compared="" with="" the="" exercise="" control="" group,=""><0.05 (the="" same="">

3.3 Pemerhatian mikroskop cahaya pewarnaan glikogen hati. Walaupun kandungan glikogen kumpulan kawalan normal tidak tinggi, terdapat glikogen teragih sama rata dalam setiap sel hati tanpa vakuol; kumpulan kawalan senaman mempunyai kurang glikogen, bertaburan di dalam hati Sel, vakuol muncul di beberapa kawasan; yangCistanchekumpulan eksperimen kaya dengan glikogen, tetapi berkumpul banyak pada satu sisi sel. 3.4 Pemerhatian ekspresi nitrik oksida sintase 3 dengan mikroskop cahaya dan analisis imej kuantitatif. Sitoplasma hepatosit kawalan normal menunjukkan ekspresi positif yang kuat dalam taburan meresap, terutamanya dalam sel binuklear, dan ekspresi positif dalam sel endothelial. . Ekspresi dalam sitoplasma hepatosit dan sel endothelial dalam kumpulan kawalan senaman telah dilemahkan. Kumpulan eksperimen cistanche menunjukkan ekspresi positif dalam sitoplasma hepatosit dan ekspresi positif yang kuat dalam sel endothelial. Keputusan analisis penganalisis imej berwarna ditunjukkan dalam Jadual 2.

Jadual 2 Perbandingan perbezaan ungkapan №s3 dalam hepatosit dan sel endothelial (x±s)

4 Bincangkan

Bahawa tubuh manusia memerlukan tenaga untuk bersenam, dan badan juga memerlukan tenaga dalam proses metabolisme. Metabolisme sel secara langsung menggunakan tenaga daripada penguraian adenosin trifosfat (ATP). Tenaga yang diperlukan untuk sintesis ATP terutamanya disediakan oleh katabolisme gula. Kajian telah menunjukkan bahawa selepas senaman yang berat, badan akan menghasilkan sejumlah besar H', radikal bebas, asid laktik, dan bahan lain yang menjejaskan metabolisme normal sel. Pada masa yang sama, kekurangan glukosa dalam sel membawa kepadakeletihan bersenamdan kerosakan sel. Hasil kajian ini menunjukkan bahawa kerosakan struktur tisu hati adalah sangat serius selepas sejumlah besar latihan, dan ia juga menjejaskan sintesis sel, seperti pengurangan sintesis glikogen hati. Selepas banyak latihan, tikus mengambilCistancheboleh memerhatikan pengurangan kerosakan hati, terutamanya disebabkan oleh pengurangan LDH5, dan kandungan glikogen hati adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan senaman, menunjukkan bahawa Cistanche boleh mencapai perlindungan hati dan mengekalkan fisiologi normal dengan mengurangkan fungsi LDH5. Daripada hasil pewarnaan glikogen.

Kandungan glikogen kumpulan eksperimen Cistanche adalah lebih tinggi daripada kumpulan kawalan biasa. Adakah Cistanche meningkatkan simpanan glikogen hati sebelum bersenam atau mempercepatkan sintesis glikogen di bawah tekanan selepas bersenam. Kerana tidak ada kawalan bukan senamanCistanchedalam eksperimen. Ia adalah mustahil untuk membuat kesimpulan, dan ia perlu disahkan dalam langkah seterusnya, tetapi pelindungkesan Cistanchepada hati dan promosi sintesis glikogen selepas banyak latihan adalah jelas. N{{0}} ialah bahan molekul kecil yang sangat dihargai oleh komuniti sukan sejak beberapa tahun kebelakangan ini. NOS ialah faktor pengehad kadar utama untuk pengeluaran N0. Telah disahkan bahawa NOS mempunyai tiga jenis isoenzim, dan NOSI dipanggil sintase nitrik oksida neuron.

Enzim, yang wujud dalam sel neuron, sel otot rangka, dsb., terlibat terutamanya dalam pembangunan saraf, rembesan saraf, pembelajaran, dan proses ingatan: NOS2 ialah sintase nitrik oksida yang boleh diinduksi, terutamanya ditemui dalam sel otot licin, makrofaj dan limfosit Sekali enzim ini diinduksi, ia boleh terus mensintesis NO sehingga substrat habis atau kematian sel. Ia kini dianggap terlibat dalam kerosakan sel; 'NOS3 ialah sintase nitrik oksida endothelial, yang diedarkan terutamanya dalam sel endothelial dan hepatosit, menghasilkan NO Terutamanya terlibat dalam fungsi fisiologi. Hasil kajian ini menunjukkan bahawa selepas banyak latihan, ekspresi NOS3 dalam sel endothelial dan hepatosit menjadi lemah, dan N0 yang terhasil berkurangan, sehingga saluran darah tidak dapat berkembang dengan berkesan, aliran darah berkurangan, dan bahan mentah untuk sintesis glikogen tidak boleh diangkut ke sel hati, jadi sintesis glikogen dikurangkan. ;Cistancheboleh mengawal selia ekspresi NOS3 dalam sel endothelial dan sel hati, mengembangkan saluran darah secara reaktif, meningkatkan aliran darah, mempercepatkan keupayaan untuk mengangkut bahan mentah sintesis glikogen, mempercepatkan sintesis glikogen, dan mengekalkan badan pada tahap metabolik fisiologi normal. Oleh itu, mengurangkan LDH5 untuk melindungi hati dan mengawal selia ekspresi NOS3 untuk menggalakkan glukoneogenesis asid laktik mungkin merupakan mekanisme penting untukCistancheuntuk melindungi hati dan menggalakkan pemulihan fizikal. Penyelidikan ini menyediakan asas eksperimen saintifik untuk pembangunan dan penggunaan selanjutnyaCistanchedalam bidang perubatan sukan dan juga meletakkan asas untuk pembangunan dan pemurnianKesan Cistanchebahan-bahan.