Penggunaan Sebatian Fenolik Daripada Tumbuhan ZaitunAir dalam Ayam Ayam Pedaging: Kesan Terhadap Mikrobiota Usus Dan Pada Jangka Hayat Isi Payudara Bahagian 3

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

2.7. Pengoksidaan Lipid

Pengoksidaan lipid dikaji melalui ukuran sekunder (TBAR) dan primer (D232 dan D270)pengoksidaansebatian (Jadual 7). Tiada perbezaan ketara dicatatkan di antara tiga kumpulan eksperimen, walaupun perlu diperhatikan bahawa terdapat sedikit peningkatan dalam nilai TBAR untuk ayam dalam kumpulan L2 berkenaan dengan kumpulan L1 dan L0, manakala D232 menunjukkan arah aliran yang bertentangan. Kedua-dua penunjuk analitik ini berkorelasi dengan ketara (TBAR lwn. D232 r=-0.5,p<0.001 and="" tbars="" vs.="" d270r=""><0.05). the="" cooking="" treatment="" caused="" decreases="" in="" the="" primary="" oxidation="" products=""><0.01), which="" were="" followed="" by="" increases="" in="" the="" secondary="" ones="" (p=""><0.001). no="" interactions="" between="" diet="" and="" cooking="" were="" observed.="" on="" the="" contrary,="" [31]and="" [45]="" observed="" a="" significant="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" breasts="" from="" chickens="" whose="" diets="" were="" supplemented="" with="" either="" olive="" cake="" or="" omww.="" similarly,="" [46]="" observed="" a="" reduction="" in="" tbars="" in="" the="" quadriceps="" femoris="" of="" chickens="" whose="" diets="" were="" enriched="" with="" omww="" permeate="" and="" the="">

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Oke et al. [16] menambahkan volum berbeza ekstrak daun zaitun(5, 10, dan 15 mL/liter) kepada air minuman yang dibekalkan kepada ayam pedaging terikan Abor acre, memerhatikan kesan ketara ke atas pengurangan paras darah malondialdehid(MDA). Ibrahim et al. [42], memerhatikan pengurangan ketara dalam kepekatan MDA dalam dada ayam yang diperoleh dengan menambah diet dengan peningkatan tahap buah zaitun kering yang ditapai atau ditapai secara enzimatik. Tidak seperti kajian lain, kesan perlindungan terhadap pengoksidaan lemak otot dalam tisu otot tidak diperhatikan pada masa ini. Terdapat banyak faktor yang menjana kebolehubahan dan perbezaan antara kajian. Selain daripada baka haiwan dan tempoh penggemukan, faktor lain seperti komposisi nutrien diet, pengambilan makanan, suhu persekitaran bersama-sama keadaan tekanan lain boleh membawa kepada keputusan yang sangat berbeza yang selalunya sukar untuk dibandingkan. Tidak kekal jenis matriks yang dietnya diperkaya dengan fenol (kek zaitun, buah delima zaitun, ekstrak daun zaitun, ekstrak air vegetatif, hanya untuk menamakan beberapa) kerana kepekatan sebatian aktif dan kehadiran bahan tambahan dengan tindakan sinergistik atau perlindungan yang terdapat dalam matriks yang sama, boleh mempengaruhi tindakan antioksidan dengan ketara dalam vivo dan dalam tisu daging selepas penyembelihan [47]. Manfaat kesihatan yang berpotensi daripada mengintegrasikan aditif antioksidan dalam daging segar dan produk daging tidak selalu terbukti [48]. Sebaliknya, banyak sebatian pengoksidaan lipid dan protein primer dan sekunder, sepertihidroperoksida, epoksida,4-hidroksinonenal, malonaldehiddiiktiraf sebagai karsinogen yang berpotensi atau boleh menjejaskan transduksi isyarat selular seperti halnya sebatian karbonil [49]. Dalam kes daging segar, kemungkinan untuk meningkatkan potensi antioksidan melalui catuan haiwan adalah prospek yang sangat sugestif, terutamanya dalam penggunaan bahan semula jadi dan bukannya sintetik. Malah, tidak seperti produk berasaskan daging di mana teknologi menawarkan kemungkinan intervensi yang berbeza untuk meningkatkan potensi antioksidan, dalam daging segar, satu-satunya alternatif untuk campur tangan melalui diet haiwan adalah rawatan yang ditujukan pada permukaan produk yang bagaimanapun mesti selaras dengan perundangan yang berkuat kuasa. Kuantiti sisa fenol yang diukur dalam daging payudara kajian ini tidak mungkin menyebabkan manfaat kesihatan secara langsung tetapi secara tidak langsung boleh melakukannya. Memasak daging, misalnya, menyebabkan kehilangan bersih pertahanan antioksidan tisu, oleh itu tisu daging diperkaya oleh sebatian yang masih aktif walaupun selepas rawatan haba, seperti halnyafenol, sangat menarik untuk digunakan memandangkan peningkatan dalam jangka hayat dan keselamatan produk itu sendiri. Sebab mengapa kesan dalam video atau bekas video tidak diperhatikan sebagai akibat daripada percubaan suapan dengan CPC, memerlukan penyiasatan percubaan lanjut, terutamanya mengenai interaksi antarapolifenol pemakanandan mikrobiota usus ayam di mana ia memanfaatkan sebahagian besar potensi kesan biokimia fenol [9,10].

3. Bahan dan Kaedah 3.1. Kemudahan Eksperimen

Perbicaraan telah dijalankan di kandang ayam Ladang Eksperimen Universiti Padova (Legnaro, Padova, Itali) selepas 6 bulan berhenti bekerja. Rumah ayam itu dilengkapi dengan sistem penyejukan, pengudaraan paksa, pemanasan berseri, dan sistem cahaya terkawal. Sebanyak 12 pen jaring wayar (2.5×2.4 m;6 m2) telah digunakan, setiap satu dilengkapi dengan lima peminum puting (jarak: 20cm) dan penyuap bulat (diameter: 30 cm) untuk pengagihan makanan secara manual. Setiap pen mempunyai lantai konkrit yang ditutup dengan sampah pencukur kayu (kedalaman 5 cm,2.5 kg/m).

Lampu disediakan 24 jam/hari untuk 2 hari pertama selepas ayam tiba di rumah ayam. Kemudian, bilangan jam cahaya dikurangkan secara beransur-ansur sehingga tempoh foto 18L:6D dicapai, yang kemudiannya dikekalkan dari umur 12 hari dan seterusnya.

Cistanche boleh meningkatkan imuniti

3.2. Haiwan, Kumpulan Eksperimen dan Rakaman In Vivo

Kajian itu telah diluluskan oleh Jawatankuasa Etika untuk Eksperimen Haiwan (Organismo per la Protezione del Benessere Animale; OPBA) Universiti Padova (projek 17/2016; No 154392 pada 10 Mei 2016). Semua haiwan dikendalikan mengikut prinsip Arahan 2010/63/EU[50] berkenaan perlindungan haiwan yang digunakan untuk tujuan eksperimen dan saintifik lain. Penyelidik yang terlibat dalam pengendalian haiwan adalah sama ada pakar haiwan (PhD atau ijazah Sarjana dalam Sains Haiwan) dan/atau pengamal veterinar.

Sebanyak 144 1-anak ayam berumur sehari(Ross 308) telah dihantar dengan trak komersial, mematuhi Peraturan Majlis (EC) no.1/2005 [51], ke kemudahan percubaan Universiti. Semua anak ayam telah diberi vaksin terhadap penyakit Marek, bronkitis berjangkit, dan penyakit Newcastle di tempat penetasan. Anak ayam ditimbang secara individu pada hari ketibaan mereka, dikenal pasti dengan tanda kaki, diperuntukkan secara rawak di antara 12 kandang (12 ekor setiap kandang dan 10 ekor/m²）,dan kemudian ditimbang sekali seminggu untuk mengukur berat hidup mereka sehingga penyembelihan komersial. Penggunaan suapan pen diukur setiap hari semasa percubaan. Tiga diet komersial telah diberikan dalam bentuk crumble semasa percubaan (Martini SpA Longiano, Forli-Cesena, Itali): diet P1 dari 0hingga 23 hari, diet P2 dari 24 hingga 37 hari, dan diet P3 dari 38 hari hingga penyembelihan pada 48 hari (lihat bahan tambahan untuk data analisis, Jadual S1). Pekatan fenolik mentah (CPC) diperolehi seperti yang diterangkan oleh [12], secara ringkas, OVW dirawat menggunakan enzim dengan aktiviti pektinase dan hemiselulosa dan kemudian tertakluk kepada penapisan mikro, ultraturasan, dan osmosis terbalik. CPC telah ditambah kepada diet seperti berikut:( i)L0 Kawalan diet (P3), (ii)L1 Kawalan diet ditambah CPC(220 mg/kg suapan sebagai teori jumlah fenol), (i) L2 Kawalan diet ditambah CPC(440 mg/kg suapan sebagai teori jumlah fenol). Kandungan sebenar sebatian fenolik individu CPC dan diet telah dilaporkan dalam Jadual S2. Setiap diet telah direplikasi dalam empat pen (homogen untuk berat hidup awal dan kebolehubahan). CPC dibekalkan dari umur 24 hari (d) sehingga penyembelihan komersial pada 48 hari (lihat Bahan Tambahan untuk komposisi fenolik CPC). Semua haiwan diberi makan secara ad libitum sepanjang percubaan, dan diet tambahan disediakan setiap minggu.

Untuk menentukan komposisi komuniti mikrob usus, swab kloaka dikumpul (4 haiwan/pen) pada umur 23,34, dan 44 hari untuk sejumlah 12 haiwan (4 pada setiap diet) yang diuji tiga kali (36 swab). sampel yang dikumpul secara keseluruhan).

3.3. Penyembelihan Komersial, dan Rakaman Kualiti Karkas dan Daging

Pada umur 48 hari, selepas pengeluaran makanan dan air (masing-masing selama 7 dan 2 jam), semua ayam telah disembelih di rumah penyembelihan komersial. Ayam ditimbang secara individu sebelum dikurung. Semua ayam dari kandang dimuatkan ke dalam sangkar pengangkutan (tinggi, 62.5cm ×160 cm ×25.0 cm; luas lantai, 1 m²）. Pemuatan dan pengangkutan dari kemudahan eksperimen ke rumah penyembelihan komersial dan sarang sebelum penyembelihan mengambil masa kira-kira 3 jam. Ayam disembelih mengikut amalan standard rumah sembelihan komersial. Bangkai telah dipulihkan selepas 2 jam penyejukan pada 2 darjah dan ditimbang secara individu untuk mengukur peratusan pembalut penyembelihan [52].

Dua puluh empat jam selepas penyembelihan, bangkai dibedah untuk mendapatkan otot pectoralis major yang dipisahkan daripada payudara [53].

Semasa perbicaraan, terdapat kerugian yang direkodkan sebanyak 17.4 peratus (25 ekor ayam) akibat kematian. Daripada 119 bangkai, 72 telah ditugaskan untuk analisis mikrobiologi semasa tempoh jangka hayat (Bahagian 2.4 menerangkan penubuhan komposisi mikrobiota payudara mengikut kaedah yang bergantung kepada kultur dan bebas), manakala baki 47 lagi dibekukan (-40 darjah ) dan seterusnya digunakan untuk penilaian komposisi proksimat dan kadar pengoksidaan lipid daging mentah dan masak (perenggan 3.5).

3.4.Penilaian jangka hayat

3.4.1.Penyediaan Dada Ayam Berbungkus

Otot utama P dibungkus secara individu dalam dulang polietilena berketumpatan rendah yang dibalut dalam filem PVC setebal 12 μm（Weigel,KOEX412,Kumpulanpo Fabbri,Vignola,Modena,Itali)dan disimpan pada 4±1 darjah .dalam kabinet yang disejukkan (Majolo" Plus 100 Pengawal Perasa, Majolo, Cadoneghe, Padova, Itali). Pendedahan kepada cahaya ditetapkan dari 8:00 hingga 20:00 menggunakan lampu pendarfluor 36 W [54]. Tetapan storan direka bentuk dengan tujuan untuk meniru keadaan penyejukan semasa jualan. Bungkusan telah diambil sampel secara rawak pada 24,72,120, 180, 216, dan 264 jam dari tarikh sembelihan

3.4.2. Analisis Deria

Penilaian deria payudara segar dilakukan mengikut [37]menggunakan sistem pemarkahan mata 3-demerit (1=tidak boleh diterima,2=boleh diterima, 3=kualiti yang baik). Indeks deria sintetik(SI) dikira sebagai [(2×skor bau tambah 2× skor warna ditambah 1× skor tekstur)/5], dengan skor 1.8 bertindak sebagai ambang untuk menentukan sampel rosak. Analisis deria dilakukan oleh lapan ahli panel terlatih.

3.4.3.Analisis Mikrobiologi Daging Payudara dalam Tempoh Jangka Hayat

Analisis mikrobiologi dilakukan mengikut prosedur yang diterangkan oleh [38]. Otot utama pectoralis (kira-kira 2 cm panjang × 1 cm dalam × 2 cm lebar) telah dipotong secara aseptik di sepanjang setiap payudara untuk mendapatkan sampel yang mewakili 25 setiap payudara. Sampel telah dicampur dalam beg perut dengan 225 mL air pepton terkumpul dan dianalisis selepas pencairan yang sesuai. Untuk pengekstrakan DNA, 1 mL setiap homogenat dikumpulkan dalam 2 mL tiub Eppendorf dan disentrifugasi pada 13, 500 × g selama 1 minit (Eppendorf centrifuge 5425, Hamburg, Jerman). Kemudian, supernatan dibuang dan pelet dibekukan pada -80 darjah . Beberapa sasaran mikrob telah disiasat untuk menerangkan dinamik populasi mikrob semasa tempoh jangka hayat seperti berikut: Jumlah kiraan berdaya maju (TVC) dan jumlah kiraan psychrotrophic (TPC) telah dinilai pada Plate Count Agar (Diagnostik Biokar, Beauvais, Perancis) , dan plat diinkubasi pada 30 darjah selama 72 jam atau pada 4 darjah selama 10 hari. Enterobacteriaceae telah disenaraikan dengan Violet Red Bile Glucose Agar (Diagnostik Biokar, Beauvais, Perancis) pada 37 darjah selama 24 jam. Bakteria asid laktik (LAB) telah dianalisis pada De Man, Rogosa, dan Sharpe Agar (Diagnostik Biokar, Beauvais, Perancis) dalam keadaan anaerobik pada 30 darjah selama 48 jam. Pseudomonas spp. kiraan telah dinilai pada Pseudomonas Agar Base ditambah dengan cetrimide, fucidine, dan cephaloridine pada 25 darjah selama 48 jam (Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, UK). Kiraan bakteria penghasil H2S (putative Shewanella spp.) telah dijalankan pada agar besi (Lyngby, Laboratorios Conda, Torrejon de Ardoz, Sepanyol) pada suhu 25 darjah selama 48 jam. Keputusan dilaporkan sebagai log10 CFU/g daging.

3.4.4.pH dan Kehilangan Titis

Meter pH (Portamess 910, Knick, Berlin, Jerman), dilengkapi dengan elektrod khusus (Mettler Toledo, Milano, Itali), digunakan untuk mengukur nilai pH dengan memasukkan dalam otot pectoralis major dalam tiga kali ganda pada bahagian ventralnya. Kehilangan titisan dinilai mengikut kaedah yang dikemukakan oleh [55] menggunakan kaedah beg. Kira-kira 2.5 cm hirisan yang dipotong dari permukaan dorsal payudara dimasukkan ke dalam beg polietilena dan digantung semalaman pada 2±1 darjah C. Kehilangan titisan( peratus ) dikira dengan persamaan berikut: [(berat awal - berat akhir)/berat awal ].

3.4.5. Kepekatan fenol dalam diet dan dalam otot payudara

Pengekstrakan fenol dijalankan pada 5g sampel diet cincang yang dicampur dengan 50 mL metanol/air (larutan 80/20(o/o) yang mengandungi 20mg/L butylated hydroxy-toluene (BHT), campuran telah dihomogenkan menggunakan penyebar rod (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Jerman) selama 1 minit pada 7000 rpm, disentrifugasi pada 9327 × g selama 10 minit dan supernatan pulih. Prosedur diulang dua kali, dan ekstrak yang dikumpul kemudiannya dipekatkan oleh penyejat berputar(Buchi Rotavapor, R-210, Switzerland)sehingga mencapai volum akhir 20 mL.Katrij An SPE Bond Elut Jr-C18,1 g(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA ), sebelum ini diaktifkan dengan 10 mL metanol dan 10 mL air, telah dimuatkan dengan 1 mL ekstrak akueus, elusi dilakukan dengan 50 mL metanol. Selepas penyingkiran pelarut di bawah vakum, ekstrak fenolik telah dilarutkan dalam 1 mL larutan terdiri daripada metanol/air(50:50 v/v) dan ditapis melalui penapis picagari polivinilidena fluorida (PVDF)(0.2 mm). analisis kualitatif dan kuantitatif sebatian fenolik ekstrak dijalankan mengikut [31] oleh

HPLC (Mod. 1100 Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), dilengkapi dengan lajur C18 (Spherisorb ODS-1(250 mm × 4.6 mm)5 um saiz zarah, dibekalkan oleh Waters SpA(Milan, Itali) . Sebatian fenolik telah dikesan menggunakan set DAD pada 280 nm. Kuantifikasi polifenol ditentukan dengan menggunakan lengkung penentukuran tunggal bagi setiap sebatian dan keputusannya dinyatakan sebagai mg kg-1. Hidroksitirosol (3,{{ 10}}DHPEA) diperoleh daripada Cabru SpA(Milan, Itali), tyrosol p-HPEA dibeli daripada Merck Life Science Srl (Milan, Itali), dan verbascoside diambil daripada Extrasynthese(Genay, Perancis). Bentuk dialdehid bagi de-carboxymethyl oleuropein aglycone (3,4-DHPEA-EDA) telah diekstrak daripada minyak zaitun dara mengikut prosedur yang dilaporkan daripada [56].

Sebanyak 10gram daging dicampur dengan 50 mL metanol dan air（80/20,o/ø）mengandungi asid formik {{0}}.2 peratus dan 20 mg/L BHT. Penyelesaian dihomogenkan menggunakan penyebar rod (IKA, T50 Ultra-Turrax, Werke, Staufen, Jerman) selama 1 minit pada 7000 rpm, disentrifugasi pada 4146 × g selama 10 minit dan supernatan pulih. Operasi diulang dua kali, dan dua aliquot ekstrak dikumpulkan dan metanol dikeluarkan oleh penyejat berputar (Buchi Rotavapor, R-210, Switzerland). Dua puluh mL ekstrak akueus telah dimuatkan ke kartrij SPE Bond Elut HF Mega BE-C18,5g (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA), sebelum ini diaktifkan dengan 20 mL metanol dan 20 mL air; elusi dilakukan dengan 50 mL metanol. Selepas penyingkiran pelarut di bawah vakum, ekstrak fenolik diperoleh semula dengan 0.5 ml larutan yang terdiri daripada metanol/air.（50∶50 o/ø）dan ditapis melalui polivinilidena fluorida（PVDF）penapis picagari (0.2 mm). Analisis HPLC bagi ekstrak fenolik telah dijalankan mengikut [56] dengan peralatan yang sama seperti yang dilaporkan di atas. Hydroxytyrosol telah dikesan dengan menggunakan pengesan pendarfluor (FLD) yang dikendalikan pada panjang gelombang pengujaan 280 nm dan pelepasan 313 nm. Kuantifikasi hydroxytyrosol dibuat menggunakan lengkung penentukuran dan hasilnya dinyatakan sebagai ug/kg.

3.5. Komposisi Terhampir, Kehilangan Memasak dan Analisis Asid Lemak

Komposisi proksimat, profil asid lemak dan kestabilan oksidatif telah dinilai pada kedua-dua sampel mentah (sebelah kanan P. major) dan masak (sebelah kiri P. maijor). Selepas pencairan, kehilangan masak dinilai mengikut[53] dengan pengubahsuaian berikut: Separuh kiri setiap payudara ditimbang, dibungkus dengan vakum dan dimasak dalam tab mandi air pada 8{35}} darjah selama 45 minit. Selepas itu, payudara disejukkan sehingga 4 darjah dan disimpan di dalam peti sejuk (4 darjah ) selama 72 jam sebelum dibongkar dan ditimbang semula untuk mengira kehilangan masak sebagai [(berat daging masak berat daging mentah)/berat daging mentah. ]×100). Otot, kedua-dua mentah dan dimasak, dikisar halus (dua kali 2500rpm×10 s, Retsch, Dusseldorf, Jerman) dan diserahkan kepada analisis kelembapan, protein kasar dan abu [57], manakala kandungan lemak mentah ditentukan menggunakan kaedah yang dibentangkan. oleh [58]. Secara ringkas, 200 mL campuran diklorometana/metanol 1:1 telah ditambah kepada 5g sampel, dihomogenkan pada 11,000/min selama 1 minit (Ultraturrax T25 Basic, Ika Werke. Staufen, Jerman) dan diinkubasi pada 60 C dalam ketuhar(sistem PID, M120-VF, instrumen MPN, Bernaggio, MB, Itali) selama 20 min. Selepas itu, 100 mL lagi diklorometana telah ditambah, dan selepas penghomogenan(11,000}/min selama 1 min) sampel telah ditapis (kertas penapis pantas) dan 100 mL KCl 1 M telah ditambah ke dalam resapan. Selepas sentrifugasi (AvantiJ-E, Beckman Coulter, Brea, CA, Amerika Syarikat) pada 1000×g selama 30 m pada 4 darjah, supernatan telah dinyahcas dan ekstrak organik ditapis melalui natrium sulfat kontang. Aliquot (kira-kira 10 g) digunakan untuk penentuan gravimetrik peratusan lemak, bakinya disuling (Rotavapor"R-210, Büchi, Essen, Jerman) dan lemak kontang digunakan untuk analisis lanjut. Asid lemak metil ester (FAMEs) telah disediakan dengan menimbang 0.015 g lemak kontang ke dalam tiub kaca dengan penutup skru [39], yang telah dilarutkan dengan 1 mL 3 M metanolik HCl (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Syarikat) dan diinkubasi selama 2 jam pada 60 darjah. Kemudian, 1 mL air ternyahion ditambah dan,selepas sebati,FAME telah dipulihkan dalam 1 mL n-heksana. FAMEs（1 μL）telah dianalisis oleh kromatografi gas (Shimadzu Italia Srl, model 2014, Milano, Itali)dilengkapi dengan pengesan pengionan nyalaan (ditetapkan pada 250 darjah ) dan penyuntik tanpa belah-belah (ditetapkan pada 280 darjah). Ruang haba, yang memegang lajur kapilari (Supelco SP-2560;100 m ×0.25 mm ×0.2 um), disimpan pada 60 darjah selama 8 minit. Suhu kemudiannya dinaikkan kepada 120 darjah selama 1 minit pada kadar 10 darjah / min, dan kemudian dari 120 hingga 240 darjah pada kadar 2.5 darjah C / min. Isoterma terakhir disimpan pada 240 darjah selama 20 minit. Asid lemak dikenal pasti menggunakan campuran standard luaran (37 Komponen FAME Mix, Supelco, Jerman). Analisis dibuat dalam salinan.

3.6. Pengoksidaan Lipid

Sebatian pengoksidaan utama ditentukan sebagai diena terkonjugasi melalui analisis spektrofotometri dalam medan ultraungu menggunakan versi diubah suai kaedah yang ditunjukkan dalam lampiran Majlis Reg.EU/2015/1833 [59]. Secara ringkas,0.01±0.001g fatwa kontang ditimbang ke dalam kelalang gradasi 10 mL dan dilarutkan oleh sikloheksana gred spektrofotometri sehingga tanda. Spektrofotometer UV/Vis (Mod. 7800 Jasco UV/VIS, Oklahoma City, OK, Amerika Syarikat) telah digunakan untuk menentukan nilai kepupusan spesifik pada 232 (diena terjuga) dan 270 nm (triena terkonjugasi) menggunakan pelarut yang sama seperti rujukan. Produk sekunder pengoksidaan lipid ditentukan mengikut kaedah yang dikemukakan oleh [60] dengan pengubahsuaian, seperti berikut: dalam tiub emparan, 8 mL larutan akueus 5 peratus (m/v) asid trikloroasetat dan 5 mL n-heksana telah ditambah kepada kira-kira 2g sampel homogen. Selepas homogenisasi dengan Ultraturrax selama 30-an pada kelajuan tinggi. sampel telah disentrifugasi selama 3 minit pada 3000 × g pada 4C (Eppendorf 5810R; Eppendorf, Hamburg, Jerman), dan supernatan dikeluarkan. Sampel ditapis melalui penapis kertas pantas dan 2.5 ml turasan ditambah kepada 2.5 mL larutan akueus asid tiobarbiturik 0.02 M dan diinkubasi selama 35 minit pada suhu 95 darjah C dalam tab mandi termostat (labor ED{{31} }; Seelbach, Baden-Württemberg, Jerman). Selepas penyejukan, penyerapan diambil menggunakan set spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm. Data dinyatakan sebagai miligram malondialdehid per kilogram daging. Pengukuran dilakukan secara pendua pada kedua-dua dada ayam yang dimasak dan mentah.

3.7. Pengekstrakan DNA dan Penyediaan Perpustakaan NGS

DNA telah diekstrak menggunakan Kit Pengasingan DNA DNeasy PowerSoil (Qiagen, Hilden, Jerman). Pelet homogenat daging dada telah dinyahbeku dengan 600 uL penimbal Lysis yang disediakan oleh kit. Swab kloaka dipotong dengan gunting steril, dimasukkan ke dalam tiub mikro yang mengandungi 600uL penimbal Lysis dan 6 uL 2-mercaptoethanol (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Amerika Syarikat). Tiub digaul rata dengan menggunakan pusaran selama 5 minit dan sapuan dikeluarkan. Untuk kedua-dua sampel kloaka dan pelet daging payudara sejumlah 100 mg manik steril 0.1 mm (BioSpec, Bartlesville, OK, USA) telah ditambah, dan kilang manik (TissueLyser, Qiagen, Hilden, Jerman) telah digunakan untuk melakukan gangguan dalam langkah goncangan berkelajuan tinggi (2×30 s pada 30 Hz). Sebanyak 40 uL proteinase K (Qiagen, Hilden, Jerman) telah ditambah dan diinkubasi pada 56 darjah selama 90 minit. Selepas langkah ini, arahan pengeluar Kit Pengasingan DNeasy PowerSoil9DNA telah diikuti. Kepekatan dan ketulenan DNA dianalisis menggunakan spektrofotometer(NanoDrop ND-1000, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA).

Pendekatan penguatan dua langkah digunakan untuk membina perpustakaan DNA 16S. Sampel telah dikuatkan dalam tindak balas 20-μL,setiap satu terdiri daripada 5 μL DNA yang dicairkan,{{0}}.4 uM setiap primer(Jadual1), 0.25 mM deoxynucleotide(dNTP),1× Phusion HF buffer dan 1 U Phusion High-Fidelity DNA polymerase (New England BioLabs, Inc., Ipswich , MA, Amerika Syarikat). PCR telah dijalankan dalam 2720 Thermal Cycler(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) dengan 25 kitaran 95 darjah selama 30 s,60 darjah atau 49 darjah C selama 30 s,72 darjah C selama 45s.dan lanjutan akhir sebanyak 7 minit pada 72 darjah. Tiga replika PCR dilakukan setiap sampel.

Produk telah disucikan menggunakan Kit Pemurnian SPRIselect(Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, USA) dan, selepas penulenan manik, jalur sasaran telah disahkan menggunakan 1.8 peratus gel agarose. Kod bar telah diperkenalkan oleh analisis PCR kedua dengan primer galas kod bar khusus platform. Setiap 50-uL tindak balas PCR mengandungi produk PCR, 0.2 μMof setiap primer（Jadual 1）,0.3 mMdNTP,1×Phusion HFbuffer,dan1UPhusion polimerase DNA kesetiaan tinggi. Sepuluh kitaran profil PCR yang diterangkan di atas telah dilakukan.

Produk PCR telah disucikan menggunakan kit penulenan SPRIselect (Beckman Coulter Life Sciences, Indianapolis, IN, USA). Selepas penulenan terakhir, setiap sampel dikira menggunakan Qubit 2.0 Fluorometer (Invitrogen, Life Technologies, Monza, Itali). Kualiti perpustakaan amplicon telah diuji menggunakan Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA). Perpustakaan disusun menggunakan platform Illumina MiSeq dengan larian kitaran 300-akhir berpasangan (Macrogen Inc., Seoul, Korea).

4. Kesimpulan

Pengayaan diet ayam dengan fenol yang diperolehi melalui penapisan dan kepekatan air tumbuh-tumbuhan kilang minyak selama 24 hari tidak dikaitkan dengan perbezaan dalam pertumbuhan haiwan, kadar penukaran makanan, atau hasil karkas. Kajian mikrobiota usus menunjukkan kesan ketara masa penyusuan tetapi bukan diet per se ke atas seli kumpulan mikrob. Sebaliknya, komposisi mikrobiota daging semasa tempoh jangka hayat menunjukkan pertumbuhan Pseudomonas yang lebih besar dalam sampel ayam yang menggunakan makanan yang diperkaya dengan fenol. Akhirnya, tiada perbezaan diperhatikan di kalangan diet berkenaan dengan penanda analisis (TBARs dan conjugate dienes) proses pengoksidaan lipid. Sebaliknya, hydroxytyrosol telah dikenal pasti dalam tisu otot sampel daripada ayam yang menggunakan makanan dengan fenol tambahan, menunjukkan penyerapan usus yang bergantung kepada dos. Oleh kerana proses oksidatif terutamanya berlaku dalam struktur membran sel otot, kajian lanjut diperlukan untuk lebih memahami taburan HT dalam petak selular dan ekstraselular.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2021, 26, 4307. https://doi.org/10.3390/molecules26144307 https://www.mdpi.com/journal/molecules