Elastin Mewujudkan Protein Anjal Tisu Penghubung Epidermis Dengan Kolagen

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

Abstrak:Glikosida xanthone baharu,135,6-tetrahydroxyxanthone-C-4-D-glucopyranoside telah diasingkan daripada ekstrak metanol daun Mangifera Indica (Anacardiaceae) yang tumbuh di Mesir. Struktur itu dijelaskan oleh data spektroskopi 1D dan 2D-NMR. Sifat fizikokimia sebatian seperti lipofilisiti, keterlarutan, dan pertimbangan formulasi telah diramalkan melalui teknik in silico ADMET menggunakan pelayan SwissADME. Teknik ini menyediakan lima peraturan Lipinski, seperti penyerapan GIT, pengedaran, metabolisme, dan resapan kulit. Aktiviti perencatan in vitro terhadap enzim pengantara penuaan seperti kolagenase, elastase, hyaluronidase, dan tyrosinase telah dinilai. Kompaun tersebut mempamerkan kesan anti-kolagenase, anti-elastase, anti-hialuronidase dan anti-tirosinase yang luar biasa dengan nilai IC50 masing-masing sebanyak 1.06,419.10,1.65 dan 0.48 ug/mL, berbanding kawalan positif. Kompaun tersebut menunjukkan ramalan kelarutan berair yang menjanjikan dan penembusan kulit yang munasabah menunjukkan kesesuaian kompaun untuk formulasi topikal sebagai agen anti-penuaan untuk persediaan kosmetik.

Kata kunci:xanthone; Mangifera indica; penuaan; ceollagenase; elastase; tyrosinase; hyaluronidase; dalam silico ADMET

1. Pengenalan

Proses penuaan adalah proses biokimia kompleks yang dikaitkan dengan tekanan oksidatif yang didorong oleh oksigen endogen dan radikal bebas nitrogen yang dihasilkan semasa jangka hayat, yang mungkin menyumbang kepada perkembangan manifestasi berkaitan usia [1]. Patologi penuaan kulit seperti kedutan, hiperpigmentasi, bintik-bintik penuaan, kedutan, melasma, jeragat, lentigo, ephelides, nevus, keperangan, dan melanoma diteruskan dengan pengaktifan spesies oksigen reaktif (ROS) [2]. Radikal bebas atau ROS berpotensi mendorong perubahan dalam komposisi sel kulit struktur dan merosakkan membran sel dengan merangsang pengoksidaan lipid dan protein, yang membawa kepada kerosakan DNA dan kematian sel [3,4]. Selain itu, ROS memainkan peranan penting dalam proses penuaan kulit dengan merosakkan protein kulit utama seperti kolagen dan elastin dengan mengaktifkan enzim kolagenase dan elastase. Selain itu, radikal bebas menyebabkan degradasi asid hyaluronik melalui pengaktifan hyaluronidases, yang membawa kepada penghidratan kulit yang tidak betul [5,6]. Jangkaan proses dinamik ini dianggap sebagai isu utama untuk kawasan dermo-kosmetik dan buruh penyelidikan yang besar sedang dibelanjakan untuk menemui formula perlindungan baharu[7]. Antioksidan adalah enzim pertahanan semula jadi yang terdapat dalam kulit dan menangkis radikal bebas yang berlebihan yang dihasilkan dalam badan. Walau bagaimanapun, keseimbangan oksidatif mungkin terganggu oleh beberapa faktor termasuk pemakanan dan pencemaran udara yang membawa kepada tekanan oksidatif. Dalam tekanan oksidatif ini, beban radikal bebas dalam badan adalah jauh lebih tinggi daripada antioksidan semulajadi. Oleh itu, adalah sangat penting untuk menggunakan antioksidan luaran daripada sumber seperti diet, kosmetik, atau farmaseutikal untuk meneutralkan radikal bebas dan melawan proses penuaan kulit [5,8]. Kajian moden telah mendedahkan bahawa beberapa metabolit sekunder semula jadi, terutamanya flavonoid dan polifenol menyumbang dengan ketara kepada jumlah aktiviti antioksidan banyak tumbuhan [9]. Ini telah membawa kepada minat dalam penyiasatan aktiviti antioksidan banyak tumbuhan [10]. Buah-buahan telah dilaporkan kerana kekayaannya dalam fenolik dan flavonoid ini serta vitamin [11].

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Elastin membentuk protein elastik tisu penghubung epidermis dengan kolagen dan mewakili peranan penting dalam pencegahan kedutan dan ketegasan kulit[12]. Semasa penuaan sel, metalloproteinase matriks seperti kolagenase, elastase, dan hyaluronidase dikawal selia [13]. Penindasan enzim ini adalah salah satu strategi terapeutik yang paling berkesan untuk menguruskan kemerosotan keadaan kulit semasa penuaan [14]. Sebatian fenolik yang berasal dari tumbuhan telah digambarkan sebagai mediator pemutihan yang kuat kerana sifat perencatan tyrosinase mereka [15] dan beberapa (daripada mereka boleh memainkan peranan dalam pembentukan semula matriks melalui kesan perencatan elastase [16].

Mangifera indica L. adalah salah satu tumbuhan yang boleh dimakan terpenting yang tergolong dalam keluarga Anacardiaceae yang tersebar di banyak negara, khususnya kawasan tropika [17]. Buah mangga telah mempamerkan peranan penting dalam bidang pertanian, makanan, farmaseutikal, dan nutraseutikal selama lebih 4000 tahun [18]. Selain itu, buah mangga berada di kedudukan ke-2 di kalangan tanaman industri, selepas balana, dari segi pengeluaran dan liputan [19]. Bahagian Mangifera indica yang berbeza mewakili sumber yang kaya dengan fitokonstituen yang berbeza termasuk flavonoid, xanthonoids, asid fenolik, dan triterpenoid dengan nilai berpotensi sebagai molekul berfungsi [18]. Di samping itu, buah-buahan membekalkan tubuh manusia dengan komponen penting seperti karbohidrat, protein, lemak, mineral, vitamin, asid amino penting, karotenoid, serat makanan, dan fenolik [20]. Secara tradisinya, budaya yang berbeza melaporkan bahawa infusi daun telah digunakan untuk beberapa penyakit seperti cirit-birit, disentri berdarah, anemia, asma, bronkitis, hipertensi, insomnia, reumatik, senak, hepatitis, tetanus, keguguran, dan pendarahan [21]. Selanjutnya, asap daun yang terbakar telah disedut untuk cegukan dan sakit tekak [18]. Kulit kayu digunakan sebagai diuretik dan dalam pembalut antireumatik. Bijinya terkenal untuk rawatan selsema, asma, cirit-birit, dan buasir pendarahan. Aktiviti antioksidan, jumlah fenolik (TPC) tinggi, jumlah kandungan flavonoid (TFC),2,2-difenil-1-aktiviti penghapusan picrylhydrazyl (DPPH), dan kapasiti perencatan linoleik bahagian tumbuhan Mangifera indica telah dilaporkan [ 22].

Cistanche boleh anti-penuaan

Kajian ini direka bentuk untuk menyiasat sifat perencatan in vitro bagi sebatian xanthone baharu yang diperoleh daripada 70 peratus ekstrak metanol daun Mangifera indica L. terhadap kolagenase, elastase, tyrosinase dan hyaluronidase. Selanjutnya, sifat farmakokinetik seperti penyerapan, pengedaran, metabolisme dan ketoksikan (dalam ramalan ADMET silico) telah dijalankan menggunakan SwissADME dan peraturan lima Lipinski untuk menilai keterlarutan ubat, kebolehtelapan dan keperluan formulasi.

2.Keputusan dan Perbincangan

2.1. Penjelasan Struktur Sebatian Terpencil

Kompaun itu diperolehi sebagai kristal kuning (18.29mg). Analisis kromatografi mendedahkan bintik kuning pucat-oren pada TLC di bawah cahaya UV panjang (365 nm) dalam sistem pelarut DCM:MeOH (7:3) dan BAW. Apabila bintik itu dirawat dengan 1 peratus larutan ferik klorida metanol, ia bertukar menjadi hijau gelap dan memberikan warna kuning dengan penyemburan larutan ammonia. Data spektrum lH-NMR, APT, dan HMBC bagi kompaun disusun dalam Jadual 1. Analisis spektrum lH-NMR (DMSO-dg, suhu bilik) (Rajah Sl dan S2) mendedahkan kehadiran dua isyarat berganda aromatik downfield pada oH 7.57 dan 6.79 dengan pemalar gandingan 8.24 Hz menunjukkan kehadiran dua proton gandingan orto. Selain itu, kawasan aromatik spektrum H-NMR menunjukkan kehadiran isyarat singlet pada Su 5.96, menunjukkan kehadiran proton tunggal dalam cincin aromatik. Proton anomerik unit C-glukosil telah dikesan pada Su 4.60 ppm dengan nilai pemalar gandingan 7 Hz ditetapkan untuk -anomer. Corak proton aromatik dalam spektrum H-NMR bagi sebatian terpencil ini menyerupai struktur xanthone. Tambahan pula, kehadiran proton -anomerik pada ou 4.60 dengan anjakan kimia glukosa pada 3.21 hingga 4.60 lH-NMR (rantau gula) menunjukkan bahawa terdapat hubungan C-glikosidik antara gula dan xanton. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah S3, spektrum APT bagi kompaun mendedahkan kehadiran sembilan belas isyarat karbon, yang mewakili xanthone dan struktur C-glukosida.ulasan cistanche tubulosaPercubaan APT mengenal pasti tiga kumpulan CH (C-8,131.95;C-7,115.10;C-2, 95.35 ppm) dalam bahagian xanthone dan anomerik C-1' daripada C-glukosa pada SH75.13 ppm. Kami menjalankan eksperimen NMR dua dimensi (HMBC; Rajah S4) untuk mengesahkan kaitan glikosidik C-glukosa pada C{16}}xanthone. Isyarat korelasi julat log 2,3JCH yang banyak menyokong tulang belakang xanthone dengan puncak silang yang diperhatikan dari H-1'(6) 4.60) hingga C-4(6c 104.13 ppm) dan C-3 (6c 158.95).bioflavonoid sitrusUntuk bahagian xanthone, korelasi jarak jauh 2,3JCH turut dikesan daripada H-2(8) hingga C-4(6c 104.13 ppm), C-3 (8c 158.95), dan C-4b(6c 107.45).Selain itu, terdapat 2-37-kaitan jarak jauh yang dikesan daripada H-8(8)7.57)kepada kumpulan karbonil C-9( 6c 195.14),C-8a(6c 131.22),dan C-6 （6c161.87）. Untuk gelang yang sama, aJcH memberi isyarat daripada H-7（6μ 6.79） ke C{ {39}}a（6c 131.22） telah diperhatikan. Korelasi ini digambarkan dalam struktur sebatian dalam Rajah 1. HSQC sebatian menunjukkan korelasi 1JcH antara setiap proton dan karbon yang terletak seperti ditunjukkan dalam Rajah S5. Percubaan H,H COZY (Rajah S6) mendedahkan korelasi rentas puncak yang kuat antara H-7 （δu 6.79）dan H-8（8H7.57）. Selanjutnya, sebatian itu mendedahkan puncak ion pseudomolekul [MH] - pada m/z 421, menunjukkan formula molekul CgHngOrin dalam mod negatif analisis ESI-MS (Rajah S7). Data daripada 1H-NMR,APT, IH, H COSY, HMBC dan HSQC membawa kami membuat postulat bahawa sebatian itu boleh menjadi1,3,5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside. Ini disahkan dengan perbandingan dengan data NMR yang dilaporkan tentang isomangiferin dalam kesusasteraan [23,24].

2.2.Dalam Ramalan Farmakokinetik Siliko Sebatian Terpencil

Pelayan dalam talian SwissADME digunakan untuk menilai keupayaan dadah bagi kompaun terpencil dengan menganggarkan peraturan lima Lipinski (RO5) untuk keserupaan dadah[25]. Lipinski melaporkan bahawa 90 peratus ubat aktif secara lisan yang mencapai status klinikal fasa II mempunyai MWT Kurang daripada atau sama dengan 500,logp Kurang daripada atau sama dengan 5,penderma ikatan-H Kurang daripada atau sama dengan 5, dan penerima ikatan-H Kurang daripada atau sama dengan 10[26].SwissADME meramalkan enam parameter fizikokimia tambahan yang dikaitkan dengan keserupaan dadah seperti lipofilisiti [27], saiz, kekutuban [28], keterlarutan [29,30], fleksibiliti dan ketepuan [31,32] seperti yang digambarkan dalam Rajah 2 dan Jadual 2.cistanche UKPlot SWISSADME persamaan dadah bagi sebatian terpencil menunjukkan bahawa kebanyakan sifat fizikokimia sebatian berada dalam julat yang diingini [33] kecuali bilangan penerima ikatan-H, penderma ikatan-H, dan kekutuban sebatian sejak nilai PSA ialah 201.28 A2 (julat yang diingini (antara 20 dan 130 A2)[28]. Kekutuban yang tinggi ini mungkin dikaitkan dengan kehadiran gugusan gula. Kompaun terpencil menunjukkan log keterlarutan akueus topologi yang diramalkan S(Ali)[29]. ] dan Log S (ESOL)[30]. Ini akan memudahkan perumusan masa depan sebatian ini. Farmakokinetik yang diramalkan menunjukkan bahawa kompaun tersebut mempunyai ramalan penyerapan GIT yang rendah tanpa resapan kepada BBB seperti model telur rebus Dania [34] yang diguna pakai oleh pelayan dalam talian SwissADME[33].cistanche wirkungTambahan pula, sebatian itu tidak menunjukkan kesan perencat pada lima isoform sitokrom P450(1A2,2C19,2C9,2D6, dan 3A4) [35], menunjukkan kemungkinan rendah interaksi ubat-ubat. Penyerapan kulit yang diramalkan dikira oleh model regresi linear berganda yang mengaitkan saiz molekul dan lipofilisiti dengan kebolehtelapan kulit [36]. Lebih negatif log Kp (dengan Kp dalam cm/s), semakin sedikit kulit kekal adalah molekul [33,36].ekstrak cistanche tubulosaLog resapan kulit yang diramalkan Kp dalam cm/s ialah -9.14 sm/s.

2.3.Penilaian Sifat Anti-Penuaan Kulit

2.3.1.Penentuan Aktiviti Anti-Collagenase dan Anti-Elastase

Kolagen dan elastin adalah protein struktur penting epidermis yang mengekalkan keanjalan, nada kapilari, dan kekuatan kulit bersama-sama dengan asid hyaluronik [39]. Semasa proses penuaan, tekanan oksidatif dan pendedahan yang berlebihan kepada cahaya UV membawa kepada pengaktifan enzim penghidrolisis seperti elastase, kolagenase dan hyaluronidase, dengan itu kekuatan dan kelenturan kulit hilang serta kedutan muncul[40] . Perencatan aktiviti kolagenase dan elastase adalah salah satu strategi yang berkesan untuk melindungi kulit daripada manifestasi penuaan kulit [41]. Seperti yang dijelaskan dalam Rajah 3A, kompaun menunjukkan sifat anti-kolagenase sederhana dengan nilai ICso 419.10 ug/mL, berbanding phenanthroline （IC50=182.80ug/mL） sebagai standard. Mengenai kesan perencatan elastase (Rajah 3B), ia menunjukkan kesan yang luar biasa dengan nilai ICso 1.06 ug/mL, manakala kawalan positif, N-methoxysuccinyl-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone, memberikan nilai ICso 0.63 ug /mL.Selaras dengan keputusan ini, kajian terdahulu melaporkan bahawa ekstrak daun metanol mangga ialah 10-perencat elastase kuat kali ganda daripada tokoferol piawai yang dikaitkan dengan sifat perencatan bukan kompetitif mangiferin[42]. Selanjutnya, laporan terdahulu membuktikan aktiviti anti-elastase sebatian polifenol disebabkan oleh kehadiran kumpulan hidrofilik seperti hidroksil atau karboksil yang boleh mempengaruhi secara positif perencatan kompetitif enzim [43].

2.3.2.Penentuan Aktiviti Anti-Hyaluronidase dan Antityrosinase

Asid hyaluronik ialah glikosaminoglikan yang lazim pada kulit yang mengekalkan kandungan lembapannya[44]. Ia dihidrolisiskan secara enzimatik oleh hyaluronidase yang mengakibatkan pecahan integriti struktur kulit dan gangguan kebolehtelapan tisu [45]. Penekanan hyaluronidase mengekalkan integriti kulit, melambatkan perkembangan penuaan kulit, dan mengekalkan penghidratan kulit [13]. Kajian terdahulu memaklumkan bahawa perencat hyaluronidase semulajadi boleh berfungsi dengan baik sebagai agen anti-penuaan untuk pembangunan produk berkaitan kesihatan kulit[46]. Seperti yang digambarkan dalam Rajah 4A, sebatian terpencil boleh melemahkan aktiviti hyaluronidase dengan nilai ICso sebanyak 1.65 ug/mL, berbanding 6-asid O-palmitoyl L-askorbik sebagai kawalan positif （2.55 ug/mL）.

Di antara manifestasi penuaan kulit klinikal, hiperpigmentasi kulit boleh dipercepatkan oleh enzim tyrosinase dengan kehadiran spesies oksigen reaktif (ROS)[46]. Tyrosinase, glikoprotein yang mengandungi kuprum,, memainkan fungsi penting dalam sintesis melanin melalui hidroksilasi L-tirosin kepada 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA), diikuti dengan pengoksidaan DOPA kepada DOPAquinone [47]. Oleh itu, penindasan aktiviti tyrosinase berpotensi mengurangkan hiperpigmentasi kulit [48]. Daripada pandangan ini, sebatian berpotensi menghalang tyrosinase dengan nilai ICso 0.48 ug/mL, berbanding asid kojik sebagai kawalan positif (0.82 ug/mL) seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4B. Kajian terdahulu mengenai ekstrak biji Mangifera indica menunjukkan hasil anti-tyrosinase dan anti-hyaluronidase yang cemerlang dikaitkan dengan kandungan polifenol [47]. Pada peringkat molekul, kedua-dua tirosin dan DOPA mengandungi kumpulan hidroksil yang menyatakan sebagai penderma proton penting untuk pengaktifan tyrosinase [49]. Begitu juga, sebatian itu memegang empat bahagian hidroksil dalam rangkanya yang boleh bertindak sebagai perencat kompetitif dengan bertindak balas sebagai substrat kepada tirosinase.

3.Bahan dan Kaedah

3.1.Bahan Tumbuhan

Daun segar Mangifera indica L.daun diperoleh pada peringkat berbuah dari taman persendirian di kawasan Abo-Zabal (N 30 darjah 1743.5336"E 3128.254), kerajaan Qualiobya, Mesir, pada 20 Julai 2021. Mereka telah disahkan oleh Puan Treize Labib, pakar taksonomi di El-Orman Botanical Garden, Giza, Mesir. Spesimen baucar dengan kod PHG-P-MI-362 telah diletakkan di galeri Jabatan Farmakognosi, Fakulti Farmasi, Universiti Ain Shams.

3.2. Pengekstrakan dan Pengasingan Kromatografi

Daun kering Mangifera indica L. (1.56 kg) telah diresap dalam 7{24}} peratus metanol (27L) selama 5 hari, kemudian ditapis. Turasan disejat sepenuhnya dalam vakuo pada 47 darjah sehingga kering untuk menghasilkan sisa kering (90.36 g; 5.79 peratus b/b); hasil pengekstrakan dikira sebagai persamaan berikut: [jumlah berat ekstrak kering/jumlah berat tumbuhan segar] × 100. Kemudian, ekstrak yang diperoleh telah digunakan pada pecahan Diaion HP{12}}. Elusi kecerunan (air/metanol) telah digunakan. Lima pecahan utama diperolehi: 100 peratus air, 25 peratus metanol, 50 peratus metanol, 75 peratus metanol, dan 100 peratus metanol. Pecahan 50 peratus larut metanol (26.38 g) telah didedahkan kepada poliamida dan dicairkan pada mulanya dengan 100 peratus air, kemudian kecerunan dicairkan dengan air/metanol (dari 100:0 hingga 0:100,w/o) untuk mendapatkan enam subfraksi:100 peratus air, 20 peratus ,40 peratus ,60 peratus ,80 peratus dan 100 peratus metanol. Subfraksi 40 peratus larut metanol (2.36 g) telah digunakan pada Sephadex LH-20 menggunakan MeOH (elusi isokratik)Pecahan yang serupa telah digabungkan dan disejat untuk mendapatkan empat subfraksi utama(A1-A4), Subfraksi A3(0.86} g) telah digunakan pada plat kromatografi lapisan nipis(TLC) sediaan menggunakan asid butanolacetic:air (BAW;4:1:5) sebagai pembangun fasa mudah alih untuk mengasingkan sebatian sebagai cahaya- serbuk amorf kuning.

3.3.Spektrometer Resonans Magnet Nuklear(NMR).

Spektrometer Bruker Ascend 400/R (Burker Avance Ⅲ, Fallanden, Switzerland) telah digunakan di Pusat Penemuan, Penyelidikan dan Pembangunan Dadah, Fakulti Farmasi, Universiti Ain Shams. 3.4.Spektrometri Jisim

Spektrometer jisim LCQ-DECA Finnigan (San Jose, CA, Amerika Syarikat) yang disambungkan kepada pengesan PDA digunakan untuk analisis spektrometri jisim. Sampel telah dibubarkan dalam HSO:MeOH sebagai campuran dan disuntik terus ke dalam sistem HPLC/ESI-MS. Kedua-dua mod ion pengionan ESI negatif dan positif telah digunakan di bawah keadaan berikut: gas pengeringan dan nebulizing, N2; suhu kapilari, 250 darjah; voltan semburan, 4.48 kV; voltan kapilari, 39.6 V; voltan kanta tiub,10.00 V; dan mod imbasan penuh dalam julat jisim m/z 100-2000. Analisis ESI-MS untuk sebatian terpencil telah dijalankan pada spektrometer jisim Waters Xevo TQD dengan mod UPLC Acquity (Milford, CT, Amerika Syarikat) di Pusat Penemuan Dadah, Penyelidikan dan Pembangunan, Fakulti Farmasi, Universiti Ain Shams.

3.5. Ramalan Farmakokinetik Dalam Siliko

Peraturan lima Lipinski, parameter fizikokimia seperti lipofilisiti, keterlarutan, dan sifat farmakokinetik sebagai penyerapan GIT, pengedaran, metabolisme, dan resapan kulit bagi sebatian terpencil telah dijalankan menggunakan pelayan dalam talian SwissADME [36]. 3.6. Penilaian Sifat Anti-Penuaan Kulit

3.6.1.Penentuan Aktiviti Anti-Collagenase

Keupayaan perencatan sebatian terpencil terhadap aktiviti kolagenase dinilai menggunakan kit saringan perencat kolagenase fluorometrik (BioVision, katalog no. # K833-100) mengikut kaedah yang diterangkan sebelum ini [50]. Kawalan rujukan ialah (1,10) -phenanthroline. Kompaun yang diuji dan kawalan rujukan telah disediakan dalam kepekatan 1,10,100, dan 1000 ug/mL untuk analisis. Kompaun yang diuji telah disediakan dalam 96-plat perigi dengan bahagian bawah rata. Pertama, substrat kolagenase telah dibubarkan dalam penimbal ujian kolagenase (CAB). Sampel untuk analisis disediakan dengan mencampurkan sebatian dengan kedua-dua kolagenase dan CAB. Menyediakan sampel kawalan perencat dilakukan dengan mencampurkan perencat((1,10)-fenantrolin (80 mM)) dengan enzim kolagenase cair dan penimbal CAB. Kawalan enzim telah disediakan dengan mencampurkan kolagenase yang dicairkan dengan CAB. Penampan CAB digunakan sebagai kawalan latar belakang. Semua sampel diinkubasi pada suhu bilik selama 15 minit. Pada masa ini, campuran tindak balas telah disediakan dengan mencampurkan kolagenase dengan CAB. Dalam langkah berikut, campuran tindak balas telah dicampur dengan teliti dengan sampel yang disediakan. Pendarfluor diukur serta-merta pada panjang gelombang pengujaan 490 nm dan panjang gelombang pelepasan 520 nm menggunakan pembaca plat mikro (FilterMax F5, Thermo Fisher). Pengukuran dilakukan dalam mod kinetik pada 37 darjah selama 60 minit. Sampel disediakan dalam pendua dan kesan perencatan kolagenase sebatian yang diuji dikira menggunakan persamaan berikut:

3.6.2.Penentuan Aktiviti Anti-Elastase

Aktiviti antielastase kompaun telah disiasat menggunakan Kit Ujian EnzChek§Elastase (E-12056)mengikut kaedah yang dilaporkan sebelum ini [51]. Kompaun dan kawalan rujukan yang diuji telah disediakan dalam kepekatan 0.1,10, dan 100 ug/mL untuk analisis. Kompaun telah disediakan dalam 96-plat perigi dengan bahagian bawah yang jelas untuk ujian fluorometrik. Secara ringkas, larutan enzim elastase, substrat elastase, dan kawalan perencat telah disediakan seperti yang disyorkan. Larutan elastase yang dicairkan kemudiannya ditambah ke dalam telaga. Kompaun yang diuji, kawalan perencat, dan kawalan enzim telah ditambah ke telaga berikutnya. Sampel dicampur pada shaker dan kemudian diinkubasi selama 5 minit pada suhu 37 darjah . Penampan ujian dicampur dengan substrat untuk menyediakan campuran tindak balas fluorometrik, yang kemudiannya ditambah dan dicampur dengan teliti dengan setiap sampel. Pendarfluor diukur serta-merta pada panjang gelombang pengujaan 400 nm dan panjang gelombang pelepasan 505 nm menggunakan pembaca plat mikro (FilterMax F5, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA). Pengukuran dibuat dalam mod kinetik pada 37 darjah selama 30 minit dilindungi daripada cahaya. Semua sampel yang diuji telah disediakan dan diuji dalam pendua dan kesan perencatan elastase sebatian yang diuji telah dikira menggunakan persamaan berikut:

di mana:

△RFU=perubahan dalam unit pendarfluor relatif EC=kawalan enzim

3.6.3.Penentuan Aktiviti Anti-Tyrosinase

Aktiviti perencatan minyak telah diuji terhadap kolagenase menggunakan Kit Ujian Kolorimetrik Pemeriksaan Perencatan Abcam@Tyrosinase (katalog # ab204715). Ujian dijalankan mengikut manual yang disediakan. Inhibitor tyrosinase standard ialah asid kojik. Kompaun yang diuji telah disediakan dalam kepekatan antara 0.1 hingga 10 ug/mL untuk analisis. Kira-kira 2 uL tyrosinase yang disediakan dicampur dengan 48 uL penimbal ujian tyrosinase. Sampel minyak pati atau dirian (20 uL) dicampur dengan campuran enzim （50 μL） dan diinkubasi pada 25 darjah selama 10 minit. Kemudian, 30μL larutan substrat tyrosinase telah ditambah ke dalam telaga minyak pati dan standard. Selepas itu, plat diukur secara spektrofotometri pada panjang gelombang 510 nm selama 30-60 min pada 25 darjah .

3.6.4.Penentuan Aktiviti Anti-Hyaluronidase

Aktiviti hyaluronidase dinilai secara spektrofotometri dengan mengukur jumlah N-asetilglukosamin yang terbentuk daripada natrium hyaluronat [52]. Kompaun dan kawalan rujukan yang diuji telah disediakan dalam kepekatan antara 0.1 hingga 10 ug/mL untuk analisis. Lima puluh mikroliter hyaluronidase lembu (7900 unit mL-1,(Sigma, St. Louis, MO, Amerika Syarikat）) dilarutkan dalam penimbal asetat 0.1 M (pH=3.5) dicampur dengan 100 μL bahan yang ditetapkan kepekatan sebatian dilarutkan dalam 5 peratus DMSO dan kemudian diinkubasi dalam mandi air pada suhu 37 darjah selama 20min. Kumpulan kawalan dirawat dengan 100 μL 5 peratus DMSO dan bukannya sampel. Ketumpatan optik campuran tindak balas diukur pada 585 nm secara spektrofotometri.

3.7.Analisis Statistik

Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda. Data untuk ICso aktiviti penghalang enzim telah diperiksa secara statistik menggunakan analisis varians sehala (ANOVA). Analisis statistik telah dilakukan menggunakan GraphPad Prism 5.0. 4. Kesimpulan dan Perspektif Masa Depan

Produk semula jadi terbitan tumbuhan mendapat permintaan tinggi di pasaran global untuk pembangunan ejen baharu untuk reka bentuk kosmetik[4]. Dalam kajian ini, sebatian xanthone baharu,1.3.5,6-tetrahydroxyxanthone-C-4- -D-glucopyranoside, telah diasingkan daripada ekstrak daun M. indica. Berdasarkan ujian perencatan enzim, sebatian ini mungkin boleh mempamerkan sifat anti-kolagenase, anti-elastase, aanti-hyaluronidase, dan anti-tirosinase yang baik, dengan itu memberikan kesan pelemahan yang menyeluruh terhadap enzim berkaitan penuaan kulit. Tambahan pula, parameter fizikokimia dalam siliko dan kajian ADME menyokong penggabungannya ke dalam bentuk dos topikal kerana ia memaparkan keterlarutan akueus yang menjanjikan dan ramalan penembusan kulit yang munasabah. Oleh itu, sebatian ini boleh digunakan sebagai agen bioaktif pelbagai fungsi yang bertuah untuk formulasi nutraseutikal dan kosmeseutikal. Namun begitu, penilaian toksikologi dan klinikal berpotensi menjanjikan.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2022, 27, 2609. https://doi.org/10.3390/molecules27092609 https://www.mdpi.com/journal/molecules