Kesan perlindungan glikosida cistanche pada kecederaan iskemia-reperfusi serebrum
Mar 09, 2022
Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com
Zhang Yanhui1,Ren Xiaoli1,Pei Feixiang2
Abstrak
Objektif: Untuk memerhati kesan daripadaglikosida cistanche(GCs) pada asid amino penguja (EAA) dan ekspresi NF-KB dan protein dalam hippocampus tikus denganiskemia-reperfusi serebrum, dan untuk meneroka kesan pencegahan dan rawatanglikosida cistanchepadaiskemia-reperfusi serebrumkecederaan. Kaedah: 60 tikus SD dibahagikan secara rawak kepada kumpulan palsu, kumpulan model, dos rendahglikosida cistanchekumpulan, dos tinggiglikosida cistanchekumpulan, dan kumpulan kawalan, dengan 12 tikus dalam setiap kumpulan. Model tikus daripadaiskemia-reperfusi serebrumtelah disediakan dengan kaedah bolt wayar. Selepas pemodelan berjaya, tikus dalam setiap kumpulan diberi terapi gavage dadah. Memori water maze penilaian ujian navigasi pembelajaran spatial dan keupayaan ingatan tikus, oleh kumpulan ujian kromatografi cecair (HPLC) berprestasi tinggi, asid aspartik tikus (Glu), asid glutamat (Asp), -asid aminobutyric (GABA), glisin (Gly ) kandungan, menggunakan kaedah imunohistokimia untuk mengesan kawasan otak hippocampus tikus NF - KB, tau, P - tau, Tahap ekspresi protein amiloid. Keputusan: Kependaman melarikan diri purata tikus dalam setiap kumpulan telah dipendekkan kepada darjah yang berbeza semasa percubaan laut penentududukan maze air 5d. Latensi melarikan diri tikus dalam dos tinggiglikosida cistanchekumpulan dan kumpulan kawalan pada hari 4 dan 5 adalah jauh lebih rendah daripada kumpulan model (P < 0.05).="" selepas="">iskemia-reperfusi serebrumkecederaan berlaku, kandungan EAA organisasi dan kawasan otak hippocampal tikus NF - KB, tahap ekspresi protein jauh lebih tinggi (P < 0.05), penggunaan kandungan EAA dan campur tangan dadah selepas tikus mempunyai otak hippocampus NF - KB , tahap ekspresi protein dalam tahap penurunan yang berbeza, dos yang tinggiglikosida cistanchekumpulan, kandungan EAA dan kumpulan kawalan dadah tikus mempunyai otak hippocampus NF - KB, tahap ekspresi protein adalah jauh lebih rendah daripada kumpulan model (P < 0.05).="" kesimpulan:="" dalam="">iskemia-reperfusi serebrum, kandungan asid amino penguja (EAA) dikawal selia, dan pengaktifan protein yang berkaitan, menjejaskan fungsi kognitif tikus.Cistanche glikosidaboleh mengurangkan tahap EAA, NF-KB, dan ekspresi protein dalam otak hippocampal tikus, dan dengan itu meningkatkan fungsi kognitif tikus.
Kata kunci: Glikosida cistanche; Iskemia-reperfusi serebrum; Asid amino penguja (EAA); NF - KB; Tahap ekspresi protein
1. Bahan dan kaedah
1.1 Haiwan eksperimen
60 8-Tikus SD jantan sihat gred SPF seminggu, seberat (200±20) g, dibeli daripada Pusat Haiwan Eksperimen Universiti Perubatan Anhui, nombor sijil: 0001507. Ia sesuai untuk pembiakan selama 1 minggu dalam persekitaran suhu bilik 22-24 darjah dan kelembapan relatif 45 peratus ~55 peratus . Dalam tempoh ini, anda boleh makan dan minum dengan bebas, dan lampu ganti selama 12 jam. Proses eksperimen mengikut ketat "Pendapat Panduan Mengenai Merawat Haiwan Eksperimen".
1.2 Instrumen dan reagen utama
Glikosida cistancheadalah dari Shanxi Yuning Biotechnology Co., Ltd., spesifikasi: 80 peratus ; Oxiracetam dibeli daripada CSPC Ouyi Pharmaceutical Co., Ltd.; Produk standard EAA adalah dari American Sigma, Purity 99.9 peratus; Kromatografi cecair berprestasi tinggi disediakan oleh Shimadzu, Jepun, LC-6Jenis A; Kit NF-KB, kit protein tau, kit protein P-tau, Kit protein amiloid telah dibeli daripada Shanghai Jingkang Biological Engineering Co., Ltd.
1.3 Pengelompokan dan pemodelan
Mengikut kaedah jadual nombor rawak, 60 ekor tikus jantan SD dibahagikan secara rawak kepada kumpulan palsu, kumpulan model, dos rendahGlikosida cistanchekumpulan, dos tinggiGlikosida cistanchekumpulan, dan kumpulan kawalan dadah, dengan 12 tikus dalam setiap kumpulan. Model tikus daripadaiskemia serebrum dan reperfusitelah direplikasi dengan kaedah jahitan [6].
1.4 Rawatan pentadbiran
Menurut "Jadual nisbah dos setara penukaran permukaan badan manusia dan haiwan", dos gavage tikus telah dikira. Dos rendah dan tinggiglikosida cistanchekumpulan telah diberikan pada 2.5 mg/kg dan 10 mg/kg masing-masing, dan kumpulan kawalan dadah Menurut dos 450mg/kg Oxiracetam, kumpulan operasi palsu dan kumpulan model diberi jumlah garam biasa yang sama secara intragastrik, sekali hari, selama 2 minggu rawatan berterusan.
1.5 Petunjuk pemerhatian
Penilaian fungsi kognitif Ujian maze air Morris digunakan untuk menilai fungsi kognitifiskemia-reperfusi serebrumtikus: Kolam maze air Morris berbentuk bulat dengan diameter dalam 30cm dan diameter dalam 160cm. Dinding bahagian dalam kolam dicat hitam dan dibahagikan kepada 4 kuadran dengan keluasan yang sama. Satu kuadran dipilih secara rawak untuk membina pelantar tersembunyi 1cm di bawah permukaan air. Sehari selepas pentadbiran, percubaan navigasi penentududukan maze air telah dimulakan. Letakkan tikus menghadap dinding kolam dari titik masuk kuadran rawak ke dalam kolam, dan rekodkan kependaman melarikan diri tikus (masa yang diperlukan untuk tikus mencari dan berdiri di atas platform tersembunyi selama sekurang-kurangnya 3 saat). Jika tikus gagal menjumpai pelantar tersembunyi dalam masa 2 minit, ambil sebatang kayu untuk mengalihkan faraj tikus ke pelantar, dan biarkan ia berdiri di atas pelantar selama 30-an. Latensi melarikan diri tikus direkodkan sebagai 120s, dan eksperimen diteruskan selama 5 hari.
1.6 Kaedah statistik SPSS22.0 perisian statistik telah digunakan untuk analisis.
Data pengukuran diwakili oleh (x ± s ), yang bertaburan normal dan mempunyai varians seragam. Ujian-t sampel bebas digunakan untuk perbandingan antara kumpulan, dan ujian-t berpasangan digunakan untuk perbandingan antara kumpulan. P<0.05 is="" considered="" as="" the="" difference="" is="" statistically="">
2. Keputusan
2.1 Kesan glikosida cistanche pada kependaman melarikan diri eksperimen navigasi kedudukan pada tikus dengan kecederaan reperfusi iskemia serebrum
Purata kependaman melarikan diri tikus dalam setiap kumpulan berubah dengan ketara dalam eksperimen navigasi maze air 5d. Semasa eksperimen diteruskan, kependaman melarikan diri tikus dalam setiap kumpulan menunjukkan tahap pemendekan yang berbeza-beza. Berbanding dengan kumpulan model, kependaman melarikan diri tikus dalam dos rendah dan dos tinggiglikosida cistanchekumpulan dan kumpulan kawalan dadah telah dipendekkan dengan ketara, dan kependaman melarikan diri tikus dalam kumpulan GCs dos tinggi dan kumpulan kawalan dadah adalah ketara pada 4 dan 5 hari.
Jauh lebih rendah daripada kumpulan model (P<>
Jadual 1 Kesan daripadaglikosida cistanchemengenai kependaman melarikan diri percubaan navigasi kedudukan pada tikus dengan kecederaan reperfusi iskemia serebrum (x ± s, s)
Nota: Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, △P＜{{0}}.05; berbanding dengan kumpulan model ▲P＜0.05.
2.2 Kesan cistanche glycosides pada kandungan EAA dalam tisu otak tikus dengan kecederaan perfusi iskemia serebrum.
Selepasiskemia-reperfusi serebrumkecederaan, kandungan EAA dalam tisu otak tikus meningkat dengan ketara (P<0.05). after="" drug="" intervention,="" the="" eaa="" content="" in="" the="" brain="" tissue="" of="" the="" rats="" decreased="" to="" varying="" degrees.="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" contents="" of="" eaa="" in="" the="" high-dose="">glikosida cistanchekumpulan dan kumpulan kawalan dadah telah menurun dengan ketara (P<>
Jadual 2 Kesan daripadaglikosida cistanchepada kandungan EAA dalam tisu otak tikus dengan kecederaan perfusi iskemia serebrum (x ± s, μmol/g)
Nota: Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, △P＜{{0}}.05; berbanding dengan kumpulan model ▲P＜0.05.
2.3 Kesan cistanche glycosides pada ekspresi NF-KB dan protein dalam hippocampus tikus dengan kecederaan perfusi iskemia serebrum
Imunohistokimia menunjukkan bahawa 4 protein dalam hippocampus kumpulan model menunjukkan ekspresi yang tinggi, yang jauh berbeza daripada dalam kumpulan operasi palsu (P＜0.05). Selepas campur tangan dadah, tahap ekspresi 4 protein dalam otak kuda tikus telah Dikurangkan, terdapat perbezaan yang ketara antara dos tinggiglikosida cistanchekumpulan, kumpulan kawalan dadah, dan kumpulan model (P<>
3 Perbincangan
Iskemia-reperfusi serebrumboleh menyebabkan tindak balas keradangan imun, pembebasan NO secara besar-besaran, penjanaan radikal bebas oksigen, beban kalsium intraselular, peningkatan pelepasan EAA, dan tindak balas lain, dan menyebabkan degenerasi neuron dan nekrosis, yang menjejaskan fungsi normal tisu otak [8]. NF-KB ialah faktor pengawalseliaan yang mengawal tindak balas imun dan keradangan. Kajian telah menunjukkan bahawa menghalang pengaktifan NF-KB dalam nukleus dan sitoplasma secara berkesan boleh mengurangkan apoptosis otak sel saraf di kawasan fokus infark [9]. EAA ialah neurotransmitter penting yang diedarkan dalam sistem saraf pusat. Selepasiskemia serebrum dan reperfusi, neuron mengalami depolarisasi dan keupayaan mereka untuk mengambil EAA berkurangan dengan ketara, mengakibatkan peningkatan yang tidak normal dalam kandungan EAA dalam tisu otak. Apabila kandungan EAA terlalu tinggi, neurotoksisitinya akan menyebabkan kerosakan berterusan pada tisu otak, seterusnya menyebabkan apoptosis neuron, dan merosakkan fungsi normal tisu otak [10].
Wang Lu et al. [15] menunjukkan bahawa:Glikosida cistancheboleh meningkatkan kadar survival sel vertebra di kawasan CA1 hippocampus, dan mengurangkan MDA untuk meningkatkan aktiviti GSH-Px dan SOD, mengesahkan bahawaGlikosida cistancheberkesan boleh menghilangkan radikal bebas oksigen dan memperbaiki tikus penyakit Alzheimer Belajar fungsi kognitif. Huang Huilian et al. [16] memerhatikan fungsi kognitif pesakit dengan demensia vaskular dan mendapati bahawaGlikosida cistancheboleh mengurangkan tahap ekspresi serum protein P-tau pada pesakit dan meningkatkan keupayaan pesakit untuk menjalani kehidupan seharian. Mereka mencadangkan ituGlikosida cistancheboleh mengawal tahap ekspresi protein badan, dengan itu mengurangkan tahap kerosakan otak pesakit demensia vaskular. Qi Yue et al. [17] memerhatikesan Cistanche glycosidesebagai ubat utama pada tingkah laku dan ekspresi protein tau model tikus dengan mereplikasi model tetikus penyakit Alzheimer dan mendapati bahawa kependaman melarikan diri tikus telah dipendekkan dan tau Ekspresi fosforilasi protein telah dihalang, dan kemerosotan pembelajaran dan ingatan tikus adalah dipertingkatkan dengan berkesan. Ia boleh dilihat bahawaGlikosida cistancheboleh mengurangkan kerosakan tisu otak dan membaiki fungsi saraf melalui mekanisme seperti mengawal tahap ekspresi protein dan menghalang tekanan oksidatif. Kemungkinan mekanisme kecederaan reperfusi darah.
Latensi melarikan diri tikus yang dirawat denganGlikosida cistanchedipendekkan kepada pelbagai peringkat. Kandungan EAA dalam tisu otak dan ekspresi NF-KB dan protein dalam hippocampus telah dikawal ke bawah, menunjukkan bahawa fungsi kognitif tikus telah dipertingkatkan dengan berkesan. Kandungan EAA dalam tisu otak mengurangkan neurotoksisiti dan melindungi neuron pada tahap tertentu. Sebagai tambahan,Glikosida cistancheboleh menghalang ekspresi protein NF-KB dan menghalang proses pengaktifannya, dengan itu menyekat proses penghantaran laluan isyarat dan mengurangkan apoptosis sel neuron.Glikosida cistancheboleh menurunkan tahap ekspresi protein tau, protein P-tau, dan amiloid A dalam hippocampus, dan menghalangnya daripada terkumpul secara berlebihan dalam sel, yang seterusnya boleh merosakkan neuron. Ia boleh dilihat bahawaGlikosida cistancheboleh mengurangkaniskemia-reperfusi serebrumkecederaan melalui EAA dan pengawalan protein, dengan itu meningkatkan fungsi tisu otak badan. Membandingkan kesan kumpulan GCs dos rendah dan tinggi dalam tikus, dapat dilihat bahawa GCs dos tinggi mempunyai peningkatan yang lebih baik.kesan pada iskemia-reperfusi serebrumkecederaan pada tikus. Ada spekulasi bahawaGlikosida cistanchemempunyai rawatan yang bergantung kepada kepekatan tertentuiskemia-reperfusi serebrumkecederaan, dan dos tinggiglikosida cistanchemempunyai tidak kurang daripada kesan terapeutik Oxiracetam. Ia boleh dilihat bahawaCistancheadalah ubat herba Cina dengan mekanisme aplikasi klinikal yang tinggi. Mekanisme tindakannya agak rumit dan mekanisme tindakannya sangat luas. Ia secara khusus melibatkan protein, sel, dan bidang lain. Ia boleh digunakan untuk pembangunan ubat baru seperti penyakit Parkinson dan penyakit Alzheimer. Bahan utama. Walau bagaimanapun, penyelidikan semasa mengenaiCistancheadalah agak lemah, dan pelbagai farmakologi dan mekanisme tindakan yang tidak diketahui serta mencukupi perlu dijelaskan dengan lebih lanjut. Kami telah memulakan penyelidikan pelbagai peringkat tentang protein, gen, sel, molekul, dll., untuk menjelaskan sasaran bahan berkesan yang berbeza. Rawatan masa depan penyakit neuropsikiatri mempunyai prospek aplikasi yang luas.
Secara ringkasnya,iskemia serebrum dan reperfusiboleh menyebabkan ekspresi abnormal EAA, NF-KB, dan protein dalam hippocampus tikus, dan memburukkan kecederaan otak dan disfungsi kognitif.Glikosida cistancheberkesan boleh menghalang ekspresi NF-KB, dan menurunkan tahap ekspresi protein tau, protein P-tau, dan A amiloid dalam EAA dan hippocampus tisu otak tikus, yang boleh digunakan sebagai cara baharu untuk merawatiskemikpenyakit serebrovaskular.
Cistanche glycoside merawat iskemia-reperfusi serebrum
Rujukan
[1] Yuan Lingyue, Zhai Dongyu. Ketamin mengurangkan tindak balas keradanganiskemia-reperfusi serebrumkecederaan pada tikus dan kajian korelasi laluan isyarat NF-κB [J]. Ahli Farmasi Cina, 2020, 23(4): 614-619.
[2] Li Ping, Yu Jingping, Chen Yixuan, et al. Kesan daripadaiskemia-reperfusi serebrumkecederaan pada morfologi patologi kecederaan neuron di kawasan EPL korteks serebrum dan kawasan CA1 hippocampus dalam tikus [J]. Jurnal Perubatan Cina Tradisional Cina, 2020, 35 (3):1488-1492.
[3] Wen Yan, Yu Guan. Peranan penghalang darah-otak dalam patogenesis penyakit Alzheimer [J]. Jurnal Perubatan Chongqing, 2016, 45(8): 1116-1118. [4] Li Chuanwen, Zhang Rong, Hou Liang, et al. Laluan SIRT1/NF-kB mengambil bahagian dalam resveratrol untuk meningkatkan tindak balas keradanganiskemia-reperfusi serebrumkecederaan pada tikus[J].Jurnal Universiti Perubatan Anhui,2018,53(1):6-9.
[5] Yin Shuiling, Wang Haibo, Yang Shuo. Pelindung sarafkesan Cistanchepolisakarida dengan mengaktifkan laluan isyarat Wnt/ -catenin pada 6-tikus penyakit Parkinson yang disebabkan oleh HODA[J]. Jurnal Perubatan Tradisional Cina dan Barat Bersepadu dalam Penyakit Kardio-Serebrovaskular, 2020,18(8):1227-1230.
[6] Li Zhenzong, Zhao Yumei, Yuan Hui. Pengubahsuaian model tikus fokusiskemia serebrumdengan kaedah jahitan [J]. Jurnal Cina Pembedahan Neuron Invasif Minima, 2018, 23(9): 419-422.
[7]Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Oklusi arteri serebrum tengah boleh balik tanpa kraniektomi pada tikus.[J]. Strok; jurnal peredaran otak, 1989, 20(1):84.
[8] Xie Lihua, Liao Jun. Penyelidikan Hukum Gabungan Perubatan Cina dalam RawatanIskemia-Reperfusi SerebrumpadaKecederaan Berdasarkan Peraturan Persatuan[J]. Jurnal Perubatan Cina Tradisional Hunan Universiti Farmaseutikal, 2020, 40(1): 65-69.
[9] Li Fan. Curcumin mengurangkan kerosakan neuron otak dalam tikus melintang penyakit Alzheimer dengan menghalang laluan isyarat TLR4/NF-kB [J]. Penyelidikan Anatomi, 2017, 39(2): 102-105.
[10]Wang Weiyao, Chen Ling, Yue Xueling, et al. Kesan tekanan sekatan kronik pada pembelajaran dan ingatan spatial dan tahap asid amino pengujaan dalam gyrus dentate hippocampal tikus tua [J]. Jurnal Universiti Jilin (Edisi Perubatan), 2018,44(1):8-12.
[11] Yang Jianhua, Mai Wu Judan Alifu, Ju Bowie, et al. Kajian tentang proses pengekstrakan dan farmakodinamik bahagian julap berkesanCistanche[J]. Jurnal Pemeriksaan Keselamatan dan Kualiti Makanan, 2019, 10(15) ): 5069-5075.
[12]Ailadan·Maimaiti Aili, Yang Ting, Yuan Jie, et al. Teknologi pengekstrakan dan aktiviti antioksidan in vitro polisakarida daripadaCistanchehampas [J]. Kimia dan Kejuruteraan Bio, 2020, 37(2) ): 36-41.
[13] Ma Xiaoqing, Wang Jie, Hu Junping, et al. Farmakodinamik daripadaGlikosida phenylethanoid cistanchepada kecederaan buah pinggang akut yang disebabkan oleh gentamicin pada tikus [J]. Jurnal Universiti Perubatan Xinjiang, 2020, 43(7): 942 -946,950.
[14] Deng Nan, Shen Yajuan, Ding Hui, et al. Kemajuan penyelidikan tentang kesan farmakologi daripadaCistanchekomponen polisakarida deserticola [J]. Jurnal Universiti Perubatan Tradisional Cina Liaoning, 2020, 22(6): 67-71.
[15]Wang Lu, Bai Yumeng, Li Xiaoyu, et al. Kesan daripadaCistanche Glycosidesmengenai Pembelajaran Fungsi Kognitif dan Tekanan Oksidatif dalam Model Penyakit Alzheimer Tikus[J]. Jurnal Anatomi, 2020, 43(3): 194-199, kulit belakang 3.
[16]Huang Huilian, Chen Li. Kesan daripadaCistanche Glycosidesmengenai Fungsi Kognitif dan Ekspresi Protein Serum p-tau dalam Pesakit Demensia Vaskular[J]. Jurnal Perubatan Tradisional Cina dan Barat Penyakit Kardio-Serebrovaskular Bersepadu, 2019, 17(8):1248- 1250.
