Kesan Jumlah Glikosida Cistanche Deserticola Terhadap Percambahan, Apoptosis dan Ekspresi Wnt/ -Catenin Protein Berkaitan Laluan Isyarat Sel HepG2

FENG Duo1,2, WANG Jing2 , JIANG Yong-jun3 , ZHOU Shi-qi1 , DUAN Hao1 ,GUO Yu1 , ZHAO Jian1 , YAN Wen-jie1,*

（1.Makmal Utama Beijing Bahan Bioaktif dan Makanan Berfungsi, Kolej Kejuruteraan Biokimia, Universiti Kesatuan Beijing, Beijing 100023, China; 2. Institut Pembangunan Makanan dan Pemakanan, Kementerian Pertanian dan Hal Ehwal Luar Bandar, Beijing 100081, China; 3. Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Inner Mongolia 017000, China）

Abstrak: Untuk meneroka kesan perencatan daripadajumlah Glikosida daripadaCistanche deserticola(TG) pada sel HepG2 dan mekanismenya. Dalam kertas ini, kepekatan berbeza (0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 ug/mL) TG telah dirawat selama 24 jam pada sel kanser hati HepG2 dan daya maju sel HepG2 telah dikesan menggunakan ujian CCK8. . Kaedah pewarnaan berganda Hoechst33342/PI dan Annexin V-FITC / PI digunakan untuk mengesan apoptosis sel HepG2. Fenomena migrasi sel telah dikesan oleh ujian migrasi sel. Sementara itu, perubahan perkembangan kitaran sel dikesan oleh sitometri aliran. Dan ungkapan -fetoprotein(AFP), -catenin, Disheveled (Dsh) dan GSK-3 telah dikesan oleh western blot. Keputusan menunjukkan bahawa TG boleh mengurangkan percambahan sel HepG2 dalam cara yang bergantung kepada kepekatan, dengan hanya 31.04 peratus daya maju sel apabila TG adalah 42 ug/mL. Di samping itu, TG boleh merosakkan struktur sel dan mendorong apoptosis sel, dan kadar apoptosis boleh setinggi 32.44 peratus dengan pengesanan AV/PI. Selain itu, TG juga boleh menggalakkan nekrosis sel, dan mengehadkan penghijrahan sel. Terdapat perbezaan yang ketara antara kumpulan yang dirawat dan kumpulan kawalan. Sementara itu, kepekatan TG yang tinggi boleh menangkap sel HepG2 dalam fasa G2/M. Akhir sekali, berbanding dengan kumpulan kawalan, ungkapan relatif -catenin dan Dsh menurun, manakala GSK{30}} meningkat dalam kumpulan yang dirawat TG. Kesimpulannya, TG boleh menghalang pertumbuhan sel HepG2 dengan menjejaskan perkembangan kitaran sel, menggalakkan apoptosis, dan mengehadkan penghijrahan sel. Mekanismenya mungkin melalui laluan isyarat Wnt/ -catenin, yang mengaktifkan GSK-3 untuk merendahkan -catenin untuk mencapai perencatan kanser hati.

Kata kunci: Cistanche deserticola; jumlah glikosida; sel HepG2; anti-hepatoma; Laluan isyarat Wnt/ -Catenin

Cistanche deserticola matergolong dalam bahan homolog perubatan dan makanan dan merupakan tumbuhan parasit herba saka Orobaceae.Ia mempunyai kesan antioksidan, anti-keletihan, anti-penuaan, anti-tumor, perlindungan hati, peraturan endokrin, meningkatkan keupayaan ingatan, dan anti-osteoporosis. Ia dikenali sebagai "Ginseng Gurun". Selepas mengesahkan bahawa deserticola deserticola telah menjadi bahan homolog perubatan dan makanan pada 2018, ia telah menarik perhatian ramai. Ia bukan sahaja boleh memainkan nilai aplikasi klinikal ubat herba Cina tetapi juga mempengaruhi kesan intervensi pemakanan makanan.Ia juga menunjukkan potensi besar dalam pembangunan produk kanser anti-hati semula jadi yang baharu [2-3]. Penyelidikan pemakanan dan kesan fungsi makanan deserticola deserticola menjadi semakin mendalam [4].

cistanche hidup padang pasir

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, telah dilaporkan bahawa Cistanche deserticola mempunyaianti tumorkesan. Ye et al. [5]telah mendapati bahawa echinacea yang diekstrak daripada garam Cistanche deserticola boleh menghalang percambahan sel HepG2 dengan mengurangkan ekspresi TREM2 dan menyekat laluan isyarat PI3K/AKT; Sesetengah sarjana telah mendapati bahawa glikosida phenylethanoid daripada Cistanche deserticola boleh menghalang pembiakan sel HepG2 [6]; Echinoside mempunyai kesan perencatan tertentu ke atas pembiakan barah buah pinggang 786-sel O [7] dan sel kanser kolon SW480 [8]; Dalam kajian lain, glikosida phenylethanoid daripada Cistanche deserticola telah ditunjukkan untuk mengurangkan kerosakan hati pada tikus yang mengandungi tumor H22, dan meningkatkan fungsi imun dengan mengurangkan tahap AFP, dengan itu menjejaskan pertumbuhan tumor [9]. Kedua-dua rebusan Cistanche deserticola [10] dan polisakarida [11] boleh disalurkan melalui laluan isyarat Wnt/ - Catenin memperbaiki gejala klinikal tikus Parkinson dan memainkan peranan neuroprotektif. Di samping itu, kajian mendapati bahawa echinacea boleh menghalang Wnt by/ - Laluan isyarat Catenin memainkan peranan anti-kanser payudara [12]; Selain itu, ia juga boleh mengurangkan sel THP-1 dalam leukemia akut manusia - ekspresi protein Catenin [13]. Sepanjang masa, laluan isyarat Wnt/ - Catenin telah mendapat perhatian yang besar [14]. Dilaporkan bahawa ia boleh diperhatikan dalam 20 peratus - 35 peratus kes HCC [15] - Pengaktifan Catenin. Terdapat bukti yang semakin meningkat bahawa laluan isyarat Wnt/ - Catenin memainkan peranan penting dalam kejadian dan perkembangan kanser hati [16], tetapi sama ada jumlah glikosida Cistanche deserticola mengawal Wnt/ - Terdapat beberapa laporan mengenai kesan anti-hepatoma daripada laluan isyarat Catenin. Jumlah glikosida ekstrak Cistanche deserticola, termasuk glikosida phenylethanoid dan glikosida lain [17], telah dikaji dalam eksperimen ini dengan mengkaji percambahan, apoptosis, migrasi, dan tahap ekspresi protein berkaitan sel HepG2 yang disebabkan oleh Jumlah Glikosida Cistanche deserticola (TG) , untuk meneroka mekanisme TG menghalang kanser hati, dan untuk menerangkan mekanisme potensi TG terhadap kanser hati, Untuk menyediakan asas saintifik tertentu untuk memperkayakan lagi aplikasi klinikal Cistanche deserticola dalam bidang kanser hati.

Phenylethanol glycoside adalah komponen aktif utama Cistanche deserticola

1.Bahan dan Kaedah

1.1 Bahan dan Instrumen

Sel HepG2 (Karsinoma Hepatoselular Manusia) telah dibeli dari Pusat Sel Institut Perubatan Asas, Universiti Perubatan Kesatuan Peking, China.Jumlah glikosida daripadaSerbuk ekstrak cistanche(pecahan jisim Lebih besar daripada atau sama dengan 75 peratus , digabungkan dengan echinacoside dan kolam renang, disediakan oleh Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) telah dilarutkan dalam medium DMEM kepada kepekatan TG yang sepadan untuk eksperimen seterusnya.

Serbuk ekstrak cistanche

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Extract Protect Liver

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Serum lembu janin dibeli dari Gibco, Amerika Syarikat; Antibodi (larutan campuran gentamicin penicillin-streptomycin), medium DMEM-H, apoptosis sel dan kit pengesanan kitaran sel, larutan Annexin V-FITC/pewarna, dan larutan pewarna Hoechst 33342/PI apoptosis dibeli daripada Genview; 0.25 peratus trypsin dan kit penentuan kepekatan protein BCA telah dibeli daripada Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd; Antibodi anti-Catenin arnab dibeli daripada ABclonal; Antibodi anti-Dsh arnab (ADAR1) telah dibeli daripada Bios; Antibodi anti GSK3 arnab dan antibodi anti-AFP arnab telah dibeli daripada Affinity. Inkubator sel CO2 (Innova CO-170), emparan desktop berkelajuan tinggi suhu rendah (3K15, Sigma, Jerman), instrumen pelabelan enzim pelbagai fungsi (INFINITE M NANO TECAN), mikroskop pendarfluor (C-SHG1, Nikon, Jepun ), flow cytometry (FACSCALIBUR, BD, USA), peranti elektroforesis (EN027015, BIO-RAD, USA), peranti pemindahan membran (043BR57802, BIO-RAD, USA).

1.2 Kaedah eksperimen

1.2.1 Laluan sel

Sel HepG2 dikultur dalam medium lengkap DMEM yang mengandungi 1{10}} peratus serum lembu janin dan 1 peratus antibodi tiga kali ganda (100 U/mL penisilin, 100 mg/mL streptomycin dan gentamicin) dalam inkubator sel CO2 5 peratus pada 37 ijazah . Selepas sel berkembang kepada pertemuan 80 peratus hingga 90 peratus, ia dicerna dengan 0.25 peratus trypsin (- EDTA) dan disubkultur pada nisbah 1:2 hingga 4. Selepas 2-3 hari pertumbuhan sel, pertumbuhan logaritma sel fasa diambil untuk subkultur atau eksperimen seterusnya

1.2.2 Kesan TG terhadap morfologi sel HepG2

Sel HepG2 fasa pertumbuhan logaritma telah diambil dan diinokulasi dalam 24-plat perigi dengan kepekatan sel 5 setiap telaga × 104 keping/mL, selepas sel melekat pada dinding, tambah TG kepada kepekatan akhir 0, 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 μ G/mL, 0.5 mL setiap perigi, dikultur selama 24 jam dan memerhati morfologi sel setiap kumpulan di bawah mikroskop cahaya.

1.2.3 Kesan TG terhadap pembiakan sel HepG2

Ambil sel HepG2 pada peringkat pertumbuhan logaritma dan laraskan kepekatan sel kepada 1 × 104 keping/telaga, diinokulasi dalam 96 plat telaga, menambah 100 keping setiap telaga μ 50. Inkubasi dalam inkubator sel. Selepas sel melekat pada dinding, mereka dirawat dengan ubat mengikut 1.2.2 di atas, dan setiap kumpulan mempunyai enam reperforasi, dibiakkan selama 24 jam. Kadar survival sel diukur menggunakan kaedah CCK8, dan nilai penyerapan (OD) diukur pada panjang gelombang 450 nm. Kadar kelangsungan hidup sel dan kadar perencatan sel dikira menggunakan formula berikut.

Dalam formula, kumpulan kosong hanya mengandungi cecair CCK8, manakala kumpulan kawalan mengandungi 0 μ kumpulan rawatan G/mL, kumpulan eksperimen: 3.5, 10.5, 21, 31.5, 42 μ kumpulan rawatan G/mL.

1.2.4 Kesan TG pada kitaran sel HepG2

Ambil sel fasa pertumbuhan logaritma dan tekan 5 × Ketumpatan sel 105 sel setiap telaga telah diinokulasi ke dalam plat enam telaga, dan sistem 2 mL setiap telaga mengandungi 5 × 105 sel diletakkan di dalam kotak kultur dan tertakluk kepada rawatan dadah seperti yang diterangkan dalam 1.2.2 di atas. Selepas budaya, operasi seterusnya dilakukan mengikut arahan kit.

1.2.5 Kesan TG terhadap Penghijrahan Sel HepG2:

Pilih sel fasa pertumbuhan logaritma dan letakkannya di atas plat enam telaga. Sistem 2 mL setiap telaga yang mengandungi 6 × 105 sel telah dialih keluar apabila lekatan sel dan pengagregatan sel melebihi 90 peratus . Menjalankan rawatan dadah mengikut 1.2.2 di atas. Pada 0 jam, pilih secara rawak 5 medan pandangan di bawah mikroskop untuk mengambil gambar, letakkannya dalam inkubator untuk penanaman selanjutnya selama 24 jam, ambil gambar di bawah mikroskop optik, gunakan perisian Image J untuk menganalisis kawasan calar sel, dan mengira kadar migrasi mengikut formula berikut (2) [18].

1.2.6 Kaedah pewarnaan berganda Hoechst 33342/PI untuk mengesan apoptosis

Pilih sel fasa pertumbuhan logaritma dan letakkannya pada plat telaga {{0}}, dengan sistem 0.5 mL yang mengandungi 3 × 104 sel telah dirawat dengan ubat mengikut 1.2.2 di atas, dan 1 mL penimbal pewarnaan sel telah ditambah, diikuti dengan 5 μ L pewarna Hoechst dan 5 μ larutan pewarna LPI untuk pewarnaan. Inkubasi dalam gelap pada 37 darjah selama 7-10min, keluarkan 24-plat lubang, lembapkannya dengan PBS dan ambil foto menggunakan mikroskop pendarfluor untuk pemerhatian.

1.2.7 Pengesanan apoptosis sel HepG2 dengan pewarnaan berganda Annexin V-FITC/PI

Pilih sel fasa pertumbuhan logaritma dan letakkannya di atas plat enam telaga, dengan sistem 2 mL setiap telaga yang mengandungi 2 × 105 sel telah dirawat dengan ubat mengikut 1.2.2 di atas, dan operasi seterusnya dilakukan mengikut arahan kit, menambahkan larutan pewarnaan 5 μ L Annexin V-FITC dan 5 μ L PI diinkubasi pada 4 darjah dalam gelap dan kemudian diletakkan pada sitometri aliran untuk pengesanan apoptosis.

1.2.8 Kesan TG pada ekspresi protein dalam sel HepG2

Tekan 2 × 106 sel/sel telah dirawat dengan ubat mengikut 1.2.2 di atas, menggunakan 80 μ L lysate (RIPA: PMSF=100:1) melisiskan protein, dan kemudian menggunakan elektroforesis SDS-PAGE untuk memisahkan setiap sampel protein (50 sampel setiap perigi μ g) Lengkapkan pemindahan protein ke membran PVDF dalam tab mandi ais, menggunakan 1 × Bersihkan pita dengan larutan penimbal TBST, tutup perlahan meja goncang BSA pada suhu bilik selama 1 jam, dan tambah antibodi (AFP, GSK3) dalam perkadaran- , - Catenin, Dsh), eram pada 4 darjah semalaman, dan kemudian eramkan membran PVDF dengan antibodi sekunder yang dicairkan pada suhu bilik selama 1-2 jam. GAPDH digunakan sebagai rujukan dalaman. Selepas membangunkan dan membetulkan membran PVDF, perhatikan perubahan dalam ekspresi protein sasaran [6].

1.3 Analisis data

ANONA analisis kepentingan faktor tunggal telah dijalankan menggunakan SPSS 25.0 perisian statistik untuk menyatakan; Data eksperimen sitometri aliran dianalisis menggunakan Flowjo; Gunakan Graphpad Prism 8.0.2 untuk melukis. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Keputusan dan Analisis

2.1 Kesan TG terhadap morfologi sel HepG2

rajah 1 sel hepg2 dirawat dengan kepekatan tg yang berbeza selama 24 jam (200x)

Semasa proses apoptosis, pertama sekali, isipadunya akan berkurangan dan berubah bentuk secara beransur-ansur, dan kemudian sel-sel yang melekat perlahan-lahan akan mengalami proses seperti mengecut, membulatkan, menumpahkan, dan pyknosis kromosom intraselular. Sesetengah nukleus akan mengalami pecah, terpinggir, dan pembentukan vesikel apoptosis. Seperti yang diperhatikan dalam Rajah 1, 3.5, dan 10.5 μ Apabila sel HepG2 dirawat dengan g/mL TG, isipadu sel secara beransur-ansur berkurangan; Dan kemudian perhatikan secara visual 21 μ Pada g/mL, nukleus mula mengecut dan isipadu menjadi lebih kecil; tiga puluh satu koma lima μ Pada g/mL, sel-sel telah disertai dengan terapung dan serpihan sel; empat puluh dua μ Pada g/mL, membran sel pecah sepenuhnya, sel mengalami lisis, nekrosis berlaku, dan sempadannya tidak jelas. Sel-sel berada dalam keadaan keruntuhan dan kematian yang akan berlaku.

2.2 Kesan TG terhadap pembiakan sel HepG2

Rajah 2 Kesan TG terhadap pembiakan sel HepG2

Nota: * mewakili sama seperti 0 μ Perbezaan adalah ketara pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Seperti yang dapat dilihat dari Rajah 2, selepas 24 jam rawatan dengan kepekatan TG yang berbeza, percambahan sel HepG2 dihadkan kepada tahap yang berbeza-beza. Berbanding dengan kadar survival sel dalam kumpulan kawalan, kadar survival sel dalam kumpulan rawatan menunjukkan trend menurun dengan peningkatan kepekatan, iaitu 96.95 peratus, 92.59 peratus, 92.78 peratus, 77.24 peratus, 31.04 peratus, dan kepekatannya ialah 3.5, 10.5, dan 21, masing-masing μ Tidak terdapat perbezaan yang signifikan dalam g/mL dan penurunan adalah kecil, manakala 31.5 peratus μ G/mL dan 42 μ Pada g/mL, terdapat perbezaan yang signifikan (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 Kesan TG pada kitaran sel HepG2

Rajah 3 Kesan kepekatan TG yang berbeza pada kitaran sel sel HepG2

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, selepas 24 jam rawatan dengan kepekatan TG yang berbeza, didapati bahawa apabila kepekatan meningkat, fasa G0/G1 secara beransur-ansur menurun, menyumbang 59.9 peratus , 56.7 peratus , 56 peratus , 54 peratus , 33.4 peratus dan 29.1 peratus , masing-masing, dengan penurunan yang ketara; Perkadaran fasa S ialah 14.3 peratus, 15.8 peratus, 16.8 peratus, 18.7 peratus, 25.1 peratus, dan 27.6 peratus, masing-masing, dengan tahap peningkatan yang berbeza-beza; 3.5-21 berbanding kumpulan kawalan (23.88 peratus ) μ Pada g/mL, fasa G2/M mempunyai sedikit perubahan, masing-masing menyumbang 25.85 peratus, 24.92 peratus dan 25.33 peratus. Apabila TG ialah 31.5 μ G/mL dan 42 μ Pada g/mL, ia meningkat dengan ketara, masing-masing 37.89 peratus dan 39.42 peratus. Ujian ini mendapati bahawa TG pada kepekatan rendah (3.5-21 μ G/mL), tidak menghalang pembahagian dan percambahan sel dengan cara utama yang mempengaruhi kitaran sel, dan pada kepekatan tinggi (31.5 μ G/mL dan 42 μ G/mL) boleh mendorong penangkapan sel dalam fasa S dan fasa G2/M, dengan itu menghalang percambahan sel. Pada masa yang sama, apabila TG ialah 31.5 μ G/mL dan 42 μ Pada g/mL, subG1 juga meningkat, yang konsisten dengan penyelidikan oleh Sun Qian et al. [19] bahawa derivatif artemisinin boleh meningkatkan puncak subG1 sel HepG2 pada kepekatan tinggi. Beliau juga mendapati bahawa dengan peningkatan kepekatan artemisinin, perkadaran sel fasa G2/M meningkat. Keputusan kitaran sel menunjukkan bahawa TG boleh menggalakkan perencatan perkembangan kitaran sel, dengan itu mendorong apoptosis sel.

2.4 Kesan TG pada penghijrahan sel HepG2

Rajah 4 Kesan kepekatan TG yang berbeza pada penghijrahan sel HepG2

Nota: * mewakili sama seperti 0 μ Perbezaan adalah ketara pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Metastasis sel kanser adalah salah satu kunci kepada rawatan kanser, dan kanser berulang juga berkait rapat dengannya. Untuk menyiasat sama ada TG boleh menghalang penghijrahan sel HepG2, kaedah calar digunakan untuk memerhatikan penghijrahan sel. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, dengan peningkatan kepekatan TG, 24-mobiliti jam secara beransur-ansur berkurangan, dan kesan perencatan yang jelas ialah. Mobiliti ialah 14.82 peratus , 13.42 peratus , 12.66 peratus , 10.11 peratus , 8.46 peratus , 7.24 peratus , 21 μ G/mL menunjukkan perbezaan yang ketara (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Kaedah pewarnaan berganda Hoechst 33342/PI untuk mengesan apoptosis

Rajah 5 Kesan kepekatan berbeza TG pada Hoechst 33342/PI dalam sel HepG2

Pewarnaan nuklear dilakukan dengan Hoechst 33342 untuk mengesan pemeluwapan kromatin [20]. Sel normal menunjukkan biru rendah, sel apoptosis menunjukkan biru tinggi / merah rendah dan sel nekrotik menunjukkan biru rendah / merah tinggi. Seperti yang dapat dilihat dari Rajah 5, berbanding dengan kumpulan kawalan, dalam kumpulan rawatan TG, kepekatan kromatin dan pemecahan nuklear diperhatikan. Pada masa yang sama, apabila TG berada pada 3.5-21, diperhatikan bahawa μ Dalam julat g/mL, pendarfluor biru meningkat secara beransur-ansur, menunjukkan bahawa TG terutamanya menghalang percambahan sel melalui apoptosis pada kepekatan rendah; Dan melebihi 21 μ Pada g/mL, pendarfluor merah meningkat, menunjukkan bahawa TG terutamanya merosakkan dan memusnahkan struktur sel untuk membunuh sel pada kepekatan yang lebih tinggi. Keputusan eksperimen ini menunjukkan bahawa rawatan dengan TG boleh menyebabkan apoptosis dan nekrosis sel HepG2.

2.6 Pewarnaan berganda Annexin V-FITC/PI untuk mengesan kesan TG pada apoptosis sel HepG2

Rajah 6 Kesan TG pada pewarnaan berganda AV/PI sel HepG2

Nota: * mewakili sama seperti 0 μ Perbezaan adalah ketara pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Untuk menentukan lebih lanjut kesan apoptosis yang mendorong TG pada sel HepG2, kami menggunakan kaedah pewarnaan ganda Annexin V-FITC/PI untuk mengotorkan sel HepG2. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6, dengan peningkatan kepekatan, kadar apoptosis menunjukkan arah aliran menaik, 0, 3.5, 21, 41 μ Kadar apoptosis g/mL ialah 5.63 peratus, 7.65 peratus, 10.93 peratus, dan 32.44 peratus , masing-masing, dalam cara yang bergantung kepada dos. Keputusan menunjukkan bahawa TG boleh mendorong apoptosis dengan memusnahkan integriti membran sel HepG2. Keputusan ini konsisten dengan hasil pewarnaan AV/PI sel HepG2 yang dibincangkan oleh Qi Xinxin et al. [6].

2.7 Kesan TG pada ekspresi protein dalam sel HepG2

Rajah 7 Ekspresi protein dalam sel HepG2 dirawat dengan kepekatan TG yang berbeza

Nota: * mewakili sama seperti 0 μ Perbezaan adalah ketara pada g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Alpha-fetoprotein (AFP) digunakan sebagai penanda serum untuk diagnosis dan ujian keberkesanan kanser hati primer [21]. Seperti yang dapat dilihat dari Rajah 7, berbanding dengan kumpulan kawalan, tahap ekspresi AFP dalam kumpulan rawatan telah menurun, menunjukkan bahawa TG boleh menghalang kejadian kanser hati sedikit sebanyak, tetapi kebarangkalian untuk membalikkan kanser hati adalah sangat kecil. . Di samping itu, Dsh - Tahap Catenin menurun secara linear dengan peningkatan kepekatan dadah; GSK-3 meningkat secara beransur-ansur, tetapi tidak mengikut cara yang bergantung kepada dos. Oleh itu, adalah spekulasi bahawa TG boleh mengawal selia Dsh - Catenin dan ekspresi Relatif GSK-3, melalui laluan isyarat klasik Wnt/ - Catenin untuk mendorong apoptosis dalam sel HepG2.

3 .Perbincangan dan Kesimpulan

Kanser hati adalah salah satu tumor malignan yang paling biasa di China dan juga berada di antara tiga penyakit teratas dengan kematian[22]. Kaedah rawatan utama untuk kanser hati termasuk pembedahan pembedahan, pemindahan hati, kemoradioterapi dan imunoterapi [23-25]. Dilaporkan bahawa pada tahun 2016, kadar kejadian kanser hati di China adalah 9.57 peratus, dan kadar kematian setinggi 13.92 peratus [26]. "Disebabkan oleh simptom tidak spesifik kanser hati awal, apabila gejala berlaku, mereka kebanyakannya berada di peringkat pertengahan dan lewat. Oleh itu, orang ramai lebih aktif menggunakan ubat tradisional Cina untuk merawat kanser hati [27]."Orang ramai percaya bahawa sebatian semula jadi mempunyai ketoksikan molekul yang paling sedikit dan telah terbukti bermanfaat untuk rawatan kanser hati, jadi mereka secara aktif menyaring sebatian semula jadi baru untuk kanser anti-hati.

Jumlah glikosida Cistanche deserticola boleh menghalang sel-sel kanser hati pada peringkat awal kanser hati

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, pelbagai kesan daripadaCistanche deserticolatelah menarik banyak perhatian dan secara beransur-ansur menjadi salah satu tempat hangat dalam pembangunan makanan sihat dan penyelidikan dadah. Eksperimen morfologi sel dan CCK-8 telah mengesahkan bahawa kepekatan TG tertentu boleh memusnahkan morfologi sel dan menghalang pertumbuhan dan percambahan sel HepG2, dan kepekatannya adalah berkadar terus dengan kadar perencatan sel.

Kitaran sel merujuk kepada keseluruhan proses yang dilalui sel dari selesai satu mitosis hingga akhir bahagian seterusnya. Ia dibahagikan kepada dua peringkat: antara fasa dan pembahagian. Sitometri aliran menggunakan pewarna pendarfluor untuk membezakan fasa G0/G1, fasa S dan fasa G2/M. Melalui pengesanan kitaran sel, didapati selepas rawatan dengan kepekatan TG yang berbeza, didapati pada kepekatan tinggi TG (31.5 μ G/mL dan 42 μ G/mL) boleh menyekat sel daripada berada dalam fasa G2/M. dan menjejaskan aktiviti sel HepG2, mengakibatkan sitotoksisiti, dengan itu menghalang pembiakan sel. Semasa perkembangan kanser, sel-sel kanser daripada tumor primer menyerang tisu normal bersebelahan, bermetastasis ke tapak yang jauh, dan membentuk koloni baru. Dianggarkan bahawa sejumlah 90 peratus kematian berkaitan kanser adalah disebabkan oleh metastasis [28]. Laluan isyarat Wnt terlibat dalam proses transformasi sel epitelium-ke-mesenchymal dan transformasi sel mesenchymal-to-epithelial untuk menggalakkan metastasis kanser. Dalam karsinoma hepatoselular (HCC), tahap tinggi - Catenin dikaitkan dengan peningkatan metastasis dan prognosis yang buruk [29]. Dalam kajian ini, didapati bahawa kadar penghijrahan sel HepG2 yang dirawat dengan TG selama 24 jam secara beransur-ansur menurun dengan peningkatan kepekatan, dalam cara yang bergantung kepada kepekatan.Ini menunjukkan bahawa TG boleh mengawal penghijrahan sel kanser dan mencegah penyebaran kanser selanjutnya, mungkin melalui pengurangan laluan isyarat Wnt - Ekspresi Catenin.Secara umum, nukleus terjejas kelihatan lebih kecil; Sesetengah kromatin tertumpu atau terkumpul di pinggir, manakala yang lain mempunyai ciri tipikal seperti pemecahan kromatin nuklear dan pembentukan badan apoptosis [30-31]. Hoechst 33342 ialah pewarna pendarfluor biru yang boleh menembusi membran sel dan mempunyai ketoksikan yang rendah kepada sel. Beberapa kajian mendapati bahawa ciri morfologi sel apoptosis, termasuk pembekuan nuklear dan pemecahan, telah diperhatikan dalam sel HepG2 yang diwarnai dengan Hoechst 33342 [32]. Dalam eksperimen ini, didapati bahawa selepas 24 jam rawatan TG, perkadaran sel dengan pembekuan kromatin dan serpihan nuklear pendarfluor meningkat dalam cara yang bergantung kepada kepekatan, yang konsisten dengan keputusan kajian oleh Yang et al. [33] pada apoptosis teraruh gingerol sel HepG2. Menggunakan kaedah pewarnaan berganda Annexin V-FITC/PI untuk mengesan sel HepG2 yang dirawat dengan TG selama 24 jam, didapati bahawakadar apoptosis sel secara beransur-ansur meningkat dengan peningkatan kepekatan.

Kepadaglikosida dari Cistanche deserticol

Dsh, - Catenin dan GSK-3 Merupakan Wnt/ - Disheveled (Dvl/Dsh) biasa ialah pengawal selia penting dalam laluan isyarat Catenin, yang merupakan protein utama dalam laluan isyarat Wnt dan boleh menghantar isyarat Wnt ke hiliran pengesan [34]. Dalam laluan isyarat Wnt klasik, Dsh dipanggil ke membran sel oleh reseptor Frizzled, yang bertindak sebagai proto-onkogen dan dikaitkan dengan faktor perencatan paksi somatik (Axin), gen adenomatous polyposis coli (APC), dan GSK. -3 Mengikat untuk membentuk kompleks degradasi yang menghalang GSK-3 ya - Degradasi fosforilasi Catenin menyebabkan - Catenin memasuki nukleus dan berfungsi [34-36]. - Catenin terutamanya dinyatakan dalam membran sel sel normal dan berkaitan dengan lekatan sel. Ia juga mengambil bahagian dalam penghantaran maklumat laluan isyarat Wnt, mengawal selia percambahan dan pembezaan sel. Apabila laluan isyarat Wnt diaktifkan secara tidak normal, - Pengagihan semula Catenin mungkin menjadi salah satu sebab berlakunya tumor [37]. Dilaporkan, ia boleh diperhatikan dalam 20 peratus - 35 peratus kes HCC [15] - Pengaktifan Catenin. Pada masa yang sama, ia juga mungkin untuk menekan Wnt by/ - Laluan isyarat Catenin mengaktifkan autophagy untuk menghalang percambahan sel HepG2 [38]. Kajian ini mendapati selepas rawatan TG, sel HepG2, Dsh - Tahap Catenin menurun secara linear dengan peningkatan kepekatan ubat; GSK-3 meningkat secara beransur-ansur, tetapi tidak mengikut cara yang bergantung kepada dos. Oleh itu, boleh disimpulkan bahawa TG melepasi laluan isyarat Wnt/ - Catenin untuk mendorong apoptosis dalam sel HepG2.

Biomarker yang paling banyak digunakan bagi kanser hati primer di seluruh dunia ialah - Alpha-fetoprotein (AFP) [39]. AFP memainkan peranan penting dalam pemantauan awal, klasifikasi patologi, pemilihan rawatan, dan prognosis pesakit dengan kanser hati primer 9. Tanpa mengira kaedah rawatan, apabila tahap AFP lebih tinggi daripada 400 ng/mL, ia akan membawa kepada kelangsungan hidup yang lemah [40]. Dengan mengesan tahap ekspresi protein AFP dalam sel yang dirawat dengan TG,didapati bahawa TG boleh mengurangkan ekspresi AFP dengan berkesan, menunjukkan bahawa TG boleh memainkan peranan dalam menghalang sel-sel kanser hati pada peringkat awal kanser hati.

teh cistanche

Secara ringkasnya,jumlah glikosida Cistanche deserticola menghalang percambahan dan pertumbuhan sel HepG2 dengan mempengaruhi perkembangan kitaran sel, memusnahkan struktur sel, menggalakkan apoptosis, dan mengehadkan penghijrahan sel.Mekanisme tindakan mungkin melalui laluan isyarat Wnt/ - Catenin, mengaktifkan GSK-3 Degradasi - Catenin boleh menghalang kanser hati, tetapi kajian lanjut diperlukan. Pada masa hadapan, pakar dan sarjana boleh meneroka dengan mendalam aplikasi Cistanche deserticola dalam Wnt/ - Molekul protein huluan dan hiliran laluan isyarat Catenin digunakan untuk mengesahkan gen sasaran dan seterusnya meneroka mekanisme tindakan jumlah glikosida Cistanche deserticola terhadap sel HepG2. Di samping itu, sebagai bahan homolog perubatan dan makanan, cistanche deserticola boleh dimakan dalam diet harian untuk menyediakan kedua-dua pencegahan dan rawatan, dan juga menyediakan asas teori tertentu untuk mengamalkan Tinjauan Makanan Hebat, mempromosikan pembinaan "China Sihat", dan meningkatkan tahap kesihatan rakyat.

[1] FENG D, HE Y, JIANG YJ, et al. Kemajuan penyelidikan mengenai fungsi anti-penuaan Cistanches[J]. Jurnal Keselamatan & Kualiti Makanan, 2021, 12(11): 4429-4437.

[2] Ma G, Chen J, Wei T, et al. Menghalang peranan FOXA2 dalam penghijrahan dan pencerobohan sel kanser hati dengan menekan secara transkripsi microRNA103a-3p dan mengaktifkan paksi GREM2/LATS2/YAP[J]. Sitoteknologi. 2021, 73:523-537.

[3] LI MQ, WANG K, ZHOU X. Perencatan Peptida Kacang Hijau pada Pembiakan dalam Sel HepG2[J]. Jurnal Institut Sains dan Teknologi Makanan China, 2018, 18(10): 52-57.

[4] HU Y, WANG S, WU X, et al. Sebatian yang berasal dari ubat herba Cina untuk terapi kanser: tumpuan pada karsinoma hepatoselular [J]. J Ethnopharmacol. 2013, 149(3):601-612. doi:10.1016/j.jep.2013.07.030.

[5] YE Y, SONG Y, ZHUANG J, et al. Kesan antikanser echinacoside dalam model tikus karsinoma hepatoselular dan sel HepG2 [J]. J Sel Fisiol. 2019, 234(2): 1880-1888. doi:10.1002/jcp.27063

[6] QI XX, ANDA SP, HE ZX, et al. Kesan Cistanche deserticola phenylethanol glycoside pada percambahan dan apoptosis sel HepG2 secara in vitro[J]. Jurnal Universiti Perubatan Xinjiang, 2021, 44(09): 1041-1047.

[7] XIE YT. Kesan Echniacoside pada 786-Apoptosis Sel O dan Mekanisme Induktif dalam Vitro[D]. Maktab Perguruan Baotou, 2020.

[8] HAN YM, JIN WM, ZENG H, et al, Kesan Echniacoside pada Percambahan, Pencerobohan dan Metastasis Sel Kanser Kolon SW480 dalam Vitro dan dalam Vivo[J]. Jurnal Universiti Perubatan Cina Tradisional Guangzhou, 2020,37(08):1542-1549.

[9] HU Q, ANDA SP, LIU T, et al. Penyiasatan mengenai kesan kanser anti-hati cistanche[J]. Karsinogenesis, Teratogenesis & Mutagenesis, 2018,30(03):194-199.

[10] XU Q, QIN W, WU FZ, et al. Kesan rebusan Roucongrong(Herba Cistanches Deserticolae) pada substantia nigra melalui laluan isyarat Wnt/ -catenin pada tikus dengan penyakit Parkinson yang disebabkan oleh 6-hidroksidopamin hidroklorida[ J].Jurnal Perubatan Tradisional Cina,2021,41(05):762-770.

[11] YIN SL, WANG HB, YANG S. Kesan Neuroprotektif Polisakarida Cistanche Deserticola pada Tikus Parkinson Disebabkan oleh 6-HODA Disebabkan oleh Mengaktifkan Laluan Isyarat Wntt/ -catenin[J]. 10 Jurnal Perubatan Integratif Cina tentang Penyakit Kardio-Serebrovaskular, 2020,18(08):1227-1230.

[12] TANG C H. Echinacoside menghalang sel kanser payudara dengan menekan laluan isyarat Wnt/ -catenin[D]. Universiti Perubatan Chongqing, 2020.

[13] FENG L, MA QL, SHI L, et al. Echinacein menghalang percambahan sel leukemia myeloid akut dengan menekan isyarat SOX4/Wnt/beta-Catenin[J]. Jurnal Imunologi, 2020,36(02):138-142.

[14] Clevers H, et al. Isyarat Wnt/ -catenin dan penyakit[J]. sel. 2012, 149(6):1192-205.

[15] Russell JO, Monga SP. Isyarat Wnt/ -Catenin dalam Perkembangan Hati, Homeostasis dan Patobiologi[J]. Annu Rev Pathol. 2018, 13: 351-378. doi:10.1146/annurev-pathol-020117-044010

[16] LIU CY, CHEN KF, CHEN PJ. Rawatan Kanser Hati[J]. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015, 5(9):a021535.

[17] WANG F, LI R, TU P, et al. Jumlah Glikosida Cistanche deserticola Menggalakkan Pemulihan Fungsi Neurologi dengan Mendorong Penjanaan Semula Neurovaskular melalui Laluan Nrf-2/Keap-1 dalam Tikus MCAO/R. Frontiers dalam farmakologi 2020, 11, 236.

[18] LAGU QJ. Kesan perencatan ekstrak Buah Akebia pada Lekatan, Migrasi dan Pencerobohan Sel Hepatoma HepG2 Manusia dan Mekanisme Berkaitan[D]. Universiti Perubatan Tradisional Cina Shanghai, 2019.

[19] SUN Q, WANG J, LI Y, et al. Sintesis dan penilaian aktiviti sitotoksik derivatif artemisinin[J]. Chem Biol Drug Des. 2017, 90(5): 1019-1028.

[20] ZHAO YM, SUN LN, ZHOU HY, et al. Saluran kalium yang bergantung kepada voltan terlibat dalam apoptosis yang disebabkan oleh glutamat neuron hippocampal tikus [J]. Neurosci Lett. 2006, 398(1-2):22-27.

[21] GALLE PR, FOERSTER F, KUDO M, et al. Biologi dan kepentingan alpha-fetoprotein dalam karsinoma hepatoselluar [J]. Liver Int, 2019, 39(12): 2214-2229.

[22] MA G, CHEN J, WEI T, et al. Menghalang peranan FOXA2 dalam penghijrahan dan pencerobohan sel kanser hati dengan menekan secara transkripsi mikroRNA-103a-3p dan mengaktifkan paksi GREM2/LATS2/YAP[J]. Sitoteknologi. 2021, 73(4): 523-537.

[23] KAMARAJAH SK, FRANKEL TL, SONNENDAY C, et al. Penilaian kritikal sistem pementasan American Joint Commission on Cancer (AJCC) edisi ke-8 untuk pesakit dengan Karsinoma Hepatoselular (HCC): Analisis Surveillance, Epidemiology, End Results (SEER)[J]. J Surg Oncol. 2018, 117(4):644-650.

[24] EDGE SB, COMPTON CC. Jawatankuasa Bersama Amerika mengenai Kanser: edisi ke-7 manual pementasan kanser AJCC dan masa depan TNM[J]. Ann Surg Oncol. 2010, 17(6):1471-1474.

[25] VAUTHEY JN, LAUWERS GY, ESNAOLA NF, et al. Peringkat dipermudahkan untuk karsinoma hepatoselular[J]. Jurnal onkologi klinikal : jurnal rasmi Persatuan Onkologi Klinikal Amerika. 2002, 20(6): 1527-36.

[26] ZHENG R, ZHANG S, ZENG H, et al. Insiden dan kematian kanser di China, 2016. Jurnal Pusat Kanser Kebangsaan, 2022, 2(1), 1–9.

[27] ANWANWAN D, SINGH SK, SINGH S, et al. Cabaran dalam kanser hati dan pendekatan rawatan yang mungkin [J]. Biochim Biophys Acta Rev Kanser. 2020, 1873(1): 188314.

[28] CHAFFER CL, WEINBERG RA. Perspektif mengenai metastasis sel kanser[J]. Sains, 2011, 331(6024): 1559-1564.

[29] ZHONG Z, YU J, VIRSHUP DM, et al. Wnts dan ciri-ciri kanser[J]. Metastasis Kanser Rev 2020, 39: 625–645.

[30] SYAM S, ABDUL AB, SUKARI MA, et al. Kesan penindasan pertumbuhan girinimbine pada HepG2 melibatkan induksi apoptosis dan penangkapan kitaran sel [J]. Molekul. 2011, 16(8):7155-7170.

[31] ZHANG X, LUO W, ZHAO W, et al. Apoptosis Terinduksi Isocryptotanshinone dan Isyarat MAPK Diaktifkan dalam Sel MCF-7 Kanser Payudara Manusia[J]. J Kanser Payudara. 2015, 18(2):112-118.

[32] Ponselvi Induja M, Ezhilarasan D, Ashok Vardhan N. Evolvulus alsinoides ekstrak metanol mencetuskan apoptosis dalam sel HepG2[J]. Avicenna J Phytomed. 2018, 8(6): 504-512.11

[33] YANG G, WANG SP, ZHONG LF, et al. 6-Gingerol menginduksi apoptosis melalui paksi lisosom-mitokondrial dalam sel G2 hepatoma manusia[J]. Phytother Res. 2012, 26(11):1667-1673. doi:10.1002/ptr.4632

[34]  LI J, GUO G, PEMINAT YM, et al. Disheveled menggalakkan percambahan glioma: Kajian eksperimen [J]. Pemulihan & Klinik Cina, 2021, 21(18): 3077-3080.

[35] Fiedler M, Mendoza-Topaz C, Rutherford TJ, Mieszczanek J, Bienz M. Disheveled berinteraksi dengan antara muka pempolimeran domain DIX Axin untuk mengganggu fungsinya dalam -catenin[J]. Proc Natl Acad Sci US A. 2011;108(5):1937-1942. doi:10.1073/pnas.1017063108.

[36]  SHI QQ, ZUO GW, FENG ZQ, et al. Kajian tentang kesan anti-hepatoma ginsenoside Rh2 dan mekanisme degradasi -catenin melalui pengaktifan GSK-3 [J]. Ubat Tradisional dan Herba Cina, 2016,47(18):3231-3238.

[37] HE S, TANG S. WNT/ -catenin memberi isyarat dalam perkembangan kanser hati[J]. Biomed Pharmacother. 2020, 132: 110851.

[38] HU P, CHENG B, HE Y, et al. Autophagy menyekat pembiakan sel HepG2 melalui menghalang isyarat glypican-3/wnt/ -catenin[J]. Sasaran Onco Di sana. 2018;11:193-200.

[39] GAO YX, YANG TW, YIN JM,et al. Kemajuan dan prospek biomarker dalam kanser hati primer (Semakan)[J]. Int J Oncol. 2020, 57(1): 54-66.

[40] Tangkijvanich P, Anukulkarnkusol N, Suwangool P, et al. Ciri-ciri klinikal dan prognosis karsinoma hepatoselular: analisis berdasarkan tahap alpha-fetoprotein serum [J]. J Clin Gastroenterol. 2000, 31(4):302-308.

[41] FENG D, DUAN H, LYU YN, et al. Penggunaan Cistanche Deserticola Ma dalam Makanan Berfungsi di China[J]. Sains dan Teknologi Makanan, 2021,46(12):76-81.