Kesan Empat Ekstrak Herba Cina Pada Sel Karsinoma Paru-paru Sel Kecil yang Sensitif Ubat Dan Multidrug
Feb 19, 2022
David SadavaJulie Ahn Mei Zhan Mei-Lin PangJane DingSusan E. Kane
Tujuan Abstrak:Kami meneliti farmakologi, biologi sel, dan biologi molekul sel karsinoma paru-paru sel kecil yang dirawat dengan empat ekstrakubat herba cina. Ramai pesakit kanser mengambil ubat ini, tetapi kesannya pada tahap selular sebahagian besarnya tidak diketahui. Kami amat berminat dengan kesan ke atas sel tahan dadah, kerana rintangan adalah masalah klinikal yang ketara dalamkanser paru-parur. Kaedah: Sensitif dadah (H69), tahan berbilang ubat (H69VP) dan sel epitelium paru-paru normal (BEAS-2) telah terdedah kepada ekstrak daripada dua tumbuhan yang digunakan dalam perubatan herba Cina untukkanser paru-paru: Glycyrrhiza glabra (GLYC) dan Olenandria diffusa (OLEN), dan kepada ekstrak dua kombinasi yang tersedia secara komersialubat herba cina, SPES (15 herba) dan PC-SPES (8 herba). Sitotoksisiti diukur dari segi perencatan pertumbuhan sel (IC50). Kinetik pemecahan DNA selepas pendedahan kepada ekstrak herba diukur dengan pelabelan BudR diikuti oleh ELISA. Apoptosis diukur dengan ujian TUNEL diikuti oleh sitometri aliran. Ungkapan gen berkaitan apoptosis dan kitaran sel diukur dengan transkripsi terbalik mRNA diikuti oleh hibridisasi penapis kepada susunan probe dan pengesanan oleh chemiluminescence. Keputusan: Dalam setiap kes, empat ekstrak herba adalah sama-sama sitotoksik kepada H69 dan H69VP dan kurang sitotoksik kepada BEAS-2. Keempat-empat ekstrak menyebabkan pemecahan DNA dalam sel karsinoma paru-paru. Kinetik menunjukkan serpihan DNA yang dilepaskan ke medium (petunjuk nekrosis) dalam kultur terdedah GLYC, tetapi di dalam sel (petunjuk apoptosis) dalam kultur terdedah OLEN-, SPES- dan PC-SPES. Analisis TUNEL mengesahkan bahawa pendedahan kepada tiga ekstrak terakhir, tetapi tidak kepada GLYC, membawa kepada apoptosis. Berbanding dengan sel yang tidak dirawat dan dirawat GLYC, sel H69 dan H69VP yang dirawat dengan OLEN, SPES dan PC-SPES menunjukkan ekspresi tinggi beberapa gen yang terlibat dalam lata apoptosis, serupa dengan sel yang dirawat dengan etoposide dan vincristine.
Kesimpulan:Thejamu cinaekstrak OLEN, SPES dan PC-SPES adalah sitotoksik kepada kedua-dua tahan dadah dan sensitif dadahkanser paru-parusel, menunjukkan beberapa kekhususan sel tumor berbanding dengan kesannya pada sel normal, dan bersifat proapoptotik seperti yang diukur oleh pecahan DNA dan ekspresi gen. Tindak balas sel tumor terhadap ekstrak ini adalah serupa dengan tindak balas mereka terhadap ubat kemoterapi konvensional.
Cistanche, yang berhargajamu cina, mempunyai kesan meningkatkan imuniti dankanser paru-paru. Cistanche mempunyai sejarah penggunaan perubatan yang panjang. Ia pertama kali direkodkan dalam "Shen Nong's Materia Medica". Shennong merasai semua jenis herba. Keberkesanan dan peranan Cistanche adalah penting dalam mencergaskan buah pinggang dan intipati berkhasiat, melegakan keletihan, melembabkan usus dan membuang air besar, menyuburkan yang dan menyuburkan yin, dan lain-lain, jadi ia direkodkan dalam buku. Semasa zaman Dinasti Tang, Cistanche telah disenaraikan sebagai salah satu daripada sembilan jenis rumput dongeng Cina. Penyelidikan moden mengenainya telah dijalankan selama lebih daripada 60 tahun. , Anti-penuaan, membantu meningkatkan daya ingatan dan imuniti, dsb.
Kata kunci:Kanser paru-paru, Rintangan dadah,ubat herba cina,cistanche
Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com
pengenalan
Sel kecilkanser paru-paru(SCLC) menyumbang kira-kira 20 peratus daripada semuabarah paru-parudan agresif, dengan 5-kadar survival tahun pada diagnosis kurang daripada 10 peratus [19]. Pesakit lazimnya menghidapi penyakit disebarkan, dan rawatan adalah melalui kemoterapi, dengan kombinasi yang lazimnya melibatkan cisplatin, etoposide, doxorubicin, 5-uorouracil, dan taxol [12]. Malangnya, rawatan ini akhirnya menjadi tidak berkesan kerana kebanyakan tumor SCLC membina rintangan multidrug [18]. Memandangkan terdapat banyak mekanisme rintangan [15], mengatasi rintangan adalah cabaran klinikal utama.
Menghadapi penjagaan paliatif, ramai pesakit kanser menggunakan ubat alternatif, termasuk terapi herba [6, 23]. Di antara terapi-terapi ini, perubatan tradisional Cina mungkin yang terbaik ditubuhkan dan dikodifikasikan, sejak beberapa ribu tahun dahulu. Asas teori sistem perubatan ini menyangkut kuasa lawan yin dan yang, kitaran generatif dan pemusnah, dan daya hidup, atau qi [2]. Ekstrak herba khusus, dan gabungan, telah direka untuk merawat penyakit tertentu termasuk kanser [11, 27]. Walaupun terdapat beberapa bukti empirikal bahawa herba itu berkesan dalam merawat kanser, mekanisme tindakannya di peringkat selular sebahagian besarnya tidak diketahui. Ini mengambil kepentingan tambahan jika pesakit menggabungkan penggunaannya dengan kemoterapi konvensional. Selain itu, kesan ekstrak herba terhadap rintangan dadah belum dilaporkan.
Kami menyiasat kesan empatubat herba cinapada tiga garisan sel: SCLC, SCLC tahan multidrug, dan epitelium paru-paru normal. Dua daripada empat ekstrak adalah daripada tumbuhan tunggal yang sering ditetapkan untuk kanser paru-paru, Glycyrrhiza glabra (GLYC) dan Olenandria diffusa (OLEN). Dua lagi adalah daripada gabungan herba yang boleh didapati secara komersil dipanggil SPES dan PC- SPES. OLEN (nama Cina Bai Hua she cao) mempunyai aktiviti antitumor, antimutagenik, dan imunostimulasi [1, 25, 29]. GLYC (nama Cina gan kereta) adalah anti-radang, antitumorigenik, dan antimutagenik [7, 11]. SPES, dibangunkan oleh BotanicLabs (Brea, Calif.), adalah dalam bentuk kapsul yang mengandungi ekstrak lyophilized daripada 15 herba Cina dan telah ditunjukkan untuk mengurangkan kesakitan pada pesakit dengan kanser lanjutan [14]. Antara herba dalam SPES ialah perangsang imunCistanchedeserticola, agen antitumor Rabdosia rubescens, dan agen anti-radang Zanthoxylum iridium [1, 11]. PC- SPES, juga disediakan oleh BotanicLabs, mengandungi lapan herba, termasuk Serenoa repens antiandrogenik yang menghalang hiperplasia prostat [21], perencat protein kinase C Scutellaria baicalensis [13], agen antitumor Panax ginseng [30], dan Glycyrrhiza glabra ( lihat di atas). Walaupun bukti kukuh untuk keberkesanan antitumor klinikal GLYC, OLEN, dan SPES kurang, terdapat beberapa bukti untuk keberkesanan PC-SPES. Dalam kedua-dua sel kanser prostat dan model haiwan, PC-SPES adalah proapoptotik dan sitotoksik [8, 9, 10, 28]. Ujian klinikal telah menunjukkan bahawa ia adalah berkesan dalam menurunkan tahap antigen spesifik prostat dan dalam menghentikan pertumbuhan tumor dalam kedua-dua kanser prostat yang bergantung kepada androgen dan androgen [4, 5, 17, 20, 26].
Walaupun pesakit kanser pasti menggunakan ekstrak herba, terdapat sedikit data praklinikal atau klinikal mengenai kesan ekstrak ini pada SCLC. Matlamat kami adalah untuk memulakan analisis ini dengan pemeriksaan farmakologi (sitotoksisiti), biologi sel (kaedah kematian sel), dan biologi molekul (ekspresi gen) dalam sel SCLC yang sensitif dadah dan tahan dadah.
Bahan dan kaedah
Ekstrak dan bahan kimia
GLYC dan OLEN diperoleh sebagai tumbuhan kering daripada Jen-On Medical Group (Monterey Park, Calif.). Untuk penyediaan ekstrak, 0.5 g dikisar hingga menjadi serbuk halus dengan mortar dan alu dan digantung dalam 30 ml air suling. Dalam perubatan Cina, ekstrak tumbuhan dimakan sebagai teh selepas dipanaskan. Oleh itu, penggantungan diinkubasi dengan goncangan pada 70 darjah selama 18 jam. Selepas sentrifugasi pada 1500 g selama 10 minit, supernatan telah disterilkan dengan menapis melalui penapis 0.45-lm menggunakan picagari. Ekstrak yang terhasil diselaraskan dengan air suling kepada 17 mg/ml berdasarkan bahan tumbuhan asal. Ekstrak disimpan pada suhu 4 darjah sehingga 1 minggu sehingga digunakan.
SPES dan PC-SPES diperoleh daripada BotanicLabs (Brea, Calif.) sebagai kapsul. Kaedah pengekstrakan yang digunakan telah digunakan dalam kajian terdahulu mengenai persediaan ini [8, 9, 10]. Kandungan satu kapsul (320 mg) telah dilarutkan dalam 1 ml 95 peratus etanol dan ampaian diinkubasi dengan goncangan pada 37 darjah selama 1 jam. Selepas sentrifugasi pada 3000 g selama 10 minit, supernatan ditapis-disterilkan seperti di atas. Kepekatan akhir ialah 300 mg/ml berdasarkan bahan tumbuhan asal. Ekstrak disimpan pada -20 darjah sehingga 1 minggu sehingga digunakan.
Kultur sel dan pengukuran sitotoksisiti
Sel NCI-H69 SCLC telah ditanam pada 37 darjah dalam suasana yang mengandungi 5 peratus CO2 sebagai penggantungan dalam medium bebas serum AIM-V (Life Technologies, Grand Island, NY). Barisan sel tahan multidrug (H69VP) yang dipilih dalam etoposide [16] juga ditanam dalam AIM-V dan menunjukkan rintangan silang kepada etoposide (9-kali ganda), doxorubicin (20- kali ganda), dan vincristine (10-lipat) (data tidak ditunjukkan). Sel-sel ini mempunyai pelbagai mekanisme rintangan dadah, termasuk perubahan dalam topoisomerase II dan ekspresi pam membran, MDR1 dan MRP. BEAS{16}} sel epitelium paru-paru normal [22] telah ditanam dalam DMEM-F12 ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin.
Untuk ujian sitotoksisiti, ekstrak telah ditambah seperti yang ditunjukkan kepada sel yang tumbuh secara logaritma dalam kultur 1-ml yang mengandungi 6000 sel/ ml. Selepas 4 hari pendedahan berterusan, sel telah dikira dalam kaunter Coulter Z-1. Kiraan telah disahkan secara mikroskopik oleh hemocytometer selepas pewarnaan dengan biru trypan. Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda dan diulang sekurang-kurangnya tiga kali. Nilai IC50, yang ditakrifkan sebagai kepekatan ekstrak yang telah mengurangkan bilangan sel pada hari ke-4 sebanyak 50 peratus, telah dikira berbanding dengan kawalan pelarut. Nilai min telah dikira dan dibandingkan dengan ANOVA untuk tiga baris sel untuk ekstrak tersebut.
Ujian kematian sel
Mekanisme sitotoksisiti telah disiasat oleh kinetik pemecahan DNA selular (kit Boehringer-Mannheim, Indianapolis, Ind.). Secara ringkas, 5·105 sel/ml telah diinkubasi selama 16 jam pada suhu 37 darjah dalam atmosfera yang mengandungi 5 peratus CO2 dalam medium AIM-V yang mengandungi 10 lM BudR. Sel-sel telah dibasuh dan digantung semula pada 105/ml dalam medium bebas BudR, dan 200 ll kultur ini diinkubasi dengan ekstrak herba pada 2·IC50 untuk masa yang dinyatakan, selepas itu 100 ll medium kultur telah dikeluarkan untuk kuantiti DNA. serpihan oleh ELISA. Ini adalah ukuran nekrosis sel. Serpihan DNA dalam sel, yang dihasilkan oleh apoptosis, diukur berikutan lisis sel dalam albumin serum lembu (BSA) / Tween 20 pada 21 darjah selama 30 minit. Selepas sentrifugasi, lisat digunakan untuk ELISA.
ELISA dilakukan dalam plat mikrotiter bawah bulat yang disalut dengan antibodi anti-DNA (monoklonal DNA anti-manusia tikus, klon MCA-33) semalaman pada 4 darjah . Berikutan penyekatan dengan BSA, larutan serpihan DNA berlabel 100 ll telah ditambahkan pada telaga bersalut diikuti dengan pengeraman selama 90 minit pada 21 darjah . DNA telah dibetulkan dan didenaturasikan oleh penyinaran gelombang mikro pada 500 W selama 5 minit. Tetikus anti-BudR (tikus monoklonal BMG 6HB) berkonjugasi dengan peroksidase telah ditambah dan, selepas pengeraman dalam gelap selama 120 minit pada 21 darjah, tindak balas dihentikan dengan penambahan 500 ll pekat H2SO4. Warna yang terhasil dikira dengan penyerapan pada 450 nm. Sampel yang dirawat ekstrak dibandingkan dengan kawalan yang tidak dirawat sebagai latar belakang.
Apoptosis telah disahkan oleh analisis TUNEL. Sel yang tumbuh secara logaritma terdedah kepada ekstrak herba pada 1·IC50 selama 3 jam. Ia kemudiannya dibasuh dua kali dalam salin terbina fosfat (PBS) yang mengandungi 1 peratus BSA dan digantung semula dalam PBS/BSA pada 5·105 sel/ml. Kepada 500 ll sel, 100 ll 4 peratus paraformaldehyde telah ditambah dan sel-sel itu diikat pada 21 darjah selama 1 jam. Selepas mencuci dalam PBS, sel telah digantung semula dalam 100 ll penimbal permeabilisasi sejuk (0.1 peratus Triton X-100, 0.1 peratus natrium sitrat) selama 2 minit pada 4 darjah . Sel-sel telah dibasuh dua kali dalam PBS dan kemudian digantung semula dalam campuran TUNEL 50 ll yang mengandungi terminal deoxyribonucleotide-idyl transferase (TdT) dan fluorescein-dUTP (kit Boehringer-Mannheim). Selepas pengeraman dalam gelap pada 37 darjah selama 1 jam, sel-sel telah diwarnai balas dengan propidium iodide dan dianalisis oleh sitometri aliran.
Analisis ekspresi gen
Kultur (6 ml) sel yang tumbuh secara logaritma (5·105 sel/ml) diinkubasi dalam medium yang mengandungi ekstrak herba pada 1·IC50 pada 37 darjah dalam atmosfera yang mengandungi 5 peratus CO2 selama 3 jam. Selepas mencuci dua kali dalam PBS, pelet sel dibekukan pada -70 darjah semalaman. RNA telah diasingkan oleh protokol RNeasy Mini (Qiagen, Valencia, Calif.). Secara amnya, kaedah ini menghasilkan 0.5 LG RNA. Jumlah RNA ini ditranskripsikan secara terbalik kepada cDNA dan dilabelkan dengan biotin-dUTP, dan dihibridkan kepada probe denaturasi kepada gen berkaitan apoptosis dan kitaran sel pada penapis. Hibridisasi dikesan dengan mengikat alkali fosfatase-streptavidin kepada cDNA menggunakan substrat chemiluminescent, CDP-Star (SuperAr- ray, Bethesda, Md.), diikuti dengan pendedahan kepada filem sinar-X, secara amnya selama 1-2 min.
Sasaran gen kawalan pada setiap penapis termasuk b-actin dan GAP-DH sebagai kawalan positif, dan pUC18 sebagai kawalan negatif. Gen berkaitan kitaran sel dan apoptosis berikut ialah sasaran hibridisasi: buruk, bcl-2, BCL-w, BCL-x, caspases 1–10, c-myc, E2F, fas, ligan fas, gadd45, iNOS , mdm2, NFkB, p21Waf1, p53, pig7, pig8, Rb, DR5, jejak, Casper, CRADD, DAXX, IAP-1, IAP-2, NIK, TNFR2, TRAF2, TRAF3, TRAF5 dan DR5. Keamatanpenghibridan telah dijaringkan secara visual bersamaan titik pendua pada penapis berhubung dengan kawalan positif.
Keputusan
Eksperimen awal kami menguji sitotoksisiti ekstrak herba Cina pada sel SCLC yang sensitif dadah dan tahan dadah, serta sel epitelium paru-paru biasa. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1, empat ekstrak herba adalah sitotoksik pada kepekatan rendah. Penemuan ini serupa dengan yang ditemui untuk SPES dan PC-SPES dalam sel tumor lain [8]. Dalam setiap kes, nilai IC50 untuk sel tahan pelbagai ubat (H69VP) tidak berbeza daripada nilai untuk sel sensitif dadah (H69). Juga, nilai IC50 untuk sel epitelium paru-paru normal adalah lebih tinggi daripada nilai untuk sel-sel sel tumor.
Kami kemudian menyiasat mekanisme sitotoksisiti menggunakan kinetik pemecahan DNA sebagai petunjuk apoptosis (serpihan perlahan-lahan terbentuk dalam sel) atau nekrosis (serpihan cepat terbentuk dan dibebaskan daripada sel yang rosak). Sel telah diinkubasi dalam ekstrak herba selama antara 30 minit dan 8 jam, dan kemudian serpihan DNA dianggarkan oleh ELISA dalam kedua-dua medium kultur dan lisat sel. Rajah 1 menunjukkan data perwakilan untuk sel H69 yang terdedah kepada empat ekstrak selama 90 minit. Dengan tiga daripada ekstrak (SPES, PC-SPES, OLEN), kebanyakan serpihan DNA datang dari dalam sel (lisat), yang menunjukkan apoptosis. Walau bagaimanapun, dengan GLYC, serpihan dilepaskan ke medium daripada sel yang rosak, menunjukkan nekrosis. Keputusan yang sama diperoleh dengan H69VPcells (data tidak ditunjukkan).
Eksperimen sitotoksisiti ini diikuti oleh ujian TUNEL tentang pecahan DNA di situ. Berbanding dengan kawalan yang tidak dirawat (1–3 peratus sel apoptosis dalam empat eksperimen), sel SCLC yang dirawat dengan SPES (58–85 peratus ), PC-SPES (63–77 peratus) dan OLEN (49–81 peratus) menunjukkan positif TUNEL, manakala sel yang dirawat dengan GLYC tidak (1–2 peratus ) (Rajah 2). Keputusan yang sama diperoleh dengan sel H69VP (data tidak ditunjukkan).
Kami menganalisis transkripsi gen sebagai tindak balas kepada ekstrak herba menggunakan GeneArrays. Tatasusunan ini mempunyai gen yang disusun bersama-sama yang berkaitan dengan kitaran sel dan apoptosis. Kami melakukan eksperimen ini dua kali dengan hasil yang serupa. Rajah 3 menunjukkan gambar rajah arrayautora wakil sel H69 yang terdedah kepada etoposide atau SPES. Keputusan kami untuk sel H69 diringkaskan dalam Jadual 2. Walaupun kawalan yang tidak dirawat mempunyai ekspresi yang dapat dikesan hanya beberapa gen yang dikaji, sel yang dirawat dengan ubat kemoterapi konvensional (etoposide dan vincristine) menunjukkan isyarat kuat untuk beberapa gen yang terlibat dalam kitaran sel peraturan dan apoptosis. Sel yang dirawat dengan OLEN, SPES dan PC-SPES menunjukkan corak yang serupa dengan yang diperoleh dengan kedua-dua ubat tersebut. Secara umum, sel yang dirawat dengan GLYC nampaknya tidak menunjukkan corak transkripsi ini dan sebaliknya menunjukkan ekspresi gen antiapoptosis yang kuat, BCL-2.
Perbincangan
Kami menjalankan kajian ini atas dua sebab. Pertama, terdapat tradisi kuno perubatan herba Cina yang berdasarkan teori dan falsafahnya sendiri [2], dan kami ingin mula memahami dalam istilah perubatan Barat kesan ubat herba. Herba ini digunakan sebagai campuran, dan walaupun terdapat beberapa kemajuan dalam memecahkannya kepada juzuk kimia individu[11], kajian kami memberi tumpuan kepada mereka kerana ia digunakan dalam amalan tradisional. Motivasi kedua kami ialah ramai pesakit kanser menggunakan herba ini bersama-sama dengan rawatan konvensional [6, 23], dan memahami kesan selular herba boleh memberikan maklumat penting untuk membuat keputusan klinikal.
Data sitotoksisiti (Jadual 1) menunjukkan bahawa empat ekstrak herba sememangnya sitotoksik kepada sel tumor, lebih-lebih lagi berdasarkan dos berbanding sel epitelium paru-paru biasa, menunjukkan beberapa kekhususan tumor dan mungkin indeks terapeutik yang menggalakkan. Persamaan dalam IC50 antara sel sensitif dadah dan tahan multidrug menunjukkan bahawa ekstrak ini tidak dipengaruhi oleh mekanisme rintangan dadah yang dipaparkan dalam sel H69VP, termasuk ekspresi berlebihan dua pengangkut ubat, MDR1 dan MRP.
Kinetik pemecahan DNA menunjukkan bahawa ekstrak SPES, PC-SPES, dan OLEN adalah proapoptotik, manakala GLYC adalah pron erotik (Rajah 1). Ini disahkan oleh pewarnaan TUNEL in situ (Rajah 2). Kebanyakan ubat kemoterapi konvensional adalah proapoptotik [3], dan sekumpulan gen pengawalseliaan kitaran apoptosis dan sel dikawal dalam sel sebagai tindak balas kepada ubat [24]. Kami mendapati bahawa corak ekspresi beberapa gen yang dinyatakan sebagai tindak balas kepada tiga aplikasi pro kepada ekstrak herba adalah serupa dengan yang diperhatikan dalam sel-sel ini selepas terdedah kepada ubat kemoterapi konvensional (Rajah 3, Jadual 2). Tindak balas terhadap GLYC sahaja nampaknya berbeza, sekurang-kurangnya pada titik masa yang dianalisis dalam eksperimen ini. Menariknya, GLYC adalah sebahagian daripada SPES PC, yang bersifat proapoptotik, manakala GLYC sahaja tidak. Mungkin komponen lain PC-SPES bertanggungjawab untuk aktiviti proapoptotiknya. Walaupun keputusan ini tidak menunjukkan bagaimana ekstrak herba merosakkan sel, mereka mencadangkan bahawa sel H69 bertindak balas terhadap kerosakan pada tahap molekul (transkripsi) dan selular (apoptosis) dengan cara yang serupa dengan tindak balas mereka terhadap kemoterapi.
Kajian kami menunjukkan potensi kegunaan ekstrak herba Cina ini dalam rawatan SCLC, terutamanya penyakit tahan dadah.
Ucapan terima kasihKami berterima kasih kepada L. Brown untuk bantuan yang tidak ternilai dengan rakan sitometri dan R. Lingeman untuk bantuan dengan protokol biologi molekul. Sel BEAS-2 banyak dibekalkan oleh Dr. I. Laird-Offringa, Universiti SouthernCalifornia, Pusat Kanser Norris. SPES dan PC-SPES ialah hadiah daripada Dr. S. Chen, Kolej Perubatan New York. Penyelidikan ini disokong oleh Yayasan Keluarga Pritzker dan WM KeckFoundation.
Rujukan
1. Boik J (1996) Kanser dan perubatan semulajadi: buku teks sains asas dan penyelidikan klinikal. Oregon Medical Press, Princeton, hlm 221
2. Chan K (1995) Kemajuan dalam perubatan tradisional Cina. Trend Pharmacol Sci 16:182–187
3. Chu E, DeVita V Jr (2001) Prinsip pengurusan kanser: kemoterapi. Dalam: DeVita V Jr, Hellman S, Rosenberg SA (eds) Kanser: prinsip dan amalan onkologi. Lippincott Williams dan Wilkins, Philadelphia, ms 289–306
4. De la Taille A, Hayek OR, Buttyan R, Bagiella E, Burchart M, Katz AE (1999) Kesan agen fitoterapeutik, PC-SPES, pada kanser prostat. BJU Int 84:845–850
5. DiPaola RS, Zhang H, Lambert G, Meeker R, Licitra E, Rafi M, Spaulding H, Goodin S, Toledano M, Gallo M (1998) Aktiviti klinikal dan biologi gabungan herba estrogenik (PC-SPES) dalam prostat barah. New Engl J Med 339:785–791
6. Eisenberg DM, Davis RB, Ettner SL (1998) Trend penggunaan perubatan alternatif di AS: 1990–1997: hasil tinjauan nasional susulan. JAMA 280:1569–1575
7. Fenwick GR, Lutomski J, Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: komposisi, kegunaan dan analisis. Kimia Makanan 38:119–143
8. Halicka HD, Ardelt B, Juan G, Mittleman A, Chen S, Traganos F, Darzynkiewicz Z (1997) Apoptosis dan kesan kitaran sel yang disebabkan oleh ekstrak penyediaan herba Cina PC-SPES. Int J Oncol 11:437–448
9. Hsieh T, Chen SS, Wang X, Wu J (1997) Peraturan reseptor androgen dan ekspresi antigen khusus prostat dalam LNCaPcells prostat manusia yang responsif androgen oleh ekstrak etanol penyediaan herba Cina PC-SPES. Biochem Mol Biol Int 42:535–544
10. Hsieh T, Ng C, Chang, C, Chen SS, Mittleman, A, Wu J (1998) Induksi apoptosis dan pengawalan menurun BCL-6 dalam sel Mutu yang dirawat dengan ekstrak etanol suplemen herba Cina PC-SPES. Int J Oncol 13:1199–1202
11. Huang KC (1999) Farmakologi herba Cina, 2ndedn. CRC Press, Boca Raton
12. Kalemkerian GP, Worden FP (2000) Kemajuan terapeutik dalam SCLC. Pakar Opin Invest Drugs 9:65–79
13. Kimura Y, Okuda H, Yokio K, Matsushita N (1997) Kesan baicalein yang diasingkan daripada Scutellaria baicalensis pada interleukin 1b-dan TNF-induced tissue plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1 pengeluaran dalam sel umbilical vein endothelial kultur . Phytother Res 11:363–367
14. Lin C (1996) Pemerhatian terhadap gabungan penggunaan kemoterapi dan perubatan tradisional Cina untuk melegakan kesakitan kanser. J Tradit Chin Med 16:267–269
15. Mattern J, Volm M (1995) Mekanisme rintangan dalam kanser paru-paru manusia. Metastasis Pencerobohan 15:81–94
16. Minato K, Kanzawa F, Nishio K, Nakagawa K, Fujiwara Y, Saijo N (1990) Pencirian garis kanser paru-paru sel kecil manusia yang tahan etoposide. Kanser Chemother Pharmacol 26:313–327
17. Moyad MA, Pienta KJ, Montie JE (1999) Penggunaan PC-SPES, suplemen yang tersedia secara komersil untuk kanser prostat, pada pesakit dengan penyakit hormon-naif. Urologi 54:319–324
18. Nishio K, Nakamura T, Koh Y, Suzuki H, Fukumoto N, Saijo N (1999) Rintangan dadah dalam kanser paru-paru. Curr Opin Oncol 11:109–115
19. Pass H, Mitchell JB, Johnson DH, Turrisi AT, Minna J (2000) Kanser paru-paru: prinsip dan amalan. Lippincott, Philadelphia
20. Pfeifer BL, Pirani JF, Hamann SR, Klippel KF (2000) PC SPES: makanan tambahan untuk rawatan kanser prostat refraktori hormon. BJU Int 85:481–485