Kesan Jumlah Glikosida Cistanche Deserticola Terhadap Kecederaan Tekanan Oksidatif Dan Apoptosis Sel dalam Tikus Dengan Iskemia-reperfusi Serebrum Ⅰ
Mar 15, 2024
Abstract
Objektif: Untuk meneroka kesan dan kemungkinan mekanismeJumlah glikosida cistanche deserticola(GCs) pada kerosakan tekanan oksidatif dan apoptosis sel saraf pada tikus dengan serebrumkecederaan reperfusi iskemia(CIRI).
Kaedah: Model oklusi arteri serebrum tengah (MCAO) telah dibina dalam model tikus menggunakan kaedah embolisasi jahitan. Selepas model berjaya ditubuhkan, tikus dalam kumpulan ubat (GC) diberi GC 50 mg/(kg·d) secara gavage selama 14 hari berturut-turut; tikus dalam kumpulan operasi palsu (Sham) dan kumpulan model (Model) diberi isipadu garam biasa yang sama. Pentadbiran lisan. Selepas pentadbiran, kaedah skor Longa digunakan untuk menilai defisit neurologi; tikus kemudiannya dikorbankan, dan pewarnaan TTC dilakukan untuk mengira peratusan kawasan infark serebrum; Kaedah ELISA digunakan untuk mengesan serummalondialdehidkandungan (MDA),superoksida dismutase(SOD) danGlutathione peroksidase (GSH-Px)aktiviti; Western blot untuk mengesan faktor nuklear E2-faktor berkaitan 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1) dan B dalam tisu otakLimfoma/leukemia selular-2 (Bcl-2), Bcl-2-protein X (Bax) dan caspase-3 (Caspase-3) yang berkaitan.
Keputusan: Berbanding dengan kumpulan Sham, kumpulan Model mempunyai peningkatan skor defisit neurologi, peningkatan peratusan kawasan infarksi serebrum,meningkatkan kandungan MDA, menurunkan aktiviti SOD dan GSH-Px dan menurunkan tahap ekspresi protein Nrf 2, HO -1 dan Bc l-2 Tahap ekspresi protein Bax dan Caspase-3 meningkat; berbanding dengan kumpulan Model, skor defisit neurologi tikus dalam kumpulan GC menurun, peratusan kawasan infarksi serebrum menurun,Kandungan MDA menurun, Aktiviti SOD dan GS H-Px meningkat, Tahap ekspresi protein Nrf 2, HO -1 dan Bcl - 2 meningkat, dan tahap ekspresi protein Bax dan Caspase - 3 menurun. Kesimpulan: GC boleh mengurangkan kecederaan reperfusi iskemia serebrum dengan berkesan, dan mekanismenya mungkin berkaitan dengan mengaktifkan laluan Nrf 2 / HO - 1, dengan itu mengurangkan tahap tekanan oksidatif dan menghalang apoptosis sel saraf.
[Kata kunci]Jumlah glikosida cistanche deserticola; kecederaan iskemia-reperfusi serebrum; tekanan oksidatif; apoptosis sel
EKSTRAK CISTANCHE ORGANIK SEMULAJADI
Klik untuk mendapatkan butiran lanjut
Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Pengeksport cistanche terbesar di China:
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Beli Untuk Butiran Spesifikasi Lebih Lanjut:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
Iskemia serebrum-reperfusi,
CIS adalah penyakit dengan sangatmorbiditi yang tinggi, kecacatandankadar kematian. Sel-sel otak sangat sensitif terhadap iskemia dan hipoksia, jadi menyalin semula saluran darah serebrum secepat mungkin adalah cara paling berkesan untuk menangani strok iskemia akut. Trombolisis intravena dan trombektomi mekanikal pada masa ini digunakan secara meluas kaedah, tetapi disebabkan oleh relatifnya
Disebabkan tetingkap masa yang sempit dan faktor lain yang tidak terkawal, sahaja<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Reperfusi iskemia serebrum, CIRI ialah sejenis pemulihan saluran darah serebrum daripada stenosis Kerosakan patologi bertindih yang berlaku semasa aliran darah. Pada masa ini dipercayai bahawa mekanisme patologinya mungkin berkaitan dengan ketoksikan asid amino rangsang, kelebihan kalsium, pembebasan faktor keradangan, dan pengumpulan radikal bebas oksigen yang disebabkan oleh kerosakan mitokondria [1], yang akhirnya membawa kepada pemusnahan penghalang darah-otak, gangguan peredaran mikro. , apoptosis sel saraf, dan nekrosis [1] 2] dan satu siri tindak balas, dengan itu memburukkan lagi defisit neurologi.
Cistanche deserticola total glycosides (glycosides of cistanche, GCs) berasal daripada perubatan tradisional Cina Herba Cistanche Bahan aktif utama diekstrak daripada batang dan akar inci). Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa GC secara berkesan boleh menghalang peroksidasi lipid, meningkatkan fungsi mitokondria, menghilangkan radikal bebas oksigen berlebihan, menghalang pembebasan sitokin radang, mengurangkan sitotoksisiti, pengagregatan anti-platelet, menghalang percambahan sel, menghalang apoptosis neuron, dan Mengurangkan tahap hormon, dengan itu mempunyai anti-penuaan, anti-tumor, anti-kemurungan, meningkatkan imuniti, meningkatkan penyakit kardiovaskular dan serebrovaskular iskemik, meningkatkan kebolehan pembelajaran dan ingatan serta fungsi kognitif, dan meningkatkan pembiakan [3].
Kajian telah menunjukkan bahawa GC boleh mengurangkan kerosakan oksidatif pada sel dan mengekalkan integriti penghalang darah-otak.
[4]; GC secara berkesan boleh meningkatkan daya maju sel dan menghalang keradangan dan apoptosis yang disebabkan selepas iskemia-reperfusi [5]; Nrf 2 memainkan peranan penting dalam proses anti-radang dan antioksidan [6]. Berdasarkan latar belakang di atas, artikel ini bertujuan untuk mengkaji lebih lanjut kesan dan kemungkinan laluan GC pada tekanan oksidatif dan apoptosis selepas CIRI dengan mereplikasi model CIRI.
1 Bahan dan kaedah
1. 1 Ubat dan reagen GC (SN-5692, ketulenan 98%, Barat
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), larutan pewarna 2% triphenyltetrazolium chloride (TTC) (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), kit ELISA (Beijing Boosen Co., Ltd.), kit analisis kuantitatif protein BCA (USA Cell Signaling Syarikat Teknologi), antibodi anti-tikus arnab Bcl-2, Bax, Antibodi Caspas seperti e-3, Nrf 2, HO-1 dan antibodi sekunder anti-arnab kambing semuanya dibeli daripada Syarikat Proteintech Amerika Syarikat.
1. 2 instrumen
Centrifuge (Model: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), Pembaca plat mikro (Model: Max-M5, Syarikat Peranti Molekul Amerika), instrumen elektroforesis SDS- PAGE (model: DYY-7C, Syarikat Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), pengimbas gel (Model: 4466611, Syarikat BIO-RAD AS).
1. 3 haiwan
Tikus Wistar jantan [SCXK (Beijing) 2019-0010], gred bersih, berumur 8 minggu, berat badan 250-280 g.
1. 3 kaedah
1. 3. 1 Pengelompokan dan pemodelan
Tikus dibahagikan kepada kumpulan palsu (Sham), kumpulan model (Model), dan kumpulan ubat (GC) menggunakan kaedah rawak mudah. Terdapat 15 ekor tikus dalam setiap kumpulan. Mereka dibesarkan secara adaptif selama 1 minggu dan kemudian dimodelkan. Berpuasa dan berpuasa 12 jam sebelum pembedahan, kumpulan Model dan kumpulan GCs menggunakan kaedah embolisasi jahitan [7] untuk mencipta oklusi arteri serebrum tengah (oklusi arteri serebrum tengah). oklusi, model tikus MCAO), penyingkiran embolus dilakukan selepas 2 jam iskemia untuk mencapai reperfusi. , rekod masa mula reperfusi. Luka itu dijahit, kulitnya dibasmi kuman dengan iodophor, dan haiwan itu dikembalikan ke sangkar dan dipelihara, dan kemudian direndam selama 24 jam. Operasi untuk tikus dalam kumpulan Sham adalah sama seperti untuk tikus model, tetapi tiada penyumbatan dilakukan. Akhirnya, 10 ekor tikus dalam setiap kumpulan telah dikekalkan untuk eksperimen seterusnya.
1. 3. 2. Kaedah pentadbiran
Ambil serbuk GCs dan tambah air tulen untuk menyediakan larutan 15 mg/mL. Kajian awal telah menunjukkan bahawa dos 50 mg/(kg·d) adalah lebih baik daripada kumpulan dos lain [8], jadi dos yang dipilih untuk eksperimen ini adalah sama seperti sebelumnya. Tikus dalam kumpulan GC diberi GC secara gavage selepas 24 jam iskemia dan reperfusi, dan tikus dalam kumpulan Sham dan kumpulan Model diberi jumlah garam biasa yang sama dengan gavage selama 14 hari.
1. 3. 3 Skor defisit neurologi
Kaedah pemarkahan Longa [7] digunakan untuk menjaringkan 24 jam selepas pembedahan, dan tikus model dengan skor 1 hingga 3 dikekalkan untuk eksperimen seterusnya. Skor selepas dos terakhir. 0 mata: Tiada
Gejala neurologi; 1 mata: defisit neurologi yang sedikit, kaki depan kontralateral melentur dan dinaikkan apabila ekor diangkat, dan bahu bertambah; 2 mata: defisit neurologi sederhana, kaki depan kontralateral melentur dan dinaikkan apabila ekor diangkat , penambahan bahu, berpusing dalam bulatan ke bahagian bertentangan lesi apabila berjalan; 3 mata: defisit neurologi yang teruk, bersandar ke seberang lesi apabila berjalan; 4 mata: aktiviti tidak sedarkan diri dan autonomi.
1. 3. 4 Penentuan peratusan kawasan infarksi serebrum
Selepas pentadbiran terakhir, 4 tikus dari setiap kumpulan dipilih secara rawak, dibius dengan mendalam, dipenggal, dan otak mereka dikeluarkan dengan cepat.
Cepat bekukan tisu otak dalam peti sejuk -20 darjah selama 20 minit. Selepas tisu otak agak tetap, keluarkannya. Bermula dari persimpangan kutub anterior otak ke kiasma optik, dan dari dahi ke oksiput, potong otak tikus di sepanjang satah koronal. Potong ke dalam 5 kepingan otak dengan ketebalan 2 mm, rendamkannya dalam larutan TTC 2%, letakkannya dalam tab mandi air 37 darjah untuk pencelupan selama 15 minit, balikkannya, dan celupkannya selama 15 minit lagi. Akhirnya, hirisan otak direndam dalam larutan paraformaldehid 4% dan diperbaiki selama 12 jam sebelum difoto. Tisu otak normal ditunjukkan dalam warna merah dan tisu otak infark ditunjukkan dalam warna putih. Gunakan perisian imej untuk menganalisis dan mengira kadar infarksi setiap kepingan otak. Kadar infarksi=kawasan infark/jumlah kawasan hirisan otak × 100%.
1. 3. 5 Pengesanan penunjuk berkaitan tekanan oksidatif
Bius tikus, ambil 4 mL darah aorta abdomen, aliquot ke dalam tiub EP bersih dan letakkan di dalam peti sejuk 4 darjah selama 0. Empar pada 3 500 r/min selama 5 jam pada 4 darjah selama 15 minit, ambil supernatan, dan akhir sekali simpan serum 3 tikus dalam setiap kumpulan. Kandungan malondialdehid (MDA) dan superoksida dismutase (superoxide dismutase) ditentukan mengikut kaedah pengendalian kit ELISA. e dismutase,
SOD), aktiviti glutathione peroksidase (glutathione peroxidase, GSH-Px).
1. 3. 6 Pengesanan Western blot
Tekanan oksidatif dan protein berkaitan apoptosis diukur untuk mengukur ekspresi Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax, dan Caspase -3 protein dalam tisu otak. Tiga tikus dipilih dari setiap kumpulan, dan jumlah korteks serebrum yang sesuai dari kawasan berpenyakit diambil, larutan lisis ditambah kepadanya, dan kepekatan protein dikira selepas pengekstrakan protein. Selepas elektroforesis gel protein, pindahkan ke membran, menyekat dengan larutan penyekat selama 2 jam, bilas, dan kemudian diinkubasi dengan antibodi primer pada 4 darjah semalaman, keesokan harinya, TBST dikeluarkan, dibilas, dan antibodi sekunder ditambah untuk pengeraman selama 2 h. Letakkan jalur sasaran pada penganalisis pengimejan untuk menganalisis nilai kelabu. Kira nilai kelabu jalur relatif, nilai kelabu jalur relatif=nilai kelabu jalur sasaran / nilai kelabu jalur rujukan dalaman.
1. 4 Kaedah analisis statistik
Aplikasi data SPSS 25. 0 perisian untuk analisis data, dan graf statistik dalam artikel ini telah dilukis dengan perisian GraphPad Prism 8. Keputusan data yang konsisten dengan taburan normal dinyatakan sebagai min ± sisihan piawai. Analisis satu faktor varians digunakan untuk perbandingan antara berbilang sampel, dan LSD-t digunakan untuk perbandingan antara dua sampel bebas. Uji, dengan P < 0. 05 menunjukkan bahawa perbezaan adalah signifikan secara statistik.
