Kesan Cistanche Deserticola Polysaccharide Pada Sel Imun Dan Aktiviti Telomerase dalam Penuaan Tikus

Zhang Hongquan, Li Yuan, Song Yuanyuan (Institut Perubatan, Universiti Yangzhou, Yangzhou 225001, Jiangsu)

Abstrak: Objektif Mengkaji kesan polisakarida Cistanche deserticola (PCD) ke atas kandungan malondialdehid (MDA), aktiviti telomerase, dan fungsi imun dalam tisu tikus penuaan subakut. Kaedah Model penuaan subakut tikus telah diinduksi oleh D-galaktosa. Kandungan MDA dikesan oleh kolorimetri asid thiobarbituric; Aktiviti telomerase telah dikesan oleh PCR-ELISA; Reaksi percambahan limfosit diukur dengan kaedah MTT; Fungsi fagositik makrofaj peritoneal tikus diukur dengan ujian merah neutral; Kandungan IL-2 dalam serum ditentukan oleh ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA). Keputusan Kandungan MDA dalam jantung, hati dan otak kumpulan model meningkat dengan ketara, manakala aktiviti telomerase, tindak balas percambahan limfosit, fagositosis makrofaj peritoneal dan kandungan IL-2 dalam darah periferal menurun dengan ketara. Selepas pentadbiran PCD, kandungan MDA dalam jantung, hati dan otak tikus telah berkurangan dengan ketara, dan aktiviti telomerase dalam jantung dan tisu otak, tindak balas percambahan limfosit, fagositosis makrofaj peritoneal dan kandungan IL-2 dalam darah periferal meningkat dengan ketara. Kesimpulan PCD boleh menentang kerosakan radikal bebas, meningkatkan aktiviti telomerase dalam jantung dan tisu otak dan fungsi imun tikus penuaan, dan meningkatkan penuaan yang disebabkan oleh D-galaktosa.

Kata kunci: Cistanche deserticolapolisakarida; Malondialdehid; Telomerase;Imunisasi; nyanyuk

Supplement cistanche dekat saya—Meningkatkan imuniti

Klik di sini untuk melihat produk Cistanche Enhance Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Klasifikasi Perpustakaan Cina No.: R284 Kod Dokumen: No. Artikel: 1001-2494 (2011) 14-1081-05

Cistanche deserticola ialah batang berdaging kering dengan daun fosforus Cistanche deserticola, yang mempunyai fungsi mengencangkan hati dan buah pinggang serta memberi manfaat kepada intipati dan qi [1]. Polisakarida cistanche deserticola ialah polisakarida mentah yang dipisahkan daripada Cistanche deserticola, yang dikeluarkan daripada kekotoran molekul kecil larut air, dinyahprotein dengan kaedah Sevag, dan dirawat berulang kali dengan air dan alkohol untuk mendapatkan PCD [2]. Eksperimen ini bermula dengan teori imun dan teori telomer penuaan dan mengguna pakai model tetikus penuaan D-galaktosa untuk memerhati kesan PCD ke atas kandungan malondialdehid (MDA) dan aktiviti telomerase dalam jantung, hati, dan otak, dan meneroka secara awal. mekanismenya.

1.Bahan dan kaedah

1.1 Haiwan, ubat, reagen dan instrumen

3-tikus ICR berumur sebulan, gred bersih, 26-32g, separuh jantan dan separuh betina [Pusat Haiwan Eksperimen Universiti Yangzhou, No. Sijil Kualiti Haiwan Eksperimen: SCXK (Su) 2002-0009] . Suhu bilik adalah 20 ~ 25 darjah, pencahayaan semula jadi, dan persekitaran sesuai untuk memberi makan selama satu minggu sebelum eksperimen. PCD disediakan oleh Institut Penyelidikan Hidupan Liar Nanjing dan dilarutkan dalam air suling; D-galaktosa (D-Gal, Kilang Reagen Kedua Shanghai); Kit ujian aktiviti telomerase (Syarikat MB, Amerika Syarikat); Kit pengesanan MDA dan kit IL-2 ELISA tetikus (Institut Penyelidikan Kejuruteraan Biologi Nanjing Jiancheng). Penanda enzim ELX800UV (BIO-TEK, USA); Penghomogen tisu PT-MR3100D (Polytron, Switzerland); Empar pembekuan desktop MODEL550 (Eppendorf, Jerman); Skala elektronik BP110S (Sartorius, Jerman).

Cistanche deserticola—Meningkatkan imuniti

1.2 Pengelompokan haiwan, penyediaan model, dan pentadbiran

Model tetikus penuaan telah disediakan mengikut kaedah dalam literatur [3]. 10 peratus D-Gal telah disediakan dengan air untuk suntikan, dan 10 mL · kg-1 disuntik secara subkutan ke leher dan belakang tikus sekali sehari selama 6 minggu. Tikus telah dibahagikan secara rawak kepada lima kumpulan: kumpulan kawalan biasa, kumpulan kawalan model, kumpulan PCD25, 50 dan 100mg · kg-1 (kumpulan PL, PM, PH), dengan 12 tikus dalam setiap kumpulan. Tikus dalam kumpulan model dan kumpulan pentadbiran PCD telah ditubuhkan mengikut undang-undang, dan PCD25, 50, dan 100 mg · kg-1 dengan isipadu 20 mL · kg-1 diberikan secara gavage setiap hari. Tikus kumpulan kawalan biasa telah disuntik dengan isipadu air yang sama untuk suntikan dan diberi isipadu garam biasa yang sama secara gavage.

1.3 Penentuan kandungan MDA dan aktiviti telomerase

24 jam selepas pentadbiran terakhir, bola mata dikeluarkan dan darah diambil, tikus dibunuh, jantung, hati, dan otak dikeluarkan dengan cepat, dan homogenat tisu segar dilakukan di bawah suhu rendah, sentrifugasi, dan supernatan diambil. Kandungan MDA ditentukan oleh kolorimetri asid thiobarbituric. Aktiviti telomerase telah dikesan oleh PCR-ELISA. Langkah-langkah operasi telah dijalankan mengikut arahan pada kit. Nilai A diukur pada 450nm penanda enzim.

1.4 Penentuan tindak balas percambahan limfosit [4]

Keluarkan limpa tetikus secara aseptik dalam meja kerja ultra-bersih, sediakan penggantungan sel limpa tetikus dan laraskan ketumpatan sel kepada 1 × 109 · L-1, concanavalin A (ConA) telah dikultur sebagai perangsang in vitro untuk 48 jam, dan tindak balas percambahan sel diukur dengan kaedah MTT. Nilai A diukur pada panjang gelombang 570 nm yang diukur oleh penghubung enzim, dan hasilnya dinyatakan sebagai nilai min bagi tiga lubang kompleks A.

1.5 Penentuan fungsi fagositik makrofaj peritoneal dengan kaedah merah neutral

Faedah lelaki cistanche—Imbuktikan imuniti

24 jam selepas pentadbiran terakhir, tikus dipenggal dan dibunuh. Cecair peritoneal tikus telah terkumpul secara aseptik dan disentrifugasi pada 1000r · min-1, sel telah dibasuh dengan larutan Hanks tiga kali dan ampaian sel telah disediakan dengan larutan kultur 1640. Ambil 3mL dan masukkan ke dalam bekas kultur, kultur pada suhu 37 darjah dan 5 peratus CO2 selama 2 jam. Makrofaj melekat pada permukaan bekas, meniup dan menghisap dengan larutan Hanks 4 darjah, mengumpul sel yang melekat, mengira pada plat kiraan sel darah dan melaraskan ketumpatan sel kepada 2 × 109 sel · L-1, dikultur dalam inkubator 37 darjah selama 2 jam, sel supernatan dan tidak melekat dibuang. Ambil makrofaj yang melekat, tambah 0.1 peratus garam fisiologi merah neutral, teruskan ke kultur pada 37 darjah selama 30 minit, buang merah neutral, basuh berulang kali makrofaj dengan PBS pada 37 darjah, cairkan dengan 50 peratus asid asetik dan 50 peratus etanol mengikut isipadu, dan ukur nilai A.

1.6 Penentuan tahap IL-2 serum

Ambil darah dari bola mata, sentrifuge (3000r · min-1, 10min) untuk mengasingkan serum dan tentukan kandungan IL-2 dalam serum melalui ujian imunosorben berkaitan enzim (ELISA). Operasi khusus adalah mengikut arahan kit. Tahap IL-2 dalam serum tikus dalam setiap kumpulan dikesan pada 450nm penanda enzim.

1.7 Analisis statistik

Data telah diproses dengan SPSS11.0, dan data pengukuran dinyatakan dengan min ± sisihan piawai (x ± s), menggunakan ANOVA sehala dan ujian-t antara kumpulan.

ginseng gurun—Imbuktikan imuniti

2.Keputusan

2.1 Kesan PCD pada kandungan MDA dalam jantung, otak, dan hati tikus yang semakin tua

Adalah jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan biasa (P<0.01). After intragastric administration of PCD25, 50 and 100 mg · kg-1, the content of MDA in the heart, brain, and liver of mice decreased in a dose-dependent manner compared with the model group (P<0.01, P<0.05), and the content of MDA in the high-dose group was close to the normal level (Table 1).

2.2 Kesan PCD pada aktiviti telomerase dalam jantung, otak, dan tisu hati tikus yang semakin tua

Compared with the normal control group, the telomerase activity of the heart, liver, and brain tissue in the model group was significantly reduced. After intragastric administration of PCD, the activity of telomerase in heart and brain tissue was increased in a dose-dependent manner, and the level of the high dose group was close to that of the normal control group. There was no significant effect on telomerase activity in the liver tissue of aging mice (P>0.05) (Jadual 2). 2.3 Kesan PCD pada tindak balas percambahan limfosit, fagositosis makrofaj peritoneal dan kandungan IL-2 serum dalam tikus berumur adalah jauh lebih rendah berbanding kumpulan kawalan biasa (P<0.01). After intragastric administration of PCD, the lymphocyte proliferation reaction, peritoneal macrophage phagocytosis and serum IL-2 content of aging mice increased in dose dependence, which was significantly different from the model group (P<0.01, P<0.05) (Table 3).

3.Perbincangan

Mekanisme sebenar penuaan masih tidak jelas. Selama bertahun-tahun, sarjana di dalam dan luar negara telah mengemukakan berpuluh-puluh teori penuaan, seperti teori radikal bebas. Oksigen molekul diperlukan untuk kemandirian organisma, dan nutrien dalam organisma membebaskan tenaga melalui pengoksidaan. Keadaan oksidatif sel memainkan peranan penting dalam penuaan, kejadian tumor, dan perkembangan. Walau bagaimanapun, radikal bebas akan terbentuk dalam beberapa proses pengoksidaan, dan penuaan berkait rapat dengan tindak balas radikal bebas yang tidak normal. Apabila radikal bebas terkumpul terlalu banyak di dalam badan, ia akan menyebabkan peroksidasi asid lemak tak tepu dalam badan, terutamanya dalam membran biologi, mengakibatkan perubahan dalam struktur membran sel, kerosakan pada fungsi membran, dan pengeluaran MDA. dan lipofuscin (LPF) [5].

MDA ialah agen penghubung silang yang sangat aktif. Ia boleh silang silang secara kovalen dengan protein, enzim, dan asid amino bebas pada asid nukleik untuk membentuk bes Schiff. Kerana ikatannya yang tidak normal, ia tidak boleh dicerna oleh hidrolase selepas ditelan oleh lisosom, dan ia boleh berkumpul dalam sel untuk membentuk lipofuscin, yang boleh meracuni sel, menyekat penghantaran bahan dan mesej dalam sel, dan membawa kepada pecutan nuklear penuaan dan kematian sel.

Oleh itu, MDA boleh digunakan sebagai penunjuk yang boleh dipercayai tentang penuaan organ dan sel. Teori telomere percaya bahawa panjang kromosom (telomere) di bahagian atas kromosom berkait rapat dengan penuaan dan jangka hayat. Panjang telomer adalah kira-kira 2 hingga 15 kb. Kerana masalah replikasi terminal, DNA telomer akan kehilangan 50 hingga 200 bp setiap kali DNA disalin. Dengan pertambahan bilangan pembahagian sel, DNA telomer akan memendekkan secara beransur-ansur. Apabila ia dipendekkan kepada had tertentu, ia tidak akan mengekalkan kestabilan pewarnaan, dan sel akan kehilangan keupayaan untuk pembahagian dan percambahan dan mati akibat penuaan, Pemendekan ini adalah tanda penuaan [6]. Sel memasuki peringkat kegagalan proliferatif, dan sel terus bertahan tetapi tidak boleh membahagi dan membiak [7]. Oleh itu, telomer juga dikenali sebagai "jam biologi" sel, dan penuaan sel menentukan penuaan seluruh badan. Penyelidikan Bryma mendapati bahawa panjang telomere adalah berkaitan dengan aktiviti telomerase. Semakin tinggi aktiviti telomerase, semakin panjang telomer, semakin baik kestabilan dan integriti kromosom, semakin banyak masa pembahagian sel, dan semakin lama jangka hayat.

Suplemen cistanche berhampiran saya—Tingkatkan imuniti

Sistem imun, sebagai sistem yang lengkap dan autonomi, memainkan peranan penting dalam penyelenggaraan dan penyesuaian aktiviti kehidupan, dan penurunan fungsi imun adalah ciri penuaan yang paling menonjol. Disfungsi imun boleh mempercepatkan penuaan badan[8]. Keputusan eksperimen ini menunjukkan bahawaPCD boleh mengurangkan kandungan MDA dengan ketara dalam tisu jantung, otak dan hati, meningkatkan aktiviti telomerase dalam jantung dan tisu otak tikus model yang semakin tua, serta tindak balas proliferasi limfosit, fagositosis makrofaj peritoneal dan kandungan IL{{0 }} dalam darah periferi tikus yang semakin tua. Dapat disimpulkan bahawa PCD mempunyai peranan yang baik dalam menentang kerosakan radikal bebas, boleh menggalakkan percambahan limfosit, meningkatkan imuniti selular yang tidak spesifik dan fungsi pengawalan imun badan, dan memainkan peranan dalam melambatkan penuaan badan.

RUJUKAN

[1] MAZG.Perbezaan Cistanche sinensis G.Beck dan Herba Cistanche yang Diproses oleh HPLCF ingerprints[ J] .ChinPharmJ, 2011, 46(12):899-902.

[2] SHIHF, LINAP, ZHANGHQ,etal.Thee effect of polysaccgrides of Cistanche deserticola YCMa on spleen deficiency syndromerats[ J] .Chin Wild Plant Res, 2000, 19(6):49-51.

[3] XUSY, BIANRL, CHENX.Methodoldgy of Pharmacological Experiments)[ M] .Vol3.Beijing:People's Medical Publishing House, 2002:1465-1466.

[4] LIUYQ, SUW, WUJJ, etal.Kesan pengekstrakan cynomorium coccineum pada fungsi imuniti dan metabolisme radikal bebas tikus tua[J] .JCell MolI mmunol=, 2009, 25(1):1155-1157 .

[5] YANGHJ, WANGZL, XUESH.Kemajuan dalam kajian mekanisme penuaan[ J] .Chin J Control Endem Dis=, 2008, 23(1):35-37.

[6] YANGJ, ZHANXH, SUNY, etal.Kesan sijunzidecoction pada kandungan malondialdehid dan telomeraseaktiviti dalam jantung, hati dan tisu otaksodD-galaktosa yang disebabkan oleh penuaan model tikus[ J] .ChinJ Integr Tradit Chin West Med=, 2005, 25 (6):531-533.

[7] ZHANGXH, ZHANGJN.Telomere, telomerase, penuaandan kanser[ J] .IntJGenetics=, 2007, 30(1):69-71.

[8] SONGSX, LVZJ. Kemajuan penyelidikan penuaan sel T,B dan ekanisme mo lekularnya[ J] .JCell MolI mmunol, 2002, 18(3):306-308.