Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Hospital ke-98 Tentera Pembebasan Rakyat China, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Universiti Perubatan Tradisional Cina Zhejiang, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Hospital Ortopedik Perubatan Tradisional Cina Fuyang, Bandar Hangzhou, Wilayah Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, China

Abstrak

Objektif: Untuk melihat kesan daripadaCistancheekstrak airpada penyembuhanosteoporosispatah tulang pada tikus dan untuk meneroka mekanismenya. Kaedah: Tikus betina SD gred SPF dibahagikan secara rawak kepada kumpulan kawalan, kumpulan model dan kumpulan rawatan, dan dimodelkan mengikut kaedah yang berkaitan. 24 jam selepas pemodelan patah, kumpulan kawalan dan kumpulan model diberi gavage garam biasa, dan kumpulan rawatan diberi gavage denganCistancheekstrak air sekali sehari. Selepas 2 minggu dan 6 minggu intervensi, darah dikumpulkan dari aorta abdomen untuk mengesan interleukin. TP (IL-1 B) dan mengubah tahap faktor pertumbuhan-B l (TGF-8 1), kumpulkan spesimen patah pada masa yang sama, lakukan imbasan Mikro-CT selepas penetapan, ukur R0 Pecahan isipadu tulang kalus (BV/TV) dan parameter lain yang berkaitan Selepas penyahkalsifikasian, penyahhidratan dan benam, ia telah dijadikan blok lilin untuk digunakan. Keputusan: 6 minggu selepas model osteoporosis ditubuhkan, ketumpatan mineral tulang tikus dalam kumpulan model dan kumpulan rawatan adalah lebih rendah daripada kumpulan kawalan (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistancheboleh menggalakkan penyembuhanosteoporosispatah tulang, dan mekanismenya mungkin berkaitan dengan perencatannyaosteoporosispatah tulang. Selepas serum tikus IL-1 B dan menggalakkan rembesan TGF-8 1, yang boleh meningkatkan osteoporosis dan menggalakkan penyembuhan patah tulang.

Kata kunci: patah tulang osteoporosis, Cistanche, penyembuhan patah tulang, tikus

Osteoporosis adalah penyakit di mana ketumpatan tulang berkurangan, struktur halus tisu tulang dimusnahkan, dan kerapuhan tulang meningkat. Pesakit boleh menyebabkan patah tulang di bawah daya luaran yang sedikit dalam kehidupan seharian. Ia adalah penyakit klinikal biasa dan penyakit yang kerap berlaku. Lebih-lebih lagi, jenis patah tulang ini kebanyakannya pesakit tua, selalunya dikaitkan dengan penyakit lain, dan kebanyakan patah tulang itu berlaku, dengan kestabilan yang lemah, dan kadang-kadang penyembuhan patah tulang yang perlahan atau tidak berlaku, dan terdapat kecacatan dan kadar maut yang tinggi. Pada masa ini, rawatannya terutamanya melalui pembedahan, pemulihan manual, dan rawatan anti-osteoporosis. Terdapat kekurangan ubat rawatan yang disasarkan untuk pesakit denganosteoporosispatah tulang. Perubatan tradisional Cina mempunyai sejarah panjang merawat osteoporosis dan mempunyai kesan positif. Banyak ubat-ubatan tradisional Cina telah terbukti dapat memperbaiki tulang. Kemiskinan juga boleh menggalakkan penyembuhan patah tulang. Rongrong biasanya digunakan sebagai ubat perwakilan untuk buah pinggang yang berkhasiat dan mempunyai kesan menyuburkan hati dan buah pinggang. Perubatan tradisional Cina percaya bahawa buah pinggang mengawal tulang, dan rawatan patah tulang juga tidak dapat dipisahkan daripada buah pinggang dan intipati. Farmakologi moden telah mendapati bahawa abu daging juga mempunyai kesan estrogenik tertentu. Kajian ini berhasrat untuk menggunakan pengukuran ketumpatan tulang, Micro-CT dan interleukin serum-13 ( IL-10 ), pemerhatian tahap faktor pertumbuhan transformasi-P KTGF-P 1) dan ekstrak air pes hernia daging pada penyembuhan daripadaosteoporosispatah tulang pada tikus

Cistanche

1Bahan dan kaedah

1.1 Haiwan eksperimen dan peralatan reagen: 52 tikus SD betina SPF seberat 210~250g diternak di Pusat Eksperimen Haiwan Universiti Perubatan Tradisional Cina Zhejiang. Iodin kompleks, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., nombor kumpulan 20160720; Penicillin, North China Pharmaceutical Co., Ltd., nombor kelompok F3117217; Kit IL-18 (nombor kelompok: 20160715), kit TGF-8 1 (nombor kelompok: 20160722); Pengimbas ketumpatan tulang sinar-X dua tenaga, 0STE0C0RE2; Mikro-CT, Skyscan1176O

1.2 Pengekstrakan daripadaCistancheekstrak air: rendam tanahcistanche(Kilang Farmaseutikal Perubatan Tradisional China Universiti Zhejiang) 10 kali air ultratulen selama 0.5 jam, rebusan kuali selama 1.5 jam, ulangi pengekstrakan 2 kali, dan pengukus putar cecair ubat campuran Pekat kepada kepekatan 1.5g /ml dan simpan di dalam peti sejuk pada suhu 4 darjah untuk kegunaan kemudian.

1.3 Persediaan pemodelan: Perkara-perkara adalah seperti berikut.

1.3. 1 Model Osteoporosis: Tikus telah dipelihara secara adaptif selama 1 minggu sebelum pemodelan dan dibahagikan secara rawak kepada kumpulan kawalan, kumpulan model, dan kumpulan rawatan, dengan masing-masing 16 tikus, 18 tikus, dan 18 tikus, dan setiap kumpulan adalah berdasarkan titik masa 2 minggu dan 6 minggu. Masing-masing dibahagikan kepada dua kumpulan. Kedua-dua kumpulan rawatan dan kumpulan model telah dibius dengan 1 peratus natrium pentobarbital (0.4ml/100g), kulit telah dibius, dinyahjangkit, dibalut dan kulit dipotong. Ovari dua hala tikus dikeluarkan. Kumpulan kawalan hanya mempunyai hirisan. Jangan

Penyingkiran ovari

1.3. 2 Model fraktur: 6 minggu selepas model osteoporosis disediakan, model fraktur akan disediakan. Selepas tikus dalam setiap kumpulan dibius, ketumpatan mineral tulang femur tengah diukur. , Insisi, buat model patah melintang tulang paha tengah, betulkan dengan dawai Kirschner 1mm, sterilkan dan jahitkan kulit hirisan

1.4 Campur tangan ubat: Pengesanan sinar-X pada tulang paha telah dilakukan selepas pemodelan, tikus yang gagal menyediakan model telah dihapuskan dan 80,000 unit penisilin disuntik secara intramuskular selepas pemodelan untuk mencegah jangkitan. 24 jam selepas pembedahan, kumpulan rawatan diberi ekstrak air pes hernia daging (kepekatan 1.5g/ml, lg/kg, sekali sehari). Kumpulan kawalan dan kumpulan model diberi isipadu garam biasa yang sama.

1.5 Pengumpulan sampel: Sampel tikus dikumpul 2 dan 6 minggu selepas intervensi. Selepas 1 peratus bius natrium pentobarbital, 5-10ml darah dikumpulkan dari aorta abdomen untuk menyediakan serum dan disimpan dalam peti sejuk -20B. ganti. Kemudian tikus dikorbankan dan sampel patah tulang paha dikumpul dan diletakkan dalam formaldehid neutral 10 peratus selama 72 jam.

1.6 Petunjuk ujian: Perkara-perkara adalah seperti berikut.

1.6. 1 Ketumpatan mineral tulang: Semua tikus selepas model osteoporosis telah dibius sebelum model patah, dan kemudian ketumpatan mineral tulang femur tengah diukur. Tiga kumpulan tikus menerima sampel selepas 2 dan 6 minggu intervensi, dan sampel telah ditetapkan selama 72 jam dan kemudian ketumpatan tulang diukur semula.

1.6. 2 Mikro-CT: Imbasan mikro-CT dilakukan selepas sampel dibetulkan selama 72 jam, dengan 2{11}}0 gambar di atas dan di bawah hujung patah sebagai kawasan yang menarik (R01), sudut imbasan 360 darjah , semasa 555uA, voltan 42kV, penapis Al 0. 2mm, resolusi 8.73um, selepas selesai pembinaan semula imej tiga dimensi dan analisis kalus. Parameter pengesanan adalah seperti berikut: pecahan isipadu tulang BV/TV, faktor model trabekular tulang (Tb. Pf); indeks model struktur (SMI), dll."

1.6.3 Penentuan serum IL-1P dan TGF-P1: Cairkan serum tikus dari peti sejuk pada -20 darjah , dan lakukan pengesanan langkah demi langkah mengikut IL-13 dan TGF" 1 arahan kit.

1.7 Kaedah statistik: gunakan perisian analisis statistik SPSS.19 untuk pemprosesan. Data eksperimen dinyatakan dari segi min ± sisihan piawai (G±s), dan ketumpatan mineral tulang bagi tiga kumpulan tikus. Parameter mikro-CT Tahap JL-1 P JGF- P 1 dipuratakan dengan analisis varians sehala, dan perbandingan berpasangan antara kumpulan digunakan Pemeriksaan, tahap pemeriksaan ialah P<0.>

2 keputusan

2.1 Ketumpatan tulang bagi tiga kumpulan: lihat Jadual 1.

Jadual 1 Keputusan ketumpatan mineral tulang dalam femur tengah setiap kumpulan tikus (x±s, g/cm²)

Nota: Berbanding dengan kumpulan model, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Keratan rentas dua dimensi mikro-CT: keratan rentas dua dimensi sagital memilih gambar paksi membujur femur pada setiap titik masa dalam setiap kumpulan (lihat Rajah 1), dan rentas dua dimensi mendatar- bahagian memilih gambar ke-100 di bawah garis patah untuk perbandingan (Rajah 2) ), dapat dilihat dari angka bahawa kalus setiap kumpulan secara beransur-ansur meningkat dari masa ke masa, tetapi ia adalah plastik kepada darjah yang berbeza 6 minggu selepas patah; pada masa yang sama, dapat dilihat bahawa kalus dalam kumpulan kawalan adalah besar, dan korteks kalus tebal dan merangkak melintasi garis patah selepas 6 minggu, manakala kalus dalam kumpulan model Terdapat kurang tulang dalam kalus pada 2 minggu, dan korteks kalus longgar selepas 6 minggu. Walaupun jumlah kalus dalam kumpulan rawatan tidak besar pada 2 minggu, jisim tulang dalam kalus adalah lebih daripada itu dalam kumpulan model. Bentuk kalus lebih baik selepas 6 minggu. Dan garis patah tidak jelas.

Kumpulan kawalan Kumpulan model Kumpulan rawatan

Rajah 1 Keratan rentas sagital femur tengah setiap kumpulan

Rajah 2 Bahagian mendatar femur tengah setiap kumpulan

2.3 Pembinaan semula tiga dimensi mikro-CT: pembinaan semula tiga dimensi kalus pada hujung patah tulang paha ditunjukkan dalam Rajah 3. Ia boleh dilihat daripada Rajah 3 bahawa kalus terbentuk di sepanjang periosteum pada kedua-dua hujung patah baris 2 minggu selepas patah tulang dalam setiap kumpulan, helai patah dalam setiap kumpulan masih jelas, terutamanya dalam kumpulan model dan kumpulan rawatan, manakala kalus dalam kumpulan kawalan tebal dan tebal, kebanyakannya dengan plat 6 minggu selepas patah. . Tulang trabekular adalah dominan dan garis patah hilang, manakala kumpulan model adalah tulang longgar dan garis patah adalah kabur, tetapi kumpulan rawatan mempunyai lebih banyak tulang kalus, tulang trabekular biasa dan tebal, dan garis patah tidak jelas.

Rajah 3 Pembinaan semula tiga dimensi bagi R0I kalus pada hujung patah

2.4 Parameter mikro-CT: Gunakan perisian untuk menganalisis kalus pada hujung yang patah. Lihat Jadual 2 untuk parameter berkaitan.

Jadual 2 Perbandingan parameter Mikro-CT setiap kumpulan (x±s)

Kumpulan kawalan Kumpulan model Kumpulan rawatan

Nota: Berbanding dengan kumpulan model, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Serum IL-1 P .TGF-P 1 tahap: lihat Jadual 3.

Jadual 3 Perbandingan tahap IL-1 P JGF-0 1 dalam setiap kumpulan G±s, n=8)

Nota: Berbanding dengan kumpulan model, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, ubat-ubatan tradisional Cina Yinyangdian, Drynaria fortune, dan sebatiannya (Pil Qing, Pil Liuwei Dihuang, dll.) telah terbukti dalam amalan klinikal untuk meningkatkan osteoporosis dengan ketara. Jenis perubatan dan sebatian Cina ini kebanyakannya digunakan untuk menyuburkan hati dan buah pinggang. Ini selaras dengan prinsip menyuburkan buah pinggang dan memperbaharui otot pada peringkat pertengahan dan akhir patah tulang. "Sepuluh hari. Pes anggota badan yang berisi mula-mula diterbitkan dalam "Shen Nong's Materia Medica". , Bersifat hangat, mempunyai fungsi menyuburkan buah pinggang dan menguatkan yang, menambah pati dan sumsum, menyuburkan darah dan melembapkan kekeringan, dan warna yang menyenangkan dan memanjangkan hayat.

Dalam kajian ini, ketumpatan mineral tulang kumpulan rawatan adalah lebih tinggi daripada kumpulan model selepas 2 dan 6 minggu intervensi (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporosispenyembuhan patah tulang. Ia secara langsung mencerminkan kandungan tulang kalus. Ini menunjukkan bahawa Rouganrong mungkin mempunyai kesan menggalakkan osteogenesis. Analisis mungkin berkesan dalam pes hernia daging. Bahan-bahan tersebut mempunyai kesan mengawal selia BMP2 dan BMP2 ialah salah satu daripada ahli keluarga TGF-8. Dan keputusan ini juga disahkan oleh parameter lain imbasan Mikro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp dan SMI mencerminkan sifat biomekanik kalus, dan nilai dalam kumpulan rawatan adalah jauh lebih baik daripada Kumpulan model, ini juga menunjukkan bahawa Roudongrong mempunyai kesan memperbaiki kehilangan tulang, menggalakkan osteogenesis, dan mempercepatkan penyembuhan patah tulang.

Dari segi tahap serum IL-1B dan JGF-P 1, selepas 2 minggu dan 6 minggu intervensi, didapati tahap IL-1P kumpulan rawatan adalah lebih rendah daripada dua yang lain. kumpulan pada 2 minggu, dan pada 6 minggu. Walaupun tahap IL-1 B kumpulan rawatan adalah lebih tinggi daripada kumpulan kawalan, masih jauh lebih rendah daripada kumpulan model (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistanchebolehmemperbaiki kehilangan tulang, menggalakkan osteogenesis, dan mempercepatkan penyembuhan patah tulang. Ia mungkin mengurangkan tahap IL-13 dalamosteoporosispatah tikus dan menghalang patah tulang. Aktiviti sel tulang dicapai; di samping itu, ia juga mungkin berkaitan dengan fakta bahawaCistancheboleh meningkatkan tahap TGF-B 1 dalam tikus patah, menggalakkan pembezaan osteogenik dan pematangan dan pembentukan kalus.

Ringkasnya, berdasarkan analisis ketumpatan mineral tulang, parameter imbasan Mikro-CT dan tahap serum IL-1 P, TGF"1, didapati bahawa ekstrak akueusCistanchebolehmemperbaiki kehilangan tulangdanmenggalakkan penyembuhan patah tulang osteoporosis. Mekanisme ini mungkin berkaitan dengan ini. Ia boleh menghalang rembesan serum ILT 8 dan menggalakkan rembesan TGF-B 1 dalam tikus selepasosteoporosispatah tulang, dengan itu meningkatkan osteoporosis dan menggalakkan penyembuhan patah tulang.

4 Rujukan

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang, et al. Garis panduan untuk diagnosis dan rawatan osteoporosis pada orang tua di China (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporosis, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2]Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang, et al. Kesan terapeutik dan mekanisme ekstrak alkohol hernia daging pada tikus ovariectomized dengan osteoporosis [J]. Jurnal Universiti Jilin (Edisi Perubatan), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Ekstrak heartwood daripada Dalbergia sissoo menggalakkan penyembuhan patah tulang dan penggunaannya dalam tikus osteoporotik yang disebabkan oleh ovariektomi [J]. Jurnal Farmasi dan Farmakologi, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4]Kevin 0'Neill, Christopher MS, Nicholas AM, et al. Penilaian tomografi berkomputer mikro mengenai perkembangan penyembuhan patah tulang pada tikus[j]. Bone, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian, et al. Konsensus pakar mengenai diagnosis berperingkat dan rawatan osteoporosis primer dengan perubatan tradisional Cina di Wilayah Zhejiang (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Kemajuan penyelidikan dalam pencegahan dan rawatan osteoporosis oleh ubat-ubatan Cina tunggal dan kompaun[J]. Panduan Perubatan China, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng, et al. Kesan puri keluarga daging padang pasir pada ekspresi protein BMP-2 dalam tikus osteoporotik yang cepat menua[J]. Jurnal Perubatan Ningxia, 2014, 36(12): 1114-1116