Kesan Dwi Modulasi Diosmin Pada Proses Pembentukan Batu Ginjal Kalsium Oksalat: Penghabluran, Pertumbuhan, Pengagregatan, Lekatan sel Kristal, Penyertaan Ke dalam Sel Tubular Renal, Dan Pencerobohan Melalui Matriks Ekstraselular
Mar 16, 2022
untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com
Supaporn Khamchuna,b,c,1, Sunisa Yoodeea,1, Visith Thongboonkerda,*
aUnit Proteomik Perubatan, Pejabat Penyelidikan dan Pembangunan, Fakulti Perubatan Hospital Siriraj, Universiti Mahidol, Bangkok 10700, Thailand
bJabatan Teknologi Perubatan, Pusat Pengajian Sains Kesihatan Bersekutu, Universiti Phayao, Phayao 56000, Thailand
cUnit Kecemerlangan dalam Bioperubatan Molekul Integratif, Pusat Pengajian Sains Kesihatan Bersekutu, Universiti Phayao, Phayao 56000, Thailand
Kata kunci: Sebatian bioaktif, Flavonoid, Inhibitor, Modulator, Nephrolithiasis, Promoter, Urolithiasis
ABSTRAK
Diosminadalah flavon glikosida semulajadi (bioflavonoid) yang terdapat dalam buah-buahan dan tumbuhan dengan beberapa aktiviti farmakologi. Ia telah digunakan secara meluas sebagai makanan tambahan atau agen terapeutik dalam pelbagai penyakit/gangguan. Walaupun disyorkan, bukti mekanisme perlindungannya terhadapbuah pinggangpenyakit batu (nephrolithiasis/urolithiasis), terutamanya kalsium oksalat (CaOx) monohidrat (COM) yang merupakan jenis yang paling biasa, masih tidak jelas. Dalam kajian ini, kami menilai secara sistematik kesan daripadadiosmin(pada 2.5–160 nM) pada pelbagai peringkatbuah pinggangproses pembentukan batu, termasuk penghabluran COM, pertumbuhan kristal, pengagregatan, lekatan sel kristal, internalisasi ke dalam sel tubular renal dan pencerobohan melalui matriks ekstraselular (ECM). Keputusan menunjukkan bahawadiosminmempunyai kesan modulasi yang bergantung kepada dos pada semua proses batu ginjal COM yang disebutkan.Diosminmeningkatkan bilangan dan jisim kristal COM dengan ketara semasa penghabluran, tetapi mengurangkan saiz dan pertumbuhan kristal. manakaladiosminmenggalakkan pengagregatan kristal, ia menghalang lekatan sel kristal dan dalaman ke dalam sel tiub buah pinggang. Akhirnya, diosmin menggalakkan pencerobohan kristal melalui ECM. Data kami menyediakan bukti yang menunjukkan kedua-dua kesan menghalang dan menggalakkan diosmin pada COMbuah pinggangproses pembentukan batu. Berdasarkan aktiviti dwi modulasi diosmin ini, peranan anti-urolithiasisnya diragui dan berhati-hati harus dibuat untuk penggunaannya dalambuah pinggangpenyakit batu.
1. Pengenalan
Diosmin(3′,5,7-trihydroxy-4′-methoxyflavone-7-rhamnoglucoside) ialah bioflavonoid semula jadi yang biasa ditemui dalam pelbagai tumbuhan dan buah-buahan, terutamanya Citrus spp. [1,2]. Ia boleh disintesis atau diperoleh daripada flavonoid lain, hesperidin [1,2]. Diosmin sahaja atau dalam kombinasi dengan hesperidin digunakan secara meluas sebagai ubat phlebotropic untuk rawatan gangguan vena dan limfa seperti kekurangan vena kronik dan buasir [3,4]. Di samping itu, diosmin mempamerkan beberapa aktiviti biologi dan farmakologi lain, termasuk aktiviti antioksidan dan anti-radang [5,6], sifat anti-mutagenik dan anti-neoplastik [7,8], kesan antibiotik [9], sifat anti-hiperglisemik [ 10], dan kesan perlindungan terhadap kerosakan berbilang organ, iaitu,
kardiovaskular [11], retina [12],buah pinggang, kecederaan hati dan otak [13].
buah pinggangpenyakit batu (atau nephrolithiasis/urolithiasis) disebabkan oleh batu pepejal yang dibangunkan dan dimendapkan di dalam buah pinggang dan menjejaskan manusia di semua kawasan di dunia dengan kadar berulang yang tinggi [14-17]. Di antara semua pelbagai kristal penyebab, kalsium oksalat (CaOx), terutamanya bentuk monohidrat (COM), adalah komponen kristal yang paling patogenik dan paling biasa ditemui dalam pembentuk batu (pesakit dengan batu karang) [18]. Secara mekanikal, kristal COM mempunyai keupayaan pelekat yang paling kuat dan kesan sitotoksik yang paling besar pada sel epitelium tiub buah pinggang [19,20]. Semasa patogenesis batu, kedua-dua model plak Randall dan hipotesis intratubular mempunyai ciri umum proses pembentukan batu COM, termasuk penghabluran COM, pertumbuhan, pengagregatan, pengekalan melalui lekatan permukaan pada sel tubular renal atau pelvis renal, internalisasi ke dalam sel, dan pencerobohan ke dalam. interstitium buah pinggang melalui matriks ekstraselular (ECM) [21,22].
Baru-baru ini, banyak kajian telah memberi tumpuan kepada penemuan ubat menggunakan tumbuhan/buah ubatan dan sebatian bioaktifnya yang bertujuan untuk mencegah pembentukan batu baru dan/atau berulang. Beberapa laporan sebelum ini telah menunjukkan bahawa beberapa sebatian bioaktif, terutamanya sebatian fenolik (polifenol, flavonoid, flavon glikosida, dll.) yang diekstrak daripada beberapa tumbuhan/buah ubatan, mempunyai kesan pencegahan terhadap mekanisme patogenikbuah pinggangpenyakit batu in vitro dan in vivo [23-25]. Di antara bahan berfaedah ini, beberapa laporan telah mencadangkan bahawa diosmin boleh menghalang pemendapan kristal CaOx di dalam tisu buah pinggang dalam model haiwan [26,27]. Walau bagaimanapun, peranan modulasi yang tepat (perencatan atau promosi) dan mekanisme (peringkat atau proses pembentukan batu) dalam pembentukan batu ginjal COM belum disiasat. Kajian ini dengan itu menilai secara sistematik kesan daripadadiosmin(pada 2.5–160 nM) pada pelbagai peringkatbuah pinggangproses pembentukan batu, termasuk penghabluran, pertumbuhan kristal, pengagregatan, lekatan sel kristal, internalisasi ke dalam sel tubular renal dan pencerobohan melalui ECM.
Klik untukDos cistanche tubulosa untuk fungsi buah pinggang
2. Bahan-bahan dan cara-cara
2.1. Penyediaan Diosmin
Diosmin(Industri Kimia Tokyo; Tokyo, Jepun) telah dibubarkan dengan 100 peratus dimetil sulfoksida (DMSO) (Sigma-Aldrich; St. Louis, MO) dan aliquot berfungsi dibuat pada kepekatan akhir 2.5, 5, 10, 20, 40, 80 dan 160 nM untuk menyiasat kesannya pada kristal COM. Di samping itu, 100 peratus DMSO digunakan sebagai kawalan negatif dalam semua eksperimen.
2.2. Kultur sel
Barisan sel epitelium tiub renal MDCK yang diperoleh daripada segmen tiub distal nefron (ATCC; Manassas, VA) telah disebarkan dalam medium penting minimum Eagle (MEM) (Gibco; Grand Island, NY) ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (FBS), 60 U/ml penisilin G (Sigma-Aldrich) dan 60 ug/ml streptomycin (Sigma-Aldrich). Sel-sel telah dikekalkan dalam inkubator yang dilembapkan dengan 5 peratus CO2 pada 37 ◦C.
2.3. ujian penghabluran COM
Penghabluran COM telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [28,29]. Secara ringkas, 500 ul 10 mM CaCl2⋅2H2O dalam penimbal penghabluran (mengandungi 10 mM Tris-HCl dan 90 mM NaCl) (pH 7.4) telah ditambah ke dalam setiap telaga 24-plat telaga (Corning Inc.; Corning, NY). Isipadu yang sama (4 ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) ataudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 atau 160 nM) telah dicampur dengan CaCl2. Akhirnya, 500 ul 1.0 mM Na2C2O4 dalam penimbal penghabluran kemudiannya ditambah untuk menjadikan kepekatan akhir CaCl2 dan Na2C2O4 kepada 5 mM dan 0.5 mM, masing-masing. Campuran diinkubasi pada suhu 25 ◦C selama 1 jam dan kemudian diperiksa. Imej kristal telah ditangkap secara rawak daripada sekurang-kurangnya 15 medan kuasa tinggi (HPF) di bawah mikroskop cahaya kontras fasa terbalik Nikon Eclipse Ti-S (Nikon; Tokyo, Jepun). Saiz dan nombor kristal diukur daripada sekurang-kurangnya 15 HPF untuk setiap sampel menggunakan perisian NIS Element D versi 4.11 (Nikon). Jisim kristal dikira daripada sekurang-kurangnya 100 kristal dalam 15 HPF menggunakan formula berikut: Jisim kristal (µm2/HPF)=Saiz kristal purata dalam setiap medan (µm2) × Bilangan kristal dalam setiap medan (/HPF) ( 1)
2.4. Ujian pertumbuhan kristal COM
Ujian pertumbuhan kristal dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [30,31].
Secara ringkasnya, isipadu yang sama (500 ul) 10 mM CaCl2⋅2H2O dan 1.0 mM Na2C2O4 dalam penimbal penghabluran telah dicampur (1:1) (v/v) dalam setiap telaga { {12}}plat perigi. Campuran diinkubasi pada suhu 25 ◦C selama 1 jam untuk membolehkan penghabluran lengkap. Pada titik ini (T0), isipadu yang sama (4 ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) ataudiosmin(2.5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 atau 160 nM) telah ditambah ke dalam setiap telaga dan campuran itu diinkubasi lagi selama 60 minit (T60). Pada T0 dan T60, imej kristal telah ditangkap secara rawak daripada sekurang-kurangnya 15 HPF di bawah mikroskop cahaya kontras fasa terbalik Nikon Eclipse Ti-S. Saiz kristal pada T0 dan T60 diukur menggunakan perisian NIS Element D versi 4.11 (Nikon), manakala pertumbuhan kristal (diwakili oleh Δ Saiz Kristal) dikira daripada sekurang-kurangnya 100 kristal dalam 15 HPF menggunakan formula berikut: Δ Saiz kristal (µm2)=Saiz kristal pada T60 − Saiz kristal pada T0 (2)
2.5. Ujian pengagregatan kristal COM
Ujian pengagregatan kristal telah dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [32,33]. Kristal COM telah dijana seperti yang dinyatakan di atas dalam ujian pertumbuhan kristal tetapi dengan isipadu yang lebih besar dalam 50-ml tiub kon (Corning Inc.) dan kemudian dituai melalui sentrifugasi pada 2000 g selama 5 minit. Supernatan dibuang, manakala kristal COM dibasuh tiga kali dengan metanol. Selepas sentrifugasi lain pada 2000 g selama 5 minit, metanol dibuang dan kristal dikeringkan di udara semalaman pada suhu 25 ◦C. Hablur COM (1000 µg berat kering) digantung semula dalam 1 ml penimbal penghabluran dalam setiap telaga 6-plat telaga (Corning Inc.). Isipadu yang sama (4 ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) ataudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 atau 160 nM) telah ditambah ke dalam suspensi kristal COM dalam setiap telaga. Plat digoncang secara berterusan dalam inkubator yang bergoncang (Zhicheng; Shanghai, China) pada 150 rpm dan 25 ◦C selama 1 jam. Selepas itu, pembentukan agregat kristal COM (ditakrifkan sebagai "himpunan tiga atau lebih kristal COM individu yang bercantum rapat" [32]) telah diperiksa dan diimej di bawah mikroskop cahaya kontras fasa terbalik Nikon Eclipse Ti-S. Bilangan agregat kristal COM dikira daripada sekurang-kurangnya 15 HPF rawak setiap telaga.
2.6. Ujian lekatan sel kristal COM
Ujian lekatan sel kristal dilakukan seperti yang diterangkan sebelum ini [34,35]. Secara ringkas, hablur COM dijana seperti yang dinyatakan di atas dalam tiub kon 50-ml dan kemudian dituai melalui sentrifugasi pada 2000 g selama 5 minit. Supernatan dibuang, manakala kristal COM dibasuh tiga kali dengan metanol. Selepas sentrifugasi lain pada 2000 g selama 5 minit, metanol dibuang dan kristal dikeringkan di udara semalaman pada suhu 25 ◦C. Kristal telah dinyahcemar oleh sinaran cahaya UV selama 30 minit sebelum campur tangan dengan sel.
Sel-sel MDCK (pada ketumpatan 2 × 105 sel/telaga) telah disemai dan ditanam dalam setiap telaga 6-plat telaga (Corning Inc.) selama 48 jam untuk mendapatkan monolayer konfluen. Medium kultur kemudiannya disegarkan sebelum menambah kristal COM (100 µg hablur berat kering per ml medium kultur). Isipadu yang sama (4 ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) ataudiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 atau 160 nM) telah ditambah ke dalam setiap telaga. Sel-sel telah diinkubasi selanjutnya dalam inkubator yang dilembapkan dengan 5 peratus CO2 pada 37 ◦C selama 1 jam. Selepas itu, sel-sel itu dibasuh dengan kuat dengan PBS lima kali dan diimej di bawah mikroskop cahaya kontras fasa terbalik Nikon Eclipse Ti-S. Bilangan baki kristal COM yang melekat pada permukaan sel tiub renal dikira daripada sekurang-kurangnya 15 medan rawak setiap telaga.
Cistanche untuk fungsi buah pinggang
2.7. Ujian dalaman kristal COM
Kristal COM berlabel pendarfluor telah dihasilkan seperti yang diterangkan sebelum ini [36,37]. Komposisi/kepekatan bahan kimia yang digunakan untuk penghabluran adalah sama seperti yang dinyatakan di atas untuk kristal biasa (tidak berlabel), tetapi 0.1 µg/ml fluorescein isothiocyanate (FITC) (Thermo Scientific Pierce; Rockford, IL) ialah ditambah kepada larutan CaCl2⋅2H2O sebelum dicampur dengan Na2C2O4. Langkah-langkah seterusnya (penghabluran dan penuaian) telah dilakukan seperti yang dinyatakan di atas, tetapi dalam keadaan gelap.
Untuk menilai internalisasi kristal ke dalam sel epitelium tubular renal, sel MDCK (pada ketumpatan 2 × 105 sel/telaga) telah disemai dan ditanam dalam setiap telaga 6-plat telaga (Corning Inc.) selama 48 jam untuk mendapatkan lapisan tunggal konfluen. Monolayer sel diinkubasi dengan kristal COM berlabel FITC (1000 µg kristal/ml medium) dalam inkubator lembap dengan 5 peratus CO2 pada 37 ◦C selama 1 jam. Selepas itu, sel-sel telah dibasuh dengan PBS dan diinkubasi dengan larutan trypsin-EDTA untuk menghapuskan kristal tidak dalaman (kedua-dua melekat dan tidak melekat). Peratusan sel dengan kristal dalaman dikira daripada sejumlah 10,000 peristiwa yang diperoleh menggunakan cytometer aliran (BD Accuri C6) (BD Biosciences; San Jose, CA). Sel-sel yang diinkubasi dengan kristal COM biasa (tidak berlabel) digunakan untuk pratetap bunyi dan ambang untuk isyarat pendarfluor positif. Sel-sel dengan isyarat pendarfluor positif kemudiannya dikira dan digunakan untuk pengiraan peratusan tersebut.
2.8. Pencerobohan kristal COM melalui ujian ECM
Kristal COM telah disediakan seperti yang diterangkan di atas untuk pengagregatan kristal dan ujian lekatan sel kristal. Ujian pencerobohan kristal dilakukan mengikut protokol yang ditetapkan sebelum ini [38,39]. Secara ringkas, sejumlah 20 µg hablur COM disalut dengan penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif), albumin (Sigma-Aldrich) (kawalan positif) ataudiosmin(2.5, 5, 1{{10}}, 20, 40, 80 atau 160 nM) telah ditambah ke dalam 200 ul MEM. Selepas itu, 200 ul 0.3 pM Lys-plasminogen (Fitzgerald Industries international; Acton, MA) dalam PBS dicampur dan diinkubasi dengan kompleks kristal-protein pada 37 ◦C selama 1 jam. Plasminogen yang tidak terikat telah dibuang dengan sentrifugasi pada 2000 g selama 5 minit dan pelet dibasuh dengan PBS sekali. Selepas itu, 100 ul 0.15 pM urokinase plasminogen activator (uPA) (Fitzgerald Industries International) dalam PBS dicampur dengan kompleks kristal-protein-plasminogen/plasmin. Campuran kemudiannya ditambah di atas gel matriks di dalam ruang migrasi ECM dan diinkubasi pada suhu 37 ◦C. Selepas 24-h pengeraman, larutan kekal di bahagian atas kebuk migrasi dikeluarkan dengan menggunakan kain kasa atau kertas tisu. Hablur COM yang diserang di dalam gel matriks kemudiannya diimej menggunakan mikroskop cahaya dengan mod kontras gangguan pembezaan (DIC) (Nikon H600L). Jarak pencerobohan kristal telah diukur dan dipuratakan daripada sekurang-kurangnya 15 medan kuasa rendah (LPF) dalam ruang yang sama menggunakan perisian NIS Element D versi 4.11 (Nikon).
2.9. Analisis statistik
Semua eksperimen di atas dilakukan dalam tiga kali ganda (tiga eksperimen bebas) dan data kuantitatif dilaporkan sebagai min ± SEM. Perbandingan berbilang dilakukan menggunakan analisis varians sehala (ANOVA) dengan ujian post-hoc Tukey. Ujian korelasi Pearson dilakukan untuk menentukan hubungan antara pembolehubah. Semua analisis statistik dilakukan dengan menggunakan perisian SPSS (versi 18) (IBM SPSS; Armonk, NY). Nilai P kurang daripada 0.05 dianggap signifikan secara statistik.
3. Keputusan
3.1. Kesan diosmin pada penghabluran COM
Penghabluran adalah salah satu langkah awal yang pentingbuah pinggangproses pembentukan batu semua jenis. Selepas 1-j penghabluran dengan atau tanpadiosminpada pelbagai kepekatan (2.5, 5, 10, 20, 40, 80 atau 160 nM), saiz dan nombor kristal COM diukur dan jisim kristal dikira. Penimbal penghabluran dan DMSO pelarut berfungsi sebagai kawalan kosong dan kawalan negatif, masing-masing. Data menunjukkan bahawa semua dos (2.5-160 nM) disomin mengurangkan saiz kristal dengan ketara tetapi meningkatkan bilangan kristal dalam cara yang bergantung kepada dos jika dibandingkan dengan kawalan kosong dan negatif (Rajah 1A-1C). Selaras dengan nombor kristal, dos jisim kristal bergantung kepada peningkatan (Rajah 1D). Secara keseluruhan, data ini menunjukkan bahawa diosmin menggalakkan penghabluran COM (neocrystals).
3.2. Kesan diosmin pada pertumbuhan kristal COM
Kesan modulasi daripadadiosminpada pertumbuhan hablur COM dinilai dengan mengukur perubahan dalam saiz hablur (Δ Saiz kristal) selepas 60-minit pengeraman selanjutnya selepas selesai langkah penghabluran awal, apabila neocrystals tiada. Keputusan menunjukkan bahawa semua dos (2.5–160nM) disomin mengurangkan dengan ketara saiz Δ Kristal dalam cara yang bergantung kepada dos berbanding dengan kawalan kosong dan negatif (Rajah 2). Penemuan ini menunjukkan bahawa diosmin menghalang pertumbuhan kristal COM.
3.3. Kesan diosmin pada pengagregatan kristal COM
Sebagai tambahan kepada pertumbuhan kristal, pengagregatan kristal individu yang melekat rapat bersama adalah satu lagi langkah penting semasabuah pinggangpatogenesis batu. Tahap pengagregatan kristal yang tinggi akhirnya boleh menyebabkan pembesaran batu dan halangan lumen tiub buah pinggang kecil. Membandingkan dengan kawalan kosong dan negatif,diosminpada 10–160nM bergantung kepada dos peningkatan bilangan agregat kristal COM (Rajah 3). Keputusan ini menunjukkan bahawa diosmin menggalakkan pengagregatan kristal COM.
Cistanche untuk fungsi buah pinggang
3.4. Kesan diosmin pada lekatan sel kristal COM
Pengekalan kristal penyebab adalah salah satu langkah penting untukbuah pinggangpembentukan batu dan boleh disebabkan oleh lekatan sel kristal yang menghalang kristal daripada keluar bersama-sama dengan aliran keluar air kencing. Oleh itu, kami menilai aktiviti modulasidiosminpada lekatan sel kristal COM. Data mendedahkan bahawa diosmin pada 5–160nM dengan ketara mengurangkan keupayaan pelekat kristal COM pada sel tiub renal dalam cara yang bergantung kepada dos berbanding dengan kawalan kosong dan negatif (Rajah 4). Data ini menunjukkan bahawa diosmin menghalang lekatan sel kristal COM.
3.5. Kesan diosmin pada internalisasi kristal COM ke dalam sel tiub buah pinggang
Selepas lekatan, beberapa kristal COM boleh dihayati ke dalam sel tubular renal dan menyebabkan beberapa tindak balas selular berikutnya [37,40]. Penginternalan kristal dinilai dengan menggunakan kristal COM berlabel FITC dan dikira oleh sitometri aliran. Kristal COM biasa (tanpa pelabelan) digunakan untuk menolak bunyi teknikal dan untuk memastikan bahawa keamatan pendarfluor adalah daripada isyarat FITC. Berbanding dengan kawalan kosong dan negatif, peratusan sel dengan kristal dalaman telah menurun dengan ketara sebanyakdiosminpada 10–160nM dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 5). Penemuan menunjukkan bahawa disomin menghalang penghayatan kristal COM ke dalam sel tiub buah pinggang.
3.6. Kesan diosmin pada pencerobohan kristal COM melalui ECM
Pencerobohan kristal melalui ECM adalah proses patogenik/musnah semasabuah pinggangpatogenesis batu yang boleh mencetuskan pelbagai tindak balas keradangan dan lata, dengan itu memburukkan lagi mekanisme penyakit. Kami mengkaji fenomena ini dengan menggunakan protokol yang ditetapkan berdasarkan aktiviti plasminogen-plasmin kompleks kristal-protein [38,39]. Keputusan menunjukkan bahawa semua dos disomin (2.5–160nM) secara ketara meningkatkan pencerobohan kristal COM melalui ECM dalam cara yang bergantung kepada dos (Rajah 6). Menariknya,diosminpada 160nM boleh menggalakkan pencerobohan kristal COM setanding dengan albumin, yang merupakan penganjur kuat yang diketahui untuk pencerobohan kristal COM [41] (Rajah 6). Keputusan ini menunjukkan bahawa diosmin sangat menggalakkan pencerobohan kristal COM melalui ECM.
Rajah 1. Kesan daripadadiosminpada penghabluran COM. Ujian penghabluran dilakukan dengan jumlah yang sama (4ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) atau diosmin (2.5–160nM). (A): Morfologi kristal dalam setiap keadaan selepas 1-h penghabluran. Pembesaran asal ialah 400× untuk semua panel. (B): Saiz kristal. (C): Nombor kristal. (D): Jisim kristal (lihat Formula 1 dalam "Bahan dan Kaedah") dianalisis daripada sekurang-kurangnya 100 kristal dalam 15 HPF. Setiap bar mewakili min ±SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *=hlm< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" dmso.="">
Rajah 2. Kesan daripadadiosminpada pertumbuhan kristal COM. Ujian pertumbuhan kristal dilakukan selepas penghabluran selesai (untuk mengelakkan neocrystallization) dengan jumlah yang sama (4ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) atau diosmin (2.5–160nM). (A): Morfologi kristal dalam setiap keadaan di T0 dan T60. Pembesaran asal ialah 400 × untuk semua panel. (B)-(J): Histogram saiz kristal yang diukur daripada kristal individu pada T0 dan T60 dalam setiap kumpulan. (K): Δ Saiz kristal (lihat Formula 2 dalam "Bahan dan Kaedah") dianalisis daripada sekurang-kurangnya 100 kristal dalam 15 HPF. Setiap bar mewakili min ± SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *= p < 0.05="" lwn.="" kawalan="" kosong;="" #="p">< 0.05="" lwn.="">
Rajah 3. Kesan daripadadiosminpada pengagregatan kristal COM. Ujian pengagregatan kristal dilakukan dengan jumlah yang sama (4ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) atau diosmin (2.5-160nM). (A): Mikrograf kristal COM terkumpul (dilabelkan dengan bulatan bertitik). Pembesaran asal ialah 400 ×untuk semua panel. (B): Bilangan agregat kristal dikira daripada sekurang-kurangnya 15 HPF rawak dalam setiap telaga. Setiap bar mewakili min ± SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *=hlm< 0.05="" vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="" dmso.="">
Rajah 4. Kesan daripadadiosminpada lekatan sel kristal COM. Ujian lekatan sel kristal dilakukan dengan jumlah yang sama (4ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) atau diosmin (2.5–160nM). (A): Mikrograf baki kristal yang melekat padat pada lapisan tunggal sel selepas mengeluarkan kristal yang tidak terikat dengan mencuci kuat dengan PBS. Pembesaran asal ialah 200 × untuk semua panel. (B): Bilangan kristal yang melekat dikira daripada sekurang-kurangnya 15 medan rawak dalam setiap telaga. Setiap bar mewakili min ±SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *= hlm<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p"><0.05 vs.="">
Rajah 5. Kesan daripadadiosminpada penghayatan kristal COM ke dalam sel tiub buah pinggang. Ujian dalaman kristal dilakukan menggunakan kristal COM berlabel FITC (FITC-COM), manakala kristal COM biasa (tidak berlabel) digunakan untuk penolakan latar belakang/bunyi. Ujian dilakukan dengan volum yang sama (4ul) penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif) atau diosmin (2.5–160nM). (A): Analisis dot-plot sitometrik aliran saiz (paksi-y) dan keamatan pendarfluor FITC (paksi-x) sel selepas mengalih keluar kristal tidak dalaman dengan 0.1 peratus trypsin/2.5mM EDTA. (B): Peratusan sel dengan kristal COM berlabel FITC yang diinternalisasi. Setiap bar mewakili min ± SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *= hlm<0.05 vs.="" fitc-com="" +="" blank="" control;="" #="">< 0.05="" vs.="" fitc-com="" +="" dmso.="">
Rajah 6. Kesan daripadadiosminpada pencerobohan kristal COM melalui ECM. Pencerobohan kristal melalui ujian ECM dilakukan menggunakan kristal COM yang disalut dengan penimbal penghabluran (kawalan kosong), DMSO (kawalan negatif), albumin (kawalan positif) atau diosmin (2.5-160nM). (A): Mikrograf kristal COM menyerang atau berhijrah melalui ruang migrasi ECM. Pembesaran asal ialah 100 × untuk semua panel. (B): Jarak pencerobohan kristal diukur daripada sekurang-kurangnya 15 LPF rawak dalam setiap ruang. Setiap bar mewakili min ±SEM data yang diperoleh daripada 3 eksperimen bebas. *= hlm<0.05 vs.="" blank="" control;="" #="p" <="" 0.05="" vs.="">
4. Perbincangan
Penyakit batu karang disebabkan oleh pembentukan batu di dalambuah pinggangdan sistem pelvocalyceal. Proses pembentukan batu ginjal yang biasa termasuk penghabluran COM, pertumbuhan, pengagregatan, pengekalan oleh lekatan sel kristal, dan pencerobohan melalui interstitium buah pinggang yang kaya dengan ECM [21,22]. Terdapat beberapa percubaan untuk mencegah penyakit ini menggunakan pelbagai ubat dan/atau suplemen pemakanan. Banyak bukti terkini telah melaporkan bahawa flavonoid, flavon glikosida dan sebatian lain yang diekstrak daripada buah sitrus mungkin mempunyai kesan pencegahan terhadap penyakit batu karang dan gangguan lain [23-25]. Antaranya,diosmin, flavon glikosida semulajadi dan derivatif hesperidin yang ditemui terutamanya dalam buah sitrus [1,2], telah dicadangkan untuk memainkan peranan pencegahan terhadap kecederaan dan kerosakanbuah pinggangtisu [13,42]. Selain itu, peranan anti-urolithiasisnya telah dilaporkan dalam beberapa kajian terdahulu menggunakan model haiwan [26,27]. Namun begitu, kesan berfaedah dan mekanisme asas diosmin dalam pencegahan batu karang kekal kabur. Oleh itu, kami mengkaji aktiviti modulasi diosmin pada kristal COM. Analisis sistematik dilakukan pada pelbagai peringkat COMbuah pinggangpembentukan batu, termasuk penghabluran, pertumbuhan kristal, pengagregatan, lekatan sel kristal, internalisasi ke dalam sel tubular renal dan pencerobohan melalui ECM.
Selepas pengambilan oral daripadadiosmin, paras plasmanya pada manusia adalah berjulat daripada {{0}}.5 hingga 200ng/ml (atau 0.8–300nM) [43,44]. Kepekatan plasma maksimum (Cmax) adalah lebih kurang 50ng/ml (atau 85nM) [43,44]. Oleh itu, dos diosmin yang digunakan dalam kajian kami sekarang (2.5-160nM) adalah dalam julat yang berkaitan secara farmakologi untuk farmakokinetiknya. Oleh kerana DMSO digunakan sebagai pelarut untuk melarutkan diosmin sepenuhnya setiap cadangan, DMSO digunakan sebagai kawalan negatif dalam kajian ini sebagai tambahan kepada kawalan kosong untuk memastikan tiada kesan daripada bahan pelarut itu sendiri yang mungkin mengganggu tafsiran data. Dalam semua ujian, data menunjukkan bahawa tiada kesan ketara daripada DMSO yang diperhatikan dan semua data kuantitatif yang diperoleh daripada kawalan negatif adalah setanding dengan kawalan kosong.
Ujian penghabluran COM mendedahkan bahawa semua kepekatandiosmin(2.5, 5, 10, 20, 40, 80 dan 160nM) boleh mengurangkan saiz kristal COM tetapi, sebaliknya, meningkatkan bilangan kristal. Oleh kerana jisim kristal adalah produk akhir kedua-dua saiz dan nombor kristal dan lebih relevan untuk mencerminkan tahap penghabluran COM, kami kemudian menilai sama ada diosmin mempengaruhi indeks kristal ini. Data menunjukkan bahawa semua kepekatan diosmin mempunyai kesan menggalakkan pada jisim kristal COM, selaras dengan data pada nombor kristal. Selepas penghabluran, hablur COM boleh terus berkembang kepada saiz yang lebih besar untuk langkah seterusnyabuah pinggangpembentukan batu.
Berbeza dengan penghabluran, diosmin pada semua kepekatan mempamerkan kesan perencatan pada pertumbuhan kristal COM dalam cara yang bergantung kepada dos. Beberapa kajian terdahulu telah melaporkan bahawa keterlarutan kristal CaOx boleh ditingkatkan oleh derivatif hidroksiantrakuinon dengan glikosilasi [45]. Selain itu, kehadiran gula dalam sebatian bioaktif sedemikian boleh mengikat dengan ion kalsium bebas mungkin disebabkan oleh kumpulan hidroksil dalam struktur molekul, dengan itu menghalang pembentukan kristal CaOx [45,46]. Diosmin juga mungkin menjejaskan peralihan kalsium terlarut dan ion oksalat ke dalam zarah kristal COM dalam cecair tiub buah pinggang dalam proses penghabluran COM berdasarkan mekanisme ini.
Walau bagaimanapun, pengagregatan kristal COM telah dipromosikan oleh 10-160nMdiosmin, membabitkan keupayaan diosmin untuk bertindak sebagai penghubung atau molekul pelekat untuk merekrut kristal individu untuk mengikat bersama untuk membentuk agregat kristal. Pengikatan ini juga mengakibatkan perkembangan jambatan pelekat antara kristal individu dan boleh mendorong pembentukan struktur besar kristal COM, yang dengan mudah menyumbang kepada pemendapan nidus batu di dalambuah pinggang[32].
Pengekalan kristal COM melalui lekatan kristal pada permukaan sel tiub buah pinggang telah ditubuhkan sebagai satu lagi langkah penting untuk pembentukan batu ginjal [47]. Data kami mendedahkan bahawa diosmin boleh mengurangkan keupayaan pelekat kristal COM untuk mengikat dengan permukaan apikal sel tubular renal MDCK. Beberapa kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa glycosaminoglycans (sebatian polisakarida) yang disalut pada kristal CaOx atau dinyatakan pada sel tubular renal boleh mengganggu keupayaan pelekat kristal CaOx pada sel tubular renal [48]. Selain itu, ekspresi reseptor kristal pada sel tubular renal adalah salah satu mekanisme penting yang menentukan lekatan sel kristal [21]. Walaupun kristal CaOx mendorong kecederaan membran apikal, terutamanya mikrovili, beberapa polifenol seperti epigallocatechin gallate (EGCG) boleh menghalang lekatan sel kristal dan kecederaan selular [49]. Selain itu, bahan flavonoid dalam pelbagai ekstrak tumbuhan telah dilaporkan sebelum ini meningkatkan tahap pH kencing, yang membawa kepada perencatan lekatan sel kristal [50,51]. mungkin,diosminmungkin juga melemahkan kecederaan selular yang disebabkan oleh COM, dengan itu mengurangkan lekatan sel kristal.
Pengintegrasian kristal COM telah ditunjukkan untuk muncul terutamanya oleh endositosis melalui laluan macropinocytosis yang dimediasi sitoskeleton aktin [40]. Flavonoid seperti quercetin telah dilaporkan menjejaskan sitoskeleton aktin yang diperlukan untuk macropinocytosis [52,53]. Penemuan kami menunjukkan bahawa diosmin secara signifikan mengurangkan keupayaan sel MDCK untuk menginternalisasi kristal COM. Kesan perencatan diosmin sedemikian mungkin dikaitkan dengan pemasangan atau organisasi sitoskeleton aktin di dalam sel yang secara langsung mempengaruhi laluan macropinocytosis [54,55].
Selepas internalisasi, kristal COM telah didegradasi oleh endolisosom yang mengakibatkan peningkatan kalsium bebas dan ion oksalat dalam interstitium buah pinggang [37]. Peningkatan ion kalsium dan oksalat sedemikian boleh membawa kepada neocrystallization COM dalam interstitium buah pinggang [56,57]. Di samping itu, kehadiran kristal COM interstisial mungkin disebabkan oleh kecacatan persimpangan ketat dan halangan lekatan paraselular, mengakibatkan peningkatan kebolehtelapan paraselular dan translokasi kristal [58-60]. Kristal ini kemudiannya boleh menyerang interstitium buah pinggang melalui ECM dan seterusnya mencetuskan beberapa tindak balas keradangan dan kerosakan tisu [58-60]. Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa pencerobohan kristal COM melalui ruang migrasi ECM telah diinduksi oleh semua kepekatan diosmin. Diosmin mungkin terikat pada permukaan kristal COM dan berinteraksi dengan sistem plasminogen-plasmin yang mendorong penghijrahan kristal dalam ruang migrasi ECM [38,39].
Cistanche untuk buah pinggang
Keranadiosminmendorong kedua-dua kesan menghalang dan menggalakkan pada pelbagai proses pembentukan batu COM yang berbeza, oleh itu kami menentukan hubungan mereka menggunakan ujian korelasi Pearson. Analisis korelasi mendedahkan bahawa nombor hablur berkorelasi songsang dengan kedua-dua saiz hablur dan pertumbuhan hablur (Δ Saiz kristal) (Rajah 7A dan B). Saiz kristal berkorelasi kuat dengan pertumbuhan kristal (Rajah 7C) tetapi berkorelasi songsang dengan jisim kristal (Rajah 7D). Akhir sekali, jisim kristal berkorelasi kuat dengan kedua-dua nombor kristal dan pengagregatan kristal (Rajah 7E dan F). Daripada analisis korelasi, data menunjukkan bahawa nombor hablur dan jisim hablur lebih relevan untuk mencerminkan penghabluran berbanding saiz hablur (Rajah 7A, D dan E). Di samping itu, saiz neocrystals semasa penghabluran adalah berkaitan dengan pertumbuhan kristal prabentuk (Rajah 7C), manakala tahap penghabluran (seperti yang dicerminkan oleh nombor kristal dan jisim kristal) berkait rapat dengan tahap pengagregatan kristal (Rajah 7E dan F). Walau bagaimanapun, korelasi ini kemungkinan besar khusus untuk kesan diosmin, manakala kesan daripada modulator lain mungkin atau mungkin tidak mempunyai korelasi yang sama. Sebagai contoh, fibronektin mengurangkan jisim kristal dan menghalang pertumbuhan kristal, tetapi menggalakkan pengagregatan kristal [31]. Di samping itu, Escherichia coli yang berdaya maju utuh meningkatkan saiz dan jisim kristal tetapi tidak mempunyai kesan pada nombor kristal [33]. Data ini menunjukkan bahawa korelasi antara pelbagai ujian kristal COM tidak universal untuk semua modulator.
Akhirnya, kami telah meringkaskan keputusan yang diperoleh daripada pelbagai ujian dan mengintegrasikannya dengan mekanisme patogenikbuah pinggangpenyakit batu (lihat skema dalam Rajah 8). Daripada analisis korelasi, diosmin menggalakkan penghabluran (Rajah 8A). Antara penghabluran dan pertumbuhan kristal,diosminmengekalkan keseimbangan yang baik dengan menggalakkan penghabluran tetapi, sebaliknya, menghalang pertumbuhan kristal (Rajah 8B). Mengenai semua kesan pada kristal COM sahaja (tanpa mengambil kira sel dan ECM yang turut campur tangan), aktiviti menggalakkan diosmin adalah lebih menonjol daripada aktiviti menghalangnya pada kristal COM kerana ia menggalakkan kedua-dua penghabluran dan pengagregatan kristal, tetapi hanya menghalang pertumbuhan kristal ( Rajah 8C). Walaupun penghabluran meningkat, saiz kristal berkurangan dan dikaitkan dengan perencatan pertumbuhan (Rajah 7C). Data ini konsisten dengan keputusan yang dilaporkan oleh Kavanagh et al. [61–63], menunjukkan bahawa peningkatan penghabluran membawa kepada penurunan supersaturasi kalsium dan ion oksalat dalam larutan, dengan itu mengurangkan pertumbuhan. Walau bagaimanapun, pertumbuhan kristal bukanlah satu-satunya faktor yang menentukanbuah pinggangpatogenesis batu [64], terutamanya apabila jisim kristal mengatasi dan dikaitkan dengan peningkatan pengagregatan kristal (Rajah 7F) yang boleh meningkatkan peluang bahan kristal untuk tersekat dalam segmen tiub kecil (dalam hipotesis intratubular), dengan itu meningkatkan peluang pembentukan batu. Selain itu, kajian terdahulu telah menunjukkan data yang konsisten dengan penemuan kami, menunjukkan bahawa peningkatan bilangan kristal dikaitkan dengan peningkatan pengagregatan kristal dan pembesaran batu [63].
Rajah 7. Analisis korelasi. (A)–(F): Korelasi antara nombor kristal COM, saiz kristal, saiz kristal Δ, jisim kristal, dan beberapa agregat kristal telah dianalisis dengan ujian korelasi Pearson.
Rajah 8. Skema meringkaskan kesan modulasi bagidiosminpada COMbuah pinggangproses pembentukan batu. (A): Kesan diosmin pada penghabluran COM. (B): Kesan diosmin pada penghabluran COM dan pertumbuhan kristal. (C): Kesan diosmin pada penghabluran, pertumbuhan dan pengagregatan COM. (D): Kesan diosmin pada keseluruhan proses pembentukan batu karang COM.
Apabila interaksi dengan sel tubular renal dan ECM dipertimbangkan, gambaran global tentang kesan dwidiosminpada COM pembentukan batu ginjal menjadi lebih jelas (Rajah 8D). Diosmin menghalang lekatan sel kristal, dengan itu mengurangkan penghayatan kristal ke dalam sel. Ini boleh dijelaskan bahawa saiz kristal COM yang lebih kecil mempunyai keupayaan pelekat yang kurang untuk mengikat sel-sel tiub buah pinggang berbanding dengan yang lebih besar seperti yang dilaporkan dalam kajian terbaru kami [34] dan kajian terdahulu oleh kumpulan lain [65]. Keupayaan pelekat yang kurang bagi kristal COM yang lebih kecil adalah disebabkan oleh daya pelekatnya yang kurang pada permukaan sel dan bilangan reseptor kristal COM yang lebih sedikit yang terikat kepada mereka seperti yang ditentukan oleh mikroskopi daya atom dan analisis proteom, masing-masing [34]. Diosmin juga menghalang penghayatan kristal. Ambil perhatian bahawa proses internalisasi adalah pedang bermata dua yang memerlukan tafsiran yang teliti. Internalisasi atau endositosis dalam salah satu mekanisme pertahanan yang digunakan oleh sel untuk penyingkiran kristal oleh endolisosom. Walau bagaimanapun, degradasi kristal utuh menjana ion kalsium dan oksalat bebas yang boleh bergerak dari petak intraselular ke interstitium buah pinggang, di mana ia boleh menghasilkan neocrystals [56,57]. Sebaliknya, diosmin menggalakkan pencerobohan kristal melalui ECM, yang merupakan salah satu mekanisme penting untuk patogenesis batu ginjal (terutamanya dalam model plak Randall) [58-60]. Secara keseluruhan, Rajah 8D meringkaskan semua kesan modulasi dwi diosmin pada COMbuah pinggangproses pembentukan batu. Perlu diingatkan bahawa keseimbangan kesan menggalakkan dan menghalang ini tidak boleh dikira dengan tepat (tidak seperti persamaan matematik). Selain itu, terdapat beberapa faktor endogen dan eksogen lain yang juga boleh mengganggu proses pembentukan batu. Akhirnya, diosmin juga mempamerkan beberapa kesan tidak langsung pada pembentukan batu ginjal, termasuk sifat antioksidan dan anti-radangnya [5,6] yang perlu diambil kira. Oleh itu, hasil akhir kesan modulasi dwi inidiosminpada COMbuah pinggangpembentukan batu memerlukan penyiasatan in vivo lanjut dan kajian prospektif kohort besar.
5. Kesimpulan
Ringkasnya, kami melaporkan di sini kesan dwi diosmin pada modulasi kristal COM dalam cara yang bergantung kepada dos. Walaupun ia menghalang pertumbuhan kristal COM, lekatan sel kristal, dan dalaman ke dalam sel tubular renal,diosminmenggalakkan penghabluran, pengagregatan dan pencerobohan COM melalui ECM. Oleh itu, peranan anti-urolithiasisnya diragui dan berhati-hati harus dibuat untuk penggunaannya dalam penyakit batu karang.
penyata sumbangan pengarang CRedit
Supaporn Khamchun: Pengkonsepan, Metodologi, Perisian, Pengesahan, Analisis Formal, Penyiasatan, Penyusunan data, Penulisan – draf asal, Visualisasi, Sunisa Yoodee: Pengkonsepan, Metodologi, Perisian, Pengesahan, Analisis Formal, Penyiasatan, Penyusunan data, Penulisan – draf asal, Visualisasi, Lawati Thongboonkerd: Pengkonsepan, Metodologi, Perisian, Pengesahan, Sumber, Penulisan – semakan & penyuntingan, Penyeliaan, Pentadbiran projek, Pemerolehan pembiayaan.
Penyata konflik kepentingan
Penulis mengisytiharkan TIADA konflik kepentingan.
Ucapan terima kasih
Kami berterima kasih atas bantuan teknikal Kittiya Suwannakud. Kerja ini disokong oleh Pejabat Majlis Dasar Penyelidikan dan Inovasi Sains Pendidikan Tinggi Negara (NXPO) melalui PMU-B dan Dana Penyelidikan Thailand (IRN60W0004). VT juga disokong oleh Geran "Chalermphrakiat", Fakulti Perubatan Hospital Siriraj.
Rujukan
[1] A. Bogucka-Kocka, M. Wozniak, M. Feldo, J. Kockic, K. Szewczyk,Diosmin– teknik pengasingan, penentuan dalam bahan tumbuhan dan formulasi farmaseutikal, dan penggunaan klinikal, Nat. Prod. Commun. 8 (2013) 545–550.
[2] Y. Zheng, R. Zhang, W. Shi, L. Li, H. Liu, Z. Chen, L. Wu, Metabolisme dan aktiviti farmakologi sebatian semulajadi yang memberi manfaat kepada kesihatan diosmin, Fungsi Makanan. 11 (2020) 8472–8492.
[3] ENCIK Cesarone, G. Belcaro, L. Pellegrini, A. Ledda, G. Vinciguerra, A. Ricci, A. Di Renzo, I. Ruffini, G. Gizzi, E. Ippolito, F. Fano, M. Dugall , G. Acerbi, U. Cornelli, M. Hosoi, M. Cacchio, Venoruton vs Daflon: penilaian kesan ke atas kualiti hidup dalam kekurangan vena kronik, Angiology 57 (2006) 131-138.
[4] KA Lyseng-Williamson, CM Perry, Pecahan flavonoid yang dimurnikan secara mikro: kajian semula penggunaannya dalam kekurangan vena kronik, ulser vena dan buasir, Ubat 63 (2003) 71–100.
[5] AS Shalkami, M. Hassan, AG Bakr, Anti-radang, aktiviti antioksidan dan anti-apoptosis diosmin dalam kolitis ulseratif yang disebabkan oleh asid asetik, Hum. Exp. Toksik. 37 (2018) 78–86.
[6] M. Berkoz, Diosmin menyekat mediator proinflamasi dalam makrofaj RAW264.7 yang disebabkan oleh lipopolysaccharide melalui laluan isyarat NF-kappaB dan MAPKs, Gen. Physiol. Biophys. 38 (2019) 315–324.
[7] M. Rajasekar, K. Suresh, K. Sivakumar, Diosmin mendorong apoptosis melalui modulasi isyarat STAT-3 dalam 7,12 dimetilbenz(a)antrasena akibat karsinogenesis kantung buccal harmster, Biomed. Pharm. 83 (2016) 1064–1070.
[8] A. Lewinska, J. Adamczyk-Grochala, E. Kwasniewicz, A. Deregowska, M. Wnuk, penuaan yang disebabkan Diosmin, apoptosis dan autophagy dalam sel-sel kanser payudara yang berbeza status p53 dan aktiviti ERK, Toxicol. Lett. 265 (2017) 117–130.
[9] AC Pushkaran, V. Vinod, M. Vanuopadath, SS Nair, SV Nair, AK Vasudevan, R. Biswas, CG Mohan, Gabungan diosmin ubat guna semula dengan asid amoxicillin- clavulanic menyebabkan perencatan sinergistik pertumbuhan mikobakteria, Sci. Rep. 9 (2019) 6800.
[10] CC Hsu, MH Lin, JT Cheng, MC Wu, Tindakan antihiperglisemik diosmin, flavonoid sitrus, diinduksi melalui beta-endorphin endogen dalam tikus diabetes jenis I, Clin. Exp. Pharm. Fisiol. 44 (2017) 549–555.
[11] O. Senthamizhselvan, J. Manivannan, T. Silambarasan, B. Raja,Diosminprarawatan meningkatkan fungsi jantung dan menyekat tekanan oksidatif dalam jantung tikus selepas iskemia/reperfusi, Eur. J. Pharm. 736 (2014) 131–137.
[12] N. Tong, Z. Zhang, Y. Gong, L. Yin, X. Wu, Diosmin melindungi retina tikus daripada kecederaan iskemia/reperfusi, J. Ocul. Pharm. Di sana. 28 (2012) 459–466.
[13] AE Elhelaly, G. AlBasher, S. Alfarraj, R. Almeer, EI Bahbah, MMA Fouda, SG Bungau, L. Aleya, MM Abdel-Daim, Kesan perlindungan hesperidin dan diosmin terhadap hati yang disebabkan oleh akrilamida, buah pinggang, dan kerosakan oksidatif otak pada tikus, Alam Sekitar. Sci. mencemarkan. Res. Int. 26 (2019) 35151–35162.
[14] C. Thongprayoon, AE Krambeck, AD Peraturan, Menentukan beban sebenarbuah pinggangpenyakit batu, Nat. Rev. Nephrol. 16 (2020) 736–746.
[15] K. Bishop, T. Momah, J. Ricks, Nephrolithiasis, Prim. Penjagaan 47 (2020) 661–671.
[16] A. Viljoen, R. Chaudhry, J. Bycroft, Batu buah pinggang, Ann. Clin. Biochem 56 (2019) 15–27.
[17] PM Ferraro, R. Marano, A. Primiano, J. Gervasoni, M. Bargagli, G. Rovere, PF Bassi, G. Gambaro, Komposisi batu dan kalsifikasi vaskular pada pesakit dengan nephrolithiasis, J. Nephrol. 32 (2019) 589–594.
[18] G. Schubert, Analisis batu, Urol. Res. 34 (2006) 146–150.
[19] A. Vinaiphat, S. Aluksanasuwan, J. Manissorn, S. Sutthimethakorn, V. Thongboonkerd, Tindak balas sel tubular renal kepada jenis pembezaan dan dos kristal kalsium oksalat: analisis rangkaian proteom integratif dan penyiasatan berfungsi, Proteomics 17 (2017) ), 1700192.
[20] P. Peerapen, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Analisis rangkaian protein dan kajian kefungsian sitotoksisiti yang disebabkan oleh kristal kalsium oksalat dalam sel epitelium tubular renal, Proteomics 18 (2018), 1800008.
[21] KP Aggarwal, S. Narula, M. Kakkar, C. Tandon, Nephrolithiasis: mekanisme molekul pembentukan batu buah pinggang dan peranan kritikal yang dimainkan oleh modulator, Biomed. Res. Int. 2013 (2013), 292953.
[22] VN Ratkalkar, JG Kleinman, Mekanisme pembentukan batu, Clin. Rev. Bone Miner. Metab. 9 (2011) 187–197.
[23] X. Zeng, Y. Xi, W. Jiang, Peranan pelindung flavonoid dan ekstrak tumbuhan yang kaya dengan flavonoid terhadap urolithiasis: ulasan, Crit. Rev. Sains Makanan. Nutr. 59 (2019) 2125–2135.
[24] MC Nirumand, M. Hajialyani, R. Rahimi, MH Farzaei, S. Zingue, SM Nabavi, A. Bishayee, Tumbuhan pemakanan untuk pencegahan dan pengurusanbuah pinggangbatu: bukti praklinikal dan klinikal dan mekanisme molekul, Int. J. Mol. Sci. 19 (2018) 765.
[25] S. Ahmed, MM Hasan, H. Khan, ZA Mahmood, S. Patel, Pandangan mekanistik polifenol dalam pengurangan urolithiasis kalsium oksalat, Biomed. Pharm. 106 (2018) 1292–1299.
[26] VV Prabhu, D. Sathyamurthy, A. Ramasamy, S. Das, M. Anuradha, S. Pachiappan, Penilaian kesan perlindungan diosmin (flavonoid sitrus) dalam urolithiasis akibat kimia dalam tikus eksperimen, Pharm. biol. 54 (2016) 1513–1521.
[27] A. Noorafshan, S. Karbalay-Doust, F. Karimi,Diosminmengurangkan pemendapan kalsium oksalat dan degenerasi tisu dalam nefrolitiasis pada tikus: kajian stereologi, J. Urol Korea. 54 (2013) 252–257.
[28] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Chutipongtanate, Faktor penentu jenis dan morfologi kristal kalsium oksalat: kepekatan molar, penimbalan, pH, kacau dan suhu, Clin. Chim. Acta 367 (2006) 120–131.
[29] V. Thongboonkerd, T. Semangoen, S. Sinchaikul, ST Chen, Analisis proteomik kalsium oksalat monohidrat sitotoksisiti yang disebabkan oleh kristal dalam sel tubular renal distal, J. Proteome Res. 7 (2008) 4689–4700.
[30] P. Amimanan, R. Tavichakorntrakool, K. Fong-ngern, P. Sribenjalux, A. Lulitanond, V. Prasongwatana, C. Wongkham, P. Boonsiri, WJ Umka, V. Thongboonkerd, Faktor pemanjangan Tu pada Escherichia coli diasingkan daripada air kencing pesakit batu karang menggalakkan pertumbuhan dan pengagregatan kristal kalsium oksalat, Sci. Rep. 7 (2017) 2953.
[31] S. Khamchun, K. Sueksakit, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Kesan modulasi fibronektin pada penghabluran kalsium oksalat, pertumbuhan, pengagregatan, lekatan pada sel tubular renal, dan pencerobohan melalui matriks ekstraselular, J. Biol. Inorg. Kimia. 24 (2019) 235–246.
[32] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Mentakrifkan dan analisis sistematik indeks pengagregatan untuk menilai tahap pengagregatan kristal kalsium oksalat, Depan. Kimia. 5 (2017) 113.
[33] R. Kanlaya, O. Naruepantawart, V. Thongboonkerd, Flagellum bertanggungjawab menggalakkan kesan Escherichia coli yang berdaya maju pada penghabluran kalsium oksalat, pertumbuhan kristal, dan pengagregatan kristal, Depan. Mikrobiol 10 (2019) 2507.
[34] P. Peerapen, V. Thongboonkerd, Protein terikat pembezaan dan keupayaan pelekat kristal kalsium oksalat monohidrat dengan pelbagai saiz, Int. J. Biol. Makromol. 163 (2020) 2210–2223.
[35] K. Fong-ngern, K. Sueksakit, V. Thongboonkerd, Protein kejutan haba permukaan 90 berfungsi sebagai reseptor berpotensi untuk kristal kalsium oksalat pada membran apikal sel epitelium tubular renal, J. Biol. Inorg. Kimia. 21 (2016) 463–474.
[36] S. Chaiyarit, S. Mungdee, V. Thongboonkerd, Pelabelan bukan radioaktif bagi hablur kalsium oksalat untuk penyiasatan interaksi dan pengantaraan sel kristal, Dubur. Kaedah 2 (2010) 1536–1541.
[37] S. Chaiyarit, N. Singhto, V. Thongboonkerd, Hablur kalsium oksalat monohidrat yang dihayati ke dalam sel-sel tiub buah pinggang terdegradasi dan dilarutkan oleh endolisosom, Chem. biol. Berinteraksi. 246 (2016) 30–35.
[38] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, Ujian baru untuk menilai kesan menggalakkan protein pada pencerobohan kristal kalsium oksalat melalui matriks ekstraselular berdasarkan aktiviti plasminogen/plasmin, Talanta 101 (2012) 240–245.
[39] W. Chiangjong, V. Thongboonkerd, Hablur kalsium oksalat meningkatkan rembesan enolase-1 daripada sel tubular renal yang kemudiannya meningkatkan pencerobohan kristal dan monosit melalui interstitium renal, Sci. Rep. 6 (2016) 24064.
[40] R. Kanlaya, K. Sintiprungrat, S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Macropinocytosis ialah mekanisme utama untuk endositosis hablur kalsium oksalat ke dalam sel tubular renal, Cell Biochem. Biophys. 67 (2013) 1171–1179.
[41] S. Sassanarakkit, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, StoneMod: pangkalan data untukbuah pinggangprotein modulasi batu dengan bukti eksperimen, Sci. Rep. 10 (2020) 15109.
[42] G. Eraslan, ZS Sarica, LC Bayram, MY Tekeli, M. Kanbur, M. Karabacak, Kesan diosmin pada kerosakan hati dan buah pinggang akibat aflatoxin, Alam Sekitar. Sci. mencemarkan. Res. Int. 24 (2017) 27931–27941.
[43] R. Russo, D. Chandradhara, N. De Tommasi, Ketersediaan bio perbandingan duadiosminformulasi selepas pemberian oral kepada sukarelawan yang sihat, Molecules 23 (2018) 2174.
[44] JQ Silveira, TB Cesar, JA Manthey, EA Baldwin, J. Bai, S. Raithore, Farmakokinetik flavanone glikosida selepas pengambilan dos tunggal jus oren segar yang diperah berbanding jus oren yang diproses secara komersial dalam manusia yang sihat, J. Agric . Kimia Makanan. 62 (2014) 12576–12584.
[45] A. Frackowiak, P. Skibinski, W. Gawel, E. Zaczynska, A. Czarny, R. Gancarz, Sintesis derivatif glikosida hidroksiantrakuinon dengan keupayaan untuk melarutkan dan menghalang pembentukan kristal kalsium oksalat. Sebatian berpotensi dalam terapi batu karang, Eur. J. Med. Kimia. 45 (2010) 1001–1007.
[46] F. Grases, J. Perello, B. Isern, RM Prieto, Kajian krim berasaskan heksafosfat myo-inositol untuk mencegah kutis kalsinosis dystrophik, Br. J. Dermatol. 152 (2005) 1022–1025.
[47] V. Thongboonkerd, Proteomik interaksi sel kristal: model untuk penyelidikan batu ginjal, Sel 8 (2019) 1076.
[48] CF Verkoelen, Pengekalan kristal dalam penyakit batu renal: peranan penting untuk hyaluronan glycosaminoglycan? J. Am. Soc. Nephrol. 17 (2006) 1673–1687.
[49] K. Fong-ngern, A. Vinaiphat, V. Thongboonkerd, Kecederaan mikrovillar dalam sel epitelium tiub renal yang disebabkan oleh kristal kalsium oksalat dan peranan pelindung epigallocatechin-3-gallate, FASEB J. 31 (2017) 120 –131.
[50] J. Zhou, J. Jin, X. Li, Z. Zhao, L. Zhang, Q. Wang, J. Li, Q. Zhang, S. Xiang, Jumlah flavonoid Desmodium styracifolium melemahkan pembentukan hidroksi- L- proline-induced calcium oxalate urolithiasis dalam tikus, Urolithiasis 46 (2018) 231–241.
[51] J. Manissorn, K. Fong-ngern, P. Peerapen, V. Thongboonkerd, Penilaian sistematik untuk kesan pH air kencing pada penghabluran kalsium oksalat, lekatan sel kristal dan internalisasi ke dalam sel tubular renal, Sci. Rep. 7 (2017) 1798.
[52] S. Cui, J. Qian, P. Bo, Kesan perencatan pada fagositosis Candida albicans yang disebabkan oleh prarawatan dengan kuersetin melalui gangguan sitoskeleton aktin, J. Tradit. Dagu. Med. 33 (2013) 804–809.
[53] S. Cui, Q. Wu, J. Wang, M. Li, J. Qian, S. Li, Quercetin menghalang penghijrahan makrofaj yang disebabkan oleh LPS dengan menekan laluan iNOS/FAK/paxillin dan memodulasi sitoskeleton, Cell Adhes . Migr. 13 (2019) 1–12.
[54] Y. Li, WG Gonzalez, A. Andreev, W. Tang, S. Gandhi, A. Cunha, D. Prober, C. Lois, ME Bronner, kitar semula membran pengantara Makropinositosis memacu penghijrahan puncak neural dengan menyampaikan F- aktin kepada lamellipodium, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 117 (2020) 27400–27411.
[55] H. Inaba, K. Yoda, H. Adachi, RapGEF GflB yang mengikat F-aktin diperlukan untuk makropinositosis yang cekap dalam Dictyostelium, J. Cell Sci. 130 (2017) 3158–3172.
[56] A. Khan, Prevalensi, mekanisme patofisiologi dan faktor yang mempengaruhi urolithiasis, Int. Urol. Nephrol. 50 (2018) 799–806.
[57] AP Evan, EM Worcester, FL Coe, J. Williams Jr., JE Lingeman, Mekanisme pembentukan batu ginjal manusia, Urolithiasis 43 (Suppl 1) (2015) 19–32.
[58] S. Chaiyarit, V. Thongboonkerd, Disfungsi mitokondria danbuah pinggangpenyakit batu, Depan. Fisiol. 11 (2020), 566506.
[59] SR Khan, Aspek histologi model "zarah tetap" pembentukan batu: kajian haiwan, Urolithiasis 45 (2017) 75–87.
[60] VY Bird, SR Khan, Bagaimanakah batu terbentuk? Adakah penyatuan teori tentang pembentukan batu mungkin? Gerbang. Esp. Urol. 70 (2017) 12–27.
[61] JP Kavanagh, Kaedah untuk kajian penghabluran kalsium oksalat dan penggunaannya untuk penyelidikan urolithiasis, Scanning Microsc. 6 (1992) 685–704, perbincangan 704-5.
[62] JP Kavanagh, L. Jones, PN Rao, Kinetik penghabluran kalsium oksalat pada kepekatan berbeza air kencing manusia dan tiruan, dengan nisbah kalsium kepada oksalat yang tetap, Urol. Res. 27 (1999) 231–237.
[63] NK Saw, PN Rao, JP Kavanagh, A. nidus, crystalluria dan pengagregatan: bahan utama untuk pembesaran batu, Urol. Res. 36 (2008) 11–15.
[64] A. Borissova, GE Goltz, JP Kavanagh, TA Wilkins, Kejuruteraan songsang buah pinggang: memodelkan penghabluran kalsium oksalat monohidrat dalam nefron, Med. biol. En. Pengiraan. 48 (2010) 649–659.
[65] LA Thurgood, ES Sorensen, RL Ryall, Kesan intrakrystalline dan osteopontin terikat permukaan pada perlekatan kristal kalsium oksalat dihidrat pada sel buah pinggang anjing Madin-Darby (MDCK) dalam air kencing manusia yang ditapis ultra, BJU Int. 109 (2012) 1100–1109.