Dihydroquercetin Memperbaiki Neuroinflammation dan Defisit Memori yang disebabkan oleh LPSⅠ

ABSTRAK

Dihydroquercetin (DHQ) ialah pentahydroxyflavanone yang telah digunakan sebagai suplemen penting terhadap keradangan berkaitan tekanan oksidatif dan neuroinflammation. Neuroinflammation ialah pengaktifan mekanisme pertahanan sistem saraf pusat, apabila terdedah kepada rangsangan seperti amiloid, badan Lewy, lipopolysaccharide (LPS), dan spesies oksigen reaktif. Ia merupakan pengantara patofisiologi yang penting bagi beberapa gangguan neurodegeneratif, termasuk penyakit Alzheimer, penyakit Parkinson, sklerosis berganda, dan lain-lain.

Klik untuk menambah memori cistanche tubulosa

Objektif kajian ini adalah untuk menilai kesan neuroprotektif DHQ, molekul antioksidan yang kuat, terhadap neuroinflammation yang disebabkan oleh LPS. Pada hari pertama percubaan (hari-1), keradangan saraf telah diinduksi melalui suntikan intracerebroventricular LPS (5 ug/5 ul) ke dalam setiap ventrikel sisi pada tikus. DHQ0.5, 1 dan 2 ug/kg telah disuntik ke dalam urat ekor dalam kumpulan masing-masing dari hari-2 ke hari-10. Kajian tingkah laku menunjukkan bahawa DHQ melemahkan kehilangan yang disebabkan oleh LPS dalam ingatan jangka panjang dan ingatan kerja seperti yang dinilai oleh ujian maze tambah tinggi dan ujian Y-maze.

Selanjutnya, anggaran biokimia mendedahkan bahawa bergantung kepada dos DHQ melemahkan penurunan yang disebabkan oleh LPS dalam tahap asetilkolin dan meningkatkan aktiviti asetilkolin-esterase di rantau hippocampal. DHQ juga meningkatkan aktiviti katalase dan menurunkan oksida nitrik dan peroksidasi lipid yang diubah oleh suntikan LPS.

DHQ juga melemahkan interleukin-6 dalam otak, yang telah meningkat apabila induksi LPS. Penurunan IL-6 dikaitkan dengan aktiviti antioksidannya. Oleh itu, DHQ boleh menjadi calon terapeutik yang berpotensi dalam pengurusan neuroinflammation dan gangguan neurodegenerative yang berkaitan.

1. Pengenalan

Neuroinflammation ialah fenomena pengaktifan mekanisme pertahanan dalam sistem saraf pusat terhadap pelbagai rangsangan (Morales et al., 2015). Ia adalah pengantara patofisiologi yang penting bagi kebanyakan gangguan neurodegeneratif termasuk penyakit Alzheimer, penyakit Parkinson, multiple sclerosis, dan lain-lain (Lyman et al., 2014; Morales et al., 2015). Pelbagai rangsangan termasuk amiloid, badan Lewy, lipopolysaccharide (LPS), dan spesies oksigen reaktif (ROS), yang merupakan pengantara penting neuroinflammation (Lee et al., 2008; Streit et al., 2004).

LPS adalah model yang mantap untuk mengkaji hubungan antara neuroinflammation dan tingkah laku kognitif (Tripathi et al., 2017). LPS juga dilaporkan mendorong tingkah laku seperti kebimbangan dalam model tikus dan tikus (Bassi et al., 2012; Savignac et al., 2016). Walaupun patofisiologi tepat neuroinflammation oleh LPS tidak diketahui sepenuhnya, salah satu mekanismenya ialah pengaktifan pengantara reseptor (TLR)- 4 NFκB, yang merupakan faktor transkripsi untuk banyak sitokin pro-radang (Shih et al., 2015). Mekanisme penting untuk neuroinflammation oleh LPS adalah kerosakan selular akibat penjanaan spesies oksigen reaktif (ROS) dan pengaktifan sitokin (Hsu dan Wen, 2002).

LPS mendorong pengaktifan astrocytes dan mikroglia dalam CNS dan peningkatan selanjutnya dalam ekspresi IL -6 (Wang et al., 2015). IL-6 ialah mediator larut dengan kesan pleiotropik pada keradangan, tindak balas imun dan hematopoiesis dan dianggap sebagai penanda neuroinflammation apabila terdapat dalam CNS (Beurel dan Jope, 2009). LPS menyebabkan neurodegeneration dan kecacatan dalam pembelajaran dan ingatan (Shaw et al., 2001). Dibuktikan bahawa kedua-dua reseptor asetilkolin muskarinik dan nikotinik memainkan peranan dalam tingkah laku pembelajaran dan penyatuan ingatan melalui potensiasi jangka panjang (LTP) (Hasselmo, 2006).

Mengikut hipotesis kolinergik, kehilangan fungsi kolinergik dalam CNS secara signifikan berkaitan dengan penurunan ingatan dan perencat acetylcholine esterase adalah ubat penting untuk pengurusan gejala berkaitan demensia dalam penyakit Alzheimer (Davies, 1985). Neuroinflammation terlibat secara kritikal dalam gangguan neurodegenerative; walau bagaimanapun, ubat anti-radang konvensional, seperti ubat anti-radang bukan steroid, telah menghasilkan keputusan yang bercampur-campur, dan kesan toksiknya belum dapat diselesaikan (Woodling dan Andreasson, 2016). Oleh itu, terdapat keperluan untuk meneroka ubat-ubatan yang lebih baru untuk rawatan berpotensi gangguan neuroinflamasi.

Pelbagai produk semula jadi menunjukkan hasil yang menjanjikan terhadap tekanan oksidatif dan neuroinflammation, termasuk carnosine (Caruso et al., 2019), hederagenin (Wang et al., 2020), dan resveratrol (Zhang et al., 2013). Dihydroquercetin (DHQ) adalah flavonoid antioksidan kuat yang terdapat dalam bawang, kulit maritim Perancis, milk thistle, dan kulit cemara Douglas (Weidmann, 2012).

Ia didapati mempunyai kesan neuroprotektif pada sel kultur neuron tikus yang telah rosak oleh tekanan oksidatif (Dok-Go et al., 2003). Ia telah dilaporkan dapat memperbaiki hepatitis fulminan eksperimen tetikus akibat concanavalin-A dan peningkatan heme oxygenase-1 (HO-1) melalui kinase protein diaktifkan mitogen/faktor nuklear eritroid 2-yang berkaitan 2 (MAPK/Nrf2) laluan antioksidan dalam garisan sel makrofaj RAW264 (Zhao et al., 2015).

DHQ juga telah ditunjukkan untuk menghalang kecederaan reperfusi iskemia serebrum dalam tikus melalui penindasan penyusupan leukosit dan dengan menghalang siklooksigenase-2 dan ekspresi sintase nitrik oksida yang boleh diinduksi (Wang et al., 2006). DHQ juga telah melemahkan apoptosis yang disebabkan oleh perencatan proteasome dalam sel PC12 dengan menekan pengaktifan laluan mitokondria dan caspase-8 dan laluan bergantung kepada Bida melalui tindakan antioksidan (Nam et al., 2015). Oleh itu, kami fikir adalah bijak untuk menilai aktiviti anti-neuroinflamasi DHQ kerana ia mempunyai aktiviti antioksidan yang kuat.

Oleh itu, objektif kajian ini adalah untuk menilai potensi kesan anti-radang saraf DHQ (0.5, 1, dan 2 ug/kg) dalam model LPS dalam tikus. Analisis fungsional rawatan DHQ telah dilakukan dengan menganggarkan aliran darah serebrum dan ujian tingkah laku untuk ingatan bekerja dan jangka panjang selain daripada kesan seperti kebimbangan menggunakan Y-maze dan ujian maze ditambah tinggi, masing-masing. Tahap aktiviti asetilkolin (ACh) dan asetilkolin esterase (AChE) telah disiasat di kawasan hippocampus untuk menilai lagi pembelajaran dan ingatan. Aktiviti antineuroinflamasi DHQ telah dinilai dengan menganggarkan ungkapan IL-6.

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Haiwan eksperimen

Tikus jantan albino Wistar inbred dengan berat (260 20 g) diperoleh dari Central Animal House; Institut Sains Perubatan (IMS-BHU). Eksperimen telah dilakukan dengan menggunakan garis panduan (penerbitan NIH nombor 85–23, disemak 2011) dan diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Haiwan Institusi, Universiti Hindu Banaras (BHU; Dekan/2015/CAEC/ 1420). Haiwan telah disesuaikan selama satu minggu di makmal eksperimen sebelum memulakan eksperimen.

2.2. Bahan kimia

Dihydroquercetin (Disto-Pharmaceuticals, India), LPS (E. coli, L3129), albumin serum lembu, dan reagen Griess diperoleh daripada Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, Amerika Syarikat). asid thiobarbituric (TBA), NADH, sodium succinate, sodium azide, phenazine methanesulphonate (PMS), dan nitro blue tetrazolium (NBT) telah dibeli dari Merck (Darmstadt, Jerman). Semua bahan kimia dan reagen lain bagi kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) dan gred analitik diperoleh daripada pembekal tempatan.

2.3. Prosedur eksperimen

Perwakilan skematik jadual eksperimen telah digambarkan dalam Rajah 1. LPS disuntik intracerebroventricular (ICV) menggunakan radas stereotaxic (Stoelting, USA). Tikus telah dibius dengan natrium pentobarbiton; ip 45 mg/kg (Tripathi et al., 2017). Haiwan itu dipasang pada bingkai stereotaxic, kulit kepala tikus dihiris, dan bregma diletakkan pada kulit kepala tikus. Semua koordinat ditetapkan dari bregma (0, 0) dan menggerudi 0.8 mm posterior ke bregma, 1.5 mm sisi ke jahitan sagital, dan 3.8 mm di bawah permukaan otak (Hauss-Wegrzyniak et al., 1998).

LPS telah diberikan kepada semua kumpulan kecuali sham dengan menggunakan Penyuntik Stereotaxic Quintessential. Larutan LPS disuntik ke dalam setiap ventrikel serebrum sisi pada kepekatan 1 ug/ul, pada kadar 1 ul/min selama 5 minit dengan tempoh menunggu 5 minit antara kedua-dua suntikan. Kumpulan Sham juga terdedah kepada pembedahan, dan hanya saline (kenderaan) yang disuntik. Semua keputusan kumpulan palsu tidak jauh berbeza daripada kumpulan kawalan, jadi kumpulan itu tidak dimasukkan lagi. Untuk mengehadkan jangkitan tempatan, selepas menjahit hirisan, kami menggunakan betadine (larutan iodin) sehingga hari-5 dan 1 ml garam biasa disuntik secara intraperitoneal untuk mengelakkan dehidrasi pada haiwan (Jangra et al., 2021) .

Tikus dipantau dengan teliti semasa tempoh pemulihan dan disimpan di dalam bilik pada suhu 22–26 C. Ini dianggap sebagai hari-1, dan selepas 24 jam, apabila muncul gejala berkaitan disfungsi neuromotor, ubat diberikan setiap hari. selama sembilan hari. Semua ujian tingkah laku telah dilakukan pada hari-10 dan direkodkan menggunakan penjejak tingkah laku ANY-MAZE versi 4.72 (AS). Haiwan itu kemudiannya dibunuh dengan serta-merta dengan memenggal kepala dan, tisu hippocampus dipotong secara mikro (Paxinos dan Charles, 2006). Tisu otak disimpan pada suhu 80 C sehingga kajian mekanistik lanjut.

2.4. Pentadbiran dadah

DHQ mula-mula dilarutkan dalam 10 ul etanol, dan kemudian isipadu dibuat menggunakan garam biasa untuk mendapatkan kepekatan 1 mg/ml. Kepekatan etanol dalam larutan yang disuntik adalah kurang daripada 0.001 peratus (v/v) dan kepekatan yang sama tidak termasuk DHQ telah diberikan kepada kumpulan kawalan kenderaan. Sebelum ini, telah dilaporkan bahawa DHQ memperbaiki kecederaan iskemia-reperfusi serebrum pada tikus melalui kesan antioksidan dan modulasi pengaktifan NFκB pada dos 0.1 dan 1.0 ug/kg, intravena (IV) setiap hari (Wang et al., 2006).

Oleh itu, kami menjalankan kajian rintis untuk menilai dos DHQ IV dan memuktamadkan tiga dos DHQ {{0}}.5 ug/kg, 1 ug/kg dan 2 ug/kg. Dengan mengikut prinsip rawak, pengelompokan dilakukan dengan mengambil sembilan haiwan dalam setiap kumpulan seperti berikut: (a) Kawalan, (b) LPS (c) LPS þ DHQ 0.5 ug/kg, (d) LPS þ DHQ 1 ug/kg, (e) LPS þ DHQ 2 ug/kg. Tiada kumpulan par se dalam eksperimen untuk memeriksa kesan DHQ sahaja pada tikus kerana kesan toksik dan terapeutik DHQ telah diketahui (Booth dan DeEds, 1958; Sunil dan Xu, 2019).

2.5. Pengukuran aliran darah kortikal

CBF telah dirakam menggunakan sistem pengimejan aliran darah bintik laser (zon omega OZ-2 STD, Tokyo, Jepun). Tikus telah dibius, dan tulang tengkoraknya didedahkan dengan hirisan kulit kepala garis tengah dan diletakkan pada helaian span hitam di bawah kaki tangan. Penyangga lengan memegang kamera CCD, lensa (ZM10–18, MF12), dan unit laser (780 nm untuk pengukuran dan 650 nm untuk kedudukan).

Imej bintik mentah telah dirakam dari permukaan tengkorak menggunakan Perisian LSI (LSI ver.3.3, Omegawave, Inc., Tokyo, Jepun), dan aliran darah serebrum purata ditentukan dengan analisis lanjut imej dengan menggunakan Perisian LIA (LIA ver.3.3, Omegawave, Inc., Tokyo, Jepun). Lembaran hitam tidak memantulkan cahaya laser, dan kesannya menjadikan imej aliran darah jelas (Paliwal et al., 2018).

2.6. Ujian tingkah laku

2.6.1. ujian Y-maze

Radas Y-maze membantu menilai memori kerja, tingkah laku penerokaan umum dan ingatan spatial. Radas Y-maze terdiri daripada tiga lengan yang sama yang mempunyai dimensi 32 cm tinggi, 50 cm panjang dan 16 cm lebar, yang bersudut 120⁰ antara satu sama lain. Bola plastik dengan warna yang berbeza diletakkan di sekeliling lengan, dan ini tidak ditukar setiap kali sebelum ujian untuk mengekalkan kebaharuan untuk haiwan. Tempat tidur haiwan yang kotor dibentangkan di atas lantai labirin untuk memberikan suasana yang selesa. Dalam percubaan 1, lengan novel Y-maze telah ditutup, dan haiwan itu bebas bergerak dalam dua lengan selama 15 minit.

Percubaan 2 dilakukan tepat selepas 4 jam percubaan 1, di mana haiwan mempunyai akses percuma selama 5 minit ke ketiga-tiga lengan. Semua penyertaan telah direkodkan menggunakan perisian ANY MAZE. Tingkah laku ingin tahu dikira daripada jumlah bilangan penyertaan dalam ketiga-tiga cabang. Peratusan entri lengan dalam novel dan senjata yang diketahui dianggap sebagai petunjuk ingatan pengecaman spatial. Tingkah laku bergantian spontan menandakan ingatan bekerja di mana kita memerhatikan kekerapan haiwan mengulangi pilihan awal kemasukan lengannya. Kemasukan lengan dikira apabila haiwan itu mempunyai kepala dan cakar depan di dalam lengan (Garabadu et al., 2015; Joshi et al., 2014).

2.6.2. b ujian maze ditambah tinggi

Ujian EPM (Elevated Plus Maze) telah dilakukan untuk menilai kebimbangan dan tingkah laku ingatan spatial jangka panjang dalam radas yang direka. EPM yang dibuat terdiri daripada dua lengan terbuka (50 10 cm) dan dua lengan tertutup (50 10 40 cm) ketinggian bumbung lengan terbuka adalah 50 cm dari lantai. Kependaman pemindahan (TL) dilakukan untuk menilai memori spatial jangka panjang.

TL diukur sebagai masa yang diambil oleh haiwan untuk bergerak ke dalam salah satu lengan tertutup dengan keempat-empat kaki. Haiwan itu ditolak perlahan-lahan ke dalam satu lengan tertutup jika haiwan itu tidak masuk ke dalam lengan tertutup dalam masa 90 s. Dalam kes sedemikian, TL dikira sebagai 90 saat. Pada hari-10, percubaan telah dilakukan di mana tikus dibenarkan meneroka labirin selama 2 minit. Tugas ini diulang selepas 24 jam untuk menilai pengekalan ingatan. Peratusan penyertaan dan masa yang dihabiskan dalam lengan terbuka dianggap sebagai ukuran kebimbangan (Krishnamurthy et al., 2013).

2.7. Anggaran biokimia

2.7.1. penyediaan sampel

Homogenat tisu hippocampus dibuat, dengan mengambil tisu hippocampus dalam 1 ml 0.1 M asid perklorik dalam homogenizer Potter–Elvehjem dengan triturasi satu arah bulat halus. Homogenat yang diperolehi telah diambil dalam tiub polipropilena di mana 50 ul 4 M kalium asetat telah ditambah untuk menjadikan pHnya 4.0, dan kemudiannya, ia telah disentrifugasi selama 15 minit pada 4000 g. Supernatan yang diperolehi digunakan untuk menganggarkan kedua-dua aktiviti Acetylcholine (Ach) dan Acetylcholine Esterase (AchE) (Muthuraju et al., 2009).

2.7.2. Ujian spektrofluorometrik asetilkolin

Kit ujian merah amplex digunakan untuk mencari jumlah asetilkolin dalam homogenat. Tindak balas dimulakan dengan menambah reagen Amplex Red/HRP/choline oxidase/AChE bekerja dalam tiub homogenat. Ia diinkubasi selama 30 minit, dan pendarfluor direkodkan dengan bantuan pembaca plat mikro (BioTek, Synergy H1M, Amerika Syarikat) pada pengujaan 530 nm dan panjang gelombang pelepasan 590 nm (Zoukhri dan Kublin, 2001).

2.7.3. b anggaran aktiviti AChE

Kit ujian AChE Amplex Red (Molecular Probes, Inc., USA) telah digunakan untuk mengukur aktiviti AChE. Anggaran telah dilakukan mengikut arahan pengilang. Reagen telah ditambah ke dalam sampel dan disimpan untuk pengeraman. Selepas pengeraman, pendarfluor ditentukan dengan bantuan pembaca plat mikro (BioTek, Synergy H1M, Amerika Syarikat) pada panjang gelombang pengujaan 530 nm dan panjang gelombang pelepasan 590 nm

2.7.4. c anggaran tahap nitrit

Tahap nitrit dianggarkan mengikut kaedah yang diberikan oleh Green (Green et al., 1982). 50 ul supernatan yang diperoleh daripada homogenat otak dicampur dengan 5 ul nikotinamida adenine dinukleotida fosfat (NADPH), 10 ul flavin adenine dinukleotida (FAD) dan 5 ul nitrat reduktase. Campuran telah diinkubasi selama 1 jam pada suhu 37 C dalam keadaan gelap. Zink sulfat telah ditambah untuk memendakan protein.

Selepas pengemparan (6000 g), isipadu yang sama supernatan (100 ul) dan reagen Griess (100 ul) (campuran 1:1 1 peratus sulfanilamide dalam 3 peratus asid ortofosforik dan 0.1 peratus naphthyl ethylene diamine) telah dicampur dan diinkubasi selama 10 minit pada suhu bilik dalam gelap. Plat kemudiannya dibaca pada 540 nm oleh spektrofotometer UV, dan NOx dikira dengan menggunakan lengkung piawai natrium nitrit.

2.7.5. d anggaran pembentukan LPO atau malondialdehid (MDA) mitokondria

Kandungan MDA mitokondria diukur dengan mengikut protokol standard (Ohkawa et al., 1979). Homogenat telah direbus bersama-sama dengan 10 peratus SDS, KCl (1.15 peratus ), asid asetik (20 peratus ), dan TBA (0.8 peratus ). Selepas disejukkan dalam air yang mengalir, ia diekstrak dengan n-butanol. Lapisan organik yang diperolehi melalui sentrifugasi diukur pada 532 nm. Kepekatan MDA dinyatakan sebagai mikromol MDA setiap miligram protein.

2.7.6. e-penilaian aktiviti katalase

Aktiviti katalase telah diuji mengikut kaedah Luck (1974). Homogenat otak telah disentrifugasi pada 10,000 rpm selama 10 minit dalam mikrosentrifuge Eppendorf. Alikuot supernatan dicampur dengan penimbal fosfat dan hidrogen peroksida Penyerapan diukur pada 240 nm selama 3 minit pada selang 30-s. Daripada penurunan dalam penyerapan, aktiviti enzim dikira (Correa et al., 2000).

2.7.7. f anggaran IL-6 menggunakan kit ELISA

Sitokin IL{{0}} dianggarkan dalam homogenat otak menggunakan kit ELISA yang tersedia secara komersial untuk IL tikus-6 (NOVEX™, Thermo Fischer, USA). Sampel otak digantung dalam larutan penimbal (1 peratus Triton X100, aprotinin 200 U/ml, 0.1 mM PMSF, 0.1 mM benzethonium klorida, 1 mM benzamidine, dan 1 mM EDTA) dan kemudian disentrifugasi pada 14, 000 g selama 30 minit pada 4 C dan supernatan diasingkan untuk anggaran sitokin. Paras interleukin sitokin pro-radang-6 (IL-6) dalam sampel seluruh otak dikira menggunakan kit ELISA mengikut arahan pengilang.

2.8. Analisis statistik

Semua nilai dinyatakan sebagai sisihan piawai min (SD). Untuk ingatan spatial dalam tugasan EPM, langkah berulang ANOVA dua hala diikuti dengan ujian post-hoc Bonferroni telah dilakukan untuk kependaman pemindahan antara hari-9 dan hari-10. Begitu juga, ANOVA dua hala diikuti dengan ujian post-hoc Bonferroni telah dilakukan untuk ingatan pengecaman ruang dan ujian tingkah laku ingin tahu haiwan dalam labirin-Y untuk menilai aktiviti lokomotor dalam kedua-dua sesi siasatan dan ujian.

ANOVA sehala diikuti dengan ujian Newman-Keuls Pelajar post-hoc telah dilakukan untuk analisis semua parameter tingkah laku dan biokimia yang lain. Graph Pad Prism versi 5 (San Diego, CA) telah digunakan untuk menggunakan statistik dan kumpulan dengan p < 0.05 dianggap sebagai berbeza dengan ketara.

Mekanisme perlindungan saraf Cistanchekesan

Cistanche adalah herba perubatan tradisional Cina yang telah terbukti mempunyai kesan neuroprotektif. Mekanisme tepat tindakannya tidak difahami sepenuhnya, tetapi terdapat bukti yang semakin meningkat bahawa ia mungkin berkaitan dengan keupayaannya untuk meningkatkan ekspresi faktor neurotropik dan mengawal selia laluan isyarat tertentu di dalam otak.

Salah satu faktor neurotropik utama yang telah ditunjukkan oleh Cistanche meningkat ialah faktor neurotropik yang berasal dari otak (BDNF). BDNF ialah protein yang memainkan peranan penting dalam pertumbuhan, pembezaan, dan penyelenggaraan neuron di otak. Kajian telah menunjukkan bahawa apabila tahap BDNF lebih tinggi, terdapat kelangsungan hidup dan keplastikan neuron yang lebih besar, yang boleh membantu melindungi daripada neurodegenerasi.

Cistanche juga mungkin dapat mengawal laluan isyarat tertentu dalam otak yang terlibat dalam kemandirian sel dan apoptosis (kematian sel yang diprogramkan). Sebagai contoh, ia telah ditunjukkan untuk menghalang aktiviti laluan c-Jun N-terminal kinase (JNK), yang boleh menyebabkan kematian neuron dalam keadaan tertentu. Dengan menghalang JNK, Cistanche boleh membantu melindungi neuron daripada kerosakan dan mengekalkan kemandirian mereka.

Selain itu, Cistanche telah terbukti mempunyai kesan anti-radang dan antioksidan, yang boleh membantu melindungi neuron daripada kerosakan dan mengekalkan fungsinya. Ciri-ciri ini menjadikan Cistanche sebagai agen terapeutik yang menjanjikan untuk rawatan gangguan neurodegeneratif seperti penyakit Alzheimer dan Parkinson.

Akan bersambung...

Qadir Alam, Sairam Krishnamurthy *

Makmal Neurotherapeutics, Jabatan Kejuruteraan & Teknologi Farmaseutikal, Institut Teknologi India (Universiti Hindu Banaras), Varanasi, 221005, UP, India