Perbezaan Phenylethanol Glycosides dalam Table Cistanches Herba Daripada 2 Hos BaPerbezaan Phenylethanol Glycosides dalam Table Cistanches Herba Daripada 2 Hos Berdasarkan Analisis UPLC-QQQ-MS Dan PLS-DADianalisis Pada Analisis UPLC-QQQ-MS Dan PLS-DA
May 30, 2025
Cistanche deserticolaialah tumbuhan holoparasit saka yang tergolong dalam keluarga Orobanchaceae. Ia adalah batang berisi kering yang ditutupi dengan daun seperti sisikCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Tumbuhan ini diedarkan terutamanya di Mongolia Dalam, Xinjiang, dan Gansu, di mana ia menjadi parasitHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, tumbuhan gurun xerophytic Chenopodiaceae [3-4]. Komponen aktif utamaCistanche deserticolatermasuk glikosida phenylethanoid, iridoid, dan polisakarida [5-7], yang mempamerkan sifat seperti perlindungan fungsi pembiakan, antioksida, dan perlindungan hati [8-10]. Dengan lebih 2,000 tahun penggunaan di China, ia menduduki tempat pertama dalam preskripsi perubatan tradisional Cina yang bertujuan untuk menguatkan daya hidup dan kedua dalam formulasi anti-penuaan [11]. Walau bagaimanapun, disebabkan penuaian berlebihan dan kemusnahan alam sekitar, sumber liar daripadaCistanche deserticolaberada di ambang kepupusan, yang membawa kepada klasifikasinya sebagai tumbuhan yang dilindungi negara (Kategori II) dan dimasukkan ke dalamSenarai Antarabangsa Perlindungan Tumbuhan Liar[12]. Untuk menangani ketidakseimbangan bekalan-permintaan dalam pasaran perubatan, penanaman buatan telah menjadi penting untuk pembangunan mampanCistanche deserticolaindustri.
Ekstrak Cistanche deserticola Untuk Dijual
Kajian terkini telah melaporkan kejayaan inokulasiCistanche deserticolapadaAtriplex canescens[13], pokok renek malar hijau dari keluarga Chenopodiaceae. Biasanya dirujuk sebagai "penyahsalinan biologi,"Atriplex canescensadalah spesies pokok berkualiti tinggi untuk pembaikan tanah salin-alkali [14]. bercucuk tanamCistanche deserticolapadaAtriplex canescensmenawarkan kelebihan yang ketara, seperti hasil tinggi dan kualiti unggul. Akibatnya, menilai kualitiAtriplex canescens-Cistanche deserticolatelah menjadi tempat tumpuan penyelidikan [15-16]. Penyelidikan terdahulu memberi tumpuan terutamanya kepada sifat perubatan keringCistanche deserticola, manakala kajian tentang komponen aktif dalam bentuk segar masih terhad. Terutamanya, berikutan kemasukanCistanche deserticolasebagai bahan makanan dan ubat di bawah sistem pengurusan percubaan (Notis Notis. 9 Suruhanjaya Kesihatan Kebangsaan, 2023), pembangunan dan penggunaannya sebagai herba ubatan dwiguna telah mendapat perhatian yang ketara dalam bidang perubatan tradisional Cina [17]. SegarCistanche deserticoladigemari kerana rasa dan kemudahannya yang sangat baik, menjadikannya sangat menjanjikan untuk pembangunan. Bahan perubatan segar merujuk kepada bahan tumbuhan, haiwan atau kulat segar yang belum diproses dengan sifat terapeutik atau menggalakkan kesihatan. Antara 2,000 herba perubatan Cina yang biasa digunakan, 486 adalah varieti segar [18].
Kaedah ultra-prestasi cecair kromatografi-triple quadrupole tandem spektrometri jisim (UPLC-QQQ-MS) adalah sangat sensitif, menjadikannya sesuai untuk mengesan kepekatan rendah dan komponen kompleks [19]. Untuk menangani isu kandungan air tinggi dalamCistanche deserticola, di mana glikosida phenylethanoid terdedah kepada hidrolisis enzimatik yang mengakibatkan kandungan berkurangan, kaedah pengeringan penyahaktifan enzim secara berkesan mengekalkan kandungan glikosida phenylethanoid [20]. Kajian ini menggunakan UPLC-QQQ-MS untuk menilai 8 glikosida phenylethanoid, termasuk echinacoside dan acteoside, sebagai komponen aktif utama dalam segar.Cistanche deserticoladaripada dua tumbuhan perumah [21-22]. Kajian ini mengkaji perbezaan kandungan komponen jus dan sisa daripada segarCistanche deserticoladitanam pada dua perumah. Selain itu, sisa telah tertakluk kepada rawatan penyahaktifan enzim pada 80 darjah selama 5 minit, diikuti dengan pengeringan, untuk membandingkan lebih lanjut pengekalan komponen aktif dalamCistanche deserticola. Penemuan ini bertujuan untuk menyediakan bukti saintifik dan sokongan teknikal untuk nilai dwi-tujuan segarCistanche deserticoladan pengoptimuman teknik pemprosesannya.
1 Instrumen dan Bahan
1.1 Instrumen
1290-6460 kromatografi cecair berprestasi ultra-triple quadrupole spektrometer jisim tandem (Agilent Technologies, USA).
Imbangan analitikal elektronik AL104 (Mettler-Toledo, Switzerland).
H-2050R emparan (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
Pembersih ultrasonik SB25-12DTD (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Bahan
TheAtriplex canescens-Cistanche deserticoladanHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolasampel telah dikumpulkan pada bulan Mac, April, dan Mei 2024 daripadaCistanche deserticolapangkalan penanaman di Pekan Xiquan, Daerah Jingtai, Wilayah Gansu. Sampel telah dikenal pasti oleh Profesor Sun Xuegang dari Universiti Pertanian Gansu sebagai batang berisiCistanche deserticola YC Madengan daun sisik.
Piawaian rujukan:
Echinacoside (nombor kelompok: 23031605; ketulenan: 99.74%).
Acteoside (nombor kelompok: 21102103; ketulenan: 98.83%).
Cistanoside A (nombor kelompok: 23041703; ketulenan: 98.30%).
Isoacteoside (nombor kelompok: 23052508; ketulenan: 99.90%).
2'-Acetylacteoside (nombor kelompok: 210053102; ketulenan: 97.12%).
Salidroside (nombor kelompok: 22051208; ketulenan: 98.43%).
Cistanoside B (nombor kelompok: 20120903; ketulenan: 98.57%).
Tubuloside A (nombor kelompok: 21060302; ketulenan: 93.24%).
Semuanya dibeli daripada Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reagen:
Metanol (nombor kelompok: O1140576, tulen secara kromatografi).
Acetonitrile (nombor kelompok: S3641440, tulen secara kromatografi). Kedua-duanya dibeli daripada Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
Asid format (nombor kelompok: 20230710, kromatografi tulen) telah dibeli daripada Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Air yang disucikan (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Kaedah dan Keputusan
2.1 Kaedah
2.1.1 Penyediaan Sampel
Tiga kelompokAtriplex canescens-Cistanche deserticola(nombor kelompok: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) dan tiga kelompokHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(nombor kelompok: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), berjumlah enam kelompok, dengan lima loji setiap kelompok, telah dikumpulkan. Tumbuhan dicuci bersih dengan air.
Memproses:
Sampel telah dihancurkan dan dijus, menghasilkan jus dan sisa daripada dua yang diperolehi oleh perumahCistanche deserticola.
Sisa telah dikeringkan di bawah dua keadaan:
Tanpa ketidakaktifan enzim.
Dengan penyahaktifan enzim (5 minit pada 80 darjah dalam ketuhar).
Sisa kering disimpan untuk analisis lanjut. Setiap kumpulan bahan perubatan dibahagikan kepada empat kumpulan, seperti ditunjukkan dalam Jadual 1.
Tab. 1 Contoh maklumat kumpulan
| Kumpulan | taip | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Sisa | C1 | S1 |
| ② | Jus | C2 | S2 |
| ③ | Sisa yang tidak diaktifkan enzim (5 minit pengeringan, dihancurkan) | C3 | S3 |
| ④ | Sisa tidak aktif enzim (kering dan dihancurkan) | C4 | S4 |
2.1.2 Keadaan Kromatografi
Lajur: Lajur Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 (2.1 mm × 150 mm, 1.8 μm).
Kadar aliran: 0.3 mL/min.
Isipadu suntikan: 1 μL.
Suhu lajur: 35 darjah .
Fasa mudah alih: 0.1% asid formik dalam air (A) dan asetonitril (B).
Masa analisis: 12 minit.
Kecerunan elusi:
0–1.5 min: 10% → 20% B.
1.5–3 min: 20% → 30% B.
3–5 min: 30% → 32% B.
5–8 min: 32% → 38% B.
8–9.6 min: 38% → 10% B.
9.6–12 min: 10% B.
Kromatogram piawai rujukan campuran dan sampel ujian ditunjukkan dalam Rajah 1.(Sila sahkan sama ada fasa bergerak ialah 0.01% asid formik dalam air (A) dan asetonitril (B).)
Rajah. 1 Kromatogram bahan rujukan(A) dan sampel(B) 1−salidroside; 2−echinacoside; 3−cistanosideA; 4−tubulosideA; 5−acteoside; 6−isoacteoside; 7−2'-asetilakteosida; 8-tubuloside B.
2.1.3 Keadaan Spektrometri Jisim
Jenis sumber ion: Pengionan semburan elektrik (ESI).
Mod: Pemantauan tindak balas berbilang (MRM) dalam mod ion negatif.
Suhu sumber ion: 350 darjah .
Tekanan nebulizer: 35 psi.
Gas perlanggaran: Nitrogen, ditetapkan pada tahap sederhana.
Parameter spektrometri jisim untuk komponen yang akan dianalisis ditunjukkan dalam Jadual 2.
2.1.4 Penyediaan Penyelesaian Piawai Campuran
Timbang dengan tepat jumlah piawai rujukan yang sesuaiechinacoside, acteoside, cistanoside A, isoacteoside, 2'-asetillakteosida, salidroside, cistanoside B, dantubuloside A, dan letakkannya dalam 10 mL botol reagen ambar. Tambah 50% metanol untuk menyediakan larutan standard campuran dengan kepekatan 0.2 mg·mL⁻¹ dan simpan untuk kegunaan kemudian.
2.1.5 Penyediaan Penyelesaian Ujian
Timbang dengan tepat 0.2 g segarAtriplex canescens-Cistanche deserticolasisa (C1), segarHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolasisa (S1), dikeringkanAtriplex canescens-Cistanche deserticolasisa (C3, C4), dan keringHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolasisa (S3, S4). Letakkan sampel dalam 10 mL kelalang volumetrik ambar, tambah 50% metanol, bawa ke isipadu, dan rekod jisim. Rendam selama 0.5 jam, ultrasonik selama 40 minit (250 W, 35 kHz), sejuk ke suhu bilik, dan rekod jisim sekali lagi. Gunakan 50% metanol untuk mengimbangi sebarang penurunan berat badan, gaul rata, sentrifuge, dan biarkan penyelesaiannya mengendap. Tapis supernatan melalui membran mikroporous 0.22 μm untuk mendapatkan turasan.
Untuk segarAtriplex canescens-Cistanche deserticolajus (C2) dan segarHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajus (S2), ambil 10 mL setiap satu, timbang dengan tepat, gaul rata, sentrifuge, dan biarkan larutan mengendap. Tapis supernatan melalui membran mikroporous 0.22 μm untuk mendapatkan turasan.
2.1.6 Kajian Lineariti
Jumlah yang sesuai bagi larutan piawai campuran yang disediakan dalam bahagian 2.1.4 telah dicairkan untuk menghasilkan kecerunan kepekatan51.2, 128.0, 320.0, 800.0, 4,000.0 dan 20,000.0 ug·L⁻¹. Sampel disuntik secara berurutan dari kepekatan rendah ke tinggi mengikut keadaan yang diterangkan dalam bahagian 2.1.2 dan 2.1.3. Regresi linear dilakukan, menggunakan kepekatan suntikan sebagai paksi-X dan kawasan puncak sebagai paksi-Y. Hubungan linear bagi lapan komponen ditunjukkan dalam Jadual 3.
Tab. 3 Keputusan peperiksaan perhubungan linear bagi 8 komponen dalam jadual Cistanches Herba
| Komponen | Persamaan Regresi | r | Julat Linear (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Echinacoside | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Acteoside | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoacteoside | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-Acetylacteoside | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidroside | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubuloside B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanoside A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Ujian Ketepatan
Larutan piawai campuran yang disediakan di bawah keadaan dalam bahagian 2.1.4 telah dicairkan dengan 50% metanol dan disuntik enam kali berturut-turut di bawah syarat bahagian 2.1.2 dan 2.1.3. Sisihan piawai relatif (RSD) bagi kawasan puncak untukechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-asetillakteosida, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, dancistanoside Aialah 0.95%, 1.47%, 0.56%, 1.05%, 0.93%, 1.08%, 1.19%, dan 0.91%, masing-masing, menunjukkan ketepatan yang baik.
2.1.8 Ujian Kestabilan
Satu sampel daripadaCistanche deserticola(S4) disediakan di bawah syarat yang diterangkan dalam seksyen 2.1.5. Penyelesaian ujian disuntik dan dianalisis pada 0, 2, 4, 8, 12, dan 24 jam di bawah keadaan yang diterangkan dalam bahagian 2.1.2 dan 2.1.3. RSD kawasan puncak untukechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-asetillakteosida, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, dancistanoside Aialah 1.46%, 0.79%, 0.95%, 1.29%, 1.22%, 0.56%, 0.49%, dan 1.18%, menunjukkan bahawa larutan sampel adalah stabil dalam masa 24 jam.
2.1.9 Ujian Kebolehulangan
Satu kumpulanCistanche deserticola(S4) sampel (nombor kelompok: 20240420-2) disediakan dalam enam penyelesaian ujian selari di bawah syarat yang diterangkan dalam bahagian 2.1.5. Sampel telah disuntik dan dianalisis di bawah keadaan yang diterangkan dalam bahagian 2.1.2 dan 2.1.3. RSD kandungan untukechinacoside, acteoside, isoacteoside, 2'-asetillakteosida, salidroside, cistanoside B, tubuloside A, dancistanoside Aialah 1.26%, 0.98%, 1.55%, 1.06%, 1.33%, 0.99%, 1.65%, dan 0.95%, masing-masing, menunjukkan kebolehulangan yang baik.
2.1.10 Ujian Pemulihan
Sembilan sampel daripada kumpulan yang samaCistanche deserticola(S4, nombor kelompok: 20240420-2) telah disediakan, dengan 0.1 g setiap sampel. Sampel dibahagikan kepada tiga kumpulan, dengan tiga ulangan setiap kumpulan. Setiap kumpulan telah ditambah dengan 80%, 100%, dan 120% daripada kandungan standard rujukan dalamCistanche deserticolasampel. Penyelesaian ujian telah disediakan mengikut kaedah yang diterangkan dalam bahagian 2.1.5 dan dianalisis di bawah syarat dalam bahagian 2.1.2 dan 2.1.3. Pemulihan lapan glikosida fenilethanoid telah dikira, dan keputusan ditunjukkan dalam Jadual 4.
Tab. 4 Kadar pemulihan 8 komponen yang diuji dalam Cistanches Herba
| Komponen | Kandungan Contoh (mg) | Berduri (mg) | Diukur (mg) | Purata Pemulihan (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Acteoside | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoacteoside | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-Acetylacteoside | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-Acetylacteoside | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-Acetylacteoside | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubuloside B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubuloside A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
