Pembangunan Ekstrak Biji Kopi Hijau Dimuatkan Gel Liposomal Anti-penuaan

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

ABSTRAK

latar belakang:Kacang hijau Kopi arabica L. Keluarga: Rubiaceae adalah sumber yang kaya dengan polifenol yang menghalang kerosakan oksidatif pada kulit. Dalam kajian ini, Liposom telah dirumuskan sebagai pembawa ubat untuk meningkatkan kebolehtelapan kulit polifenol untuk pentadbiran topikal. Bahan dan Kaedah: Ekstrak biji kopi hijau disediakan dengan mempelbagaikan nisbah metanol dan air. Analisis fitokimia dan penilaian antioksidan in vitro telah dijalankan ke atas semua ekstrak untuk memilih ekstrak terbaik untuk kajian lanjut. Potensi sitotoksisiti (ujian MTT) dan aktiviti anti-elastase ekstrak yang dipilih telah dinilai pada saluran sel L929 menggunakan sitometer aliran. Liposom ekstrak telah disediakan dengan kaedah penghidratan filem nipis dan dioptimumkan dengan mengubah nisbah fosfatidilkolin kepada kolesterol dan secara beransur-ansur meningkatkan jumlah ekstrak. Formulasi liposomal ditukar kepada gel menggunakan carbopol"974P sebagai agen pengegel. Suspensi liposomal yang disediakan dan gel liposomal telah dinilai untuk pelbagai parameter formulasi. Keputusan: Keputusan analisis fitokimia, ujian antioksidan in vitro, dan penilaian in vitro pada Garis sel L929 menyimpulkan bahawa 25 peratus ekstrak metanol adalah tidak toksik dengan kandungan fenolik tertinggi dan mempamerkan aktiviti antielastase yang baik. Kecekapan pengkapsulan asid klorogenik dalam formulasi liposomal yang dioptimumkan ialah 75 peratus. Gel liposomal menunjukkan pelepasan berterusan ubat sehingga 12 jam berbanding 6-7 jam rumusan konvensional. Kesimpulan: Gel berasaskan liposomal dimuatkan ekstrak biji kopi hijau yang dirumus boleh berfungsi sebagai pembawa berpotensi untuk kesan antipenuaan.

Kata kunci:Biji kopi hijau (GCB), Asid klorogenik, Ekstrak, Liposom, Antioksidan, Antipenuaan.

PENGENALAN

Kulit memainkan peranan penting dalam memodulasi suhu badan, merasakan kesakitan dan tekanan, dan bertindak sebagai penghalang penting terhadap pencemaran alam sekitar yang menjadikan penuaan kulit sangat jelas.1 Pendedahan kulit jangka panjang kepada sinaran ultraungu menghasilkan radikal bebas yang mendorong tekanan oksidatif pada kulit yang membawa kepada perkembangan fotopenuaan, selaran matahari, melanogenesis, imunosupresi, dan fotokarsinogenesis.² Radikal bebas ialah molekul oksigen yang sangat reaktif yang terlibat dalam membentuk ikatan silang dengan molekul kolagen yang membawa kepada kehilangan keanjalan kulit.3 Penuaan menampakkan dirinya dengan kendur, penipisan, kekeringan, dan tompok pada kulit. Oleh itu, dengan keinginan untuk kelihatan muda, produk antipenuaan sangat diminati. Antioksidan asal herba telah mendapat kepentingan dalam industri kosmetik. Antioksidan membantu dalam membaiki dan mencegah kerosakan oksidatif yang disebabkan oleh radikal bebas. Aktiviti antioksidan herba terutamanya disebabkan oleh sifat redoks sebatian fenolik.4 Oleh itu, antioksidan didapati menjanjikan dalam melambatkan tanda-tanda penuaan seperti kedutan, bintik-bintik penuaan, dan garis-garis halus.

Biji kopi hijau (Coffea arabica L, Rubiaceae) merupakan sumber yang kaya dengan polifenol seperti asid klorogenik dan sebatian berkaitannya seperti asid caffeic, asid kuumarik dan asid ferulik yang menghalang kulit daripada kerosakan oksidatif. Kajian telah mendedahkan ekstrak C. arabica didapati mempunyai antibakteria, 5 antivirus, 6 anti-radang, 7 penyembuhan luka kulit, dan' pengurangan kerosakan oksidatif pada makromolekul? dan aktiviti menindas ungkapan metalloproteinase.10

Asid klorogenik, sebatian polifenol utama biji kopi hijau mempunyai sifat antioksidan dan depigmentasi dan ia menghalang kerosakan kulit akibat UV. I2 Menurut kajian saintifik, biji kopi hijau mengandungi jumlah asid klorogenik yang lebih tinggi daripada biji kopi panggang dan tumbuhan lain. "3

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Penghantaran polifenol melalui kulit tidak berkesan kerana penembusannya yang terhad. Oleh itu, asas rumusan atau penambah penembusan yang meningkatkan penembusannya diperlukan." Jadi liposom dipilih sebagai pembawa ubat kerana ia bersifat amfifilik dan molekul hidrofilik dengan mudah boleh tertanam dalam dwilapisan sepusat. Liposom yang secara fisiologi serupa dengan membran sel adalah bukan -bersifat toksik. Kehadiran fosfolipid dalam liposom meningkatkan penyerapan topikal ubat dari epidermis ke lapisan bawah akibat peningkatan lekatan kompleks fosfolipid ubat pada kulit.'5 Matlamat kajian ini adalah untuk membangunkan gel yang mengandungi liposom yang dimuatkan ekstrak biji kopi hijau untuk digunakan sebagai formulasi kosmetik antioksidan untuk kesan antipenuaan.

BAHAN DAN KAEDAH Bahan

Biji kopi hijau arabica L diperoleh dari pasaran tempatan Mumbai pada Ogos 2019 dan telah disahkan oleh Dr Harshad M. Pandit. Bekas Ketua dan Profesor Madya Botani, Kolej Guru Nanak Khalsa, Mumbai, India. Phosphatidylcholine telah dibeli daripada HiMedia Laboratories Pvt Ltd, Kolesterol 99 peratus diperoleh daripada Loba Chemie Pvt Ltd, 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), dan Chlorogenic acid telah dibeli daripada Otto Chemie Pvt Ltd, Mumbai . Asid Gallic dan asid Askorbik diperoleh daripada SD Fine Chemicals Ltd, Mumbai. Semua bahan kimia yang digunakan dalam kajian ini adalah gred AR. Liposom dihasilkan menggunakan penyejat Rotary, Rotaeva, Equitron, dan Spectrophotometer UV-Visible, Shimadzu 1800 digunakan untuk penilaian liposom.

Cistanche boleh anti-penuaan

Kaedah

Metodologi Pengekstrakan

Biji kopi hijau serbuk telah dinyahlemak menggunakan petroleum eter 40-60 darjah (1:6 peratus b/v) selama 3 jam dalam radas sokhlet. Serbuk kopi hijau yang telah dinyahlemak diekstrak dengan pelarut berbeza seperti air, 25 peratus metanol, 50 peratus metanol, 75 peratus metanol, dan 100 peratus metanol selama 2 jam menggunakan sistem soxhlet. Ekstrak yang terhasil ditumpukan dalam pinggan porselin pada mandi air elektrik pada 80 darjah untuk mengeluarkan pelarut. Ekstrak yang disediakan digunakan untuk analisis kualitatif dan kuantitatif.

Jumlah Kandungan Fenolik

Jumlah kandungan fenolik ditentukan oleh kaedah reagen Folin-Ciocalteu menggunakan prosedur piawai. Asid Gallic digunakan sebagai piawai dan jumlah kandungan polifenolik dinyatakan sebagai mg/g bersamaan asid gallik (GAE) daripada lengkung penentukuran asid gallik.16

Tindanan Spektrum

Kaedah spektrometri UV digunakan untuk menentukan kehadiran asid klorogenik dalam ekstrak. Untuk penyediaan larutan piawai, Img/ml asid klorogenik piawai telah dibubarkan dalam penimbal fosfat dan pencairan selanjutnya disediakan untuk mendapatkan 10 ug/ml larutan piawai. Bagi larutan sampel, 25 peratus daripada 1 mg/ml ekstrak metanol telah dilarutkan dalam penimbal fosfat dan pencairan selanjutnya disediakan untuk mendapatkan 10 ug/ml larutan piawai. Spektrum tindanan kedua-dua larutan itu diperoleh menggunakan spektrofotometri UV-Vis.

Kuantifikasi asid klorogenik dalam setiap ekstrak Penyediaan larutan piawai

Asid klorogenik piawai telah dilarutkan dalam pelarut seperti air, 25 peratus metanol, 50 peratus metanol, 75 peratus metanol, dan 100 peratus metanol. Untuk mengurangkan ralat dalam prosedur penyediaan, larutan asid klorogenik 10 ppm disediakan dalam setiap pelarut di atas, dan kemudian pencairan yang sepadan antara kepekatan 2 hingga 10 ppm disediakan. Plot lineariti dibuat dengan merekodkan penyerapan pada 324 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

Penyediaan penyelesaian sampel

Untuk penyediaan larutan sampel, ekstrak telah dibubarkan dalam pelarut masing-masing dan larutan 10 ppm telah dibuat. Penyerapan untuk larutan sampel direkodkan pada 324 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Penyerapan yang diperolehi diekstrapolasi dalam plot kelinearan untuk mencari kepekatan asid klorogenik dalam setiap ekstrak.

Penentuan Aktiviti Antioksidan

Ujian antioksidan PDF (2,2-difenil -1-picrylhydrazyl) Aktiviti pemusnahan radikal ekstrak pada radikal DPPH telah disiasat dengan mengikut kaedah piawai." Asid askorbik digunakan sebagai piawai. Percubaan dilakukan dalam tiga kali ganda. Peratusan aktiviti penghapusan radikal DPPH telah diplot terhadap setiap kepekatan ekstrak dan IC telah ditentukan.Ujian antioksidan Nitric Oxide

Aktiviti penghapusan radikal nitrik oksida telah disiasat dengan menggunakan tindak balas Griess Illosvoy.cistanche empayar yang hilangl8 Asid askorbik digunakan sebagai piawai. Eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda. Peratusan aktiviti penghapusan radikal nitrik oksida telah diplotkan terhadap setiap kepekatan ekstrak dan Perencatan Peratusan IC untuk kedua-dua kajian antioksidan dikira menggunakan formula yang disebutkan di bawah Aktiviti pemerangkapan dinyatakan sebagai peratusan perencatan yang dikira menggunakan formula berikut:

Penentuan daya maju sel oleh MTT Assay Ekstrak biji kopi hijau iaitu 25 peratus ekstrak metanol telah disaring untuk kajian sitotoksisiti terhadap garisan sel L929.200 ul penggantungan sel telah disemai dalam 96-plat perigi dengan ketumpatan sel (20,000 sel setiap telaga), tanpa agen ujian. Sel-sel dibiarkan berkembang selama kira-kira 24 jam. Kepekatan ejen ujian yang sesuai (25 peratus ekstrak metanol) telah ditambah, plat diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 darjah dalam 5 peratus CO, atmosfera, dan media yang telah dihabiskan dikeluarkan. Reagen MTT telah ditambah kepada kepekatan akhir (0.5mg/mL) jumlah isipadu dan plat diinkubasi selama 2-3 jam dalam keadaan gelap. 100 ul DMSO ditambah selepas penyingkiran reagen MIT dan digoncang perlahan-lahan. Penyerapan diukur pada 570nm dan 630nm menggunakan spektrofotometer pada pembaca ELISA. Nilai IC.o ditentukan dengan menggunakan persamaan regresi linear. Formula yang digunakan untuk kajian:

Penentuan aktiviti Anti Elastase

Sel-sel telah dibiakkan pada ketumpatan 3×105 sel/2 ml dan diinkubasi dalam CO, inkubator selama 24 jam pada 37 darjah . 1 Untuk kajian antielastase, sel yang dirawat dengan 250uM epigallocatechin gallate (EGCG) digunakan sebagai kawalan positif, sel dirawat dengan 200ug/ml 25 peratus ekstrak metanol digunakan sebagai sampel ujian (Jadual 6), dan sel hanya dengan media kultur digunakan sebagai kawalan negatif dan diinkubasi dalam 2ml medium kultur selama 24 jam. Tiub telah disentrifugasi selama lima minit pada 300x g pada 25 darjah dan sel-sel telah dibasuh dengan PBS. 0.5 ml larutan BD Cytofix/Cytoperm telah ditambah selepas penyingkiran PBS dan tiub disimpan tidak terganggu selama 10 min.0.5 peratus albumin serum lembu (BSA) dalam 'S[PO OU] USEM Ol pes sem op upon percent I'O pue SEd 20 μL Mouse Anti-Human Neutrophil Elastase/ELA2 Alexa Fluor® 647-antibodi monoklonal terkonjugasi telah ditambah, dicampur dan diinkubasi selama 30 minit pada suhu bilik dalam keadaan gelap. Sel-sel telah dirawat dengan 0.1 peratus natrium azida dan 0.5 ml PBS dan dianalisis oleh Flow Cytometry dengan pengujaan dan pelepasan masing-masing 650nm dan 668nm. Dalam kajian ini, sebatian ujian iaitu ekstrak biji kopi hijau (25 peratus ekstrak metanol) dan standard Epigallocatechin gallate (EGCG) digunakan untuk menilai kesannya terhadap ekspresi ELA-2 (antibody elastase anti-manusia tetikus terkonjugasi) dalam sel L929. garisan.

Penyediaan liposom yang dimuatkan ekstrak biji kopi hijau

Kaedah penghidratan filem nipis seperti yang diterangkan oleh Bangham et al.1 darjah digunakan untuk merumus liposom. Campuran lipid disediakan dengan melarutkan fosfatidilkolin dan kolesterol dalam kloroform dan metanol (2:1) dalam kelalang dasar bulat(RBF) dan manik kaca ditambah untuk pembentukan filem homogen. RBF telah dilekatkan pada penyejat kilat berputar (Roteva, persamaan) dan dibenarkan berputar pada 80 rpm/min dalam mandi air termostat pada 40 darjah . Pelarut organik telah dikeluarkan dengan penggunaan vakum yang perlahan yang membawa kepada pembentukan filem lipid homogen 100 peratus pada dinding kelalang. Filem itu dibiarkan kering untuk LH untuk penyingkiran lengkap pelarut organik. Filem lipid kering telah dihidratkan dengan penimbal fosfat (pH: 5.4) yang mengandungi ekstrak terlarut (25 peratus ekstrak metanol) dan kemudian RBF diputarkan pada 150 rpm/min dalam tab mandi air termostat yang dikekalkan pada 46 darjah iaitu melebihi suhu peralihan. daripada lipid. Putaran diteruskan selama 60 minit sehingga penggantungan homogen diperolehi. Liposom yang dihasilkan menggunakan kaedah ini adalah besar dan bersaiz heterogen, justeru kaedah sonikasi mandian digunakan selama 30 minit untuk mengecilkan liposom. Suspensi liposom berasaskan ekstrak biji kopi hijau dibiarkan selama 2 jam pada suhu bilik untuk memastikan penghidratan sepenuhnya. Suspensi liposomal disimpan dalam botol kaca berwarna ambar di dalam peti sejuk sehingga digunakan selanjutnya.

Pencirian liposom

Berikut adalah parameter yang mana liposom yang disediakan telah dicirikan

Penentuan Kecekapan Enkapsulasi Spektrofotometer UV-Vis digunakan untuk menganggar kecekapan pengkapsulan asid klorogenik dalam liposom yang dimuatkan ekstrak biji kopi hijau. Penyerapan asid klorogenik yang tinggal dalam supernatan selepas sentrifugasi diukur pada 324 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis.pecahan flavonoid tulen mikronisasi 1000 mg kegunaanKemudian, kepekatan dikira daripada plot penentukuran yang diperoleh untuk asid klorogenik piawai.

Jumlah keseluruhan ubat yang ditambahkan ke Mikroskopi Optik

Setitik penggantungan liposomal diletakkan pada slaid kaca bersih dan diperhatikan di bawah kuasa 45X dan 100X mikroskop optik (Motic microscope). Penentuan Saiz Vesikel, Indeks Kebolehpenyebaran (PDI), dan Potensi Zeta

Saiz vesikel dan Indeks Polidispersibiliti dianalisis dengan menggunakan instrumen penyerakan cahaya dinamik dengan sistem pemeriksaan berkomputer (penganalisis saiz zarah Malvern). Kelompok liposom yang baru disediakan telah dicairkan dalam nisbah 1:100 dengan air ternyahion. Semua pengukuran dilakukan dalam tiga kali ganda pada 25±0.5 darjah. Suspensi liposom telah dicairkan dengan air ternyahion dan potensi zeta ditentukan menggunakan Malvern Zetasizer.

Analisis Transmission Electron Microscopy(TEM)TEM telah dijalankan untuk penggantungan sarat ubat yang dioptimumkan oleh mikroskop elektron penghantaran (Tecnai T20,200Kev, FEI). Setitik penggantungan diletakkan dengan bantuan mikropipet pada grid. Grid telah dikeringkan dengan baik. Grid kering yang mengandungi sampel telah dihujani dengan elektron yang dipercepatkan pada 200 VK. Kemudian saiz vesikel dan morfologi liposomal divisualisasikan oleh TEM di bawah vakum (Rajah 1). Penyediaan Gel Liposomal

Ekstrak biji kopi hijau gel liposomal dimuatkan telah disediakan dengan menggunakan asas gel carbopol@974P. Tepat 0.5 peratus carbopol@974P telah ditimbang dan disimpan untuk penghidratan dalam air suling berganda yang mengandungi bahan pengawet semalaman. Pelet liposomal yang diperolehi selepas sentrifugasi ditaburkan dalam air suling melalui sonication dan ditambah kepada larutan carbopol terhidrat dengan kacau. Pembentukan gel telah diinduksi oleh peneutralan menggunakan trietanolamin (TEA). Gel telah dinilai untuk warna, tekstur (kelicinan dan kelicinan), pH, kelikatan, kandungan ubat, kebolehtebaran, dan dalam untuk mengeluarkan kajian dadah.

Kajian pelepasan dadah in vitro

Radas sel resapan Franz yang mempunyai kapasiti petak reseptor 22 ml dan luas permukaan 3.91 cm2 telah digunakan untuk menganggarkan membran dialisis pelepasan ubat in vitro (potongan berat molekul 12,000-14,000) yang telah pra-terhidrat dengan merendam dalam penimbal semalaman telah dipasang pada sel. Penampan fosfat pH 5.4 (37 darjah ±0.5 darjah ) telah digunakan sebagai cecair reseptor. Larutan takungan dikacau pada 100 rpm/min menggunakan manik magnet. 0.5 g gel diletakkan di dalam petak penderma pada membran. Aliquot dikumpul pada selang 1,2, 3, 4, 5,6,7,8,12, dan 24 jam dan dianalisis menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada 324nm.20

KEPUTUSAN DAN PERBINCANGAN Metodologi Pengekstrakan

Peratusan hasil ekstrak biji kopi arabica L. kopi hijau dibentangkan dalam Jadual 3. Penampilan fizikal semua ekstrak adalah berwarna kuning gelap dan coklat gelap. 25 peratus daripada ekstrak metanol menunjukkan peratusan hasil tertinggi pada 26.54±0.13 berbanding semua ekstrak lain.

Jumlah Kandungan Fenolik

Kaedah Folin-Ciocalteu digunakan untuk menganggarkan jumlah kandungan fenolik semua ekstrak. TPC semua ekstrak dinyatakan dalam sebutan setara asid Gallic (Persamaan lengkung piawai: y= 0.0031 campur 0.3477,r2=0.9953)disebut dalam Jadual 1. Di antara semua ekstrak kandungan fenolik utama dianggarkan dalam 25 peratus ekstrak metanol. Tindanan Spektrum Kuantifikasi asid klorogenik dalam setiap ekstrak Jumlah kandungan asid klorogenik yang terdapat dalam setiap ekstrak dinyatakan dalam Jadual 3 dan Rajah 2.oteflavonoidMengikut keputusan, jumlah tertinggi asid klorogenik didapati terdapat dalam 25 peratus ekstrak metanol.

Berdasarkan keputusan yang diperoleh daripada jumlah kandungan fenolik, kuantifikasi asid klorogenik, dan ujian antioksidan 25 peratus ekstrak metanol didapati mengandungi kandungan fenolik tertinggi, kuantiti asid klorogenik yang lebih besar, dan aktiviti penghapusan radikal yang maksimum berbanding ekstrak lain.

Penentuan daya maju sel oleh Ujian MTT Assay Viability assay ialah ujian yang menentukan keupayaan tisu, sel atau organ untuk mengekalkan atau memulihkan keadaan kemandirian. Kajian sitotoksisiti sebatian ujian, ekstrak biji kopi hijau terhadap garisan sel L929 dalam data statistik kajian sitotoksisiti sel oleh pembaca ELISA mencadangkan bahawa ekstrak biji kopi hijau menunjukkan sifat berpotensi sitotoksisiti sederhana dengan kepekatan Perencatan （IC） pada 306.38 ug/ml berbanding standard. ubat Camptothecin dengan 23ug/ml Jadual 5. Pemerhatian menunjukkan bahawa ekstrak biji kopi hijau tidak mempunyai potensi sitotoksisiti yang ketara dengan kepekatan antara 12.5-200 ug/ml masing-masing dengan tempoh pengeraman 24 jam pada 37 darjah (Graf 1).

Penentuan aktiviti Anti Elastase

Enzim elastase mampu memecahkan elastin, protein gentian elastik tidak larut yang bersama-sama dengan kolagen menyumbang kepada kekuatan mekanikal tisu penghubung. Beberapa kajian telah mencadangkan bahawa kedua-dua penuaan kulit dan kesan anti-kedutan secara signifikan sepadan dengan pengurangan aktiviti elastase. Oleh itu kajian antielastase telah dijalankan untuk mengesahkan kegunaan ekstrak biji kopi hijau sebagai agen anti-penuaan. Dalam kajian ini, sebatian ujian iaitu ekstrak biji kopi Hijau dan Std, EGCG digunakan untuk menilai kesannya terhadap ekspresi ELA-2 (antibody Elastase anti-manusia tetikus terkonjugasi) dalam barisan sel L929. Kepekatan sebatian yang digunakan dalam eksperimen adalah seperti berikut:

Ekstrak kacang GC sebatian ujian yang diberikan telah menindas ungkapan ELA-2 dalam baris sel L929. Nilai keamatan pendarfluor purata relatif ELA-2 hampir sama menurun dalam std, Epigallocatechin gallate dan ekstrak biji kopi hijau kompaun ujian. (Jadual 7; Rajah 3 dan Histogram 1). Oleh itu, kacang GC boleh dianggap sebagai agen anti-elastase yang baik. Penyediaan liposom yang dimuatkan ekstrak biji kopi hijau

Dalam kajian ini kaedah penghidratan filem nipis digunakan untuk merumuskan liposom.puritans vitamin cSebab memilih ini

kaedahnya adalah kerana ia merupakan kaedah paling mudah untuk menyediakan vesikel multilamellar dan mampu memuatkan jisim molekul hidrofilik yang lebih tinggi seperti asid klorogenik berbanding vesikel unilamellar. Kaedah penghidratan filem nipis didapati memberikan 75 peratus kecekapan pengkapsulan bagi asid klorogenik yang terdapat dalam ekstrak Jadual 2. Oleh itu, kaedah ini digunakan untuk penyediaan liposom.

Pencirian liposom Mikroskopi Optik

Vesikel multilamellar diperhatikan dengan jelas (Rajah 4). Pemerhatian mikroskopik digunakan untuk menilai bentuk dan saiz vesikel yang dicatatkan untuk semua kelompok yang disediakan.

Penentuan Indeks Polydispersibility (PDI), Potensi Zeta, dan saiz Vesicle

PDI pada asasnya muncul untuk taburan saiz vesikel dalam sampel tertentu.sistancheNilai berangka PDI bermula daripada {{0}}.0 (saiz zarah yang seragam sempurna) hingga 1.1 (saiz zarah sangat polidisperse). Dalam kes sistem pembawa berasaskan lipid seperti liposom dan nanoliposom bersaiz 0.3 dan ke bawah boleh diterima kerana ia menunjukkan populasi homogen vesikel fosfolipid.21 Potensi Zeta ialah teknik pencirian penting yang digunakan untuk memahami kestabilan fizikal zarah. Nilai daripada -30 mV hingga tambah 30mV secara amnya dianggap mempunyai daya tolakan yang mencukupi untuk mencapai kestabilan koloid fizikal yang lebih baik.

Kaedah penghidratan filem nipis memberikan vesikel multilamellar yang besar dan heterogen. Analisis saiz liposom yang dihasilkan menunjukkan saiz purata z (d.nm) 864.2 nm, PDI 0.375 dan Potensi Zeta -12.4 dengan baik kecekapan perangkap.

Transmisi Electron Microscopy(TEM)Analisis morfologi liposom ini oleh TEM menunjukkan liposom berbentuk sfera. Penyediaan Gel Liposomal

Penyerakan liposomal hanya dicampur dengan polimer untuk memberikan gel yang sepadan. Formulasi gel liposomal adalah berfaedah kerana percantuman vesikel dengan berkesan boleh dielakkan atau diminimumkan kerana polimer berfungsi sebagai pengatur jarak antara liposom. Oleh itu, saiz vesikel tidak terjejas kerana ia adalah proses interaksi polimer/liposom terkawal. Formulasi krim berasaskan liposomal tidak dipilih kerana isu kestabilan dilaporkan dalam produk berasaskan emulsi disebabkan kaedah tersebut kerana ia merupakan kaedah paling mudah untuk menyediakan vesikel multilamellar dan mampu memuatkan jisim molekul hidrofilik yang lebih tinggi seperti asid klorogenik berbanding dengan vesikel unilamellar. Kaedah penghidratan filem nipis didapati memberikan 75 peratus kecekapan pengkapsulan bagi asid klorogenik yang terdapat dalam ekstrak Jadual 2. Oleh itu, kaedah ini digunakan untuk penyediaan liposom.

Pencirian liposom Mikroskopi Optik

Vesikel multilamellar diperhatikan dengan jelas (Rajah 4). Pemerhatian mikroskopik digunakan untuk menilai bentuk dan saiz vesikel yang dicatatkan untuk semua kelompok yang disediakan.

Penentuan Indeks Polydispersibility (PDI), Potensi Zeta, dan saiz Vesicle

PDI pada asasnya muncul untuk taburan saiz vesikel dalam sampel tertentu. Nilai berangka PDI bermula daripada {{0}}.0 (saiz zarah yang seragam sempurna) hingga 1.1 (saiz zarah sangat polidisperse). Dalam kes sistem pembawa berasaskan lipid seperti liposom dan nanoliposom bersaiz 0.3 dan ke bawah boleh diterima kerana ia menunjukkan populasi homogen vesikel fosfolipid.21 Potensi Zeta ialah teknik pencirian penting yang digunakan untuk memahami kestabilan fizikal zarah. Nilai daripada -30 mV hingga tambah 30mV secara amnya dianggap mempunyai daya tolakan yang mencukupi untuk mencapai kestabilan koloid fizikal yang lebih baik. 2

Kaedah penghidratan filem nipis memberikan vesikel multilamellar yang besar dan heterogen. Analisis saiz liposom yang dihasilkan menunjukkan saiz purata z (d.nm) 864.2 nm, PDI 0.375 dan Potensi Zeta -12.4 dengan baik kecekapan perangkap.

Transmisi Electron Microscopy(TEM)Analisis morfologi liposom ini oleh TEM menunjukkan liposom berbentuk sfera.

Penyediaan Gel Liposomal

Penyerakan liposomal hanya dicampur dengan polimer untuk memberikan gel yang sepadan. Formulasi gel liposomal adalah berfaedah kerana percantuman vesikel dengan berkesan boleh dielakkan atau diminimumkan kerana polimer berfungsi sebagai pengatur jarak antara liposom. Oleh itu, saiz vesikel tidak terjejas kerana ia adalah proses interaksi polimer/liposom terkawal. Formulasi krim berasaskan liposom tidak dipilih kerana isu kestabilan dilaporkan dalam produk berasaskan emulsi disebabkan oleh

kehadiran surfaktan dan minyak berlebihan yang mungkin berinteraksi dengan vesikel. Pelbagai sifat seperti kelikatan boleh dikawal dengan mudah dengan mengubah kepekatan polimer atau menukar jenis polimer. Oleh itu, gel liposomal disediakan kerana ia mengelakkan masalah kestabilan, memberikan pelepasan terkawal, mudah disediakan, dan mempunyai daya tarikan estetik sebagai kosmetik penjagaan kulit.23 Lipogel yang disediakan berwarna kuning pucat dan legap. 0.5 peratus b/b carbopol@974P didapati mempunyai konsistensi yang baik dan penampilan yang licin tanpa sebarang pengagregatan. Kandungan ubat untuk gel liposomal didapati 94.16±1.3 dengan kelikatan gel dalam julat 13,500 cps hingga 16,500 cps dan kebolehsebaran sekitar 7-8 g.cm/s.

Profil pelepasan dadah in vitro

Lapisan paling luar kulit ialah stratum korneum dan terutamanya terdiri daripada protein keratin dan lipid. Lipid antara sel memainkan peranan penting dalam mengawal penyerapan perkutaneus. Lipid antara sel boleh berinteraksi dengan fosfolipid yang terdapat dalam liposom dan dengan itu menyebabkan pembengkakan lipid tanpa mengubah struktur dwilapisan berbilang stratum korneum. Lipid yang bengkak ini menyebabkan ubat terkumpul dan membentuk depot intrakutaneus. Walaupun mekanisme liposom yang digunakan secara topikal tidak difahami sepenuhnya, tetapi komposisi lipid, cas permukaan, dan lamelariti liposom memainkan peranan penting dalam pelupusan dadah. Kajian juga mendedahkan penghantaran topikal juga dipengaruhi oleh saiz liposom.24 Pembebasan ubat in vitro dilakukan menggunakan membran dialisis. Kajian pelepasan in vitro =gel liposomal telah menunjukkan kesan pelepasan berterusan sehingga 12 jam berbanding 7-8 jam gel konvensional Graf 2.

KESIMPULAN

Ekstrak biji kopi Arabika Green Coffee telah disaring untuk jumlah kandungan fenolik, kuantifikasi asid klorogenik, dan ujian antioksidan. Berdasarkan keputusan yang diperoleh daripada kajian ini 25 peratus ekstrak metanol telah dipilih untuk dimasukkan ke dalam liposom kerana ia telah menunjukkan kandungan fenolik yang paling tinggi, kuantiti asid klorogenik yang lebih besar, dan aktiviti antioksidan yang lebih baik. Sebelum memasukkan ekstrak ke dalam liposom, ia telah disaring untuk ujian MTT dan antielastase. Berdasarkan ujian MT ekstrak tidak mempunyai potensi sitotoksisiti sel dan mengikut ujian antielastase, ekstrak mempunyai aktiviti antielastase. Oleh itu ekstrak boleh digunakan untuk merumuskan liposom antipenuaan. Vesikel multilamellar disediakan menggunakan kaedah penghidratan filem nipis. Liposom yang disediakan mempunyai kecekapan enkapsulasi yang baik dan kestabilan fizikal yang lebih baik. Suspensi liposomal berasaskan ekstrak telah dirumuskan menjadi gel liposomal. Seperti dalam kajian pelepasan ubat in vitro, gel liposomal telah menunjukkan kesan pelepasan berpanjangan sehingga 12 jam berbanding dengan gel konvensional. Oleh itu liposom yang dimuatkan ekstrak biji kopi hijau boleh dianggap sebagai pembawa yang berkesan untuk penghantaran topikal dengan potensi antipenuaan.

PENGAKUAN

Penulis berterima kasih kepada Stellixir Biotechechnology, Bengaluru, dan Karnataka atas bantuan mereka dalam melengkapkan ujian MTT dan kajian ujian Anti-elastase, kami juga mengucapkan terima kasih kepada penyelesaian ujian Sprint, Mumbai untuk pengimejan TEM dan Kolej Farmasi Dr.Bhanuben Nanavati kolej kami SVKM untuk menyediakan kemudahan yang terbaik untuk menjalankan kajian ini.

KONFLIK KEPENTINGAN

Penulis mengisytiharkan tiada konflik kepentingan.

SINGKATAN:

TPC: Jumlah kandungan fenolik; DPPH:2,2-difenil -1-pikrilhidrazil; GAE: Setara asid Gallic; GC:Kopi Hijau; GCB: Biji kopi hijau; ELA-2 (Antibodi Elastase anti-manusia tetikus konjugat): Neutrophil Elastase; EGCG: Epigallocatechin gallate;PC:Phosphatidylcholine;CH:Kolesterol;RBF:Round Bottom Flask; TEM: Mikroskopi Elektron Penghantaran; MTT: 3-(4,5-diemthylthiazol-2-yl)-2,5-difenil tetrazolium bromida; PDI: Indeks Polydispersibility;IC":Kepekatan Perencatan Separuh Maksimum.

Artikel ini diekstrak dari Desai dan Mallya.: Pembangunan Ekstrak Biji Kopi Hijau dimuatkan Anti-penuaan Liposomal Gel