Penentuan Echinacoside dalam Ekstrak Air Cistanche Herba Oleh HPLC

Abstrak: ObjektifKaedah HPLC telah diwujudkan untuk penentuan echinacoside dalam ekstrak airherba cistanche.KaedahEchinacoside ditentukan oleh HPLC. Pemisahan dilakukan pada Inertsil ODS-SP C18 lajur dengan fasa bergerak yang terdiri daripada asetonitril(A)dan 0.4% larutan asid fosforik(B), mengikut kecerunanelusi. Panjang gelombang pengesanan ditetapkan pada 333 nm, dan suhu lajur ialah 30 darjah . Kadar aliran ialah 1.0mL·min-1 dan isipadu suntikan ialah 10μL. KeputusanHubungan linear bagiechinacosidedalam kepekatanjulat 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 adalah baik(r = 0.999 8). Pemulihan ialah 94.59%-105.31%(RSD=2.93%,n = 9). Kandungan echinacoside dalam ekstrak air herba Cistanche ialah 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. 

KesimpulanKaedah HPLC yang ditetapkan dengan kebolehulangan yang baik adalah tepat, mudah, dan boleh dilaksanakan. Memang sesuaiuntuk penentuan echinacoside dalamekstrak air herba Cistanche. 

Kata kunci:HPLC;ekstrak air herba Cistanche; echinacoside; penentuan kandungan

FORMULASI HERBA BARU UNTUKBUAH PINGGANG YANG BERKHASIAT

Cistanche deserticolaadalah ubat tradisional Cina tonik yang biasa digunakan dalam amalan klinikal dan dikenali sebagai "ginseng padang pasir" [1]. TheCistanche deserticoladirekodkan dalam edisi 2015Farmakope Cinaialah batang berdaging kering dengan daun bersisikCistanche deserticola YC MaatauCistanche tubulosa (Schenk) Wight. Ia hangat, manis, dan masin, dan kembali ke buah pinggang dan meridian usus besar. Ia mempunyai kesan yang menyuburkan buah pinggang, menambah pati dan darah, dan melembapkan usus dan julap [2]. "Materia Medica Shen Nong," kata ia boleh "menguatkan bahagian tengah, menyuburkan lima organ dalaman, menguatkan yin dan menyuburkan intipati". Cistanche deserticola terutamanya mengandungi glikosida fenilethanoid, iridoid, dan glikosidanya, lignan dan glikosidanya, polisakarida, sebatian ester, dan alkaloid [3].

Glikosida phenylethanoid ialah bahan aktif utama Cistanche deserticola, antaranya echinaceaside dan verbascoside adalah komponen indeks untuk pengenalpastian dan penentuan kandungan Cistanche deserticola dalam Farmakope Cina. Kajian farmakologi [4] menunjukkan bahawa Cistanche deserticola mempunyai pelbagai kesan farmakologi seperti julap, perlindungan hati, anti-osteoporosis, antioksidan, anti-penuaan, dan anti-keletihan. Ekstrak akueus Cistanche deserticola boleh menggalakkan gen protein morfogenetik tulang 2 dalam osteoblas tikus, serta fosfatase asid tahan tartrat dan kalsium tulang dalam serum tikus yang diovariektomi.

Ekspresi gen Smad1, Smad5, transforming growth factor- , dsb. dalam sumsum tulang dan sumsum tulang mempunyai kesan anti-osteoporotik [5-6].

Echinacea boleh menggalakkan pembiakan osteoblas dan menggalakkan pembezaan sel stem mesenchymal sumsum tulang yang dikultur secara in vitro kepada osteoblas [7-9]. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat banyak laporan penyelidikan mengenai penentuan kandungan echinacoside dan verbascoside dalam ekstrak etanol Cistanche deserticola dan penyediaan kompaunnya [10-12], tetapi terdapat beberapa laporan mengenai penentuan kandungan komponen indeks dalam Cistanche deserticola ekstrak akueus. Dalam kajian ini, kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) digunakan untuk menentukankandungan echinaceasidedalamekstrak berair Cistanche deserticola.

1 Bahan

1.1 Instrumen

LC-20AT kromatografi cecair berprestasi tinggi, SPD-20Pengesan, SIL-20Autosampler, CTO-10Ketuhar lajur ASvp, stesen kerja kromatografi cecair larutan LC, Shimadzu Corporation, Jepun; MES125P-OCE-DU imbangan analitikal elektronik, Sartorius, Jerman; SHZ-D (III) pam vakum pelbagai guna air beredar, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 sistem peredaran penyejukan penyejat putar, penyejat putar RV 10 D S96, IKA, Jerman; mandian air suhu malar elektrik DK-S26, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; Mesin air ultratulen siri UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Bahan dan reagen ubat

Bahan ubatan Cistanche deserticola telah dibeli dari Guangzhou Lingnan Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., nombor kelompok: 1801001, 1806001, dan 181001. Ia dikenal pasti sebagai batang berdaging kering dengan daun sisik Cistanche deserticola YCMa daripada keluarga Orobanchaceae oleh Ketua Cina Ahli Farmasi Perubatan Tu Xingming dari Hospital Gabungan Ketiga Universiti Perubatan Cina Guangzhou. Sampel disimpan di Bilik Ujian Dadah Hospital Gabungan Ketiga Universiti Perubatan Cina Guangzhou; bahan rujukan echinacoside, kandungan ialah 89.7%, nombor kelompok ialah: 111670-201706 Institut Pemeriksaan Makanan dan Dadah China; asetonitril adalah tulen dari segi kromatografi (Merck, Jerman); metanol dan asid fosforik adalah tulen secara analitik (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); airnya sangat tulen.

2 Kaedah dan Keputusan

2.1 Penyediaan ekstrak akueus Cistanche deserticola

Ambil serbuk mentah Cistanche deserticola, tambahkan 10 kali ganda jumlah air suling, haba dan refluks untuk mengekstrak dua kali, setiap kali selama 1 jam, tapis, gabungkan turasan dan pekatkan turasan kepada 0.100 g·mL -1 dadah mentah oleh penyejat berputar, dan simpan pada 4 darjah untuk kegunaan kemudian.

2.2 Keadaan kromatografi dan kesesuaian sistem

Lajur kromatografi: Lajur Inertsil ODS SP C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm); fasa mudah alih: asetonitril (A)-0.4% larutan asid fosforik (B), elusi kecerunan: 0 ~ 5 min, 17%A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; panjang gelombang pengesanan: 333 nm; suhu lajur: 30 darjah; kadar aliran: 1.0 mL·min-1; isipadu suntikan: 10 μL. Di bawah keadaan kromatografi ini, pemisahan antara echinacoside dan puncak komponen bersebelahan adalah lebih besar daripada 1.5, dan nombor plat teori berdasarkan puncak echinacoside hendaklah tidak kurang daripada 4,000. Kromatogram ditunjukkan dalam Rajah 1.

Rajah 1 Kromatogram HPLC echinacoside(A) dan ekstrak air Cistanche herba(B)

2.3 Penyediaan penyelesaian

2.3.1 Penyelesaian rujukan

Timbang jumlah rujukan echinacoside yang sesuai, timbang dengan tepat, letakkannya dalam kelalang volumetrik 10 mL, tambah metanol untuk melarutkannya, dan sediakan larutan rujukan yang mengandungi 898.794 ug echinacoside setiap mL, dan simpan pada 4 darjah untuk kegunaan kemudian.

2.3.2 Penyelesaian ujian

Sukat 2 dengan tepat.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, sejatkannya hingga kering dalam tab mandi air, tambah metanol untuk melarutkannya, jadikan kepada isipadu dalam kelalang volumetrik 10 mL, goncang dengan baik, dan menapisnya melalui membran penapis mikroporous 0.22 μm untuk mendapatkan larutan.

2.4 Penyiasatan hubungan linear

Ukur {{0}} dengan tepat.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL penyelesaian rujukan di bawah 2.3.1 dan letakkannya dalam kelalang volumetrik 5 mL, tambah metanol untuk membentuk isipadu, goncang dengan baik dan dapatkan penyelesaian rujukan dengan kepekatan kecerunan 44.939 7, 89.879 4, 179.{ {21}}, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1,dan tapis melalui 0.22 μm membran mikroliang. Ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2 dan rekodkan kawasan puncak.

Lakukan regresi linear dengan kepekatan jisim rujukan sebagai paksi mendatar (X, ug·mL{{0}}) dan kawasan puncak sebagai paksi menegak (Y), dan dapatkan persamaan regresi: Y{{1 }}.0X-32 273.0, r=0.999 8. Keputusan menunjukkan bahawa echinacoside mempunyai hubungan linear yang baik dalam julat kepekatan 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Ujian ketepatan

Ambil 539.276 4 ug ·mL- 1 penyelesaian rujukan, dan teruskan menyuntik dan mengukur 6 kali mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2, dan merekodkan kawasan puncak. RSD bagi kawasan puncak echinacoside ialah 1.81%, menunjukkan bahawa instrumen itu mempunyai ketepatan yang baik.

2.6 Ujian kestabilan

Sukat 2 dengan tepat.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, sejat hingga kering dalam tab mandi air, larut dalam metanol, cairkan kepada 10 mL kelalang volumetrik, goncang dengan baik, tapis dengan 0 Membran penapis mikroporous .22 μm, dan suntikan dan ukur pada 0, 2, 4, 8, 12, dan 24 jam mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2, dan rekodkan kawasan puncak. Keputusan RSD bagi kawasan puncak echinacoside ialah 1.16%, menunjukkan bahawa penyelesaian ujian mempunyai kestabilan yang baik dalam masa 24 jam.

2.7 Ujian kebolehulangan

Sukat dengan tepat 6 bahagian 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, sediakan 6 bahagian larutan ujian secara selari mengikut kaedah dalam 2.3.2, dan suntik dan ukur mereka mengikut keadaan kromatografi dalam 2.2, dan merekodkan kawasan puncak. Keputusan RSD bagi kepekatan jisim echinacoside ialah 1.28%, menunjukkan bahawa kaedah tersebut mempunyai kebolehulangan yang baik.

2.8 Ujian pemulihan sampel

Sukat dengan tepat 9 bahagian 1.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, tambah 0.8, 1.0 dan 1.2 mL larutan rujukan (1.552 mg·mL{{11 }}) masing-masing, sejat hingga kering dalam tab mandi air, larutkan dalam metanol dan cairkan kepada 10 kelalang volumetrik mL; goncang dengan baik, tapis dengan membran penapis mikroporous 0.22 μm untuk mendapatkan kepekatan tinggi, sederhana dan rendah larutan ujian, sediakan 3 bahagian setiap kepekatan secara selari, dan ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2, rekod kawasan puncak dan hitung pemulihan sampel. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 1.

2.9 Penentuan Kandungan Contoh

Sukat 2 dengan tepat.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola dalam 3 bahagian, sejat hingga kering dalam tab mandi air, larut dalam metanol, cairkan kepada 10 mL dalam kelalang volumetrik, goncang dengan baik, tapis dengan membran penapis mikroporous 0.22 μm, dan tentukan mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2, rekod kawasan puncak, dan kira kandungan echinacoside. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 2.