Penentuan Echinacoside dalam Ekstrak Air Cistanche Herba Oleh HPLC

Abstrak:

Objektif Kaedah HPLC telah diwujudkan untukpenentuan echinacosidedalamekstrak air Cistancheherba.

Kaedah Echinacoside ditentukan oleh HPLC. Pengasingan dilakukan pada lajur Inertsil ODS-SP C18 dengan fasa mudah alih yang terdiri daripada asetonitril(A)dan 0.4% larutan asid fosforik(B), melalui elusi kecerunan. Panjang gelombang pengesanan ditetapkan pada 333 nm, dan suhu lajur ialah 30 darjah . Kadar alir ialah 1.0 mL·min-1 dan isipadu suntikan ialah 10 μL. Keputusan Hubungan linear echinacoside dalam julat kepekatan 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 adalah baik(r=0.999 8). Pemulihan ialah 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%,n=9). Kandungan echinacoside dalam ekstrak air herba Cistanche ialah 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Kesimpulan Kaedah HPLC yang telah ditetapkan dengan kebolehulangan yang baik adalah tepat, mudah, dan boleh dilaksanakan. Ia sesuai untuk penentuan echinacoside dalam ekstrak air herba Cistanche.

Kata kunci:HPLC;ekstrak air herba Cistanche; Echinacoside; penentuan kandungan

Cistanche deserticola ialah ubat tradisional Cina tonik yang biasa digunakan dalam amalan klinikal dan dikenali sebagai "ginseng padang pasir" [1]. Cistanche deserticola yang direkodkan dalam Chinese Pharmacopoeia edisi 2015 ialah batang berisi kering dengan daun bersisik Cistanche deserticola YC Ma atau Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Ia hangat, manis dan masin, dan kembali ke buah pinggang dan meridian usus besar. Ia mempunyai kesan yang menyuburkan buah pinggang, menambah pati dan darah, dan melembapkan usus dan julap [2]. "Materia Medica Shen Nong," kata ia boleh "menguatkan bahagian tengah, menyuburkan lima organ dalaman, menguatkan yin dan menyuburkan intipati". Cistanche deserticola terutamanya mengandungi glikosida fenilethanoid, iridoid dan glikosidanya, lignan dan glikosidanya, polisakarida, sebatian ester dan alkaloid [3]. Phenylethanol glycosides adalah bahan aktif utama Cistanche deserticola. Antaranya, echinacoside dan verbascoside disenaraikan dalam Cistanche deserticola dalam Pharmacopoeia Cina.

Komponen indikatif untuk pengenalpastian dan penentuan kandungan. Kajian farmakologi [4] menunjukkan bahawa Cistanche deserticola mempunyai pelbagai kesan farmakologi seperti julap, perlindungan hati, anti-osteoporosis, antioksidan, anti-penuaan, dan anti-keletihan. Ekstrak akueus Cistanche deserticola boleh menggalakkan ekspresi gen protein morfogenetik tulang 2 dalam osteoblas tikus, fosfatase asid tahan tartrat, osteocalcin dalam serum tikus yang diovariektomi, dan gen Smad1, mad5, mengubah faktor pertumbuhan- , dan lain-lain dalam sumsum tulang. , mempunyai kesan anti-osteoporosis [5-6].

Echinacea boleh menggalakkan pembiakan osteoblas dan menggalakkan pembezaan sel stem mesenchymal sumsum tulang yang dikultur secara in vitro kepada osteoblas [7-9]. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat banyak laporan penyelidikan mengenai penentuan kandungan echinacoside dan verbascoside dalam ekstrak etanol Cistanche deserticola dan penyediaan kompaunnya [10-12], tetapi terdapat beberapa laporan mengenai penentuan kandungan komponen indeks dalam Cistanche deserticola ekstrak akueus. Dalam kajian ini, kromatografi cecair berprestasi tinggi (HPLC) digunakan untuk menentukan kandungan echinaceaside dalam ekstrak akueus Cistanche deserticola.

1 bahan

1.1 Instrumen

LC-20AT kromatografi cecair berprestasi tinggi, SPD-20Pengesan, SIL-20Autosampler, CTO-10Ketuhar lajur ASvp, stesen kerja kromatografi cecair larutan LC, Shimadzu Corporation of Jepun; MES125P-OCE-DU imbangan analitikal elektronik, Syarikat Sartorius, Jerman; SHZ-D (Ⅲ) pam vakum pelbagai guna air beredar, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 sistem peredaran penyejukan penyejat putar, penyejat putar RV 10 D S96, Syarikat IKA, Jerman; DK-S26

Mandian air suhu malar elektrik, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; Mesin air ultratulen siri UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Bahan dan reagen ubat

Bahan ubat Cistanche deserticola telah dibeli daripada Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., nombor kelompok: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, ketua ahli farmasi Cina tradisional di Hospital Gabungan Ketiga Universiti Perubatan Cina Guangzhou, mengenal pastinya sebagai batang berdaging kering dengan daun bersisik Cistanche deserticola YCMa. Sampel disimpan di Bilik Ujian Dadah Hospital Gabungan Ketiga Universiti Perubatan Cina Guangzhou; Bahan rujukan Echinacea Glycoside, kandungan 89.7%, Institut Kawalan Makanan dan Dadah China, nombor kelompok: 111670-

201706; asetonitril adalah tulen dari segi kromatografi (Merck, Jerman); metanol dan asid fosforik adalah tulen secara analitik (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); air adalah air ultratulen.

2 Kaedah dan keputusan

2.1 Penyediaan ekstrak air Cistanche deserticola

Ambil serbuk kasar bahan ubatan Cistanche deserticola, tambahkan 10 kali ganda jumlah air suling, haba dan refluks untuk pengekstrakan dua kali, 1 jam setiap kali, tapis, gabungkan turasan dan pekatkan turasan dengan penyejat berputar kepada kandungan dadah mentah sebanyak 0.100 g·mL-1, dan simpan pada 4 darjah untuk kegunaan kemudian.

2.2 Keadaan kromatografi dan kesesuaian sistem

Lajur kromatografi: Lajur Inertsil ODS SP C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm); fasa mudah alih: asetonitril (A)-0.4% larutan asid fosforik (B), elusi kecerunan: 0 ~ 5 min, 17%

A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; panjang gelombang pengesanan: 333 nm; suhu lajur: 30 darjah; kadar aliran: 1.0 mL·min-1;

Isipadu suntikan: 10 μL. Di bawah keadaan kromatografi ini, pemisahan antara puncak echinacoside dan komponen bersebelahan adalah lebih besar daripada 1.5, dan bilangan plat teori berdasarkan puncak echinaceaside hendaklah tidak kurang daripada 4,000. Kromatogram ditunjukkan dalam Rajah 1.

2.3 Penyediaan penyelesaian

2.3.1 Larutan bahan rujukan Timbang jumlah bahan rujukan echinacoside yang sesuai, timbang dengan tepat, masukkan ke dalam kelalang volumetrik 10 mL, tambah metanol untuk melarutkannya, dan sediakan larutan bahan rujukan yang mengandungi 898.794 ug echinaceaside per ml, 4 darjah Simpan untuk kegunaan kemudian.

2.3.2 Penyelesaian ujian

Sukat 2 dengan tepat.0 mL ekstrak akueus Cistanche deserticola, sejat hingga kering dalam tab mandi air, tambah metanol untuk larut, cairkan kepada isipadu dalam kelalang volumetrik 10 mL, goncang dengan baik dan tapis dengan membran mikroporous 0.22 μm untuk diperolehi.

2.4 Penyiasatan hubungan linear

Mengukur dengan tepat {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL larutan rujukan di bawah item 2.3.1, letakkannya dalam kelalang volumetrik 5 mL, tambah metanol untuk membuat sehingga isipadu dan goncang dengan baik untuk mendapatkan kepekatan kecerunan 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 larutan rujukan ug·mL-1, ditapis melalui membran mikroliang 0.22 μm. Ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2, dan rekodkan kawasan puncak. Lakukan regresi linear dengan kepekatan jisim bahan rujukan sebagai absis (X, ug·mL-1) dan kawasan puncak sebagai ordinat (Y), dan persamaan regresi diperoleh: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Keputusan menunjukkan bahawa echinacea mempunyai hubungan linear yang baik dalam julat kepekatan 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Ujian ketepatan

Ambil 539.276 4 ug ·mL- 1 penyelesaian rujukan, suntik dan ukur 6 kali secara berterusan mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2 dan rekodkan kawasan puncak. Keputusan menunjukkan bahawa RSD bagi kawasan puncak echinacoside ialah 1.81%, menunjukkan ketepatan instrumen yang baik.

2.6 Ujian kestabilan

Sukat 2 dengan tepat.0 mL ekstrak akueus Cistanche deserticola, sejat hingga kering dalam tab mandi air, tambah metanol untuk larut, cairkan kepada 10 kelalang volumetrik mL, goncang dengan baik, tapis dengan {{ 7}}.22 μm membran mikroliang, ikut keadaan kromatografi di bawah item 2.2, dan letakkan pada 0 dan 2 masing-masing. , 4, 8, 12, 24 jam ukuran suntikan, rekod kawasan puncak. Keputusan menunjukkan bahawa RSD kawasan puncak echinacoside ialah 1.16%, menunjukkan bahawa penyelesaian ujian mempunyai kestabilan yang baik dalam masa 24 jam.

2.7 Ujian kebolehulangan

Sukat 2.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola dengan tepat dan sediakan 6 penyelesaian ujian secara selari mengikut kaedah di bawah 2.3.2. Suntikan sampel untuk pengukuran mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2 dan rekodkan kawasan puncak. Keputusan menunjukkan bahawa RSD bagiechinacosidekepekatan jisim ialah 1.28%, menunjukkan kebolehulangan kaedah yang baik.

2.8 Ujian pemulihan sampel

Ukur tepat 9 bahagian 1.0 mL ekstrak air Cistanche deserticola, tambah 0.8, 1.0 dan 1.2 mL larutan rujukan (1.552 mg·mL{{11 }}) masing-masing, sejat hingga kering dalam tab mandi air, tambah metanol untuk larut dan laraskan kepada 10 kelalang volumetrik mL; Goncang dengan baik dan tapis melalui membran mikroporous 0.22 μm untuk menyediakan penyelesaian ujian kepekatan tinggi, sederhana dan rendah. Sediakan 3 salinan setiap kepekatan secara selari. Ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2. Catatkan kawasan puncak dan hitung pemulihan sampel. Kadar. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 1.

2.9 Penentuan kandungan sampel

Sukat dengan tepat 3 bahagian 2.0 mL ekstrak akueus Cistanche deserticola, sejat hingga kering dalam tab mandi air, tambah metanol untuk larut, cairkan kepada 10 kelalang volumetrik mL, goncang dengan baik, tapis dengan membran mikroporous 0.22 μm, dan ukur mengikut keadaan kromatografi di bawah 2.2. Catatkan kawasan puncak dan hitung kandungan echinaceaside. Keputusan ditunjukkan dalam Jadual 2.

Jadual 1 Keputusan ujian pemulihan echinacoside

Jadual 2 Keputusan penentuan kandungan echinacoside dalam ekstrak air herba Cistanche