Aplikasi Klinikal Semasa Terapi Gen Vivo Dengan AAV Bahagian 4

Suntikan Suprachoroidal

Suntikan suprachoroidal adalah mod penghantaran AAV okular yang agak baru yang pada masa ini menimbulkan minat praklinikal. Penghantaran virus transscleralsuprachoroidal bertujuan untuk mencapai transduksi retina luar yang cekap tanpa pembedahan vitreoretinal.

Koroid adalah bahagian yang sangat penting dalam mata manusia. Ia terletak di luar retina dan merupakan salah satu saluran darah dan tisu yang paling banyak di mata. Koroid memainkan peranan penting dalam fungsi normal mata, dan kajian terbaru menunjukkan bahawa koroid juga berkait rapat dengan ingatan kita.

Pertama, koroid adalah salah satu organ utama dalam mata yang membekalkan darah, dan ia boleh memberikan sejumlah besar oksigen dan nutrien kepada retina. Ini sangat penting untuk fungsi visual normal dan kesihatan mata, dan ia juga membantu mengekalkan fungsi normal otak dan sistem saraf.

Kedua, penyelidikan perubatan moden mendapati bahawa beberapa bahan penting dalam koroid, seperti faktor pertumbuhan endothelial vaskular (VEGF), sangat penting untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel saraf. Bahan-bahan ini boleh menggalakkan metabolisme, menggalakkan hubungan antara sel-sel saraf, dan membantu meningkatkan daya ingatan dan keupayaan kognitif.

Selain itu, beberapa kajian juga mendapati bahawa kesan koroid terhadap fungsi otak tidak terhad kepada aspek fisiologi, tetapi mungkin juga berkaitan dengan keadaan emosi dan psikologi. Tekanan dan kebimbangan psikologi boleh menjejaskan koroid, yang membawa kepada masalah seperti kehilangan ingatan. Sikap positif dan mood optimis membantu mengekalkan kesihatan koroid dan menggalakkan peningkatan daya ingatan dan keupayaan kognitif.

Oleh itu, melindungi dan mengekalkan kesihatan koroid adalah penting untuk kedua-dua badan dan otak kita. Mengekalkan tabiat hidup yang baik, seperti diet seimbang, tidur yang cukup, dan senaman sederhana, boleh membantu kita mengekalkan kesihatan mata dan badan kita. Pada masa yang sama, mengekalkan sikap positif dan mengelakkan ketegangan dan kebimbangan yang berlebihan juga merupakan cara penting untuk melindungi koroid dan menggalakkan keupayaan kognitif.

Pendek kata, koroid berkait rapat dengan kesihatan dan keupayaan kognitif kita. Ia bukan sahaja memainkan peranan penting dalam fungsi visual normal dan kesihatan mata tetapi juga memainkan peranan penting dalam ingatan dan keupayaan kognitif. Kita harus sentiasa memberi perhatian untuk melindungi dan mengekalkan kesihatan koroid kita untuk meningkatkan fungsi fizikal dan otak kita. Ini menunjukkan bahawa kita perlu meningkatkan daya ingatan kita. Cistanche boleh meningkatkan daya ingatan dengan ketara kerana Cistanche ialah ubat tradisional Cina dengan banyak kesan unik, salah satunya adalah untuk meningkatkan daya ingatan. Keberkesanan Cistanche berasal dari pelbagai bahan aktif yang terkandung di dalamnya, termasuk asid tannic, polisakarida, glikosida flavonoid, dan lain-lain, yang boleh menggalakkan kesihatan otak dalam pelbagai cara.

Klik Tahu Memori Jangka Pendek cara menambah baik

Ruang suprachoroidal ialah ruang berpotensi antara dinding koroid dan skleral mata yang boleh diakses melalui kanulasi pembedahan113 atau transscleralmicroneedles.

114,115 Data dalam tikus, babi, dan NHP mencadangkan kebolehjadian transduksi kedua-dua RPE dan PR melalui penghantaran gen AAV suprachoroidal, walaupun keputusan tidak konsisten merentas kajian.

116–118 Laporan baru-baru ini menunjukkan bahawa penghantaran AAV suprachoroidal menghasilkan ekspresi sementara terhad terutamanya kepada RPE dan penyusupan tempatan sel-sel radang.

Sebaliknya, apabila peranti novel yang sama digunakan untuk menghantar AAV8 secara subretina (akses dari ruang suprachoroidal diikuti dengan transversal membran Bruch dengan mikrokannula boleh disambungkan), ekspresi transgen fokus dalam RPE dan PRs dan keradangan intraokular yang minimum diperhatikan.

117 Peranti ini telah dinilai dalam kajian praklinikal dan klinikal terapi berasaskan sel119 dan kini sedang dipertimbangkan untuk penghantaran AAV. Kerja tambahan diperlukan untuk memperhalusi kaedah dan menyiasat tindak balas imun tempatan dan sistemik yang berkaitan sebelum memindahkan pendekatan ini ke arena klinikal.

IV

IVI setakat ini merupakan laluan penghantaran paling invasif yang sedang dipertimbangkan untuk merawat IRD dan mungkin melindungi retina yang nipis dan merosot daripada kerosakan mekanikal tambahan yang berpotensi disebabkan oleh vitrectomy dan detasmen subretinal pembedahan.

Walau bagaimanapun, ia memerlukan kapsid AAAV yang mampu "menembusi" melalui retina dari vitreous. Satu kelebihan IVI ialah prosedur boleh dilakukan dalam keadaan klinikal, dengan itu meningkatkan kebolehcapaian terapi gen kepada populasi pesakit yang lebih besar.

Walau bagaimanapun, data klinikal terhad88,89 dan kajian NHP120 yang menggunakan kapsid yang tersedia pada masa ini menunjukkan bahawa IVI AAV berhadapan dengan banyak halangan yang boleh mengurangkan ekspresi gen dan menghalang faedah terapeutik dalam kebanyakan pesakit (iaitu, pencairan/peneutralan dalam vitreous, membran pembatas dalaman).

AAV semasa dalam ujian klinikal mengantara transduksi sel ganglion retina (RGC) dalam "cincin" makula, Müller glia, dan PR jarang bersebelahan dengan saluran darah besar, beberapa kon foveal, dan sel bukan neuron badan ciliary.

121–124 Oleh itu, tidaklah menghairankan bahawa satu-satunya ujian klinikal berasaskan IVI untuk menunjukkan aktiviti biologi setakat ini telah menyasarkan RGC dalam retina dalam sama ada untuk memberikan manfaat langsung kepada sel-sel ini (ND4-Leber hereditary optic neuropathy[LHON] )125,126 atau gunakannya sebagai depot untuk rembesan reagen antiVEGF (AMD basah).

88 tiada bukti klinikal bahawa vektor AAV yang dihantar oleh IVI boleh memindahkan sel retina luar (PRs/RPE) pada tahap yang mencukupi untuk mengantara tindak balas terapeutik.

AAV8-RS1 yang dihantar secara intravitreal gagal memulihkan struktur/fungsi retina dalam pesakit XLRS (ClinicalTrials.gov: NCT02317887).89 Walaupun sifat penyembunyian protein RS1, kajian yang dilakukan pada tikus kalah mati Rs1h menunjukkan bahawa terapi berkekalan dicapai apabila pengantaraan AAV RS1 dihasilkan dalam PR.

127 AAV8 tidak mentransduksi PR dengan cekap mengikut IVI retina yang utuh.117 Pilihan kapsid dalam percubaan ini ditentukan oleh transduksi yang diperhatikan dalam model tetikus XLRS dan mungkin jangkaan bahawa rongga schisis dalam retina pesakit XLRS akan memudahkan transduksi.128 Secara keseluruhan, kekurangan keberkesanan dalam percubaan ini sekurang-kurangnya sebahagiannya disebabkan oleh penyasaran RS1 yang tidak cekap kepada PR. Tindak balas imun juga memainkan peranan penting.

Vitreous tidak mempunyai keistimewaan imun seperti ruang subretinal.129 Apabila membandingkan pengedaran bio AAV berikutan IVI berbanding SRI, IVI menghasilkan pendedahan yang lebih sistemik.130,131 Sama seperti SRI, keradangan yang disebabkan oleh IVI AAV nampaknya bergantung kepada dos.IVI AAV 8-RS1 dikaitkan dengan keradangan okular serta antibodi sistemik terhadap AAV yang kedua-duanya meningkat dalam fesyen berkaitan dos.

89 Dua ujian klinikal yang menggunakan IVI bagi vektor berasaskan AAV2-untuk menangani LHON yang disebabkan oleh mutasi dalam mitokondria ND4 (ClinicalTrials.gov: NCT02161380 dan NCT02064569) mendokumenkan titer antibodi tinggi dan uveitis anterior pada sesetengah pesakit yang dirawat.133,12,12,12,12. ekspresi pemacu AAV2 dos tinggi bagi protein peneutral VEGF larut (AAV2-sFLT01) (2 1010 vg) untuk AMD basah (ClinicalTrials.gov:NCT01024998) mengembangkan pyrexia dan keradangan intraokular. Tindak balas keradangan yang serupa telah diperhatikan dalam Kajian keselamatan NHP.

134Adverum Biotechnologies mempunyai produk anti-VEGF AAV.7m8capsid yang membawa gen untuk aflibercept dalam ujian klinikal yang dihantar oleh IVI. Kohort pertama (6 1011 vg) menunjukkan keberkesanan yang menggalakkan dengan 6/6 pesakit yang tidak memerlukan suntikan penyelamatan afliberceptpost-rawatan, penyelenggaraan BCVA, penyelenggaraan atau pengurangan ketebalan retina incentral, dan ketahanan sehingga 15 bulan.

Walau bagaimanapun, kohort ini mengalami uveitis berulang yang memerlukan rawatan steroid tambahan (titik topikal),135 mengakibatkan penahanan klinikal sementara menunggu semakan CMC.

136 Selepas perbicaraan disambung semula, kohort berikutnya dirawat dengan dos vektor yang lebih rendah (2 1011 vg), dan perubahan kepada rejimen steroid profilaksis telah dilaksanakan, termasuk prarawatan oral berbanding rejimen rawatan steroid topikal antara dua kohort tahap dos yang sama.

Dos yang lebih rendah didapati dikaitkan dengan kurang keradangan selepas rawatan tetapi juga kurang berkesan dengan 5/15 pesakit yang memerlukan suntikan penyelamat.

Yang menarik ialah pemerhatian bahawa uveitis yang disebabkan oleh vektor kelihatan responsif kepada titisan steroid topikal, dan sebenarnya, kohort yang dirawat dengan difluprednat empirik adalah lebih baik dengan kurang keradangan selepas rawatan daripada kohort tahap dos yang sama yang dirawat dengan prednison oral empirik.

Data klinikal terkini mencadangkan bahawa imuniti humoral boleh memainkan peranan yang menghalang transduksi untuk AAV yang dihantar oleh IVI, walaupun ini tidak dipercayai berlaku dengan SRI.

Keputusan daripada IVI AAV2-sFLT01untuk merawat AMD basah (ClinicalTrials.gov: NCT01024998) mendedahkan korelasi negatif yang kuat antara antibodi meneutralkan (NAbs) kepadaAAV2 dan tahap sFLT01.

88 Ini adalah kajian klinikal pertama untuk menyerlahkan potensi peranan NAbs serum dalam mengehadkan ekspresi transgen pengantara AAV di mata. Dalam kajian berasingan, ekspresi transgen pengantara AAV dilaporkan berkorelasi songsang dengan kehadiran NAbs dalam kedua-dua serum dan kera vitreous, dengan yang terakhir menunjukkan korelasi yang lebih kuat.

120 Memandangkan terapi anti-VEGF AAV beralih kepada ujian klinikal untuk retinopati diabetik progresif (PDR) dan edema makula diabetik (DME), kedua-dua gangguan, yang dicirikan oleh gangguan pada penghalang darah retina dan kebimbangan bahawa NAbs akan menghadkan terapi, meningkat, memandangkan majoriti daripada populasi adalah seropositif untuk AAV.

Atas sebab-sebab ini, terdapat usaha sedang dijalankan untuk membangunkan kapsid AAV yang "melarikan diri" peneutralan, dengan itu meningkatkan bilangan pesakit yang akan menerima terapi gen yang disampaikan IV.

112 Sama ada transduksi retina luar yang mencukupi untuk merawat penyakit yang dimediasi PR secara berkesan boleh dicapai oleh IVI AAV tanpa peneutralan atau keradangan masih perlu dilihat dan mungkin bergantung pada perkembangan AAVkapsid baru dan/atau rejimen imunosupresif.

Oleh kerana terapi gen retina telah berkembang, kami telah memahami bahawa pendekatan "satu saiz untuk semua" tidak akan berfungsi. Sama seperti sasaran terapi gen lain (cth, hemofilia), kami belajar bahawa menterjemah bukti kajian konsep yang berjaya dalam model haiwan akan memerlukan lebih banyak penyiasatan yang bertujuan untuk mengenal pasti dan mengatasi halangan yang intrinsik kepada struktur dan fisiologi mata manusia dan dalam beberapa kes, keadaan penyakit khusus populasi pesakit sasaran.

Mujurlah, kami mempunyai set alatan yang sentiasa dipertingkatkan (cth, kapsid AAV), pendekatan penghantaran dan teknologi diagnostik yang mungkin membolehkan usaha ini.

Diambil bersama dengan keistimewaan imun relatifnya dan dos vektor yang jauh lebih rendah yang diperlukan untuk menyasarkan mata berbanding organ lain, bidang terapi gen okular mungkin menyaksikan banyak kejayaan tambahan.

Terapi Gen Hemofilia: Bergerak Melangkaui Bukti Konsep

Kejayaan dalam pemindahan gen hemofilia telah tiba. Digariskan dalam Jadual 2 dan 3, 20 ujian klinikal semakin hampir, termasuk segelintir ujian penting dan permohonan pelesenan pertama yang belum selesai (Harrington et al., 2020, Sidang Kemuncak Maya WFH, persidangan).137–153,154–156 Bidang ini sebahagian besarnya telah tertumpu pada penggunaan vektor AAV yang ditadbir secara sistemik untuk ekspresi hepatosit faktor pembekuan VIII (FVIII) dan IX (FIX).

144 Walaupun usaha AAV mendominasi, vektor lentiviral untuk sama ada infusi sistemik157,158atau transduksi ex vivo sel stem hematopoietik159–161 atau sel stem pluripoten teraruh162 sedang dijalankan secara praklinikal atau sebagai percubaan Iklinikal fasa.

156 Walaupun usaha percubaan klinikal AAV telah menunjukkan kejayaan pembuktian konsep berulang, soalan-soalan tertunggak kekal yang penting untuk ditangani untuk merealisasikan potensi terapi gen hemofilia.

Perkara ini baru-baru ini diserlahkan oleh penafian FDA terhadap permohonan pelesenan biologi pertama untuk produk terapi hemofiliagen yang dikemukakan oleh BioMarin Pharmaceutical untuk vektor ahemofilia A (HA); Walaupun hasilnya mengejutkan ramai, data tambahan yang diminta oleh FDA bertujuan untuk menangani pemerhatian yang tidak dapat dijelaskan setakat ini khusus untuk percubaannya (cth, soalan tentang ketahanan ekspresi163,164) yang sudah pasti penting untuk semua usaha terapi gen hemofilia.

Secara lebih luas, banyak pelajaran inhemofilia terpakai kepada semua usaha terapi gen AAV sistemik. HA dan hemofilia B (HB) ialah gangguan monogenik berkaitan X akibat daripada penurunan/ketiadaan fungsi pembekuan FVIII atau FIX.165,166 Manakala FIX disintesis secara endogen dalam hepatosit , FVIII disintesis terutamanya dalam sel endothelial sinusoidal hati, supaya FVIII dinyatakan secara ektopik dalam ujian klinikal.

167–170Pesakit hemofilia mengalami pendarahan berulang, spontan atau akibat trauma secara klasik ke dalam sendi, mengakibatkan arthropathy melumpuhkan. Sekuela pendarahan berkait rapat dengan aktiviti plasma FVIII/FIX(FVIII:C/FIX: C), sehingga pendarahan spontan berlaku padaHA/HB teruk (FVIII/FIX: C<1% of normal), less commonly in moderate HA/HB (FVIII/FIX: C 1%–5% of normal), and typically only following trauma in mild HA/HB (FVIII/FIX: C >5%–40% daripada biasa).

171 Oleh itu, jumlah ekspresi FVIII/FIX yang sederhana mempunyai manfaat klinikal yang besar. Hemofilia dirawat dengan terapi penggantian enzim intravena (ERT) yang dihantar secara profilaktik untuk mengelakkan permintaan oron untuk pendarahan.

172,173 Walaupun berkesan, ERT dihadkan oleh kira-kira 40% kadar ketidakpatuhan, kos R$200,000setiap tahun, dan peningkatan artropati.172–175

For more information:1950477648nn@gmail.com