2 Keputusan dan Analisis

2.1 Sifat Fisikokimia Polisakarida

2.1.1 Analisis Komponen Kimia

Sifat fizikokimia dan hasil empat pecahan yang diperoleh melalui pemisahan membran - teknik berdasarkan teknologi pemisahan membran yang dipatenkan (Nombor Paten ZL200710102756.7) yang dimiliki olehHotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (https://www.xjcistanche.com/about-us)- dibentangkan dalam Jadual 1. Perbezaan ketara diperhatikan dalam kandungan jumlah gula, protein, dan asid uronik di antara empat pecahan. CTP 1 mempamerkan kandungan gula tertinggi, dan kandungan asid uroniknya jauh lebih tinggi daripada pecahan lain. Apabila pecahan berubah daripada CTP 1 kepada CTP 4, hasil, jumlah kandungan gula, dan kandungan asid uronik menunjukkan trend penurunan yang jelas.

 

 

Pegangan Paten Teknologi Pemisahan Membran Oleh Ibu Pejabat Wecistanche

 

Jadual 1. Komposisi kimia dan hasil bagiCistanche deserticolapolisakarida selepas pemisahan membran

Pecahan	Jumlah Kandungan Gula (%)	Kandungan Protein (%)	Kandungan Asid Uronik (%)	Hasil (%)
CTP 1	91.95 ± 1.03ᵃ	1.06 ± 0.04ᶜ	26.77 ± 0.77ᵃ	3.31
CTP 2	83.67 ± 1.61ᵇ	1.42 ± 0.03ᵃ	15.90 ± 0.29ᶜ	0.70
CTP 3	78.32 ± 1.48ᶜ	1.25 ± 0.02ᵇ	19.12 ± 0.55ᵇ	0.10
CTP 4	37.51 ± 1.40ᵈ	1.41 ± 0.02ᵃ	19.20 ± 0.54ᵇ	0.10

Nota: Data dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai (n=3). Huruf superskrip yang berbeza dalam lajur yang sama menunjukkan perbezaan yang ketara antara sampel (P <0.05).

 

Bahan Cistanche Berkualiti Tinggi

 

 

 

 

2.1.2 Analisis Komposisi Monosakarida

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2 dan Jadual 2, komposisi monosakarida bagi empat pecahan (CTP 1, CTP 2, CTP 3, CTP 4) yang dipisahkan oleh membran ultraturasan dengan potongan berat molekul yang berbeza, seperti yang ditentukan oleh derivatisasi PMP, adalah konsisten. Semua pecahan adalah heteropolisakarida yang terdiri daripada 8 monosakarida: mannose (Man), glukosamin (GlcN), rhamnose (Rha), asid glukuronik (GlcA), asid galakturonik (GalA), glukosa (Glc), galaktosa (Gal), dan arabinosa (Ara). Antaranya, glukosa (Glc), galaktosa (Gal), arabinosa (Ara), asid galakturonik (GalA), dan rhamnose (Rha) menyumbang kepada peratusan molar yang lebih tinggi. Peratusan molar monosakarida yang berbeza berbeza-beza merentasi empat pecahan: CTP 1 mempunyai kandungan glukosa dan asid galakturonik yang paling tinggi; CTP 2 mempunyai kandungan galaktosa dan asid glukuronik yang tinggi; CTP 3 mempunyai kandungan arabinosa yang tinggi; dan CTP 4 mempunyai kandungan mannose dan rhamnose yang tinggi. Kandungan gula berasid CTP 1 adalah jauh lebih tinggi daripada pecahan lain, yang konsisten dengan kandungan asid uronik yang ditentukan dalam analisis sifat fizikokimia. Ini menunjukkan bahawa teknologi pemisahan membran (dilindungi olehNombor Paten ZL200710102756.7) boleh memfraksinasi komponen polisakarida dengan kandungan gula berasid yang berbeza.

 

 

Spesifikasi Ekstrak Cistanche Berbeza Dibuat Oleh Teknologi Pemisahan Membran

Dapatkan butiran lanjut tentang wecistanche

 

 

 

2.1.3 Analisis Fourier-Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR).

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, keempat-empat pecahan polisakarida mempamerkan puncak penyerapan ciri khas polisakarida. Puncak yang kuat dan luas pada 3324.6 cm⁻¹ dikaitkan dengan getaran regangan OH polisakarida [18]; puncak pada 2924.6 cm⁻¹ ialah getaran regangan CH karbohidrat, puncak ciri khas polisakarida [19, 20]. Penyerapan berhampiran 1738.8 cm⁻¹ menunjukkan kehadiran struktur asid uronik, menunjukkan bahawa polisakarida adalah berasid [16, 21]. Puncak penyerapan pada 1607.5 cm⁻¹ telah ditetapkan kepada air terjerap, yang mungkin disebabkan oleh sifat higroskopik polisakarida. Puncak penyerapan berhampiran 1234.3 cm⁻¹ disebabkan oleh getaran lentur CH [22, 23], dan puncak penyerapan pada 1014.2 cm⁻¹ mengesahkan penyerapan ciri cincin piranosa. Puncak penyerapan pada 887.3 cm⁻¹ dan 755.2 cm⁻¹ menunjukkan kehadiran ikatan glikosidik yang dikonfigurasikan dan dikonfigurasikan [24-27]. Proses pengasingan membran tidak merosakkan jenis ikatan glikosidik asas atau struktur kumpulan berfungsi polisakarida, memastikan integriti struktur pecahan polisakarida.

Rajah 1 Kromatogram komposisi monosakarida bahan rujukan

Nota: 1. Mannose; 2. Glukosamin; 3. Rhamnose; 4. Asid glukuronik; 5. Asid galakturonik; 6. Galactosamine; 7. Glukosa; 8. Galaktosa; 9. Xylose; 10. Arabinosa; 11. Fucose.

 

Rajah 2. Kromatogram komposisi monosakarida pecahan polisakarida.

Nota: 1. Mannose; 3. Rhamnose; 5. Asid galakturonik; 7. Glukosa; 8. Galaktosa; 10. Arabinosa.

 

 

 

 

2.1.4 Analisis Mikroskopi Elektron Imbasan (SEM).

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, CTP 1 mempamerkan permukaan beralun sedikit pada pembesaran 2000 × (A1). Pada pembesaran 10,000 × (A2), liang tidak sekata dengan saiz tidak sekata diperhatikan, menunjukkan ciri keseluruhan "berliang dan longgar". CTP 2 mempunyai struktur yang agak utuh dan rata pada pembesaran 2000× (B1), dengan aglomerasi yang lemah walaupun terdapat beberapa lipatan tepi. Pada pembesaran 10,000 × (B2), permukaannya licin dan rata dengan hampir tiada liang yang jelas. CTP 3 menunjukkan "riak" halus pada permukaan pada pembesaran 2000 × (C1), yang mungkin disebabkan oleh pengagregatan separa molekul polisakarida tanpa pemautan silang lengkap ke dalam struktur padat. Pada pembesaran 10,000 × (C2), permukaan menunjukkan kekasaran sederhana [28]. CTP 3 menunjukkan "riak" halus pada permukaan pada pembesaran 2000 × (C1), yang mungkin disebabkan oleh pengagregatan separa molekul polisakarida tanpa pemautan silang lengkap ke dalam struktur padat. Pada pembesaran 10,000 × (C2), permukaan menunjukkan kekasaran sederhana [28]. CTP 4 telah mengedarkan zarah-zarah berskala nano yang jarang pada permukaan kawasan terkumpul pada pembesaran 2000 × (D1), tanpa sambungan yang jelas antara zarah dan keterserakan sederhana. Pada pembesaran 10,000 × (D2), permukaan zarah adalah licin tanpa protrusi yang jelas, menunjukkan lipatan sedikit dan keseragaman struktur sederhana [29]. Secara ringkasnya, morfologi mikroskopik polisakarida yang dirawat dengan membran ultraturasan berbeza adalah berbeza dengan ketara, khususnya dalam keadaan pengagregatan, kekasaran permukaan dan keterserakan. Perbezaan morfologi ini mungkin berkaitan dengan daya antara molekul polisakarida dan kesan penyaringan semasa ultraturasan.

 

Jadual 2. Nisbah molar bagi komposisi monosakarida bagi pecahan polisakarida

Monosakarida	CTP 1 (%)	CTP 2 (%)	CTP 3 (%)	CTP 4 (%)
Mannose (Lelaki)	1.373	1.112	1.772	3.484
Glukosamin (GlcN)	0.201	0.265	0.347	0.454
Rhamnose (Rha)	8.695	9.860	11.060	12.590
Glukosa (GlcA)	1.239	1.313	1.166	1.228
Asid Galakturonik (GalA)	13.755	12.653	13.777	7.461
Glukosa (Glc)	35.101	19.329	33.898	33.998
Galaktosa (Gal)	28.353	33.372	28.623	30.997
Arabinose (Ara)	11.284	12.286	12.756	9.806

Rajah 3: Spektra Inframerah Transformasi Fourier Polisakarida Daripada Setiap Pecahan

 

Rajah 4 Mengimbas imej mikroskop elektron bagi pecahan polisakarida.

Rajah 5 DPPH kapasiti penghapusan radikal pecahan polisakarida.

 

 

 

WECISTNACHE MUNUFACTORER

 

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Untuk butiran lanjut tentang kerjasama
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com

 

2.2 Penentuan Aktiviti Antioksidan Polisakarida

2.2.1 Penentuan DPPH· Kapasiti Penghapusan Radikal

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5, kapasiti pemusnahan radikal DPPH bagi setiap pecahan mempamerkan kesan yang bergantung kepada dos yang jelas [30, 31]. Berbanding dengan kapasiti scavenging radikal VC, kapasiti scavenging DPPH bagi empat pecahan adalah agak lemah. Pada kepekatan 8 mg/mL, nilai IC₅₀ VC dan empat pecahan masing-masing ialah 0.961 mg/mL, 4.946 mg/mL, 7.534 mg/mL, 7.534 mg/mL, dan 8.472 mg/mL, dengan kapasiti radikal 1 yang paling tinggi.

 

Rajah 6 Kapasiti mengais anion superoksida bagi pecahan polisakarida.

Rajah 7 Jumlah kapasiti antioksida bagi pecahan polisakarida.

 

Rajah 8 kapasiti penghapusan radikal ABTS pecahan polisakarida

 

 

2.2.2 Penentuan Keupayaan Menghilangkan Anion Superoksida

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 6, kapasiti penghapusan anion superoksida bagi empat pecahan tidak menunjukkan perubahan ketara dengan peningkatan kepekatan [32]. Berbanding dengan kapasiti penghapusan anion superoksida VC, kapasiti empat pecahan adalah agak lemah. Pada kepekatan 8 mg/mL, nilai IC₅₀ VC dan empat pecahan ialah 0.884 mg/mL, 11.46 mg/mL, 10.54 mg/mL, 14.03 mg/mL, dan 11.83 mg/mL, masing-masing menunjukkan pecahan empat oksida yang penting, menunjukkan bahawa pecahan empat oksida perlu. konsisten. Perbezaan aktiviti ini mungkin berkaitan dengan pelbagai faktor seperti berat molekul, komposisi dan nisbah monosakarida, dan kandungan gula berasid polisakarida.

2.2.3 Penentuan Jumlah Kapasiti Antioksidan

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 7, jumlah kapasiti antioksidan setiap pecahan secara beransur-ansur meningkat dengan peningkatan kepekatan [33], menunjukkan kesan bergantung kepada dos. Berbanding dengan jumlah kapasiti antioksidan VC, kapasiti empat pecahan adalah agak lemah. Pada kepekatan 8 mg/mL, nilai IC₅₀ VC dan empat pecahan masing-masing ialah 22.88 mg/mL, 40.00 mg/mL, 61.30 mg/mL, 79.41 mg/mL dan 71.81 mg/mL, dengan jumlah kapasiti antioksidan CTP 1 terkuat.

2.2.4 Penentuan Kapasiti Penghapusan Radikal ABTS⁺

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 8, kapasiti penghapusan radikal ABTS⁺ bagi setiap pecahan secara beransur-ansur meningkat dengan peningkatan kepekatan, menunjukkan kesan bergantung kepada dos. Pada kepekatan 4 mg/mL, nilai IC₅₀ VC dan empat pecahan ialah 0.450 mg/mL, 0.486 mg/mL, 0.405 mg/mL, 1.039 mg/mL dan 0.531 mg/mL, masing-masing adalah 0.531 mg/mL, menunjukkan bahawa pecahan radikal empat ABTS⁺ adalah radikal penting. konsisten dengan VC.

 

3 Kesimpulan

Dalam kajian ini, sisa daripadaCistancheselepas pengekstrakan glikosida phenylethanoid digunakan sebagai bahan mentah, dan membran ultrafiltrasi digabungkan dengan teknologi pemendakan alkohol - dilindungi oleh paten ciptaan (Nombor Paten ZL200710102756.7) dipegang olehHotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd. (https://www.xjcistanche.com/about-us) - was employed to achieve efficient extraction and fractionation of polysaccharides. Four polysaccharide fractions with different molecular weight ranges were successfully prepared: CTP 1 (>300 kDa), CTP 2 (50–300 kDa), CTP 3 (10–50 kDa), dan CTP 4 (<10 kDa). The structural characteristics and antioxidant activity differences of each fraction were systematically analyzed.

Kesan Pecahan Polisakarida dan Ciri Taburan: Apabila saiz liang membran ultraturasan berkurangan, hasil pecahan polisakarida menunjukkan arah aliran menurun, mencerminkan taburan berat molekul polisakarida yang luas dalamCistanchesisa. Teknologi pemisahan membran (dipatenkan oleh Hotan Dichen Pharmaceutical Biotechnology Co., Ltd.) boleh memfraksinasi komponen polisakarida dengan tepat dengan berat molekul yang berbeza dan kandungan gula berasid tanpa merosakkan jenis ikatan glikosidik asas dan struktur kumpulan berfungsi polisakarida, memastikan integriti struktur pecahan. Ini menyediakan penyelesaian teknikal yang cekap dan mesra alam untuk pecahan polisakarida yang tepat.

Ciri-ciri Hubungan Struktur-Aktiviti: Kesemua empat pecahan polisakarida adalah heteropolisakarida yang mengandungi 8 monosakarida, tetapi perbezaan ketara diperhatikan dalam perkadaran molar monosakarida. Kandungan gula berasid (asid uronik) CTP 1 adalah jauh lebih tinggi daripada pecahan lain. Eksperimen antioksidan in vitro mengesahkan bahawa CTP 1 mempamerkan aktiviti penghapusan radikal DPPH dan ABTS⁺ yang terbaik, menunjukkan bahawa aktiviti antioksidan polisakarida berkait rapat dengan berat molekul, kandungan gula berasid dan nisbah komposisi monosakarida, yang konsisten dengan kesimpulan teras kajian sedia ada bahawa "ciri struktur polisakarida mengawal aktiviti biologi". Kajian oleh Aladan Memetali et al. [34] juga menunjukkan bahawa aktiviti antioksidan meningkat dengan ketara dengan peningkatan kepekatan polisakarida, dan ciri bergantung dos ini telah disahkan oleh eksperimen kepekatan kecerunan dalam kajian ini. Tidak seperti kajian terdahulu yang biasanya menyediakan polisakarida mentah melalui pemendakan alkohol, kajian ini memperkenalkan teknologi pemisahan membran untuk memfraksinasi secara sistematik.Cistanchepolisakarida, membolehkan peralihan daripada analisis aktiviti keseluruhan komponen campuran kepada penyiasatan tepat aktiviti antioksidan pecahan polisakarida dalam julat berat molekul yang berbeza.

Kajian ini hanya menilai aktiviti antioksidan polisakarida menggunakan model kimia in vitro, dan hasilnya mungkin berbeza daripada keberkesanan antioksidan dalam persekitaran fisiologi in vivo. Penyelidikan masa depan harus terus menjalankan eksperimen sel in vitro dan kajian haiwan in vivo untuk mengesahkan aktiviti antioksidan dan laluan berpotensi. Sementara itu, teknologi seperti kromatografi-spektrometri jisim dan pembelauan sinar-X boleh digunakan untuk menganalisis struktur halus polisakarida dan mengenal pasti tapak aktif utama, memberikan sokongan teori yang lebih tepat untuk pembangunan makanan berfungsi, antioksidan dan produk lain berdasarkan sisa polisakarida. Melalui penghalusan lanjut analisis struktur halus dan pengesahan aktiviti in vivo, ia dijangka dapat meneroka lebih lanjut potensi penggunaan sisa polisakarida dan menggalakkan peningkatan pembangunan sumber perubatan berciri di Xinjiang ke arah hijau, cekap dan arah perindustrian.

 

Rujukan

[18] Ibu Pejabat Wu, Zhou SY, Zhou YY, et al. Pengekstrakan Polisakarida Berbantukan Ultrabunyi daripadaBambusa vulgarisL. Pucuk Menggunakan Pelarut Eutektik Rendah dan Analisis Aktiviti In Vitronya [J].Sains dan Teknologi Industri Makanan, 2025, (dalam akhbar).

[19] Zhou R, Cui M, Wang Y, et al. Pengasingan, pengenalan struktur dan aktiviti anti-radang polisakarida daripadaPhragmitesrizoma [J].Jurnal Antarabangsa Makromolekul Biologi, 2020, 161: 810-817.

[20] Wang SL, Yu J, Song JX, et al. Pengasingan, penulenan, analisis struktur dan aktiviti in vitro polisakarida daripadaAmelanchier alnifoliaKacang [J].Proses Biokimia, 2024, 136: 229-236.

[21] Kakar MU, Li J, Mehboob MZ, et al. Pemurnian, pencirian, dan penentuan aktiviti biologi polisakarida larut air daripadaMahonia bealei [J]. Laporan Saintifik, 2022, 12(1): 1-12.

[22] Liu T, Zhou K, Yin S, et al. Pembersihan dan pencirian eksopolisakarida yang dihasilkan olehLactobacillus plantarumHY diasingkan daripada Acar Sichuan buatan sendiri [J].Jurnal Antarabangsa Makromolekul Biologi, 2019, 134: 516-526.[23] Yin Z, Zhang W, Zhang J, et al. Pengasingan, penulenan, analisis struktur dan aktiviti pembekuan polisakarida larut air daripadaLigustrum lucidumAit bunga [J].Jurnal Pusat Kimia, 2017, 11(1): 1-11.

[24] Gao Y, Abuduaini G, Yang C, et al. Pengasingan, penulenan, dan penjelasan strukturStropharia rugosoannulatapolisakarida dengan kesan hipolipidemik [J].Sempadan dalam Pemakanan, 2022, 9: 1-12.

[25] Ma K, Yi X, Yang ST, et al. Pengasingan, penulenan, dan pencirian struktur polisakarida daripadaPilosula kodonopsisdan kesan terapeutiknya terhadap penyakit hati berlemak bukan alkohol secara in vitro dan in vivo [J].Jurnal Antarabangsa Makromolekul Biologi, 2024, 265: 130988.

[26] Hu HB, Liang HP, Li HM, et al. Pengasingan, penulenan, pencirian dan aktiviti antioksidan polisakarida daripada kulit batangAcanthopanax leucorrhizus [J]. , 2018, 196: 359-367.

[27] Luo Y, Zhao Z, Chen H, et al. Analisis Dinamik Sifat Fisikokimia dan Komposisi Polisakarida semasa Penapaian Longgokan Teh Selepas Penapaian [J]., 2022, 11(21): 3376.

[28] Ren L, Yang Y, Bian X, et al. Sifat Fisikokimia, Reologi, Struktur, Antioksidan dan Antimikrob Polisakarida Diekstrak daripada Biji Tamarind [J]., 2022, 2022: 1-14.

[29] Geng X, Guo D, Wu B, et al. Kesan kaedah pengekstrakan yang berbeza terhadap ciri fiziko-kimia dan aktiviti biologi polisakarida daripadaClitocybe squamulosa [J]. Jurnal Antarabangsa Makromolekul Biologi, 2024, 259: 1-10.

[30] Liu S, Zhang T, Chen Z, et al. Pencirian struktur bagiCorydalis yanhusuopolisakarida dan bioaktivitinya secara in vitro [J].Jurnal Antarabangsa Makromolekul Biologi, 2025, 306: 141575.

[31] Gu J, Zhang H, Wen C, et al. Pembersihan, pencirian, aktiviti antioksidan dan imunologi polisakarida daripadaSagittaria sagittifolia L [J]. Penyelidikan Makanan Antarabangsa, 2020, 136: 1-10.

[32] Huo S, Wang H, Chen J, et al. Kajian awal tentang pengekstrakan polisakarida, penulenan, dan sifat antioksidan mikroalga berfilamen yang kaya dengan gulaTribonema tolak [J]. Jurnal Fikologi Gunaan, 2022, 34(6): 2755-2767.[33] Capek P, Košťálová Z. Pengasingan, pencirian kimia dan aktiviti antioksidanPrunus spinosaL. buah fenolik polisakarida-protein [J].Penyelidikan Karbohidrat, 2022, 515: 1-9.

[34] Aladan Memetali, Yang T, Yuan J, et al. Proses Pengekstrakan dan Aktiviti Antioksidan In Vitro Polisakarida daripadaCistanche tubulosaSisa [J].Kimia & Bioengineering, 2020, 37(02): 36-41.