Cistanche Rb1 Melemahkan Kemerosotan Vaskular Berkaitan Umur Dengan Memodulasi Laluan Gas6

Keputusan Rb1 mengurangkan penuaan dalam aorta tikus yang semakin tua

Untuk mengenal pasti kesan antisenescence Rb1, kami mula-mula menyiasat penuaan selular, yang dicirikan oleh ekspresi protein yang terlibat dalam perencatan kitaran sel dan penangkapan pertumbuhan tidak dapat dipulihkan (Yang et al. 2019). Memandangkan keputusan imunohistokimia ditunjukkan dalam Rajah 1 (A, B), berbanding dengan kumpulan Muda, tikus kumpulan Kenderaan Lama menunjukkan bahawa penuaan mempercepatkan regulasi p21Cip1 dan p16INK4a dalam sel aorta toraks. Walau bagaimanapun, rawatan Rb1 mengurangkan penuaan selular dalam saluran darah, terutamanya dalam kumpulan þ Rb1-20 Lama. Di samping itu, keputusan Western blot adalah selaras dengankeputusan imunohistokimia. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1(C), ekspresi protein p21Cip1 dan p16INK4a telah meningkat dengan ketara sebanyak lebih kurang 2-kali ganda dalam aorta toraks tikus tua berbanding dengan tikus muda. Selepas rawatan dengan 20 mg/kg Rb1, paras protein p21Cip1 dan p16INK4a hanya meningkat sebanyak 41.92 peratus dan 37.52 peratus berbanding kumpulan Muda, yang jauh lebih rendah daripada kumpulan Old plus Vehicle. Di samping itu, tidak terdapat perbezaan yang signifikan dalam ekspresi p21Cip1 atau p16INK4a antara tikus muda dengan dan tanpa rawatan Rb1.

Rajah 1. Kesan Rb1 pada penuaan aorta toraks. Imej pewarnaan imunohistokimia (400 ) p21Cip1 (A) dan p16INK4a (B) dalam keratan rentas aorta toraks tetikus. (C) Analisis blot Barat terhadap ekspresi p21Cip1 dan p16INK4a toraks tetikus. Data dinyatakan sebagai min ± SD. p < 0.01 berbanding kumpulan Muda; # p < 0.05 lwn. kumpulan Kenderaan Lama.

Rb1 meningkatkan kereaktifan vaskular pada tikus tua

Percubaan cincin vaskular digunakan untuk menilai vasodilatasi yang bergantung kepada endothelium. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, dalam semua cincin aorta toraks tetikus, pentadbiran Ach mengakibatkan vasorelaxation. Pada kepekatan maksimum (10–5 mol/L), Ach menginduksi kira-kira 88.84 peratus ± 1.20 peratus dan 58.35 peratus ± 2.50 peratus vasorelaxation dalam kumpulan Muda dan kumpulan Old þ Vehicle, masing-masing, menunjukkan bahawa penuaan dikaitkan dengan kemerosotan kereaktifan vaskular. Walau bagaimanapun, rawatan 10 dan 20 mg/kg Rb1 menghasilkan kira-kira 70.48 peratus ± 2.20 peratus dan 80.90 peratus ± 3.24 peratus kelonggaran masing-masing, dalam cincin aorta toraks tikus yang semakin tua sebagai tindak balas kepada 10 5 mol/L Ach.

Klik Di Sini Untuk Mendapatkan Cistanche Untuk Anti-Penuaan

Rb1 mengurangkan ekspresi molekul lekatan selular dalam aorta toraks tikus penuaan

Kami memeriksa ekspresi protein molekul lekatan sel tertentu untuk menentukanradangdankesan anti-radangsebanyak Rb1 pada tikus tua. Keputusan menunjukkan bahawa ekspresi protein ICAM-1, VCAM-1 dan PAI-1 telah meningkat dengan ketara kira-kira 2-4 kali ganda dalam aorta toraks tikus tua berbanding dengan mereka. dalam kumpulan Muda (Rajah 3). Sebaliknya, rawatan Rb1 dengan ketara menghalang perubahan ini dalam aorta toraks tikus tua tetapi tidak memberi kesan kepada kumpulan tikus Muda. Analisis kuantitatif menunjukkan bahawa rawatan 20 mg/kg Rb1 menghasilkan kira-kira 36.58 peratus , 46.66 peratus dan 49.34 peratus penurunan peraturan ICAM-1, VCAM-1 dan PAI-1, masing-masing, dalam tisu aorta toraks yang semakin tua, berbanding dengan tikus kumpulan Old plus Vehicle.

Rb1 menghalang kalsifikasi vaskular dan fibrosis berkaitan usia

Kami melakukan pewarnaan HE dan pewarnaan alizarin merah S untuk menilai struktur tisu aorta dan kalsifikasi medial vaskular dalam tikus penuaan masing-masing. Pewarnaan HE menunjukkan bahawa dinding menebal akibat penuaan aorta toraks dan ketidakselarasan matriks ekstraselular aorta, boleh dilegakan dengan rawatan Rb1 (Rajah 4(A)). Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4 (B), tikus yang semakin tua mengembangkan kalsifikasi medial yang lebih teruk (kawasan bernoda merah) daripada tikus muda, manakala campur tangan Rb1 mengurangkan perubahan patologi ini. Kemudian, kami memeriksa keratan rentas aorta toraks dengan pewarnaan trichrome Masson untuk menilai fibrosis medial vaskular dalam tikus penuaan. Keputusan menunjukkan bahawa terdapat peningkatan ketara dalam pemendapan kolagen (kawasan bernoda biru) dalam kumpulan Old þ Vehicle berbanding dengan kumpulan Muda (Rajah 4(C)), dan kesan ini telah dihalang dengan ketara oleh campur tangan Rb1. Selain itu, Western blotting menunjukkan bahawa ekspresi kolagen I dan kolagen III meningkat dengan ketara sebanyak 4.34- dan 2.62-lipat ganda dalam tikus kumpulan þ Kenderaan Lama berbanding dengan tikus muda; walau bagaimanapun, rawatan Rb1 mengecilkan ekspresi kolagen I dan kolagen III dalam tikus tua (Rajah 4(D)). Selain itu, rawatan dengan Rb1 tidak mempunyai pengaruh ke atas tahap kalsifikasi aorta toraks dan fibrosis pada tikus muda (Rajah 4 (A-D)).

Rb1 mengawal laluan isyarat Gas6

Kami selanjutnya menyiasat sama ada Rb1 berfungsi melalui laluan isyarat Gas6/Axl untuk memperbaiki kerosakan aorta toraks yang berkaitan dengan usia pada tikus. Penurunan regulasi ekspresi protein Gas6 sebanyak 41.72 peratus dan ekspresi mRNA sebanyak 52.73 peratus pada tikus tua berbanding dengan tikus muda telah dimansuhkan oleh rawatan Rb1 (Rajah 5 (A, B)). Kami juga menentukan ekspresi protein Axl oleh Western blotting. Menariknya, tidak terdapat perbezaan yang signifikan dalam ekspresi protein Axl di antara lima kumpulan eksperimen (Rajah 5(A)). Kami juga tidak mengesan perbezaan yang ketara dalam tahap mRNA Axl di kalangan kumpulan (Rajah 5(B)).

Rajah 2. Rawatan Rb1 melemahkan kemerosotan vasorelaxasi yang bergantung kepada endothelium yang berkaitan dengan usia dalam cincin vaskular aorta toraks. Angka yang menunjukkan keputusan analisis. Data dinyatakan sebagai min ± SD. p < 0.05, p < 0.01 lwn. kumpulan Muda; # p < 0.05, ##p < 0.01 lwn. kumpulan þ Kenderaan Lama.

Rajah 3. Rb1 mengurangkan ekspresi molekul lekatan selular dalam aorta toraks tikus tua. Analisis Western blot bagi ekspresi ICAM-1, VCAM-1 dan PAI-1 dalam tisu aorta toraks. Data dinyatakan sebagai min ± SD. p < 0.01 lwn. kumpulan Muda; # p < 0.05, ##p < 0.01 lwn. kumpulan Kenderaan Lama.

Perbincangan

Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa Rb1 bertambah baikkerosakan vaskular yang berkaitan dengan usiadengan menekan kalsifikasi dan fibrosis melalui pengawalan ekspresi Gas6 tetapi bukan ekspresi Axl, yang menyediakan strategi terapeutik yang berpotensi untuk mencegah penyakit vaskular yang berkaitan dengan usia. Adalah diterima dengan baik bahawa penuaan sel vaskular, yang dicirikan oleh disfungsi endothelial dan peralihan fenotip sel otot licin, boleh mengakibatkan peningkatan kekejangan vaskular dan peningkatan ketebalan dinding vaskular (Liu et al. 2019). Penuaan sel vaskular adalah ciri biasa pelbagai penyakit yang kompleks, berkaitan dengan usia, terutamanya penyakit kardiovaskular (O'Rourke et al. 2010). Dengan perkembangan penuaan sel vaskular, fungsi vaskular terjejas (Gong et al. 2014). Disfungsi vaskular yang berkaitan dengan usia dicontohkan oleh perubahan patofisiologi, termasuk penurunan progresif dalam vasodilasi yang bergantung kepada lium endothe (Herrera et al. 2010; Gong et al. 2014). Dalam kajian kami, kami mengesahkan penuaan selular dalam aorta toraks tikus tua, yang ditunjukkan oleh peningkatan ekspresi protein berkaitan umur p21Cip1 dan p16INK4a, serta penurunan dalam vasodilatasi yang bergantung kepada endothelium. Konsistensi keputusan kami dengan kajian yang disebutkan di atas menunjukkan bahawa terdapat beberapa mekanisme molekul penting yang dikaitkan dengan perubahan dalam patofisiologi sel vaskular semasa penuaan. Ejen yang bertindak ke atas mekanisme ini mungkin akan mengurangkan dan melambatkan penuaan sel vaskular.

Rajah 4. Rawatan Rb1 memperbaiki kalsifikasi vaskular dan fibrosis akibat penuaan. (A) Pewarnaan Haematoxylin dan eosin (HE) (400 ), (B) Pewarnaan Alizarin red S (400 ), dan (C) pewarnaan trichrome Masson (400 ) bahagian aorta toraks yang mewakili dalam setiap kumpulan. (D) Analisis Western blot bagi ekspresi kolagen I dan kolagen III dalam tisu aorta toraks. Data dinyatakan sebagai min ± SD. p < 0.01 berbanding kumpulan Muda; # p < 0.05, ##p < 0.01 lwn. Kumpulan Kenderaan Lama

Rajah 5. Pengaruh Rb1 pada laluan isyarat Gas6/Axl. ( A ) Western blotting dilakukan untuk memeriksa ekspresi protein Gas6 dan Axl. ( B ) qPCR dilakukan untuk memeriksa ekspresi mRNA Gas6 dan Axl. Data dinyatakan sebagai min ± SD. p < 0.05, p < 0.01 lwn. kumpulan Muda; # p < 0.05 lwn. kumpulan þ Kenderaan Lama.

Bukti terkumpul telah mendedahkan bahawa Rb1 dianggap sebagai ubat yang menjanjikan untuk mencegah kerosakan vaskular (Zhou et al. 2017, 2019a, 2019b; Zheng et al. 2020). Kajian terdahulu telah mendedahkan bahawa Rb1 menghalang penuaan sel vaskular dan menghalang kalsifikasi vaskular (Nanao-Hamai et al. 2019; Zhou et al. 2019b; Zheng et al. 2020). Walau bagaimanapun, masih tidak pasti sama ada Rb1 boleh melindungi fungsi arteri daripada penuaan dan mekanisme molekul yang berkaitan. Di sini, kami mendapati bahawa Rb1 mengurangkan dan melambatkan penuaan arteri pada tikus tua, seperti yang ditunjukkan oleh penurunan ekspresi protein yang berkaitan dan vasodilatasi vaskular yang lebih baik, menunjukkan bahawa Rb1 dengan cekap boleh menyekat penuaan yang berlebihan dalam penuaan aorta toraks tikus dan mungkin digunakan sebagai agen yang berkesan untuk merawat atau mencegah kerosakan arteri yang berkaitan dengan usia.

Bukti terdahulu telah menunjukkan pengumpulan keradangan arteri gred rendah kronik dengan usia yang semakin meningkat, yang menyumbang kepada perubahan struktur dan fungsi vaskular yang berkaitan dengan usia (Wang et al. 2014). Kajian tambahan telah menunjukkan bahawa persekitaran mikro yang diperkaya dalam profil keradangan mendorong perubahan fenotip dalam VSMC daripada kontraktil kepada jenis sintetik. Anjakan fenotip ini dicirikan oleh ekspresi dilemahkan protein kontraktil khusus SMC dan rembesan sitokin proinflamasi tambahan, kemokin, protein ECM dan molekul lekatan sel, seperti kolagen, ICAM-1, VCAM-1 , dan PAI-1 (Wang et al. 2011; Lacolley et al. 2018). Selain itu, molekul lekatan menyumbang kepada pembentukan semula arteri akibat keradangan, terutamanya dengan menyusun semula interaksi ECM-VSMC dan mempengaruhi modulasi fenotip VSMC (Intengan et al. 1999). Tambahan pula, kajian telah menunjukkan bahawa Rb1 mempunyai kesan anti-radang dalam vivo dan in vitro (Miao et al. 2017; Zhou et al. 2017). Dalam kajian ini, kami mendapati bahawa rawatan Rb1 boleh mengurangkan tahap ekspresi molekul lekatan sel yang berkaitan dengan proses keradangan pada tikus tua, menunjukkan bahawa Rb1 mungkin bertindak sebagai ubat anti-radang dan melindungi vaskular semasa penuaan.

Selain kerosakan keradangan, pembentukan semula dinding arteri yang dicirikan oleh kalsifikasi dan fibrosis adalah perubahan patofisiologi utama lain dalam pengubahsuaian avaskular berkaitan usia dan menyebabkan kekejangan vaskular yang menyumbang kepada penurunan vasodilatasi (McEniery et al. 2005; Iyemere et al. 2006; Kovacic et al. . 2011). Kajian berskala besar telah menunjukkan bahawa kalsifikasi aterosklerotik koronari meningkat dengan usia (Tesauro et al. 2017). Penyelidikan lain juga menunjukkan kehadiran peningkatan kalsifikasi dengan penuaan di kawasan arteri karotid (Wendorff et al. 2015). Begitu juga, keputusan kami menunjukkan bahawa tikus umur mengembangkan kalsifikasi medial vaskular yang lebih teruk daripada tikus muda. Campur tangan Rb1 menghalang perubahan ini dengan ketara. Keputusan ini mencadangkan bahawa pentadbiran Rb1 mengurangkan tahap kalsifikasi vaskular berkaitan usia dalam vivo. Bukti yang mencukupi telah menunjukkan bahawa kalsifikasi vaskular melibatkan pelbagai proses patobiologi dan bukannya pemendapan kalsium mudah, antaranya VSMC bertukar kepada sel seperti osteoblas memainkan peranan kritikal (Zhou et al. 2019b). Satu batasan kajian kami ialah, walaupun mendedahkan bahawa campur tangan Rb1 secara signifikan menghalang kalsifikasi vaskular dalam penuaan aorta toraks tikus, penanda VSMC kontraktil (seperti aktin dan kalponin otot licin A) dan penanda VSMC osteogenik (seperti faktor transkripsi yang berkaitan dengan runt 2 ) memerlukan penerokaan lanjut.

Selain itu, dalam kajian ini, kami juga memerhatikan penurunan paras kolagen interstisial dan penurunan ekspresi protein berkaitan dalam Rb1-tikus tua yang dirawat berbanding dengan tikus tua yang dirawat kenderaan, yang mencadangkan bahawa Rb1 mungkin mempunyai kesan yang baik terhadap fungsi vaskular. dalam penuaan aorta toraks dengan memperbaiki fibrosis vaskular yang disebabkan oleh usia. Harvey et al. (2016) melaporkan bahawa pengerasan arteri yang disebabkan oleh fibrosis yang berlebihan dan peningkatan pemendapan kolagen boleh mengakibatkan peningkatan nada vasomotor dan perfusi tisu yang diubah. Agen yang melemahkan fibrosis dianggap melindungi daripada penyakit vaskular yang berkaitan dengan usia (Kim et al. 2018).

Ia boleh disimpulkan bahawakerosakan vaskular yang berkaitan dengan usiaadalah proses kompleks yang melibatkan pelbagai perubahan tidak normal, termasuk keradangan, kalsifikasi, dan fibrosis. Lebih penting lagi, kami mendapati bahawa Rb1 dapat menghalang perubahan abnormal yang diketahui dalam aorta toraks tikus tua. Walau bagaimanapun, mekanisme asas masih tidak diketahui. Gas6 dikenal pasti sebagai lig dan untuk keluarga reseptor TAM, terutamanya reseptor kinase tirosin Axl (Rothlin et al. 2015). Kajian terdahulu menunjukkan peranan Gas6/Axl dalam mengawal selia pelbagai fungsi selular (Chen et al. 2019). Satu kajian baru-baru ini mencadangkan bahawa Gas6/Axl memainkan peranan penting dalam kalsifikasi vaskular (Son et al. 2010; Kaesler et al. 2016; Nanao-Hamai et al. 2019) dan mungkin juga terlibat dalam downregulation yang disebabkan oleh rawatan sintesis kolagen dalam VSMC dan tisu jantung yang menua (Chen et al. 2016; 2019). Selain itu, kajian terdahulu mendedahkan bahawa Rb1 mengaktifkan transkripsi Gas6 di tapak ARE khusus di rantau promoter (Son et al. 2010; Nanao-Hamai et al. 2019). Di sini, kami menunjukkan bahawa ekspresi protein Gas6 telah dikurangkan dalam tikus yang semakin tua tetapi telah diterbalikkan oleh rawatan Rb1, yang menunjukkan bahawa Gas6 mungkin mengambil bahagian dalam Rb1-kawal selia gangguan arteri dalam tikus tua. Walau bagaimanapun, keputusan kami menunjukkan bahawa tiada perubahan dalam protein Axl dan ekspresi mRNA, yang tidak konsisten dengan kajian terdahulu (Chen et al. 2019). Keluarga penerima TAM termasuk Tyro3, ​​Axl dan MerTK. Walaupun Gas6 menunjukkan pertalian yang paling kuat untuk Axl antara tiga ahli (Rothlin et al. 2015), Sun et al. (2019) mendapati bahawa pengaktifan Gas6 melemahkan kecederaan radang dan apoptosis pada tikus, tetapi tiada perubahan dalam pengaktifan Axl berlaku di kalangan kumpulan eksperimen. Penyelidikan lain mencadangkan bahawa ekspresi Axl, yang menghalang apoptosis dan dengan itu kalsifikasi vaskular, juga tidak berubah dalam Gas6–/– tikus (Kaesler et al. 2016). Keputusan kami dengan jelas menunjukkan bahawa Rb1 secara khusus melemahkan regulasi Gas6 yang berkaitan dengan usia tetapi tidak mempunyai pengaruh terhadap ekspresi Axl, yang dilaporkan sebagai peristiwa utama yang bertanggungjawab untuk kalsifikasi vaskular dan fibrosis, untuk memperbaiki keradangan vaskular yang berkaitan dengan usia dan vasodilatasi yang bergantung kepada endothelium. . Ekspresi stabil Axl mungkin terhasil daripada kuantiti yang mencukupi sebelum pengaktifan Gas6 atau menunjukkan bahawa Gas6 berfungsi melalui reseptor lain. Siasatan lanjut yang meneroka kesan Rb1 pada TAM lain yang juga boleh diaktifkan oleh Gas6, seperti Tyro3 dan MerTK, diperlukan.

Kesimpulan

Dalam kajian ini, kami mengesahkan bahawa Rb1 menghalang kalsifikasi vaskular dan fibrosis dan mengurangkan ekspresi molekul lekatan selular, yang semuanya kemudiannya memperbaiki vasodilatasi vaskular yang bergantung kepada endothelium yang berkaitan dengan usia sekurang-kurangnya sebahagiannya dengan mengawal ekspresi Gas6 tetapi bukan ekspresi Axl. Dengan penuaan yang tidak terkawal, mencari agen yang boleh mencegah atau merawat kerosakan sel vaskular berkaitan usia adalah sangat penting. Kajian kami menyediakan bukti yang mengesahkan kesan Rb1 pada kecederaan vaskular penarafan amelio dalam tikus penuaan.

Kenyataan pendedahan

Tiada potensi konflik kepentingan dilaporkan oleh pengarang.

Pembiayaan Kerja ini disokong oleh geran daripada Yayasan Sains Semula Jadi Kebangsaan China [81370447], Projek Perancangan Sains dan Teknologi Wilayah Guangdong China [2016A050502014], Dana Pembinaan Disiplin Perubatan Utama Shenzhen [SZXK002] dan Penyelidikan Saintifik Perubatan Yayasan Wilayah Guangdong China [A2019079].

Pernyataan ketersediaan data

Data dan bahan tersedia atas permintaan kepada pengarang yang sepadan.

Sumbangan pengarang

SYK, DHL dan XXQ menyumbang kepada konsep dan reka bentuk karya ini. LW, GYS dan MW menyumbang kepada analisis data. SYK, LW dan JMZ menulis manuskrip. Semua pengarang membaca dan meluluskan versi akhir.

Rujukan

Acosta JC, O'Loghlen A, Banito A, Guijarro MV, Augert A, Raguz S, Fumagalli M, Da Costa M, Brown C, Popov N, et al. 2008. Isyarat chemokine melalui reseptor CXCR2 memperkukuh penuaan. sel. 133(6): 1006–1018.

Brandes RP, Fleming I, Busse R. 2005. Penuaan endothelial. Kardiovasc Res. 66(2):286–294.

Chen FF, Lagu FQ, Chen YQ, Wang ZH, Li YH, Liu MH, Li Y, Lagu M, Zhang W, Zhao J, et al. 2019. Testosteron eksogen mengurangkan fibrosis jantung dan apoptosis melalui laluan Gas6/Axl pada tikus tua. Exp Gerontol. 119:128–137.

Chen YQ, Zhao J, Jin CW, Li YH, Tang MX, Wang ZH, Zhang W, Zhang Y, Li L, Zhong M. 2016. Testosteron melambatkan penuaan sel otot licin vaskular dan menghalang sintesis kolagen melalui laluan isyarat Gas6/Axl . Umur. 38(3):60.

Fridell YW, Villa J, Attar EC, Liu ET. 1998. GAS6 mendorong chemotaxis pengantara Axl sel otot licin vaskular. J Biol Chem. 273(12): 7123–7126.

Gong X, Ma Y, Ruan Y, Fu G, Wu S. 2014. Atorvastatin jangka panjang meningkatkan disfungsi endothelial berkaitan usia dengan memperbaiki tekanan oksidatif dan menormalkan ketidakseimbangan eNOS/iNOS dalam aorta tikus. Exp Gerontol. 52:9–17.

Harvey A, Montezano AC, Lopes RA, Rios F, Touyz RM. 2016. Fibrosis vaskular dalam penuaan dan hipertensi: mekanisme molekul dan implikasi klinikal. Boleh J Cardiol. 32(5):659–668.

Herrera MD, Mingorance C, Rodriguez-Rodriguez R, Alvarez de Sotomayor M. 2010. Disfungsi endothelial dan penuaan: kemas kini. Res Penuaan Wahyu 9(2):142–152.

Hsu JJ, Lu J, Umar S, Lee JT, Kulkarni RP, Ding Y, Chang CC, Hsiai TK, Hokugo A, Gkouveris I, Tetradis S, et al. 2018. Kesan teriparatide pada morfologi kalsifikasi aorta dalam tikus hiperlipidemik berumur. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314(6):H1203–H1213.

Hurtado B, Abasolo N, Munoz X, Garcia N, Benavente Y, Rubio F, Garcia de Frutos P, Krupinski J, Sala N. 2010. Kajian persatuan antara polimorfim dalam GAS6-gen TAM dan aterosklerosis karotid. Thromb Haemost. 104(3):592–598.

Intengan HD, Thibault G, Li JS, Schiffrin EL. 1999. Mekanik arteri rintangan, struktur, dan komponen ekstraselular dalam tikus hipertensi spontan: kesan antagonis reseptor angiotensin dan menukar perencatan enzim. Peredaran. 100(22):2267–2275.

Iyemere VP, Proudfoot D, Weissberg PL, Shanahan CM. 2006. Keplastikan fenotip sel otot licin vaskular dan pengawalseliaan kalsifikasi vaskular. J Intern Med. 260(3):192–210.

Kaesler N, Immendorf S, Ouyang C, Herfs M, Drummen N, Carmeliet P, Vermeer C, Floege J, Kruger T, Schlieper G. 2016. Gas6 protein: peranannya dalam kalsifikasi kardiovaskular. BMC Nephrol. 17(1):52. Kim EN, Kim MY, Lim JH, Kim Y, Shin SJ, Park CW, Kim YS, Chang YS, Yoon HE, Choi BS. 2018. Kesan perlindungan resveratrol pada penuaan vaskular dengan modulasi sistem renin-angiotensin. Aterosklerosis. 270: 123–131. Korshunov VA, Mohan AM, Georger MA, Berk BC. 2006. Axl, reseptor tyrosine kinase, mengantara pembentukan semula vaskular yang disebabkan oleh aliran. Circ Res. 98(11):1446–1452.