Kajian Untuk Cistanche Profil Kimia Dan Metabolit

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Zhe Li, Lkhaasuren Ryenchindorj, Bonan Liu, Ji Shi, Chao Zhang, Yue Hua, Pengpeng Liu, Guoshun Shan & Tianzhu Jia

Abstrak

Latar belakang: Pemprosesan materia medica Cina ialah teknik farmaseutikal yang terbilang dan unik dalam Perubatan Tradisional Cina (TCM) yang digunakan untuk mengurangkan kesan sampingan, dan meningkatkan atau bahkan mengubah keberkesanan terapeutik herba mentah. Perubahan dalam komponen penting yang disebabkan oleh prosedur pemprosesan yang dioptimumkan adalah bertanggungjawab terutamanya untuk peningkatan keberkesanan tumbuhan ubatan. Kesan mencergaskan buah pinggang-yang Cistancha deserticola (C. deserticola) kukus wain beras adalah lebih kuat daripada C. deserticola (CD) mentah. Kaedah: Analisis perbandingan telah dijalankan menggunakan UPLC-Q-TOF-MSE dengan platform informatik UNIFI untuk menentukan pengaruh pemprosesan. Kajian in vitro dilakukan untuk pencirian juzuk sertametabolitdalam vivo. Thekimiakomponen ditentukan dalam CD dan produk yang diproses. Analisis statistik multivariate telah dijalankan untuk menilai variasi antara mereka manakala OPLS-DA digunakan untuk perbandingan berpasangan. Keputusan: Keputusan kajian ini mendedahkan banyak variasi dalam glikosida phenylethanoid (PhGs) dan iridoid selepas diproses. Sebanyak 97 sebatian telah dikesan dalam ekstrak CD dan produk yang diproses. PhGs yang mempunyai kumpulan 4'-O-caffeoyl dalam bahagian 8-O- -D-glucopyranosyl, seperti acteoside, cistanoside C, campneoside II, osmanthuside berkurangan selepas diproses, manakala PhGs dengan 6'-O- kumpulan caffeoyl dalam bahagian 8-O- -D-glucopyranosyl, seperti isoacetoside, isocistanoside C, isocampneoside I, isomartynoside meningkat, terutamanya dalam kumpulan CD-NP. Keamatan echinacoside dan cistanoside B yang strukturnya mempunyai 6'-O- -D-glucopyranosyl moiety juga meningkat. Dalam kajian in vivo, 10 komponen prototaip dan 44metabolitdikesan dalam plasma tikus, najis, dan air kencing. Keputusan yang diperolehi mendedahkan bahawa pemprosesan membawa kepada variasi yang besar dalamkimiakonstituen CD dan menjejaskan pelupusan sebatian dalam vivo, dan proses metabolik fasa II adalah lata utama setiap sebatian, dan kebanyakanmetabolitdikaitkan dengan echinacoside atau acteoside. Kesimpulan: Ini adalah penyelidikan perbandingan global pertama CD mentah dan diproses. Penemuan ini menambah pemahaman kami tentang kesan pemprosesan CD dan memberikan data penting untuk penyiasatan keberkesanan masa hadapan.

Kajian untuk cistanche profil kimia dan metabolit

pengenalan

Pemprosesan materia medica Cina (CMM) telah menunjukkan kebolehgunaan yang ketara dalam amalan klinikal Perubatan Tradisional Cina (TCM), dan ia telah dianggap sebagai rawatan yang berdaya maju selama beberapa abad. Ini adalah teknologi farmaseutikal unik yang telah diperoleh daripada teori TCM. Selepas pemprosesan, perbezaan ketara dalam penampilan,kimiajuzuk, ciri, dan kepentingan perubatan semua jenis TCM telah dikenal pasti, membawa kepada andaian bahawa pemprosesan boleh meningkatkan keberkesanan atau mengurangkan kesan toksik TCM.

Selama ratusan tahun,Cistanche deserticola(Roucongrong dalam bahasa Cina, CD) biasanya digunakan dalam amalan klinikal TCM untuk menambah fungsi buah pinggang. Ia juga membantu dalam melembapkan usus yang membawa kepada kelonggaran usus [1].Cistanchepertama kali direkodkan di ShenNongBencaoJing. Ia biasanya ditemui di habitat gersang dan separa gersang di seluruh Eurasia dan Afrika Utara, termasuk Iran, China, India, dan Mongolia [2]. Pemprosesan CD telah dijalankan dengan mengukus dengan wain beras di bawah tekanan biasa, yang merupakan kaedah penyediaan yang didokumenkan dalam farmakope Cina (Jiucongrong dalam bahasa Cina, selepas ini dipanggil "CD-NP"). Dan mengukus CD dengan wain beras di bawah tekanan tinggi adalah kaedah penyediaan yang lebih berkesan (selepas ini dipanggil "CD-HP") [3, 4]. Beberapa kajian telah mendedahkan bahawa kesan farmakologi CD adalah berbeza daripada produk yang diproses [5]. CD boleh menguatkan buah pinggang-yang dan melegakan usus, manakala selepas dikukus dengan wain beras, kesan menambah semula buah pinggang-yang akan diperkukuh. Dalam kajian awal kami, didapati bahawa CD-NP boleh meningkatkan tonifikasi buah pinggang dan menyokong yang, dan melegakan kesan melembapkan usus dan membuang air besar [6,7,8]. Dalam amalan klinikal, produk yang diproses adalah bentuk yang paling biasa digunakan.

Sehingga kini, beberapa kajian telah menganalisiskimiakomponen CD, diikuti dengan pengasingan dan pengenalpastian lebih daripada 100 sebatian [9,10,11], seperti phenylethanoid glycosides (PhGs), iridoid, lignan, dan oligosakarida sebagai juzuk kimia utamanya. Ia juga telah dilaporkan bahawa terdapat banyak aktiviti farmakologi PhG termasuk imunomodulator, neuroprotektif, hepatoprotektif, anti-radang, anti-oksidatif, dan lain-lain.[12,13,14]. Iridoid mempunyai aktiviti anti-radang [15, 16]. Ia juga telah didedahkan oleh kajian terdahulu bahawa beberapa komponen kimia menunjukkan variasi semasa pemprosesan [17,18,19,20]. Berdasarkan laporan ini, boleh diandaikan bahawa pemprosesan pasca, variasi dalamkimiakomposisi membawa kepada pelbagai kesan farmakologi, yang perlu diterokai lebih lanjut.

Dalam kajian semasa, kaedah yang sensitif dan berkesan iaitu, kromatografi cecair berprestasi ultra tinggi ditambah dengan TOF-MSE (UPLC-Q-TOF-MSE) telah dilakukan untuk analisis perbandingan, dan kajian in-vitro telah dilakukan untuk menganalisis ekstrak secara kualitatif. CD, CD-NP, dan CD-HP untuk menjelaskan profil kimia mereka. Umumnya, eksogenbahan kimiadengan pendedahan yang tinggi dalam organ sasaran dianggap sebagai komponen yang berkesan. Oleh itu, dalam tikus, CD dan produk yang diproses masing-masing diberikan secara lisan, diikuti dengan pencirian mereka. Kajian sedia ada mendedahkan kajian perbandingan (kedua-dua in vitro dan in vivo) CD mentah dan diproses buat kali pertama. Keputusan yang diperoleh akan memperluaskan pemahaman kami mengenai kesan pemprosesan CD, yang mungkin membantu untuk kajian lanjut.

cistanche profil kimia dan metabolit

Bahan dan kaedah

Bahan

Sebatian standard ajugol (180120) dan 2'-actylacetoside (M0601AS) telah disediakan oleh Chendu Pure Chem-Standard Co., Ltd (Chengdu, China). Cistanoside F (MESTI-17022620), echinacoside (D1105AS), cistanoside A (M0906AS) dan isoacteoside (M0106AS) telah disediakan oleh syarikat Must (Sichuan China); acteoside (O0618AS), salidroside (J0526AS), catalpol (S0728AS), geniposide (A0407AS), dan asid geniposidic (MB6001-S) telah diperoleh daripada Dalian Meilun Bio.Co., Ltd (Dalian, China). 8-asid epideoksiloganik (B31123) diperoleh daripada Shanghai Yuanye Biological Technology Co., Ltd, China. Metanol dan asetonitril adalah gred MS dan diperoleh daripada Merck KGaA, Darmstadt, Jerman. Asid metanoik (CH2O2) gred HPLC disediakan oleh Merck KGaA (Darmstadt, Jerman). Air, yang digunakan dalam kajian sedia ada telah diproses melalui sistem Milli-Q (18.2 MΩ, Millipore, Ma, Amerika Syarikat). Wain beras disediakan oleh Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Zhejiang, China).

Cistanch deserticola dikumpul daripada Neimenggu wangyedicistancheCo. Ltd. Sampel telah dikenal pasti oleh Prof. Yanjun Zhai (sekolah farmasi, Liaoning University of TCM). Spesimen telah diserahkan kepada Universiti Perubatan Tradisional Cina Liaoning.

Haiwan

Tikus jantan Sprague–Dawley (gred SPF) dengan 180–220 g jumlah berat badan disediakan oleh Liaoning Changsheng biotechnology Co. Ltd. (Pusat Sumber Haiwan Makmal Wilayah Liaoning, nombor lesen: SCXK-2015–0001). Tikus-tikus ini ditempatkan di dalam bilik pembiakan dengan suhu dan kelembapan yang diselenggara dengan baik iaitu, 20–26 darjah, 50–70 peratus selama satu minggu. Tikus diberi makan dengan makanan makmal biasa dan air sebelum eksperimen. Haiwan berpuasa semalaman, bagaimanapun, air ad libitum disediakan sebelum eksperimen. Tikus-tikus itu disembelih dengan 10 peratus anestetik kloral hidrat. Jawatankuasa Etika Haiwan Institusi Hospital Wilayah Perubatan Cina Liaoning meluluskan semua protokol percubaan (2019.3.25, 2019015).

Penyediaan ekstrak CD, CD-NP, dan CD-HP

CD-NP, CD-HP diproses dari kumpulan Cistanch deserticola yang sama. Untuk menyediakan CD-NP, kepingan CD kering (tebal 5 mm, 100 g) dilembapkan dengan wain beras (30 mL) dan dikukus pada suhu 100 darjah selama 16 jam, diikuti dengan pengeringan pada suhu 55 darjah melalui ketuhar pengeringan. Manakala CD-HP disediakan melalui penyusupan kepingan CD kering (tebal 5 mm, 100 g) dengan wain beras (30 mL), diikuti dengan mengukus pada tekanan atmosfera 1.25 selama 4 jam. dan kemudian dikeringkan dalam ketuhar pengeringan pada suhu 55 darjah .

Dalam kelalang penyukat 100 mL, satu gram serbuk diayak melalui ayak#4, diikuti dengan menambah 50 peratus metanol (50 mL) dan kemudian ditutup rapat dan dicampur. Campuran ini ditimbang, diikuti dengan setengah jam. maserasi. Selepas pemerahan, campuran telah ultrasonik (kuasa 250 W, frekuensi 35 kHz) selama 40 minit, diikuti dengan penyejukan, dan ditimbang semula. Kehilangan berat telah diisi semula dengan 50 peratus metanol, dicampur dengan betul, dan dibiarkan berdiri, diikuti dengan menapis supernatan dan kemudian menggunakan turasan yang diperoleh sebagai larutan ujian.

Analisis MSE bagi komponen aktif

Penyediaan bahan standard: tubuloside-A (3.02 mg), echinacoside (3.00 mg), 2'-acetylacteoside (2.34 mg), acteoside (2.45 mg), isoacteoside (0.61 mg), cistanoside-F (2.14 mg), salidroside (3.39 mg), geniposide (2.84 mg), ajugol (1.58 mg), catalpol (2.39 mg), asid geniposidic (2.56 mg) dan 8-asid epideoxyloganic (2.34 mg) telah ditambah ke dalam kelalang volumetrik 10 mL, menambah isipadu tetap metanol mengikut skala, dikonfigurasikan ke dalam larutan rujukan kepekatan yang sepadan. Setiap 100 μL telah dikonfigurasikan menjadi penyelesaian rujukan campuran.

Keadaan analisis MS: Nilai jisim telah diperbetulkan sebelum eksperimen, dan mod ion negatif digunakan. Julat jisim ialah 50–1200 Da, dan sampel disuntik melalui pam suntikan aliran. Halaju kon ialah 100 L/jam, kadar aliran terlarut ditetapkan pada 800 L/j. Voltan kapilari dan kon telah ditetapkan pada 2500 dan 40 V, dengan sewajarnya. Suhu sumber ion dan gas terlarut ialah 100 darjah dan 400 darjah masing-masing, dan kekerapan pemerolehan isyarat ialah 0.5 S−1.

cistanche profil kimia dan metabolit

Analisis UPLC-Q-TOF-MSE bagi ekstrak CD

Penilaian kromatografi telah dijalankan dalam sistem UPLC ACQUITY I-CLASS (Waters Corporation, Milford, MA, USA). Termasuk lajur ACQUITY UPLC® BEH C18 (50 × 2.1 mm, 1.7 μm, Perairan). Fasa bergerak terdiri daripada air yang mempunyai 0.1 peratus asid formik (A) dan asetonitril mengandungi 0.1 peratus asid formik (B), keadaan elusi adalah seperti berikut: 97 peratus hingga 85 peratus A (0–5 min), 85 peratus hingga 75 peratus A (5–15 min), 75 peratus hingga 65 peratus A (15–16 min), 65 peratus hingga 55 peratus A (16–18 min) . Kadar alir ialah 0.3 mL min−1, manakala suhu bilik dan lajur pensampel automatik ialah 30 darjah dan 8 darjah secara berasingan. Isipadu suntikan ialah 1.0 μL.

Penilaian spektrometri jisim telah dijalankan melalui Waters XEVO G{{0}}XS QTOF MS (Waters Corporation, Milford, MA, USA), yang terdiri daripada sumber ESI. Kadar aliran gas nitrogen ditetapkan pada 800 L·jam−1 dengan suhu 400 darjah, suhu punca ditetapkan pada 100 darjah, dan gas kon ditetapkan pada 50 L h−1. Voltan kon dan kapilari telah dilaraskan pada 40 dan 2000 V, dengan sewajarnya. Tenaga perlanggaran tanjakan digunakan dalam julat 20–30 V. Data berpusat bagi semua sampel diperoleh dari 50 hingga 1200 Da, dengan 5-masa imbasan 0.5 s dalam masa analisis 10 minit . LockSpray TM telah digunakan untuk pengesahan ketepatan jisim. [M–H]− ion leucine enkephalin (200 pg·μL−1 kadar aliran infusi 10 μL min−1) pada m/z 554.2615 digunakan sebagai jisim kunci. Perisian MassLynx V4.1 (Waters Co., Milford, USA) digunakan untuk jisim yang tepat, komposisi ion prekursor dan pengiraan ion serpihan.

Analisis data dalam platform Masslynx

Tambahan pula, perpustakaan dalaman yang terdiri daripada nama sebatian, strukturnya, dan formula molekul (dalam mol.) telah ditubuhkan berdasarkan literatur. Semua sebatian telah dicatatkan dalam templat khas, dibuat dalam Excel. Selain itu, fail mol (Chemdraw Ultra 8.0, Cambridge soft, USA) dan fail Excel semua struktur kompaun individu turut disimpan pada PC tempatan. Helaian Excel yang ditubuhkan yang mempunyai data penting telah diimport terus ke perpustakaan saintifik di UNIFI.

UNIFI 1.8.2, Waters, Manchester, UK telah digunakan untuk penilaian ciri struktur, terutamanya untuk serpihan ciri dan pemecahan MS. Kawasan puncak minimum 500 telah ditetapkan untuk pengesanan puncak 2D. Semasa puncak 3D mendedahkan, keamatan puncak tenaga rendah lebih daripada 300 kiraan dan keamatan puncak tenaga tinggi lebih daripada 80 kiraan telah dipilih. Ralat jisim didapati sehingga ± 10 ppm untuk sebatian yang diketahui, dan toleransi masa pengekalan ditetapkan dalam julat ± 0.1 min. Kami memilih bahan tambah negatif yang mengandungi –H, ditambah HCOOH. Pemprosesan data mentah yang diperoleh daripada MS telah dijalankan melalui perisian UNIFI yang diperkemas untuk menentukan dengan pantaskimiakomponen yang memenuhi piawaian dengan pangkalan data yang dibina sendiri dan Perpustakaan Perubatan Tradisional dalaman.

Seterusnya, untuk mengesahkankimiastruktur setiap sebatian sasaran, isomer dibezakan oleh corak pemecahan MS ciri mereka yang didedahkan dalam kajian yang dilaporkan, dan dengan membandingkan masa pengekalan piawaian rujukan.

Analisis Metabolomik berdasarkan analisis statistik multivariate

Sebelum memproses data mentah, parameter telah ditetapkan, seperti jisim antara 150 hingga 1200 Da, julat masa pengekalan (0 hingga 20 min), keamatan ambang ( 2000 kiraan), toleransi jisim iaitu, 5 mDa, manakala tetingkap masa jisim dan pengekalan ialah 0.20 min dan 0.05 Da, masing-masing. Dalam senarai pangkalan data yang berikutnya, pengecam ion ialah pasangan RT-m/z berkenaan dengan masa elusinya. Nilai yang sama untuk RT dan m/z dalam pelbagai kelompok sampel dianggap sebagai sebatian yang sama.

Analisis statistik multivariate telah dijalankan untuk menilai biomarker berkesan yang banyak menyumbang kepada variasi di kalangan kumpulan yang berbeza. Semasa analisis, analisis komponen utama (PCA) digunakan untuk menunjukkan perbezaan maksimum dan pengecaman corak untuk mendapatkan gambaran keseluruhan dan klasifikasi. OPLS-DA ialah alat pemodelan yang menyediakan visualisasi pemuatan komponen ramalan OPLS-DA untuk membantu penilaian model. Kepentingan boleh ubah untuk unjuran (VIP) telah digunakan untuk menilai penilaian pelbagai komponen, danmetabolitwith VIP values >1.0 dan nilai-P< 0.05 were="" regarded="" as="" effective="" markers.="" furthermore,="" a="" permutation="" test="" was="" conducted="" for="" providing="" reference="" distributions="" for="" the="" r2/q2="" values="" that="" could="" show="" the="" statistical="">

cistanche profil kimia dan metabolit

Eksperimen haiwan

Tikus dikategorikan secara rawak kepada empat kumpulan (n = 6 bagi setiap kumpulan), diikuti dengan pemberian oral pelbagai ekstrak: (1) Kumpulan kawalan kosong: tikus diberi garam biasa (2 mL/100 g); (2) Kumpulan CD: tikus diberi ekstrak CD (2 mL/100 g); (3) Kumpulan CD-NP: tikus diberi ekstrak CD-NP (2 mL/100 g); (4) Kumpulan CD-HP: tikus diberi ekstrak CD-HP (2 mL/100 g). Pengkategorian selanjutnya semua kumpulan telah dijalankan kepada tiga sub-kumpulan untuk plasma, air kencing, dan najis, dengan sewajarnya. Dua jam kemudian, setiap tikus diberikan secara lisan dengan jumlah ekstrak yang sama dan sama.

Selepas pentadbiran, pengumpulan sampel darah telah dijalankan pada 1.0 h, 2.0 h, dan 4.0 h dalam tiub politena 1.5 mL berheparin (daripada vena orbital) , diikuti dengan sentrifugasi (pada 4500 rpm) semua sampel selama 15 minit.

Untuk sampel air kencing dan najis, tikus telah ditahan dalam sangkar metabolisme, dan kemudian pengumpulan sampel air kencing dan najis dijalankan selama 24 jam selepas pentadbiran. Sentrifugasi sampel air kencing dilakukan pada 4500 rpm selama 15 minit, manakala sampel najis dikeringkan di bawah naungan, dikisar menjadi serbuk, kemudian 0.2 g diambil, dan dimasukkan ke dalam 0.5 mL garam. larutan, ultrabunyi selama 5 minit dan disentrifugasi pada 12,000 rpm selama 15 minit. Semua sampel bio disimpan pada -80 darjah sehingga analisis.

Penyediaan sampel biologi

Penambahan sampel plasma, air kencing, dan najis dilakukan dengan 3 isipadu metanol, diikuti dengan vorteks selama 3 minit. Seterusnya, sentrifugasi (pada 12,000 rpm) campuran dijalankan selama 10 minit, diikuti dengan memindahkan supernatan ke dalam tiub EP, dan kemudian dikeringkan dengan nitrogen pada 37 darjah . Tambahan pula, penambahan 200 μL larutan HCN–H2O (50 peratus) telah dijalankan. Kemudian, pusaran telah digunakan untuk mencampurkan (1 min), diikuti dengan sentrifugasi (pada 12,000 rpm) selama 5 minit. Supernatan (5 μL) sampel yang dirawat telah disuntik ke dalam sistem UPLC-Q-TOF-MSE.

Keadaan kromatografi cecair dan spektrometri jisim

Analisis untukmetabolitjuga dilakukan oleh instrumen UPLC Waters melalui antara muka ESI. Pengasingan telah dijalankan menggunakan lajur Acquity UPLC HSS T3 (100 mm × 2.1 mm, 1.8 µm), fasa mudah alih ialah 0.1 peratus asid formik (A): Acetonitrile (B), keadaan elusi kecerunan ialah 0–3 min (99.8 peratus → 98 peratus A), 3–5 min (98 peratus → 95 peratus A), 5–8 min (95 peratus → 90 peratus A), 8 –12 min (90 peratus → 85 peratus A), 12–17 min (85 peratus → 70 peratus A), 17–22 min (70 peratus → 60 peratus A), 22–23 min (60 peratus → 58 peratus A) , 23–25 min (58 peratus A), 25–32 min (58 peratus → 45 peratus A), dan 32–37 min (45 peratus → 35 peratus A), 0.4 mL min−1 ialah kadar alir. Suhu untuk lajur dan bilik sampel ditetapkan pada 40 darjah dan 8 darjah masing-masing. Keadaan spektrometri jisim yang dinyatakan di atas telah digunakan.

Strategi untuk analisis sistematik metabolit dalam sampel bio

Perisian UNIFI (1.8.2) digunakan untuk pemprosesan data. Fungsi Binary Compare digunakan untuk mengenal pasti metabolit yang berkesan. Metabolit yang dinilai tidak wujud dalam sampel kawalan yang setara atau wujud pada keamatan ion rendah. Ambang keamatan relatif ditetapkan pada 3 atau 5, danmetabolityang memenuhi kriteria yang digariskan boleh dinilai. Biasa dan boleh diramalmetabolitkemudiannya ditentukan oleh EIC. Untuk mencari metabolit dua fasa, fungsi NLF telah digunakan. Sebagai contoh, dalam perisian UNIFI, parameter boleh ditetapkan pada 176.0321 untuk mencari kemungkinan konjugat asid glukuronik. Selepas pemprosesan, kerugian neutral boleh ditetapkan dalam kaedah atau dikenal pasti. MassFragment digunakan untuk menentukan atau mencirikan pengesananmetabolit', fungsi tafsiran spektrum UNIFI ialah fungsi utama yang digunakan untuk menganalisis pemecahan sekunder komponen induk. Fungsi ini boleh digunakan untuk pengesahan pantas laluan pemecahan sama ada munasabah.

cistanche profil kimia dan metabolit

Keputusan

Peraturan pemecahan jisim glikosida dan iridoid fenilethanoid

Glikosida phenylethanoid adalah yang utamakimiakonstituen CD. Penyelesaian piawai isoacteoside, cistanoside F, tubuloside A, echinacoside, acteoside, dan 2'-actylacteoside telah diambil, diikuti dengan menyediakan tahap tenaga perlanggaran yang berbeza (Jadual 1), dan kemudian peta MS2 yang sepadan diperolehi (Rajah 1) .

Rajah 1 Spektrogram Jisim dan laluan belahan glikosida fenilethanoid. A Isoacteoside; B cistanosideF; C tubulosideA; D echinacteoside; E acteoside; F 2'-actylacteoside

Jadual 1 Tenaga perlanggaran untuk bahan piawai

Analisis spektrometri jisim mendedahkan bahawa glikosida phenylethanoid mempunyai corak pemecahan spektrum jisim yang sama, laluan belahan dalam mod ion negatif terutamanya termasuk: (1) Pembelahan ikatan ester: kehilangan kumpulan kafeoil neutral (C9H3O6, 162.03) dan kumpulan asetil neutral (C2H2O). , 42.00); (2) Pembelahan glikosidik: kehilangan residu rhamnose neutral (C6H10O4, 146.05) dan residu glukosa neutral (C6H10O5, 162.05). Daripada spektrometri jisim resolusi tinggi, caffeoyl (162.03) dan residu glukosa (162.05) boleh dibezakan.

Iridoids ajugol, catalpol, asid geniposidic, geniposide, dan 8-penyelesaian piawai asid epideoksiloganik telah diambil, diikuti dengan menyediakan tenaga perlanggaran yang berbeza, dan peta MS2 yang sepadan diperolehi (Rajah 2).

Rajah 2 Spektrogram Jisim dan laluan belahan glikosida iridoid. A Ajugol, B catalpol, C asid geniposidic, D geniposide, E 8-asid epideoksilogan

Glikosida iridoid mempunyai corak pemecahan spektrum jisim yang sama, laluan belahan dalam mod ion negatif terutamanya termasuk (1) Pembelahan Glikosidik: Kehilangan sisa glukosa neutral (C6H10O5, 162.05); (2) Kehilangan CO2 neutral (43.99) dan H2O (18.01).

Pengenalpastian sebatian dalam ekstrak CD, CD-NP, dan CD-HP

Analisis UPLC-QTOF-MS E

Pengoptimuman keadaan kromatografi telah dijalankan. Seterusnya, sebatian daripadaCistancheHerba dinilai dalam kedua-dua mod ion negatif dan positif dengan CE tinggi dan rendah. Keputusan yang diperolehi mendedahkan bahawa keserasian mod negatif adalah lebih tinggi berbanding mod positif untuk sebatian ini. Rajah 3 menunjukkan kromatogram ion puncak asas (BPI) MS yang dikesan dengan puncak bernombor. Keamatan setiap ion yang dikesan dalam analisis UPLC-Q-TOF-MSE telah dinormalkan berkenaan dengan keseluruhan kiraan ion untuk penjanaan matriks data yang terdiri daripada nilai m/z, kawasan puncak ternormal dan masa pengekalan.

Rajah 3 Keamatan puncak asas (BPI) bagi sampel. 1.CD, 2. CD-NP, 3. CD-HP

Penilaian komponen daripada CD dan produk yang diproses pada platform UNIFI

Sebanyak 97 sebatian telah dikenal pasti dengan mod -SEM (n = 6) daripada CD dan produk diprosesnya (Jadual 2), termasuk glikosida phenylethanoid (PhGs), iridoid, lignan dan oligosakarida. Komponen 95, 91, dan 94 dikesan dalam CD, CD-NP, dan CD-HP, dengan sewajarnya. Antaranya, 64 adalah feniletanoid, 13 adalah iridoid, dan 20 jenis sebatian lain telah ditentukan. Terdapat persamaan dalamkimiakomposisi CD dan produk yang diproses, bagaimanapun, kuantiti komponen didapati berbeza antara CD dan produk yang diproses.

Jadual 2 Penilaian Sebatian yang diperoleh daripada CD dan produk yang diproses oleh UPLC-Q-TOF-MSE

Variasi dalamkimiakomponen produk yang diproses

Perisian Simca-P 13.0 digunakan untuk menganalisis matriks data berbilang variasi. Sebelum PCA, semua pembolehubah adalah berpusat min dan berskala pareto, diikuti dengan pengenalpastian pembolehubah diskriminasi yang berpotensi. Dalam plot skor PCA, setiap titik menunjukkan sampel individu. Sampel yang menunjukkan persamaan dalam merekakimiakomponen bertaburan bersebelahan antara satu sama lain, manakala komponen yang menunjukkan variasi dalam komponennya dibahagikan. Seperti yang dilihat dalam PCA (Rajah 4), kumpulan CD-HP diasingkan daripada kumpulan CD dan CD-NP.

Rajah 4 PCA CD dan produk diprosesnya yang berbeza

To distinguish CD from CD-HP and CD-NP, OPLS-DA, permutation test, S-plot, and VIP value were developed. (Figs. 5, 6, 7) The obtained results revealed that many components were key characteristic components of each product. The screening condition was the VIP >1 dan P< 0.05. from="" the="" date="" of="" the="" s-plot,="" the="" characteristic="" components="" were="" evaluated,="" which="" were="" commonly="" existing="" in="" the="" three="">

Rajah 5 OPLS-DA/ujian pilih atur/S-plot/peta haba yang menunjukkan keamatan biomarker berpotensi antara Kompaun CD-NP dan CD-HP 9, 10, 14, 32, 59, 60, 68, 70, 74, 75, 80, 81, 82, dan 84 ialah komponen pembezaan CD-NP, manakala sebatian 11, 15, 16, 45, 48, 66, dan 72 ialah komponen pembezaan CD-HP.

Rajah 6 OPLS-DA /ujian pilihatur/ S-plot/peta haba yang menunjukkan keamatan biomarker berkesan antara CD dan CD-NP Sebatian 13, 15, 16, 37, 49, 63, 66, 72, 74, 75, dan 85 ialah komponen pembezaan CD, manakala sebatian 10, 11, 32, 59, 60, 68, 70, 71, 80, 81, dan 82 ialah komponen pembezaan CD-NP.

Rajah 7 Ujian OPLS-DA/permutasi/S-plot/peta haba mendedahkan keamatan biomarker berkesan antara Sebatian CD dan CD-HP 9, 14, 16, 59, 63, 66, 72, 74, 75, 80, 82 , 84, 85, dan 94 ialah komponen pembezaan CD, dan 11, 15, 45, 49, 50, 60, dan 71 ialah komponen pembezaan CD-HP.

Daripada Rajah 8, kami mendapati keamatan acteoside (54), cistanoside C (74), campneoside II (43), osmanthuside (75), dan 2'-actylacteoside (80) mempunyai kumpulan 4'-O-caffeoyl dalam bahagian 8-O- -D-glucopyranosyl (lihat Rajah 9) berkurangan selepas diproses oleh wain beras, manakala keamatan isoacetoside (60), isocistanoside (71), isocampneoside I (69) , isomartynoside (86) yang mempunyai kumpulan 6'-O-caffeoyl (lihat Rajah 9) meningkat, terutamanya untuk kumpulan CD-NP. Walaupun tubuloside B (72) mempunyai kumpulan 6'-O-caffeoyl, sama seperti isoacteoside, keamatan berkurangan kerana kumpulan 2'-actylnya. Keamatan echinacoside (38) dan cistanoside B yang mempunyai kumpulan 6'-O- -D-glucopyranosyl moiety meningkat, tetapi keamatan tubuloside A (55) menurun juga kerana kumpulan 2'-actylnya.

Rajah 8 Intensiti terutamanya PhG dalam CD dan produk yang diproses

Rajah 9kimiaStruktur terutamanya PhG dalam CD dan produk diprosesnya.

Pasukan penyelidik kami juga mengkaji kestabilan haba acteoside dan isoacteoside, dan mendapati bahawa acteoside tidak stabil dalam air, metanol dan larutan wain beras kuning, dan boleh ditukar kepada isoacteoside sebahagiannya dalam keadaan pemanasan. Tetapi kestabilan isoacteoside adalah lebih baik, terutamanya dalam larutan wain beras kuning. Rajah 10 menunjukkan kemungkinan perubahan PhG dalam CD semasa pemprosesan:

Rajah 10 Tindak balas yang mungkin untuk PhG semasa pemprosesan

Pengenalpastian metabolit dalam tikus

Daripada data spektrometri jisim resolusi tinggi, berat molekul yang tepat dan komposisi unsur untukmetabolitdan sebatian protomolekul dianalisis dan dibandingkan. Oleh kerana jenis sebatian yang sama dalam TCM menunjukkan persamaan dalam pengubahsuaian metabolik, korelasi juzuk fitokimia secara in vitro boleh meluas kepada metabolit mereka dalam vivo. Sementara itu, berdasarkan laluan biotransformasi konvensional, perubahan berat molekul yang munasabah telah disimpulkan. Akhirnya, yangmetabolittelah dikenalpasti dengan menganalisis spektrum jisim MSE bagi metabolit dan laluan pemecahan proto-kompaun dalam spektrum jisim [21, 22]. Berbanding dengan sampel kosong, komponennya dikenal pasti secara in vivo berdasarkan maklumat yang diberikan oleh spektrum jisim kromatogram, kemungkinan tindak balas metabolik, ciri struktur sebatian, dan peraturan pemecahan spektrum jisimnya. Lihat Jadual 3.

Jadual 3 DikenalpastiMetabolitdalam plasma, air kencing dan najis ekstrak akueus dalam CD dan produk yang diproses

Pengenalpastian metabolit berkaitan phenylethanol glycosides

Platform UNIFI digunakan untuk pemprosesan. Rajah 11 menunjukkan kromatografi TIC air kencing, najis dan plasma untuk CD dan produk yang diproses. Berbanding dengan sampel kosong, sejumlah 54 metabolit dikenal pasti dalam tikus, termasuk 10 komponen prototaip dan 44metabolit, di mana 24, 49, dan 6 berada dalam najis, air kencing, dan plasma, sewajarnya.

Rajah 11 Kromatografi TIC. Sampel air kencing dalam kumpulan BC; B Sampel air kencing dalam kumpulan CD; C Sampel air kencing dalam kumpulan CD-NP; D Sampel air kencing dalam kumpulan CD-HP; E Sampel najis dalam kumpulan BC; F Sampel najis dalam kumpulan CD; Sampel najis G dalam kumpulan CD-NP; H Sampel najis dalam kumpulan CD-HP; I Sampel plasma dalam kumpulan BC; J Sampel plasma dalam kumpulan CD; Sampel K Plasma dalam kumpulan CD-NP; Sampel M Plasma dalam kumpulan CD-HP

Berdasarkan jisim yang tepat, lata pemecahan, dan kehilangan neutral yang boleh diramal oleh biotransformasi, sejumlah 35 glikosida phenylethanoid yang berkaitanmetabolittelah dinilai secara tentatif. Metabolit glikosida fenilethanoid yang berkaitan mempunyai corak pemecahan spektrum jisim yang serupa, seperti serpihan dekaffeoil biasa m/z 461.1605, kemudian dihidrolisiskan lagi oleh ikatan glikosidik dan ester dalam vivo, dan dimetabolismekan kepada hidroksitirosol (HT) (m/ z 153.0504, C8H10O3, 4.73 min) dan asid kafeik (CA)(m/z 179.0389, C9H7O4, 0.77 min), lihat Rajah 12A.

M11 menunjukkan [M–H]− pada m/z 153.0504 dengan formula iaitu, C8H10O3, dan dikenal pasti sebagai HT. M16 membentangkan [M-H] - pada m / z 329.0851, iaitu 176 Da meningkat daripada HT, mendedahkan bahawa ia mungkin metabolit glukuronidasi HT. [M–H]− M26 berada pada m/z 343.1037, 14 Da lebih tinggi daripada HT-glukuronida. Oleh itu, M26 dikenal pasti sebagai glukuronida HT-metilasi. M17 dikenal pasti sebagai HT-sulfat berdasarkan [M–H] - pada m/z 233.0112, 80 Da ke atas HT, yang boleh dimetilasi lagi, kemudian menghasilkan M22, yang menunjukkan m/z 247.0278, menunjukkan bahawa ia adalah HT-metilasi sulfatmetabolit. M7 (m/z 167.0335) dan M5 (m/z 167.0762) masing-masing dianggap sebagai produk pengoksidaan dan HT termetilasi (Rajah 12B).

M1 menunjukkan [M–H]− pada m/z 179.0389, formula molekul yang dijelaskan ialah C9H7O4 dan dikenal pasti sebagai asid kafeik (CA). M25 mendedahkan [M–H]− pada m/z 355.0704, iaitu 176 Da dinaikkan daripada CA, menunjukkan bahawa ia mungkin glukuronidasimetabolitdaripada CA. M27 mempunyai m/z 258.994, iaitu 80 Da lebih tinggi daripada CA, jadi kami menjelaskannya sebagai CA sulfat, dan ia boleh menghasilkan M35 (m/z 273.0064). Memandangkan M4 memberikan [M–H] - pada m/z 193.0524, 14 Da lebih tinggi daripada CA, ia dikenal pasti sebagai metabolit metilasi CA. M39 ialah dehidroksilasi CAmetabolit, dengan m/z 163.04, dan ia boleh disulfatkan kepada M32 (m/z 242.9951).

M33 (m/z 181.0491, C9H10O4, 9.06 min) ialah hasil pengurangan CA, iaitu 3,4-asid dihydroxybenzenepropionic, yang boleh dimetilasi menjadi M19 (m/z 195.0623, C10H12O4, 0.93 min). M33 boleh dinyahhidroksi menjadi M43, iaitu 3-HPP (m/z 165.0558, C9H10O3, 11.29 min) dan M31 (m/z 341.0942, C15H17O9, 8.90 min) dan M29 (m/z 1045,S. 8.52 min) ialah produk glukuronidasi dan sulfat (Rajah 12C).

Untuk glikosida phenylethanoid yang berkaitanmetabolit, lata metabolik utama ialah tindak balas metabolik fasa II, iaitu, glukuronidasi, metilasi, dan sulfation. Lata metabolik yang dicadangkan bagi feniletanoid digambarkan dalam Rajah 13.

Rajah 12 Spektrum jisim beberapametabolitdalam CD

Rajah 13 Kemungkinan laluan Metabolik feniletanoid

Pengenalpastian metabolit berkaitan iridoid

Dengan menganalisis komposisi unsurmetabolit, pemecahan MSE, dan kesusasteraan yang berkaitan, sejumlah 19 metabolit berkaitan iridoid telah dinilai secara tentatif. Glikosida iridoid telah dihidrolisiskan oleh ikatan glikosidik untuk membentuk aglikon yang sepadan. M/z 185.117 adalah untuk M8, 162 Da kurang daripada ajugol, yang dihasilkan oleh kehilangan sisa glukosa.

M40 (m/z 199.0641, Rt 10.91 min) ialah produk deglycosylated catalpol. M45 m/z 169.0487, Rt 12.15 min) adalah kurang daripada 30 Da daripada catalpol deglycosylatedmetabolit, dan dikenal pasti sebagai penyingkiran molekul metabolit CH2O. M34 (m/z 151.0352, Rt 9.08 min), ialah kehilangan H2O selanjutnyametabolit.

M44 (m/z 211.0665, Rt 11.31 min) ialah metabolit terdeglycosylated geniposide, dan M37 (m/z 197.0833, Rt 15.03 min) ialah deglikosilasi 8-asid epideoxyloganic. Tindak balas metabolik untuk iridoid boleh didedahkan sebagai metabolisme fasa I deglycosylation (Rajah 12D).

Perbandingan profil metabolik dalam plasma, air kencing, dan najis antara CD dan produk yang diproses

2 prototaip dalam plasma, 7 dalam air kencing, dan 3 dalam najis telah dibandingkan. Terdapat 7 prototaip diserap dalam CD, 7 prototaip diserap dalam CD-NP, dan 8 prototaip dalam CD-HP. M21 hanya dikesan dalam kumpulan najis CD-NP, dan M38 dan M51 dikesan hanya dalam kumpulan air kencing CD-HP. Berbanding dengan metabolit, samametabolitdalam plasma, air kencing, dan najis adalah 4, 42, dan 21, masing-masing. Terdapat 34 metabolit yang diserap dalam kumpulan CD, 39 dalam CD-NP, dan 40 dalam kumpulan CD-HP. M5, M7, M40, dan M52 hanya dikesan dalam kumpulan CD-NP, manakala M24, M41, dan M48 hanya dikesan dalam kumpulan CD-HP.

Variasi diperhatikan dalam penyerapan serta metabolisme sebatian aktif dalam pelbagai produk diproses CD. Daripada Rajah 14, kami mendapati bahawa keamatan konjugasi HT-sulfat (M17) adalah yang tertinggi dalam air kencing, diikuti oleh 3-konjugasi sulfat HPP (M29), konjugasi sulfat HT termetilasi (M22), sulfat CA terdehidroksilasi. konjugasi (M32), dan 3,4-konjugasi asid sulfat dihidroksi benzenepropionik (M19). Kandungan produk metabolik dalam kumpulan yang diproses adalah lebih tinggi daripada kumpulan CD, terutamanya untuk M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2. Sebatian prekursor mereka, seperti hydroxytyrosol mempunyai sifat anti-tumor, anti-radang, antibakteria, antivirus, dan antikulat [23]. Asid kafeik mempunyai aktiviti anti-radang, anti-kanser, dan antivirus [24]. Ia konsisten dengan penggunaan klinikal CD dan produk yang diproses.

Perbincangan

CD ialah TCM, dan komponen bioaktif utamanya, termasuk PhG, iridoid, polisakarida telah didokumenkan oleh pelbagai kajian penyelidikan. Dalam amalan klinikal TCM, produk CD yang diproses telah digunakan secara meluas berbanding produk mentah. Thekimiakomposisi akan diubah semasa pemprosesan, yang mungkin membawa kepada perubahan dalam kesan perubatan (Rajah 14).

Rajah 14 Intensiti utamametabolitdalam air kencing

PhGs ialah sejenis sebatian fenolik yang dicirikan oleh struktur -glucopyranoside yang mengandungi bahagian hidroksifeniletil sebagai aglikon. Sebatian ini selalunya terdiri daripada asid kafeik dan rhamnose yang melekat pada sisa glukosa melalui ikatan ester atau glikosidik masing-masing. Dalam kajian semasa, analisis kualitatif CD, CD-NP, dan CD-HP telah dijalankan, dan sejumlah 97 sebatian, termasuk phenylethanoid glycosides (PhGs), iridoid, dsb. Keputusan yang diperolehi menunjukkan variasi dalamkimiakomposisi sebelum dan selepas pemprosesan. Keamatan PhG yang mempunyai kumpulan 4'-O-caffeoyl dalam bahagian 8-O- -D-glucopyranosyl, seperti acteoside, cistanoside C, campneoside II, osmanthuside berkurangan selepas diproses, manakala PhGs dengan 6 Kumpulan '-O-caffeoyl dalam bahagian 8-O- -D-glucopyranosyl, seperti isoacetoside, isocistanoside, isocampneoside I, isomartynoside meningkat, terutamanya dalam kumpulan CD-NP. Keamatan echinacoside dan cistanoside B yang strukturnya mempunyai 6'-O- -D-glucopyranosyl moiety juga meningkat. PhG yang mempunyai kumpulan 2'-aktil selalunya berkurangan kerana tindak balas hidrosis semasa proses, seperti tubuloside B, 2-asetilakteosida.

Penyiasatan terhadapmetabolitdiserap dalam vivo telah dijalankan selepas pentadbiran lisan CD dan produk yang diproses. Proses metabolik fasa II adalah lata utama dan kebanyakan metabolit adalah sulfat, glukuronida, dan konjugat metilasi. Phenylethanol glycosides mempunyai penyerapan dan penggunaan oral yang rendah. Mereka sukar untuk diserap ke dalam darah, dan bertindak sebagai nenek moyang untuk memainkan peranan mereka selepas pengaktifan metabolik dalam vivo. Feniletanoid yang dihasilkan menjadi phenylethanolaglycone, seperti hydroxytyrosine (HT) dan asid caffeic (CA) dan derivatifnya 3-asid hydroxyphenylpropionic (3-HPP), metabolit ini mungkin lebih mudah diserap ke dalam plasma dan mempunyai ubat yang lebih baik. kesan.

Kebanyakannyametabolitdidapati dalam kepekatan yang lebih rendah atau tidak dikesan dalam plasma tikus, bagaimanapun, kepekatan yang lebih tinggi diperhatikan dalam air kencing, menunjukkan bahawa metabolit akan mudah disingkirkan melalui air kencing. Seperti yang digambarkan dalam Jadual 3, sebatian yang sama ditentukan dalam pelbagai kumpulan, manakala variasi yang besar ditemui dalam kepekatanmetabolityang mungkin dikaitkan dengan keberkesanan CD dan produk yang diproses yang tidak sama rata. Konjugasi HT-sulfat (M17) mempunyai keamatan tertinggi dalam air kencing, diikuti oleh 3-Konjugasi sulfat HPP (M29), konjugasi sulfat HT termetilasi (M22), konjugasi CA sulfat terdehidroksilasi (M32), dan 3,{{ 7}} konjugasi asid sulfat dihidroksi benzenepropionik (M19). Kandungan produk metabolik dalam kumpulan yang diproses adalah lebih tinggi daripada kumpulan CD, terutamanya untuk M22, M29, M27, M16, M19, M1, M2.

Secara amnya, komponen yang mempunyai pendedahan tinggi dalam organ sasaran boleh menjadi berkesan. Jumlah feniletanoid yang mencukupi dan derivatifnya telah dinilai dan ditentukan secara in vitro. Acteoside ialah sebatian ciri, yang kandungannya berkurangan selepas diproses oleh wain beras, dan kandungan isoacteoside, isocistanoside C, isocampneoside I meningkat sejajar. Produk degradasi PhG, seperti derivatif CA dan HT boleh dinilai dalam sampel bio, dan pemprosesan wain beras boleh meningkatkan penyerapanmetabolitdalam vivo.

Kesimpulan

Dalam kajian ini, 97 sebatian telah dikesan dalam ekstrak CD dan produk yang diproses. Penguraian beberapa glikosida berlaku di bawah suhu tinggi dan akibatnya, beberapa isomer dan kompleks baru telah disintesis. Dalam kajian in vivo, komponen prototaip (10) danmetabolit(44) ditentukan atau dinilai secara tentatif dalam plasma tikus, najis, dan air kencing. Proses metabolik Fasa II adalah lata utama, kebanyakannyametabolittelah dikaitkan dengan echinacoside atau acteoside, seperti HT, CA dan derivatifnya 3-asid hidroksifenilpropionik 3-HPP. Metabolit ini mungkin lebih mudah diserap ke dalam plasma dan mempunyai kesan perubatan yang lebih baik. Keputusan yang diperolehi menunjukkan bahawakimiakomposisi CD adalah berbeza dan menjejaskan pelupusan sebatian secara in vitro dan in vivo.

Ketersediaan data dan bahan

Set data yang digunakan dan/atau dianalisis semasa kajian semasa tersedia daripada pengarang yang sepadan atas permintaan yang munasabah.

Singkatan

PhGs: Glikosida Phenylethanoid

CD:Cistanche deserticola

CMM: Materia Medica Cina

TCM: Perubatan Tradisional Cina

CD-NP:Cistanche deserticolaDiproses dengan mengukus dengan wain beras di bawah tekanan biasa

CD-HP:Cistanche deserticolaDiproses dengan mengukus dengan wain beras di bawah tekanan tinggi

UPLC-Q-TOF-MSE : Kromatografi cecair berprestasi ultra tinggi ditambah dengan TOF-MSE

PCA: Analisis komponen utama

VIP: Kepentingan berubah untuk unjuran

CA: Asid kafeik

HA: Hydroxytyrosol

Kajian untuk cistanche profil kimia dan metabolit

Rujukan

1. Suruhanjaya Farmakope Cina. Pharmacopeia Republik Rakyat China, vol. I. Beijing: Akhbar Sains Perubatan China; 2020. hlm. 140.

2. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng CM. HerbaCistanche(Rou Cong-Rong): salah satu hadiah farmaseutikal terbaik perubatan Cina tradisional. Pharmacol Depan. 2016;7:41.

3. Liu BN, Shi J, Zhang C, Li Z, Hua Y, Liu PP, Jia TZ. Kesan kaedah pemprosesan pengeringan yang berbeza untuk SegarCistanche deserticolapada kandungan komponennya. J Chin Med Mater. 2020;10:2414–8.

4. Liu BN, Shi J, Jia TZ, Lv TT, Li Z. Pengoptimuman proses pengukusan tekanan tinggi untuk Cistanches Herba. Chin Trad Paten Med. 2019;11:2576–80.

5. Fan YN, Huang YQ, Jia TZ, Wang J, La-Sika, Shi J. Kesan daripadaCistanchesherba sebelum dan selepas memproses fungsi anti-penuaan dan fungsi imun tikus penuaan yang disebabkan oleh D-galaktosa. Chin Arch Trad Chin Med, 2017; 11:2882–2885.

6. Gao YJ, Jiang Y, Dai F, Han ZL, Liu HY, Bao Z, Zhang TM, Tu PF. Kajian tentang juzuk julap dalam Cistanche deserticola YC Ma. Med Chin Moden. 2015;17(4):307–10.

7. Liu BN, Shi J, Li Z, Zhang C, Liu P, Yao W, Jia T. Kajian tentang fungsi neuroendokrin-imunCistanche deserticoladan Produk pengukus wain berasnya dalam model tikus yang disebabkan oleh glukokortikoid. Evid Based Complement Alternat Med. 2020;22:5321976.

8. Guo Y, Wang L, Li Q, Zhao C, He P, Ma X. Peningkatan fungsi mencergaskan buah pinggang dalam model tetikus oleh herba Cistanches dikeringkan dengan cepat pada suhu sederhana tinggi. J Med Makanan. 2019;22(12):1246–53.

9. Wang T, Zhang X, Xie W.Cistanche deserticolaYC Ma, "Ginseng gurun": ulasan. Am J Chin Med. 2012;40(6):1123–41.

10. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: Gambaran keseluruhan sifat kimia, farmakologi dan farmakokinetiknya. J Ethnopharmacol. 2018;219:233–47.

11. Lei H, Wang X, Zhang Y, Cheng T, Mi R, Xu X, Zu X, Zhang W. HerbaCistanche(Rou Cong Rong): kajian semula fitokimia dan farmakologinya. Chem Pharm Bull. 2020;68(8):694–712.

12. Geng X, Tian X, Tu P, Pu X. Kesan neuroprotektif echinacoside dalam model MPTP tetikus penyakit Parkinson. Eur J Pharmacol. 2007;564:66–74.

13. Deng M, Zhao JY, Ju XD, Tu PF, Jiang Y, Li ZB. Kesan perlindungan tubuloside B pada apoptosis yang disebabkan oleh alfa TNF dalam sel neuron. Acta Pharmacol Sin. 2004;25(10):1276–84.

14. Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y, Tu PF. Iridoid anti-radang daripada batangCistanche deserticolaberbudaya di Gurun Tarim. Chin J Nat Med. 2016;14(1):61–5.

15. Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y, Tu PF. Glikosida phenylethanoid dengan aktiviti anti-radang daripada batang Cistanche deserticola yang dibiakkan di padang pasir Tarim. Fitoterapia. 2013;89:167–74.

16. Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Yuan D, Yoshikawa M, Hayakawa T, Muraoka O. Iridoid dan glikosida monoterpena asiklik, kankanosides L, M, N, O, dan P daripadaCistanchetubulosa. Chem Pharm Bull. 2010;58(10):1403–7.

17. Li SL, Song JZ, Qiao CF, et al. Strategi baru untuk meneroka potensi dengan pantaskimiapenanda untuk diskriminasi antara Radix Rehmanniae mentah dan diproses oleh UHPLC-TOF-MS dengan analisis statistik multivariate. J Pharm Biomed Dubur. 2010;51(4):812–23.

18. Peng F, Chen J, Wang X, Xu CQ, Liu TN, Xu R. Perubahan dalam tahap glikosida phenylethanoid, aktiviti antioksidan, dan ciri kualiti lain dalamCistanche deserticolahirisan dengan pemprosesan wap. Chem Pharm Bull. 2016;64:1024–30.

19. Ma ZG, Tan YX. Perubahan kandungan enam glikosida phenylethanoid di bawah jangka masa pengukusan dengan wain di Desertliving Cistanche. Chin Trad Paten Med. 2011;33(11):1951–4.

20. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Kesan proses pengukusan terhadap kualiti lepas tuaicistanche deserticolauntuk kegunaan perubatan semasa pengeringan matahari. Biol Pharm Bull. 2016;39(12):2066–70.

21. Cui Q, Pan Y, Zhang W, Zhang Y, Ren S, Wang D, Wang Z, Liu X, Xiao W.Metabolitacteoside pemakanan: profil, pengasingan, pengenalan, dan kapasiti hepatoprotektif. J Agric Food Chem. 2018;66(11):2660–8.

22. Cui Q, Pan Y, Bai X, Zhang W, Chen L, Liu X. Pencirian sistematik bagimetabolitdaripada echinacoside dan acteoside daripadaCistanchetubulosa dalam plasma tikus, hempedu, air kencing dan najis berdasarkan UPLC-ESI-Q-TOF-MS. Biomed Chromatogr. 2016;30(9):1406–15.

23. Bertelli M, Kiani AK, Paolacci S, Manara E, Kurti D, Dhuli K, Bushati V, Miertus J, Pangallo D, Baglivo M, Beccari T, Michelini S. Hydroxytyrosol: sebatian semula jadi dengan aktiviti farmakologi yang menjanjikan. J Bioteknol. 2020;309:29–33.

24. Touaibia M, Jean-François J, Doiron J. Asid Kafeik, farmakofor serba boleh: gambaran keseluruhan. Mini Rev Med Chem. 2011;11(8):695–713.