Cistanche polysaccharides deskrentola melengkapkan nefropati diabetes pada tikus dengan menjejaskan flora usus dan menghalang reseptor seperti tol 4/nuklear faktor isyarat-κB ⅱ

2.5 Kesan CDP pada patologi kolon dalam tikus C57BL/6J

Serbuk ekstrak cistanche cistanche dari bahan mentah berkualiti tinggi

Klik untuk mendapatkan maklumat lanjut

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 2, pewarnaan H & E mendedahkan bahawa struktur tisu kolon tikus normal adalah normal, crypts telah disusun dengan kemas dan ketat, bilangannya besar, dan sel -sel epitelium tidak mempunyai degenerasi dan penumpahan yang jelas. Sebaliknya, tikus DN menunjukkan penumpahan sel epitel kolon, penyusupan sel -sel keradangan, kerosakan kepada sel -sel crypt, kehilangan struktur kelenjar usus, dan peningkatan kebolehtelapan. Selepas 4 minggu campur tangan CDP, keadaan patologi di atas pulih ke tahap yang berbeza -beza.

Hasil pewarnaan AB-PAS menunjukkan bahawa berbanding dengan kumpulan kawalan, bilangan sel-sel goblet yang tidak diempah dalam kolon tikus kumpulan model berkurangan, dan rembesan protein mukus berasid meningkat dengan ketara; Bilangan sel -sel goblet yang tidak dipelihara dalam kolon kumpulan kawalan adalah yang terbesar; Berbanding dengan kumpulan model, rembesan protein lendir asid kolon dalam kumpulan CDPS-H dikurangkan.

Rajah 2 Kesan CDPS pada perubahan histopatologi kolon dalam tikus DN seperti yang diperiksa oleh H & E dan AB-PAS Pewarnaan

2.6 Kesan CDP pada Flora Usus C57BL/6J Tikus

Kesan CDP pada petunjuk biokimia dan hasil patologi tikus DN dianalisis secara komprehensif, dan kandungan kolon tikus dalam kumpulan CDPS-H dengan keberkesanan keseluruhan terbaik dipilih untuk penyelidikan flora usus.

2.6.1 Varian urutan amplicon (ASV) Pengagihan venn rajah seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 3, berbanding dengan kumpulan kawalan, kelimpahan relatif spesies flora usus dalam tikus kumpulan model menurun, dan kelimpahan relatif bertambah baik selepas rawatan CDPs.

Cistanche

2.6.2 Analisis Kepelbagaian Alpha Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 6, berbanding dengan kumpulan kawalan, indeks ChaO1 flora usus tikus kumpulan model menurun. Selepas campur tangan CDP, indeks ChaO1 meningkat, tetapi tidak ada kepentingan statistik, menunjukkan bahawa CDP boleh mengubah struktur flora usus dengan meningkatkan jumlah spesies. Indeks liputan hampir kepada 1, menunjukkan bahawa hasil penjujukan pada dasarnya dapat mencerminkan keadaan sebenar sampel. Tidak terdapat perbezaan yang signifikan secara statistik dalam indeks Shannon, Simpson, liputan, dan pielou _ di antara kumpulan, yang menunjukkan bahawa kekayaan spesies dan kepelbagaian masyarakat alam sekitar dalam setiap kumpulan adalah baik, dan liputan koloni adalah konsisten dan sama rata.

Rajah 3 Venn Diagram pengedaran ASV

Jadual 6 indeks alpha-kepelbagaian mikrobiota usus pada tikus dalam kumpulan kawalan, model dan CDPS (n=6)

2.6.3 Analisis Kepelbagaian Beta

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4, melalui analisis kepelbagaian beta, analisis komponen utama (PCA) dapat membezakan tiga kumpulan sampel dalam ruang tiga dimensi, menunjukkan bahawa terdapat perbezaan yang signifikan dalam flora usus dari tiga kumpulan sampel ini. Kumpulan model dan kumpulan kawalan dipisahkan di sepanjang paksi PC2, dan kumpulan CDPS-H adalah antara kumpulan model dan kumpulan kawalan, dekat dengan kumpulan kawalan.

Rajah 4 Kepelbagaian flora usus pada tikus dalam kumpulan kawalan, model dan CDPS (n=6)

2.6.4 Kesan CDP pada flora usus tikus C57BL/6J

2.6.4.1 Tahap Phylum

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5, berbanding dengan kumpulan kawalan, kelimpahan relatif Firmicutes dalam kumpulan model meningkat dengan ketara, kelimpahan relatif Bacteroidota dan Verrucomicrobia menurun dengan ketara, dan nisbah kelimpahan relatif (b/f) bakteroidetes kepada firmicutes menurun. Berbanding dengan kumpulan model, CDP secara signifikan meningkatkan kelimpahan relatif bakteroidet dan verrucomicrobia, menurunkan kelimpahan relatif Firmicutes, dan meningkatkan nilai B/F, yang lebih dekat dengan nilai B/F kumpulan kawalan.

Rajah 5 carta bar kelimpahan relatif flora usus di peringkat phylum (n=6)

2.6.4.2 Tahap Genus

Histogram komposisi kelimpahan spesies pada tahap 30 genera teratas (Rajah 6) menunjukkan bahawa terdapat perbezaan dalam flora usus tikus dalam kumpulan model dan kumpulan CDPS-H. Terdapat 16 genera bakteria yang berbeza antara kumpulan model dan kumpulan kawalan; Terdapat 8 genera bakteria yang berbeza antara kumpulan CDPS-H dan kumpulan model; 5 genera bakteria di kawasan tumpang tindih mungkin genera bakteria yang CDP boleh meningkatkan nefropati diabetes (Rajah 7). Seperti yang dapat dilihat dari Jadual 7, pada tahap genus dalam flora usus tetikus, berbanding dengan kumpulan kawalan, kelimpahan relatif allobaculum dalam kumpulan model dikurangkan dengan ketara, dan kelimpahan relatif Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus _<0.05) was increased. ; Compared with the Model group, the relative abundance of Roseburia, Romboutsia, Ruminococcus_torques_group and RF39 (P＜0.05) decreased in the CDPs-H group; the relative abundance of Allobaculum increased (P＜0.05).

Rajah 6 carta bar kelimpahan relatif flora usus pada tahap genus (n=6)

Rajah 7 Venn Diagram Flora Usus di Tahap Genus (N=6)

Jadual 7 Kesan CDPS pada kelimpahan relatif genera mikrob usus berbeza antara kumpulan kawalan, model dan CDP (n=6)

2.6.4.3 Kesan CDPS pada ungkapan zo kolon -1 dan occludin

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 8 dan Jadual 8, berbanding dengan kumpulan kawalan, tahap ekspresi relatif zo -1 dan protein occludin dalam tisu kolon tikus dalam kumpulan model telah dikurangkan dengan ketara (p <{3}} 01); Berbanding dengan kumpulan model, campur tangan CDPs pada setiap dos mungkin tahap ekspresi relatif zo -1 dan protein occludin dalam tisu kolon meningkat dengan ketara (p<0.01).

Rajah 8 Ekspresi zo -1 dan occludin dalam tisu kolon tikus dari setiap kumpulan (n=3)

Jadual 8 Tahap ekspresi relatif zo -1 dan occludin dalam tisu kolon tikus dari setiap kumpulan (n=3)

Bahan mentah Cistanche

2.7 Kesan CDP pada Renal TLR4/NF-κB Isyarat Laluan Protein

Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 9 dan Jadual 9, berbanding dengan kumpulan kawalan, ekspresi relatif protein TLR4 dalam tisu buah pinggang tikus dalam kumpulan model dan nisbah P-NF-κBP65/NF-κB p65 dan PI κBα/I κBα meningkat dengan ketara. Tinggi (ms<0.01); compared with the Model group, the relative expression of TLR4 protein and p-NF-κBp65/NF-κB p65 and p-I κBα/I κBα in the kidney tissue of mice in the CDPs-M and CDPs-H groups The ratios were significantly reduced (P＜0.01, P＜0.05).

Rajah 9 Analisis blot Barat ekspresi protein yang berkaitan dengan laluan isyarat TLR4/ NF-κB dalam tisu buah pinggang dari setiap kumpulan (n=3)

Jadual 9 Tahap ekspresi relatif protein yang berkaitan dengan laluan TLR4/NF-κB dalam tisu buah pinggang dari setiap kumpulan (n=3)