Cistanche Deserticola Polysaccharides Mempunyai Kesan Neuroprotektif

untuk maklumat lanjut:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu, et al

Abstrak:

Strok iskemia adalah penyakit yang mempunyai morbiditi dan kematian yang tinggi.Cistanchedeserticolapolisakarida(CDP)mempunyai pelbagai kesan berfaedah, termasuk hepatoprotection dan homeostasis imun. Setakat yang kami tahu, kesan perlindungan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)pada neuron yang cedera oleh kekurangan oksigen-glukosa/reperfusi (OGD/RP) belum disiasat. Dalam kajian ini, OGD/RP mencederakan model sel PC12. Secara ringkas, CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml) telah diberikan sebelum reperfusi. Kesan perlindungan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kemudiannya dinilai berdasarkan daya maju sel, kebocoran dehidrogenase laktat (LDH), [Ca2 tambah ] I, potensi membran mitokondria (MMP) dan apoptosis sel, status andredoks selepas reperfusi dinilai dengan menguji spesies oksigen reaktif (ROS), katalase ( CAT), glutathione peroxidase (GSH-Px) dan jumlah kapasiti antioksidan. Berdasarkan fakta bahawa DJ protein berkaitan penyakit Parkinson-1 mengambil bahagian dalam antioksidan endogen dan melakukanneuroprotektifkesan selepas iskemiastroke, kami menyiasat interaksi antara CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)dan DJ{{0}}. Ekspresi DJ-1 telah dikesan melalui analisis ELISA dan Western blot, dan translokasi DJ-1 telah dinilai melalui imunofluoresensi. Keputusan menunjukkan bahawa CDP (0.05, 0.5 dan 5 ug/ml) melemahkan kematian sel PC12, memelihara MMP dan homeostasis kalsium; menghalang tekanan oksidatif, dan menurunkan apoptosis sel. Selain itu, CDP (5 ug/ml) telah merangsang dengan ketara{10}} rembesan dan ekspresi DJ. Secara keseluruhan, keputusan mencadangkan bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)mengenakan aneuroprotektifkesan terhadap kecederaan akibat OGD/RP dengan menghalang tekanan oksidatif dan mengawal laluan-1 DJ

Kata kunci:Cistanche deserticola, Polisakarida, Neuroprotektif, Kekurangan/reperfusi glukosa oksigen, Tekanan oksidatifDJ-1

Klik untuk produk Cistanche UK

1. Pengenalan

Strok iskemia adalah penyebab utama kedua kematian dan penyebab utama ketidakupayaan jangka panjang di seluruh dunia [1]. Kematian akibat strok dijangka meningkat kepada 7.8 juta pada tahun 2030 [2]. Di China, 58 hingga 142 setiap100,000 orang mati akibat strok setiap tahun. Oleh itu, strategi berkesan yang membalikkan kecederaan iskemia-reperfusi mesti dibangunkan. Bukti yang luas menyokong bahawa tekanan oksidatif adalah faktor utama yang menggalakkan perkembangan dan perkembangan infarksi serebrum semasa reperfusi [3,4]. Oleh itu, penemuan berkesanneuroprotektifagen yang mampu mengurangkan ROS dan menekan tekanan oksidatif telah menarik minat yang besar dalam penyelidikan. Protein yang berkaitan dengan penyakit ParkinsonDJ-1 mengantara perlindungan saraf dengan merangsang ekspresi gen anti-apoptosis dan antioksidatif [4,5]. DJ-1 boleh dialihkan ke dalam mitokondria melalui tekanan oksidatif dan rangsangan mitogen dan boleh dirembeskan kepada matriks ekstraselular di bawah keadaan patologi, seperti kanser payudara, melanoma dan kecederaan OGD/RP [6]. Selain itu, DJ-1 berguna dalam penyasaran terapeutik untuk neurodegenerasi iskemia kerana peranannya yang kritikal dalam anti-pengoksidaan [4,7]. Dalam 10 tahun yang lalu, beberapa kumpulan telah mengesahkan bahawa DJ-1 telah melakukannyaneuroprotektifkesan pada model iskemia serebrum in vivofocal dan model OGD/RP in vitro [6–9]. Sementara itu, beberapa ubat, termasuk siklosporin A dan natrium fenilbutirat, membatalkan kematian sel neuron melalui DJ-1 upregulation iniskemia stroke [9,10 ].

Cistanchedeserticola, tumbuhan kering penting bagiCistanchedeserticolaYCMa dan Cistanche tubulosa Wight, dihasilkan terutamanya di kawasan gurun di utara dan barat laut China [11]. C. deserticola boleh dimakan dan telah dihormati sebagai 'Ginseng padang pasir'. Dalam preskripsi acupoint, itis digunakan sebagai rawatan untuk penyakit buah pinggang kronik, mati pucuk seksual, kemandulan wanita, keputihan, metrorrhagia, dan sembelit nyanyuk [12].C. polisakarida deserticola, komponen aktif utama yang diasingkan daripadaCistanche deserticola. CDP, memodulasi fungsi imun dan keseimbangan lipid serta memberikan perlindungan terhadap penuaan, pengoksidaan dan kerosakan hati. Selain itu, CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)menghalang kecederaan iskemia-reperfusi di jantung dan hati [13,14]. Kajian terbaru melaporkan bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)tidak toksik[12,15,16], dan fitokimia lain yang diekstrak daripada C. Deserticola, termasuk echinacoside, isoacteoside, acteoside dan salidroside, mempamerkanneuroprotektifkesan [11,12]. Walau bagaimanapun, potensi penggunaan CDP untuk memperbaiki kerosakan strok iskemia belum dilaporkan.

Dalam kajian ini, kami membuat hipotesis bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)menghalang tekanan oksidatif untuk perlindungan saraf. Kesan perlindungan berpotensi CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kerosakan strok iniskemia telah diperiksa dengan menggunakan sel PC12 yang cedera OGD/RP. Interaksi asas yang dikaitkan dengan DJ-1 kemudiannya diterokai.

2. Kaedah

2.1. Kultur sel dan model OGD/RP

Sel PC12 dibiakkan dalam medium RPMI 1640 yang mengandungi 10 peratus FBS pada 37 darjah dalam inkubator normoksik yang mengandungi 5 peratus CO2. Medium telah diganti setiap 48 jam. Model OGD/RP telah disediakan. Sel PC12 telah dicuci dan didedahkan kepada larutan garam seimbang Earle. Kemudian, sel-sel dipindahkan ke ruang anaerobik yang mengandungi 5 peratus CO2 dan 95 peratus N2 pada 37 darjah selama 4 jam dan kemudian dibenarkan menjalani reoksigenasi. Semasa langkah ini, isipadu medium kultur yang sama telah ditambah kepada sel. Selepas reoksigenasi, sel-sel diletakkan pada inkubator normoksik selama 24 jam.

2.2. Pentadbiran dadah

CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)telah dibeli daripada Yuanye Biological Technology Co.,Shanghai, China (C23J7Y18405, > 98 peratus ketulenan). Nimodipine, ubat pencegahan lini pertama untuk strok iskemia, digunakan sebagai sebatian kawalan positif [17-19]. Suntikan Nimodipine adalah daripada Syarikat Bayer. Sel dibahagikan secara rawak kepada enam kumpulan, iaitu kawalan, ve hicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)(0.05 ug/ml), CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)(0.5 ug/ml)dan CDP (5 ug/ml). Nimodipine dan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)telah ditambah sebelum reperfusi. Kumpulan kawalan dibiakkan dalam medium biasa dan diinkubasi dalam keadaan normoksik.

2.3. Daya Tahan Sel: Ujian MTT dan NRU

Sel PC12 (6 × 103 setiap telaga) telah disemai dalam 96-plat kultur telaga. Sel-sel telah dirawat mengikut keperluan setiap kumpulan. MTT (Solarbio, China) telah ditambah kepada sel pada kepekatan 5 mg/ml dan diinkubasi selama 4 jam pada 37 darjah . Formazan adalah hasil pengurangan suksinat dehidrogenase dalam sel hidup [20]. DMSO telah ditambahkan untuk pembubaran formazan biru yang dihasilkan. Penyerapan pada panjang gelombang 490 nm dikesan dengan Pembaca Microplate (Thermo, USA) selepas sel digoncang selama 10 minit pada 25 darjah. Keputusan daya maju sel telah ditunjukkan sebagai peratusan kumpulan kawalan [21].

Ujian pengambilan merah neutral (NRU) dilakukan mengikut protokol yang diterbitkan sebelum ini [22]. Apabila tempoh reperfusi telah selesai, merah neutral (Solarbio, China) telah ditambahkan pada sel pada kepekatan 50 ug /ml. Campuran itu diinkubasi selama 3 jam. Kemudian, sel-sel itu dibasuh dengan cepat dengan larutan yang mengandungi 0.5 peratus formaldehid dan 1 peratus kalsium klorida. Sel-sel itu kemudiannya ditambah kepada campuran yang mengandungi 1 peratus asid etil dan 50 peratus anhydrousethanol. Plat dibaca pada penyerapan 540 nm selepas sel digoncang selama 20 minit pada 37 darjah. Keputusan daya maju sel telah dimanifestasikan sebagai peratusan kumpulan kawalan.

Polisakarida cistanche deserticolamempunyai aKesan neuroprotektif

2.4. Penilaian sitotoksisiti

LDH ialah enzim sitoplasma yang memangkinkan pengoksidaan topiruvat laktat. LDH dilepaskan dengan cepat ke dalam cecair ekstrasel apabila membran sel rosak. Oleh itu, pengesanan LDH biasanya dilakukan untuk penilaian sitotoksisiti. [23]. Prosedur eksperimen mengikut arahan kit komersial yang dibekalkan oleh kit ujian LDH (Jiancheng, China). Penyerapan setiap sampel dikesan pada 440 nm dengan pembaca plat mikro. Peratus kematian sel dikira dengan menggunakan formula berikut: Daya maju ( peratus )=(Rawatan OD − ODTreatment kosong)/(aktiviti OD Max LDH − OD Max LDH kosong aktiviti) × 100 peratus .

2.5. Pengesanan kepekatan Ca2 ditambah intrasel

Kepekatan intrasel Ca2 plus diukur dengan Fluo-3/AM [15]. Sel PC12 telah dibasuh dengan PBS tiga kali dan kemudian diinkubasi dengan 2 μM Fluo-3/AM (Beyotime, China) selama 30 minit pada 37 darjah dalam gelap. Sel-sel itu kemudiannya dibasuh dengan PBS tiga kali untuk pembersihan pewarna ekstraselular. Keamatan pendarfluor Fluo-3/AM ditentukan pada mikroskop confocal pengimbasan laser (Olympus, Jepun). Pakej perisian Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer dan ImageJdigunakan untuk pengiraan nilai skala kelabu

2.6. Pengukuran MMP

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine;Beyotime, China) ialah probe sensitif voltan yang mudah digunakan untuk pewarnaan sel dan menilai MMP [24]. Sel PC12 dibasuh dua kali dengan PBS sejuk dan kemudian diinkubasi dengan campuran yang mengandungi 50 peratus medium dan 50 peratus cecair kerja selama 15 minit pada 37 darjah dalam gelap. Kemudian, campuran itu dibuang dan digantikan dengan medium segar. Imej pendarfluor merah dan hijau telah ditangkap melalui mikroskop pengimbasan laser. Perkadaran relatif isyarat pendarfluor merah dan hijau digunakan untuk pengukuran MMP [25]. Pakej perisianOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer dan ImageJ telah digunakan untuk pengiraan nilai skala kelabu.

2.7. Ujian pengesanan apoptosis, Hoechest33342, dan analisis sitometri aliran

Hoechst33342, pewarna pengikat DNA, digunakan untuk pemeriksaan apoptosis sel [26]. Selepas reperfusi, sel PC12 dibasuh dengan PBS tiga kali dan diinkubasi dengan kepekatan Hoechst33342 (Beyotime, China) ata sebanyak 5 ug / ml selama 15 minit pada 37 darjah dalam gelap. Kemudian, sel-sel telah diperhatikan di bawah mikroskop confocal pengimbasan laser. Sel-sel theapoptosis mempamerkan pendarfluor biru yang sengit dan pemeluwapan nukleus. Bagi setiap eksperimen pewarnaan, tiga medan rawak telah ditangkap dan dikira. Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer dan ImageJdigunakan untuk pengiraan nilai skala kelabu. Peratusan sel apoptosis dikira melalui formula berikut: jumlah apoptosis/jumlah keseluruhan × 100 peratus [27].

2.8. Pengukuran penjanaan ROS

Probe pendarfluor 2',7'- dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA; Jiancheng, China) boleh menembusi membran sel dan boleh dihidrolisiskan kepada DCFH bukan pendarfluor. DCFH dioksidakan oleh ROS intraselular kepada DCF pendarfluor [29]. Selepas reperfusi, sel-sel telah dibasuh dua kali dengan PBS dan kemudian diinkubasi dengan DCFH-DA pada kepekatan akhir 10 μM selama 45 minit pada 37 darjah dalam gelap. Pendarfluor diperhatikan oleh spektrofotometer afluoresensi dengan panjang gelombang pengujaan 485 nm dan panjang gelombang pelepasan 535 nm.

Polisakarida cistanche deserticolamempunyai aKesan neuroprotektif

2.9. Penentuan penunjuk tegasan oksidatif: CAT, GSH-Px dan T-AOClevels

Sel-sel telah dikikis dan digantung semula dalam PBS. Suspensi sel yang diperolehi telah disonikasi 45 kali pada ais dan disentrifugasi pada 1000r/min selama 10 minit pada 4 darjah. Supernatan telah dikekalkan dan digunakan untuk pengesanan [24]. Jumlah kandungan protein supernatan sel diukur dengan kit reagen ujian protein BCA (KeyGEN, China). Aktiviti tahap CAT, GSH-Px dan T-AOC diukur mengikut arahan pengeluar (Jiancheng, China). Penyerapan setiap sampel telah dikesan dengan pembaca plat mikro.

2.10. Pengukuran kepekatan DJ ekstraselular-1.

Sel PC12 (6 × 103 setiap telaga) telah disemai dalam 96-plat kultur telaga. Selepas reperfusi, supernatan sel telah dikumpulkan dan dianalisis oleh DJ-1/PARK-7 Kit ELISA (Raybio, USA ) mengikut arahan pengilang [9]. Penyerapan setiap sampel telah dikesan dengan Microplate Reader pada dwi-panjang gelombang 450 nm atau 540 nm.

2.11. Analisis Western blot

Protein selular diekstrak dengan penimbal lisis sejuk ais mengikut arahan pengeluar (KeyGEN, China). Kepekatan protein ditentukan dengan kit reagen ujian protein BCA. Jumlah lisat protein yang sama (20 ug) daripada setiap kumpulan telah diselesaikan dalam elektroforesis gel natrium dodesil sulfat-poliakrilamida 12 peratus dan seterusnya dipindahkan ke membran nitroselulosa. Membran diinkubasi dengan PBS yang mengandungi 5 peratus susu skim selama 2 jam pada suhu bilik dan kemudian disiasat dengan antibodi anti-PARK7/DJ-1(ab76008, Abcam; pencairan 1:1000) semalaman pada 4 darjah . Kemudian, membran itu dibasuh tiga kali dengan PBST dan diinkubasi dengan IgG anti-arnab kambing antibodi sekunder (SA00001-2, Kumpulan Proteintech; pencairan1:5000) pada suhu bilik selama 2 jam. Antibodi anti- -Tubulin(10759-1-AP, Proteintech Group; pencairan 1:1000) telah dianggap sebagai kawalan. Jalur protein divisualisasikan oleh reagen tindak balas chemiluminescence (ECL) yang dipertingkatkan. Ketumpatan jalur diukur dengan perisian QuantityOne Analysis v.4.6.9.

2.12. Analisis imunositokimia

Sel PC12 telah ditetapkan dalam 4 peratus paraformaldehid selama 15 minit pada suhu bilik selepas rawatan reperfusi [9]. Selepas paraformaldehid yang berlebihan dialih keluar, sel-sel tersebut diinkubasi dalam PBS yang mengandungi 0.3 peratus Triton X-100 selama 10 minit pada suhu bilik. Kemudian, sel-sel telah dibasuh dengan PBS tiga kali sebelum ia diinkubasi dengan 5 peratus serum kambing biasa selama 1 jam. Sel-sel tersebut kemudiannya diinkubasi dengan rantai sintase anti-ATP monoklonal tikus arnab (MABS1304, EMD Millipore, pencairan 1:200) untuk pewarnaan mitokondria dan seterusnya diinkubasi dengan antibodi anti-PARK7/DJ-1 (pencairan 1: 100) untuk menyelidik protein DJ-1. Sel-sel telah dibasuh dan diinkubasi dengan IgG-Alexa 488 anti-arnab kambing (hijau; A11034, Invitrogen; pencairan 1:1000) dan IgG-Alexa 594 anti-tikus kambing (merah; A11032; Invitrogen; pencairan 1:1000) untuk . min. Akhirnya, sel-sel itu dibasuh tiga kali dengan PBS dan dipasang pada slaid kaca dengan medium pelekap yang mengandungi DAPI. Imej imunofluoresen telah divisualisasikan dengan menggunakan Mikroskop Konfokal Pengimbasan Laser.

Polisakarida cistanche deserticolamempunyai aKesan neuroprotektif

2.13. Analisis data/statistik

Semua nilai ditunjukkan sebagai min ± SD. Kepentingan ditentukan oleh analisis varians Sehala (ANOVA), diikuti dengan ujian multi-perbandingan Dunnett. p < .05="" telah="" dianggap="" sebagai="" kepentingan="" statistik.="" data="" eksperimen="" dianalisis="" menggunakan="" perisian="" statistik="" spss="">

3. Keputusan

3.1. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)menghalang kerosakan sel yang disebabkan oleh OGD/RP

Sel PC12 yang terdedah kepada OGD/RP menunjukkan penurunan yang ketara dalam bilangan. Bentuk sel telah berubah dan membran sel telah pecah. Dalam ujian MTT, daya maju sel dalam CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan ({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml) masing-masing ialah 58.91 peratus ± 5.40 peratus , 61.13 peratus ± 3.81 peratus dan 68.57 peratus ± 3.24 peratus, p <.05 (rajah="" 1a)="" ,="" dan="" yang="" dengan="" kenderaan="" mempunyai="" 51.68="" peratus="" ±="" 3.89="" peratus.="" nilai="" ini="" menunjukkan="" bahawa="">(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)melindungi sel daripada kecederaan OGD/RP dan mengurangkan kematian sel. Tambahan pula, daya maju sel dalam kumpulan Nimo ialah 77.02 peratus ± 5.22 peratus , yang hampir sama dengan CDP 5 ug/ml(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan yang dirawat.

Dalam ujian NRU, daya maju sel dalam CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan ({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml) masing-masing ialah 52.03 peratus ± 4.72 peratus , 58.49 peratus ± 2.50 peratus dan 69.17 peratus ± 3.91 peratus, (Rajah 1B) dan itu dengan kenderaan mempunyai 47.14 peratus ± 2.88 peratus . Nilai menunjukkan kesan perlindungan CDP yang bergantung kepada kepekatan.

Berbeza dengan kenderaan (44.73 peratus ± 3.30 peratus ), pelepasan LDH dikurangkan dengan ketara dalam CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan. Dalam CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan ({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml), kadar kebocoran LDH masing-masing adalah 32.41 peratus ± 3.70 peratus , 27.13 ± 2.79 peratus dan 23.13 peratus ± 4.59 peratus, p <.01 (rajah="" 1c).="" selain="" itu,="" kadar="" kebocoran="" ldh="" dalam="" kumpulan="" nimo="" ialah="" 21.99="" peratus="" ±="" 4.02="" peratus="" ,="" yang="" hampir="" sama="" dengan="" dalam="" kumpulan="" 5="" ug/ml="" cdp="" yang="">

3.2. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)peningkatan yang disebabkan oleh OGD/RP [Ca2 plus ]i dilemahkan

Tahap Ca2 tambah intraselular dalam sel PC12 telah dipertingkatkan kepada 4146.60 ± 195.97 selepas kecederaan OGD/RP berbeza dengan kumpulan kawalan (373.62 ± 75.69). CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan ({{0}}}.05, 0.5 dan 5ug/ml) boleh mengurangkan tahap Ca2 tambah intraselular secara bergantung kepada 2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 dan 1768.43 ± 426.12 (Fig. ). Selain itu, tahap Ca2 tambah dalam kumpulan dirawat CDP 5 ug/ml menurun ke tahap yang setanding dengan kumpulan Nimo (1591.19 ± 213.21).

3.3. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)pelesapan MMP yang disebabkan oleh OGD/RP yang dilemahkan

Berbanding dengan kumpulan kawalan (1.67 ± 0.89), kumpulan kenderaan (0.48 ± 0.10) mempamerkan lebih banyak pendarfluor FL hijau berbanding FL merah pendarfluor (Rajah 2B dan D). Nisbah antara pendarfluor FL merah dan hijau telah dikurangkan kepada 1.11 ± 0.26 dan 1.18 ± 0.16 dalam CDP 0.5 dan 5 ug/ml(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan yang dirawat masing-masing, p <.01. pendarfluor="" fl="" hijau="" telah="" menurun="" dengan="">

3.4. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)menghalang apoptosis sel yang disebabkan oleh OGD/RP

Sel-sel yang mempamerkan kromatin pekat atau nukleus berpecah-belah telah dijaringkan sebagai sel apoptosis [30]. Keputusan ujian Hoechst33342 mendedahkan kemunculan nukleus pekat selepas OGD/RP (Rajah 3A dan C). Keamatan pendarfluor FL yang tinggi diperhatikan dalam nukleus dalam kumpulan kenderaan. Keamatan pendarfluor FL nukleus telah dilemahkan dalam CDP 5 ug/ml(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan yang dirawat. Kami menganalisis kadar apoptosis dalam sel PC12 oleh sesama sitometri menggunakan pewarnaan berganda FITC-Annexin V/PI (Rajah 3B dan D). Kumpulan kawalan mempunyai 4.16 peratus ± 0.24 peratus kadar apoptosis sel, manakala kumpulan kenderaan mempunyai 22.98 peratus ± 0.66 peratus . Dalam kumpulan 5 ug/ml CDP yang dirawat, kadar apoptosis sel ialah 7.86 peratus ± 1.16 peratus .

3.5. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)pengumpulan ROS intraselular OGD/RP yang dilemahkan dan status redoks yang dipelihara

Kesan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)pada tekanan oksidatif ditunjukkan berdasarkan penjanaan ROS, GSH-Px, aktiviti CAT, dan tahap T-AOC. Tahap ROS dalam sel PC12 yang cedera OGD/RP meningkat dan menjadi lebih tinggi dengan ketara berbanding kumpulan kawalan (p <.01). sementara="" itu,="" tahap="" ros="" dalam="">(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan ({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml) menurun mengikut cara bergantung kepada dos (p <.01; rajah="" 4a).="" selanjutnya,="" cdp="" juga="" meningkatkan="" tahap="" t-aoc="" (p=""><.05; rajah="" 4b),="" cat="" (p=""><.05; rajah="" 4c)="" dan="" gsh-px="" (p=""><.05; rajah="" 4d)="" dengan="" ketara="" berbanding="" kenderaan.="" kumpulan.="" aktiviti="" antioksidan="" endogen="" dalam="">(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)kumpulan bertambah.

3.6. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)merangsang rembesan DJ-1 dan mempertingkatkan ekspresi DJ-1

Perubahan kepekatan DJ-1 dalam supernatan sel telah dikesan dan mendedahkan kemungkinan hubungan antara DJ-1 dan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida). Keluaran DJ-1 diperhatikan daripada sel PC12 yang cedera OGD/RP (Rajah 5). DJ-1 telah dikawal selia dengan ketara dalam CDP 5 ug/ml(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)-kumpulan dirawat (38.66 ± 8.44 pg/ml) dan meningkat dengan ketara berbanding kumpulan kenderaan (18.33 ± 3.80 pg/ml, p <.01) dan kumpulan kawalan (9.67 ± 3.96 pg/ml, p <.01) .

Untuk menyiasat kesan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)pada ekspresi intrasel DJ-1, kami mengukur tahap protein DJ-1 dengan Western blotting. Tahap ekspresi protein DJ-1 meningkat dengan ketara 24 jam selepas reperfusi. Sebaliknya, rawatan pasca CDP 5 ug/ml dengan ketara meningkatkan ekspresi berlebihan DJ-1 berbanding dengan kumpulan kenderaan (p <.01, rajah="">

3.7. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)translokasi DJ{0}} dipertingkatkan ke dalam mitokondria

Sel PC12 telah diwarnai dengan antibodi anti-PARK7/DJ-1 dan anti-ATP synthase-chain (Rajah 7 dan 8). Anti-ATP synthase - rantai antibodi berkait dengan kompleks mitokondria I, dan antigen pengikat disetempat dalam membran dalam mitokondria. Keputusan mendedahkan bahawa DJ{10}} ditranslokasi ke membran dalam mitokondria berikutan penghinaan OGD/RP (Rajah 8). Sementara itu, hasil pewarnaan berganda DJ-1 dan mitokondria mendedahkan bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)memudahkan DJ- 1 translokasi mitokondria dan penyetempatan bersama (Rajah 8). Keputusan ini menunjukkan interaksi langsung antara DJ-1 danneuroprotektifkesan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)(Gamb. 9).

4. Perbincangan

Dalam kajian ini, kami melaporkan secara langsung bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)berkesan mengurangkan kerosakan sel PC12 yang disebabkan oleh OGD/RP melalui pengawalseliaan protein-1 DJ. CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)daya maju sel bertambah baik, kerosakan membran sel berkurangan, mengekalkan homeostasis Ca2 intraselular ditambah, menghalang kehilangan MMP, menurunkan apoptosis sel, menekan tekanan oksidatif, meningkatkan ekspresi DJ-1 dan mempertingkatkan translokasi DJ-1 ke dalam mitokondria. DJ-1 baru-baru ini terlibat dalam pengawalseliaanneuroprotektifkesan dan integriti mitokondria. Keputusan ini memberikan bukti yang meyakinkan tentangneuroprotektifkesan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)terhadap iskemia. Tambahan pula, interaksi antara CDP dan DJ-1 memainkan aneuroprotektifperanan dalam kerosakan sel PC12 yang disebabkan oleh OGD/RP. Keputusan di atas boleh membangunkan pemahaman kita tentang kesan berfaedah CDP dan boleh memberikan maklumat berguna untuk terapi strok pada masa hadapan.

Strok iskemia telah dikaitkan dengan siri kompleks mekanisme biokimia dan molekul, termasuk excitotoxicity, kelebihan kalsium, dan tekanan oksidatif [31]. OGD/RP digunakan secara meluas sebagai model in vitro iskemia-reperfusi dan digunakan untuk penerokaan perubahan neurologi dan biokimia. Talian sel PC12 sensitif kepada kecederaan OGD/RP [2]. Ia mempamerkan beberapa sifat dan ciri neuron bersimpati [32] dan dengan itu digunakan secara meluas talian sel neuron untuk penyelidikan yang berkaitan dengan mekanisme kerosakan neurologi akibat strok [33,34]. Banyak kajian telah menunjukkan bahawa tekanan oksidatif memainkan peranan penting dalam strok dan kerosakan iskemia otak [35-37]. DJ protein berkaitan penyakit Parkinson{10}} boleh menghalang kemerosotan saraf iskemia dan disfungsi tingkah laku dengan mengurangkan kecederaan neuron pengantaraan ROS [7]. Oleh itu, kami menggunakan model sel PC12 kecederaan OGD/RP untuk menyiasatneuroprotektifkesan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida).

Tahap kecederaan dalam sel PC12 yang disebabkan oleh OGD / RP dinilai oleh ujian pelepasan MTT, NRU, dan LDH. Pentadbiran CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)({{0}}.05, 0.5 dan 5 ug/ml) meningkatkan kemandirian sel dan mengurangkan pelepasan LDH. Kesan berfaedah rawatan CDP juga termasuk pengurangan kelebihan kalsium intraselular dan pemeliharaan MMP. Keabnormalan kepekatan Ca2 intraselular ditambah, terutamanya kelebihan kalsium mitokondria, telah dikaitkan dengan apoptosis neuron dan kematian yang disebabkan oleh strok iskemia [38]. MMP boleh mencerminkan kecekapan rantai pengangkutan elektron dan telah ditunjukkan sebagai indeks gangguan patologi sistem ini [39]. Kedua-dua peningkatan kepekatan Ca2 intraselular dan kehilangan MMP boleh menyebabkan ketidakstabilan struktur neuron dan akhirnya mengakibatkan kerosakan sel atau kematian sel [21,40]. Dalam kajian ini, keputusan menunjukkan bahawa CDP menghalang dengan ketara Ca2 intraselular ditambah beban dan meningkatkan tahap MMP dalam sel PC12 kecederaan OGD/RP. Apoptosis memainkan peranan penting dalam patofisiologi kompleks kecederaan iskemia-reperfusi serebrum. Peningkatan data mencadangkan bahawa apoptosis telah terlibat dalam disfungsi mitokondria; pelesapan MMP adalah peristiwa awal yang mengakibatkan apoptosis sel [8,39]. Apoptosis ialah proses kematian sel terprogram yang bergantung kepada tenaga untuk melupuskan sel berlebihan. Banyak neuron dalam strok iskemia akan mengalami apoptosis [41]. Dalam kajian ini, kami melakukan pewarnaan Hoechst33342 dan Annexin V-FITC/PI untuk mengkaji kesan CDP pada apoptosis [23,28]. Keputusan menunjukkan bahawa CDP mengekalkan integriti nukleus dan mengurangkan kadar apoptosis sel. Semua keputusan ini menunjukkan bahawa aktiviti anti-apoptosis CDP menyumbang kepada kesan yang baik dalam kecederaan neuron dalam sel PC12.

Sel-sel yang mengalami kerosakan iskemia yang disebabkan oleh pengumpulan ROS yang berlebihan, yang boleh menyebabkan peroksidasi lipid, kerosakan membran sel, kelebihan kalsium, dan disfungsi mitokondria, akhirnya mengakibatkan apoptosis sel dan kematian [42]. Penggunaan antioksidan endogen, seperti SOD, CAT, dan GSH-Px, juga menunjukkan kejadian Rajah 9. Mekanisme yang mungkin untuk kesan perlindungan CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)terhadap kerosakan sel PC12 yang disebabkan oleh OGD/RP. Rawatan CDP menyekat tekanan oksidatif, menstabilkan kepekatan Ca2 ditambah dan MMP, meningkatkan ekspresi-1 DJ dan penyetempatan dalam mitokondria. Y. Liu et al. Bioperubatan & Farmakoterapi 99 (2018) 671–680 678tekanan oksidatif semasa iskemia-reperfusi. Dalam kajian ini, kumpulan OGD/RP menunjukkan peningkatan ketara dalam ROS dan penurunan dalam CAT, GSH-Px, dan T-AOC berbanding kumpulan 5 ug/ml CDP yang dirawat. Walau bagaimanapun, kami melihat penurunan yang ketara dalam kadar penjanaan ROS dan penggunaan antioksidan endogen (CAT, GSH-Px, dan T-AOC) dalam kumpulan CDP. Kesan berfaedah dalam kumpulan CDP 5 ug/ml adalah hampir dengan kumpulan Nimo. Keputusan mencadangkan bahawa CDP menghalang penjanaan ROS dan memulihkan pertahanan antioksidan enzimatik.

DJ-1 ialah reaktif-redoks utamaneuroprotektifprotein yang terlibat dalam pengawalan tekanan oksidatif dalam strok. Kesan kebaikan ekspresi berlebihan DJ-1 termasuk kemandirian sel daripada reperfusi iskemia dan pemeliharaan fungsi dan morfologi mitokondria, seperti pemendakan pembukaan liang peralihan kebolehtelapan mitokondria [39,43]. Kajian terdahulu telah menunjukkan bahawa kesan perlindungan DJ-1 dalam sel yang terdedah kepada OGD/RP adalah berkaitan dengan sifat antioksidannya dan translokasi mitokondria [43–45]. DJ-1 melakukan perlindungan saraf endogen yang cekap dalam mengurangkan kecacatan mitokondria melalui translokasi [46]. Beberapa kajian telah menunjukkan bahawa translokasi DJ{10}} mungkin mempunyai kesan pada pergerakan mitokondria, meningkatkan interaksi sel-sel dan menggalakkan proses pro-kemandirian sel yang lain.

DJ-1 mempengaruhi beberapa proses, seperti penghijrahan dan lekatan sel, kemotaksis, percambahan dan apoptosis, dalam kedua-dua model in vitro dan in vivo [6,9,47,48]. Menggunakan model strok sel PC12 OGD/RP yang cedera, kami meneroka potensi hubungan antara CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)dan DJ-1. Ekspresi berlebihan DJ- 1 telah dikenal pasti oleh ELISA dan Western blotting. Bersama-sama dengan fungsi ini, penemuan utama dalam eksperimen menunjukkan bahawa ekspresi berlebihan yang ketara bagi DJ-1 berlaku apabila CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)(5 ug/ ml) telah ditadbir sebelum reperfusi. Ini mencadangkan kemungkinanneuroprotektifkesan dalam hubungan CDP dan DJ-1. Selain itu, kami telah memerhatikan bahawa DJ-1 terletak dalam mitokondria di bawah keadaan OGD/RP dan ekspresi DJ yang banyak-1 mengurangkan sensitiviti selular kepada ROS dan menghalang tekanan oksidatif [45]. Keputusan menunjukkan bahawa CDP mengawal selia dan meningkatkan DJ-1, yang bertindak sebagai penghubung molekul antara disfungsi mitokondria dan tekanan oksidatif dan menyediakan perkembangan kematian sel sekunder yang wujud dalam strok [5,47,49–51]. Selaras dengan penstabilan DJ-1 dalam mitokondria, CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)rawatan meningkatkan survival sel, menstabilkan Ca2 ditambah homeostasis, memperbaiki pelesapan MMP, dan menghalang apoptosis berkaitan mitokondria [43]. Secara keseluruhan, keputusan kami menunjukkan bahawa CDP menggunakan novelneuroprotektifmekanisme dalam rawatan strok iskemia.

5. Kesimpulan

Keputusan kami menunjukkan bahawa CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)melindungi sel PC12 daripada kecederaan yang disebabkan oleh OGD/RP melalui kesan antioksidannya, yang sebahagiannya dikaitkan dengan laluan pengantara DJ-1. Kesan ini termasuk penurunan dalam kadar kerosakan membran sel, pengekalan homeostasis [Ca2 plus ] I, pemulihan pelesapan MMP, perencatan apoptosis sel, pengecilan ROS intrasel dan modulasi tahap DJ-1. Keputusan juga menunjukkan bahawa interaksi antara CDP dan DJ-1 menguatkan perlindungan saraf dan mengekalkan integriti mitokondria. Oleh itu, neuron yang terdedah boleh dilindungi oleh CDP(Cistsakit hatideserticolapolisakarida)melalui peningkatan ekspresi DJ-1 semasa strok iskemia.

Ucapan terima kasih

Kajian ini disokong oleh Yayasan Sains Semula Jadi Kebangsaan China (geran 81360649), Program Utama Sains dan Teknologi Kebangsaan (geran 2015BAK45B01), dan Program Sokongan Sains dan Teknologi Wilayah Autonomi Ningxia Hui (geran 2016BZ07).

Polisakarida cistanche deserticolamempunyai a Kesan neuroprotektif

Rujukan

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans melindungi neuron kortikal daripada ketoksikan yang disebabkan oleh hipoksia dengan menurunkan kawal selia HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Strok 1-2-0: program tindak balas pantas untuk strok di China, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Novel terapeutik strok: membongkar patofisiologi strok dan kesannya terhadap rawatan klinikal, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, patofisiologi berkaitan oksidase NADPH dalam model eksperimen strok, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, Keadaan pengoksidaan DJ{{ 1}} menentukan nasib sel sebagai tindak balas kepada tekanan oksidatif yang dicetuskan oleh 4-hpr: autophagy atau apoptosis? Tanda Antioksida Redoks. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 memperbaiki kematian sel iskemik secara in vitro mungkin melalui laluan mitokondria, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira, et al., DJ{{ 1}} melindungi daripada degenerasi neuro yang disebabkan oleh iskemia serebrum fokus dan reperfusi pada tikus, J. Cereb. Aliran darah. Bertemu. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, sel saraf primer tikus yang kekurangan oksigen-glukosa mempamerkan translokasi DJ-1 ke dalam mitokondria yang sihat: sasaran terapeutik strok yang kuat, CNS Neurosci. Di sana. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Cyclosporine A memansuhkan kematian sel neuron akibat iskemia dengan memelihara integriti mitokondria melalui pengawalseliaan DJ protein berkaitan penyakit Parkinson-1, CNS Neurosci. Di sana. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu, et al., Prarawatan dengan natrium Phenylbutyrate Mengurangkan iskemia serebrum/ kecederaan reperfusi dengan mengawal selia protein-1 DJ, Depan. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Kajian neurofarmakologi, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Salah satu hadiah farmaseutikal terbaik perubatan tradisional Cina, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Kesan dan mekanisme perubatan Herba Cina dalam memperbaiki kecederaan reperfusi iskemia miokardium, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches merangsang kitaran redoks glutation selular oleh spesies oksigen reaktif yang dihasilkan daripada respirasi mitokondria dalam kardiomiosit H9c2, Pharm. biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Ginseng gurun": ulasan, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,Cistanchedeserticolamerebus mengurangkan ketoksikan testis yang disebabkan oleh hidroksiurea dalam tikus jantan, Asian J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Penyiasatan terhadapneuroprotektifkesan nimodipine pada sel Neuro2a melalui model tekanan seperti pembedahan, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektifkesan noscapine pada kecederaan kekurangan oksigen-glukosa serebrum, Pharmacol. Rep. 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A melindungi daripada kerosakan iskemia dalam budaya primer neuron kortikal tikus selepas kekurangan oksigen-glukosa diikuti oleh reperfusi, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, Trans-cinnamaldehyde melindungi sel PC12 terhadap kekurangan oksigen dan glukosa /reperfusi (OGD/R)-kecederaan yang disebabkan oleh anti-apoptosis dan tekanan anti-oksidatif, Mol. Biokim Sel. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Kesan perlindungan aloin pada oksigen dan kecederaan akibat kekurangan glukosa dalam sel PC12, Brain Res. lembu jantan. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrol melindungi sel PC12 iskemik dengan menghalang faktor transkripsi berkaitan hipoksia dan meningkatkan tahap enzim pertahanan antioksidan, ACS Kimia. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B melindungi sel PC12 daripada kematian neuron akibat kekurangan glukosa oksigen dengan mengekalkan homeostasis mitokondria melalui induksi bergantung kepada ubiquitin degradasi protein p53, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu, et al., Kesan perlindungan aloperin pada primer tikus neonatal neuron hippocampal berbudaya cedera oleh kekurangan oksigen-glukosa dan reperfusi, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parecoxib melindungi neuron kortikal tetikus terhadap neurotoksisiti yang disebabkan oleh OGD/R dengan mengawal selia Bcl-2, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 menstabilkan ekspresi HER2 dan mengekalkan populasi sel stem kanser dalam sel kanser ovari, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, Melindungi sel RGC-5 daripada H(2)O( 2) penghinaan tekanan oksidatif yang disebabkan dengan mengaktifkan laluan Isyarat PI3K/Akt/eNOS, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, Ekstrak propolis diklorometana melindungi sel daripada tekanan oksidatif akibat kekurangan oksigen-glukosa Y. Liu et al. Bioperubatan & Farmakoterapi 99 (2018) 671–680 679melalui mengurangkan apoptosis, Nutr Makanan. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektifkesan neuroserpin dalam kekurangan oksigen-glukosa dan astrosit tikus yang dirawat dengan reoksigenasi secara in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Ion litium melemahkan apoptosis yang disebabkan oleh kekurangan serum dalam sel PC12 melalui pengawalan isyarat Akt/FoxO1 laluan, Psikofarmakologi (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan, et al., Kemas kini ringkasan eksekutif penyakit jantung dan strok 2016. Laporan daripada Persatuan Jantung Amerika, Sirkulasi 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Peraturan tapak pengikat ligan muskarinik oleh faktor pertumbuhan saraf dalam sel phaeochromocytoma PC12, Alam 297 (1982) 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanolone melemahkan apoptosis yang disebabkan oleh glukosa tinggi dan menghalang kesakitan neuropatik diabetik eksperimen: kajian in vitro dan in vivo, J. Steroid Biochem. Mol. biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrol melindungi sel PC12 daripada apoptosis yang disebabkan oleh OGD/R melalui laluan isyarat pengantaraan mitokondria, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oksidase sebagai sumber tekanan oksidatif dan sasaran molekul dalam iskemia/reperfusi kecederaan, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, Kesan pelindung organ ekstrak wain merah, resveratrol, dalam kecederaan reperfusi pengantara tekanan oksidatif, Oxid. Med. Sel Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, VV Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Mekanisme pengaktifan mPTP yang berbeza dalam reperfusi iskemia: sumbangan Ca2 tambah tambah , ROS, pH dan polifosfat tak organik, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Prakondisi etanol dos rendah melindungi daripada kekurangan oksigen-glukosa/ Kecederaan neuron akibat Reoksigenasi dengan mengaktifkan konduktans besar , Ca2 tambah tambah -diaktifkan K tambah tambah Saluran In Vitro, Neurosci. lembu jantan. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Kesan menghalang pembelahan mitokondria pada metabolisme tenaga dalam neuron hippocampal tikus semasa kecederaan iskemia/reperfusi, Neurol. Res. (2016) 1–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun, et al., Kesan perlindungan daripada Lycium barbarum polysaccharide pada neuron hippocampal kultur primer tikus neonatal yang cedera oleh kekurangan oksigen-glukosa dan reperfusi, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Mekanisme apoptosis selepas iskemia serebrum, Strok 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin melindungi astrosit daripada hipoksia in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, kinase protein yang bergantung kepada kalsium/calmodulin mengawal PINK1/Parkin dan DJ{{3} } laluan mitophagy semasa sepsis, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 ialah pengantara penting bagi tindak balas selular yang disebabkan oleh hipoksia, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, kinase protein yang bergantung kepada kalsium/calmodulin mengawal PINK1/ Laluan Parkin dan DJ-1 mitophagy semasa sepsis, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3rd, RC Liddington, SA Lipton, Transnitrosilasi daripada DJ-1 kepada PTEN melemahkan kematian sel neuron dalam model penyakit Parkinson, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 melindungi daripada kematian sel berikutan kecederaan reperfusi iskemia jantung akut, Sel Kematian Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} ialah biomarker serum yang boleh dipercayai untuk membezakan kanser endometrium berisiko tinggi, Tumor Biol. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan, et al., DJ-1 protects the nigrostriatal paksi dari MPTP neurotoksin dengan modulasi laluan AKT, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, DJ protein penyakit Parkinson-1 ialahneuroprotektifdisebabkan oleh penyetempatan mitokondria yang didorong oleh asid sistein-sulfinik, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, Perencatan akibat Hiperglisemia DJ-1 ekspresi menjejaskan keberkesanan kardioproteksi postconditioning iskemia pada tikus, Oxid. Med. Sel Longev. (2013) (2013) 564902.