Perubahan dalam aktiviti antioksidan semasa penapaian enzim

Bab 4 Perubahan dalam aktiviti antioksidan semasa penapaian enzim

Buah -buahan kaya dengan nutrien dan datang dalam pelbagai jenis. Pengeluaran bahan semasa penapaian adalah kompleks dan bervariasi, dan terdapat banyak kajian mengenai merekaaktiviti antioksidan. Orang selalu meneroka dan menemui, mencari makanan yang bermanfaatkesihatan manusia, jadi enzim telah menjadi topik hangat dalam beberapa tahun kebelakangan ini. Proses pengeluaran enzim tradisional adalah untuk mendapatkan enzim dengan penapaian semulajadi buah -buahan dan sayur -sayuran. Berdasarkan penyelidikan terdahulu, artikel ini menambah 4 bakteria penapaian yang bermanfaat. Bakteria ini sendiri juga wujud dalam enzim. Selepas penambahan bakteria tambahan, bilangan dan jenis mikroorganisma dalam proses penapaian berubah. Apakah kesan perubahan ini terhadap aktiviti antioksidannya? Dalam bab sebelumnya, kami mengambil epal sebagai contoh untuk penjelasan terperinci. Perbandingan aktiviti antioksidan kumpulan eksperimen dan kumpulan kawalan pada kepekatan enzim yang berbeza menunjukkan bahawa aktiviti antioksidan enzim dalam kumpulan eksperimen adalah lebih besar daripada kumpulan kawalan. Keamatan aktiviti antioksidan juga mencerminkan kebolehpercayaan enzim dengan cara tertentu.

Herba baru Cistanche dengan kuasa antioksidan yang kuat

 

Perkhidmatan sokongan Wecistanche-Pengeksport Cistanche terbesar di China:
E -mel: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

Bab ini menambah buah -buahan biasa pear dan sitrus ke percubaan asal, dan menjejaki dan mengesan perubahan dalam merekaaktiviti antioksidanSemasa penapaian. Berdasarkan mengurangkan kos, melalui eksperimen, kami berharap dapat mencerminkan aktiviti biologi enzim yang lebih komprehensif selepas menambahkan bakteria, dan menyediakan asas teoritis tertentu dan sokongan data untuk pengeluaran enzim mikrob Binokulasi buatan strain.

 

 

 

4.1 Bahan dan Kaedah

4.1.1 Bahan

(1) Bahan eksperimen

Basuh epal segar, pir dan buah sitrus dengan air steril di bawah keadaan steril, keringkan secara semulajadi di atas meja operasi steril, kupasnya dan potong mereka untuk kegunaan kemudian. Masukkan gula putih dan buah -buahan ke balang kaca yang disterilkan pada nisbah massa 1: 1. Aktifkan bakteria yang diperlukan untuk eksperimen dan inokulasi mereka ke dalam enzim mengikut skema yang optimum (langkah operasi ini ditinggalkan untuk kumpulan kawalan), menutupnya dan meletakkannya di tempat yang sejuk dan kering. Ambil sampel pada tempoh masa penapaian yang berlainan pada suhu bilik untuk mendapatkan semua cecair enzim yang mengandungi pulpa buah, dan menapisnya. Ambil supernatan sebagai sampel eksperimen, dan gunakannya untuk mengukur data yang relevan selepas menyentuhnya pada 10, 000 rpm dalam centrifuge berkelajuan tinggi selama 15 minit. Perlu diingat bahawa dalam proses membuat enzim, untuk mengelakkan pencemaran yang tidak perlu, semua operasi kami dijalankan di bawah keadaan steril.

(2) Instrumen utama

Instrumen yang diperlukan untuk eksperimen adalah sama dengan 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Kaedah

(1) Perubahan jumlah kandungan fenol semasa penapaian

450μl larutan sampel telah ditambah dengan air suling untuk membuat volume 46ml, dan kemudian 1ml reagen folin-phenol telah ditambah. Campurkan dengan baik dan bertindak balas untuk 3min. Kemudian 3ml 20% NACO3 telah ditambah. Campuran digoncang dalam mandi air suhu tetap pada 25 darjah selama 2h. Air suling digunakan sebagai kawalan kosong. Penyerapan A diukur pada 760nm oleh spektrofotometer. Tiga replika dilakukan untuk setiap rawatan. Kandungan fenol total dikira mengikut persamaan lengkung standard.

(2) perubahan dalam mengurangkan kuasa semasa penapaian

Tambah 45 0 μl sampel kepada 2.5ml penampan fosfat dengan kepekatan 0. 2mol/l dan nilai pH 6.6, kemudian tambah 2.5ml kalium ferricyanide (w/v) (w/v) Dengan kepekatan massa sebanyak 10%, centrifuge pada 3000rpm selama 10 minit, ambil dan segera menarik 2.5ml supernatan ke dalam botol volumetrik, tambah 2.5ml air sulingan dan 0.5ml ferric chloride (w/v) dengan kepekatan massa sebanyak 0.1%. Gunakan air suling sebagai kawalan kosong, dan ukur penyerapan A pada panjang gelombang 700nm dengan spektrofotometer. Lakukan 3 replika untuk setiap rawatan. Kekuatan pengurangan kuasa ditentukan berdasarkan nilai penyerapan.

 

(3) Perubahan keupayaan pemusnahan radikal anion superoxide semasa penapaian
Tempat 4.5 ml 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8.2 Tris-HCl buffer dalam mandi air suhu tetap dan menyesuaikan suhu hingga 25 darjah. Selepas 20 minit, tambahkan 1 mL larutan sampel enzim dan 0.4 mL larutan pyrogallol dengan kepekatan molar 25 mmol/L. Campurkan dengan baik dan letakkan dalam mandi air 25 darjah selama 5 minit. Tambah 1.0 ml 8 mol/L HCl untuk menamatkan tindak balas. Gunakan penampan Tris-HCl sebagai rujukan dan gunakan spektrofotometer untuk mengukur penyerapan A pada 299 nm untuk mengira kadar pemotongan. Kumpulan kawalan kosong menggunakan 1 ml pelarut dan bukan sampel. Kadar pemotongan radikal anion superoxide dikira mengikut Formula 4.1: Kadar Scavenging Radikal Anion Superoxide (%)=(A 1- A2)/A1 × 100 (4.1) di mana: A1 adalah penyerapan kumpulan kawalan kosong; A2 adalah penyerapan penyelesaian sampel enzim kumpulan eksperimen.

 

(4) Perubahan keupayaan pemusnahan radikal hidroksil semasa penapaian

 

Tambah air ke 45 0 μL penyelesaian sampel ke 2ml, kemudian masukkannya ke 1.4mL hidrogen peroksida dengan kepekatan massa molar 6mmol/L, kemudian tambah 0.6ml natrium salisilat dengan kepekatan massa molar mary mary/l dan 2ml Mandi pada 37 darjah selama 1H. Zero dengan air suling, dan mengukur penyerapan A pada panjang gelombang 562nm dengan spektrofotometer. Tiga replika dilakukan untuk setiap rawatan. Kadar pemotongan radikal hidroksil dikira mengikut formula 4.2: kadar pemotongan radikal hidroksil (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.2) di mana: A1 adalah penyerapan purata kosong; A2 adalah penyerapan purata penyelesaian sampel.

 

(5) Perubahan keupayaan pemusnahan radikal bebas DPPH semasa penapaian
Pindahkan dengan tepat 2 mL larutan sampel enzim ke kelalang volumetrik 1 0 ml, kemudian tambah 2 mL larutan berair etanol 80% ke dalam kelalang volumetrik, dengan kepekatan massa molar 2 × × {5}} mol/l. Campurkan dengan baik dan biarkan pada suhu bilik selama 30 minit. Ambil penyelesaian etanol 80% sebagai rujukan dan ukur penyerapan sampel pada panjang gelombang 517 nm, yang direkodkan sebagai A1. Campurkan 2 mL larutan DPPH dan 2 mL larutan etanol 80%, dan mengukur penyerapan mereka pada panjang gelombang yang sama, yang direkodkan sebagai A0. Campurkan 2 mL larutan enzim dan 2 mL larutan etanol 80%, dan mengukur penyerapan mereka pada panjang gelombang yang sama, yang direkodkan sebagai A2. Tiga replika dilakukan untuk setiap rawatan. Kirakan kadar pemotongan radikal bebas DPPH mengikut Formula 4.3:
DPPH kadar pemotongan radikal bebas (%) {0}} [1- (a 1- a2)/a 0] × 100 (4.3) A2 adalah penyerapan penyelesaian enzim 2 mL dan 2 ml 80% penyelesaian campuran etanol; A0 adalah penyerapan larutan 2 ml DPPH dan 2 mL 80% penyelesaian campuran etanol.

(6) Perubahan keupayaan pemusnahan radikal ABTS semasa penapaian
Penyelesaian sampel 8 μl ditambah kepada 10 μL dengan penampan fosfat (5 mmol/L pH 7.4) dan kemudian dicampur sama rata dengan 10 mL kalium sulfat dan larutan campuran ABTS untuk bertindak balas pada suhu tindak balas 30 darjah dan masa tindak balas 5 minit. Zero larutan dengan air suling dan mengukur penyerapan A pada panjang gelombang 734 nm menggunakan spektrofotometer. Tiga replika dilakukan untuk setiap rawatan. Kadar pemotongan radikal bebas ABTS dikira mengikut Formula 4.4:
ABTS kadar pemotongan radikal bebas (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (4.4) di mana: A1 adalah penyerapan kumpulan kawalan kosong; A2 adalah penyerapan kumpulan percubaan sampel.