Kesan Cistanche Pada Perubahan ATPase dalam Mitokondria Hati Tikus Septicemia

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Geng Wang Zhiqiang Yin

Abstrak: Objektif:Untuk mengkaji perubahanAktiviti ATPase mitokondria hati dalam sepsisdan kesanCistanchedi atasnya.Kaedah:40 tikus SD secara rawak dibahagikan kepada kumpulan operasi palsu, kumpulan kawalan 12 jam, kumpulan pentadbiran 12 jam, kumpulan kawalan 16 jam, dan kumpulan pentadbiran 16 jam. TheSepsismodel telah direplikasi oleh ligation cecal dan penembusan (C LP) dan dibandingkan. Kadar survival kumpulan, tekanan arteri min (MAP), hatimitokondria ATPaseperubahan aktiviti.Keputusan:Selepas tikus meniru model sepsis,ATPaseaktiviti hatimitokondriamenurun, dan kadar survival 24 jam menurun dengan ketara. TheATPaseaktiviti mitokondria hati selepas pentadbiranCistanchetelah bertambah baik dengan ketara berbanding dengan kumpulan kawalan (P<0.05), which="" was="" significantly="" positively="" correlated="" with="" the="" reduction="" of="" rat="" mortality.="">Kesimpulan:Mengurangkan mitokondriaAktiviti ATPase di sepsis, beban kalsium sel, dan edema dan nekrosis adalah penyebab langsung kematian ditikus septik.Cistanche meningkatkan aktiviti ATPaseadalah mekanisme penting untuk rawatanSepsis.

Kata kunci: Cistanche, cistanche sepsis mitochondria ATP enzyme

Sepsisadalah penyakit kritikal secara klinikal. Walaupun antibiotik telah dikemas kini dalam tempoh 30 tahun yang lalu, kadar kematian sepsis tidak menurun dengan ketara dan masih setinggi 50% [1]. Rawatan antibakteria Barat "menghapuskan kejahatan" sahaja tidak meningkatkan prognosisSepsis.Dalam patogenesis TCM, sepsis tergolong dalam "kebenaran kekurangan dan kejahatan", rawatan mesti berdasarkan prinsip "memperkukuhkan badan" dan "menghapuskan kejahatan". Perubatan tradisional Cina telah menunjukkan potensi besar dalam rawatan sepsis.Sepsisrumit oleh kegagalan organ berganda adalah punca utama kadar kematian yang tinggi, dan kerosakan struktur sel adalah asas patologi mikroskopik kegagalan organ berganda [2]. Cistanche adalah perubatan tradisional Cina untuk tonik, kajian farmakologi moden telah menunjukkan bahawaCistanchemempunyai kesan menentang ester peroksidasi membran dan melindungi fungsi sel [3]. Fungsitenaga mitokondriametabolisme adalah salah satu fungsi asas sel, dan aktivitiATPaseadalah penunjuk penting untuk mengukur fungsitenaga mitokondriaMetabolisme. Dalam eksperimen ini, kami melihat perubahanATPaseaktiviti sel hati ditikus septikdan hubungan antara kesanCistanchedi atasnya dan kematian tikus dan bertujuan untuk menyediakan asas teori dan penerokaan yang berkesan untuk rawatan "pengukuhan" klinikalSepsis.

Cistanche

1. Bahan dan kaedah

1.1 Reagen

Cistanchedibeli dari Xinjiang (dikenal pasti oleh Profesor Tan Defu dari Sekolah Perubatan Universiti Three Gorges). 200g Cistanche kering telah diambil dan dikunyahkod dua kali dalam air suling. Penapis telah disejat dan tertumpu kepada kepekatan 1g/ml. Sodium Pentobarbital (001104), China National Pharmaceutical Group Shanghai ChemicalReagenSyarikat;Reagen ATPase(20030108), Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute.

1.2 Model haiwan eksperimen dan pengelompokan

40 tikus SD lelaki (dibeli dari Pusat Haiwan Eksperimen Kolej Perubatan Tongji, Universiti Sains dan Teknologi Huazhong), secara rawak dibahagikan kepada 5 kumpulan: kumpulan operasi palsu (n = 8), kumpulan kawalan 12 jam (n = 8), kumpulan pentadbiran 12 jam (n = 8), kumpulan kawalan 16 jam (n = 8), kumpulan pentadbiran 16 jam (n = 8). Kumpulan operasi palsu dan kumpulan kawalan diberi salin biasa oleh gavage, dan kumpulan pentadbiran adalah gavage dengan 1 g / ml Cistanche, dua kali sehari, sehingga 15 hari. Themodel sepsistelah direplikasi oleh ligasi cecal dan penembusan [4]. Sebelum operasi, haiwan itu bebas minum air dan berpuasa selama 12 jam.

1.3 Penentuan tekanan arteri min

Urat jugular dimasukkan dengan jarum kulit kepala, heparin digunakan untuk antikoagulasi, arteri karotid biasa kiri dicantumkan ke lengkungan aorta, dan kateter buatan sendiri disambungkan ke instrumen multichannel biologi, dan rata-ratatekanan arteri(MAP) telah direkodkan. Eksperimen selepas MAP stabil.

1.4 Penentuan aktiviti ATPase mitokondria

Ambil 6g hati tikus dan cepat letakkan di dalam medium pemisahan 0 ° C [250mmol sukrosa, 2mmol ethoxy-ethyl piperazine 2-ethyl sulfonic acid, 0.1mmol asid etilenadiaminetetraacetic, pH7.4], buka dan basuh kekotoran, Pisahkan penggantungan sederhana (1: 10), homogenkan dengan homogenizer elektrik Teflon (1200r / min), sentrifuge pada 2000r / min selama 10 minit, mengekalkan supernatant, sentrifuge pada 10000r / min selama 15 minit, buang supernatant, Ambil mendakan dan menggantungnya dalam 2ml medium pemisahan untuk mendapatkan apenggantungan mitokondria. Seluruh proses dijalankan pada 0 hingga 4 °C. Kaedah penentuan fosforus [5] digunakan untuk mengukurAktiviti ATPase(kit itu dibeli dari Institut Kejuruteraan Biologi Nanjing Jiancheng).

1.5 Pemprosesan statistik

Data eksperimen semuanya dinyatakan sebagai min±hanstandard (X±S), dan perisian SPSS melakukan analisis sehala varians dan analisis korelasi.

Ekstrak Cistanche

2. keputusan

2.1 Kesan Cistanche pada tekanan arteri min dan kematian tikus 24 jam

Tekanan darah kumpulan kawalan menurun dengan ketara pada 12 jam selepas ligasi cecal dan penembusan, dan ia menjadi lebih jelas pada 16 jam. Berbanding dengan kumpulan operasi palsu, terdapat perbezaan yang ketara. Tekanan darah dariRawatan Cistanchekumpulan telah bertambah baik. Kadar kematian kumpulan kawalan jauh lebih tinggi daripada kumpulan operasi palsu, dan kadar kematian kumpulan pentadbiran jauh lebih rendah daripada kumpulan kawalan yang sepadan.

2.2 Kesan Cistanche pada aktiviti MITokondria ATPase

Aktiviti-aktivitinatrium-kalium ATPase, kalsium ATPase, magnesium ATPase, dan kalsium-magnesium ATPasedalam kumpulan pentadbiran jauh lebih tinggi daripada kumpulan kawalan yang sepadan, mencapai tahap kumpulan operasi palsu, yang secara positif dikaitkan dengan pengurangankematian tikus(r=0.834) ).

Cistanche

3. Perbincangan

Na +-K+ -ATPase, juga dikenali sebagai pam natrium-kalium, memainkan peranan fisiologi penting dalam mengekalkan aktiviti fisiologi sel, suhu badan, dan metabolisme normal, dan mengawal keseimbangan ion di dalam dan di luar sel.Dalam sepsis, terdapat disfungsi pam natrium yang teruk dalam membran mitokondria dalaman, menyebabkanmitokondriaedema. TheNa+ -K+-ATPenzim rosak, ketidakseimbanganmitokondriakepekatan ion meningkat, aktiviti enzim metabolisme tenaga dihalang, bekalan tenaga sel habis, dan edema sitotoksik disebabkan. Pada masa yang sama, kebolehtelapan membran meningkat, yang akhirnya membawa kepada kematian sel. Dalam eksperimen, kami mendapati bahawa mitokondriaNa+-K+-ATPaseaktiviti hepatosit septik dikurangkan dengan ketara (P<0.01), indicating="" that="" the="" liver="" tissue="" is="" seriously="" damaged.="" after="" administration="" of="" cistanche,="" the="">Na+-K+-ATPaseaktivitihati mitokondriameningkat dengan ketara (P<0.05), and="" the="" mortality="" of="">tikus septiktelah dikurangkan dengan ketara. Hasil eksperimen menunjukkan bahawa penurunanNa+ -K+ -Aktiviti ATPaseberkait rapat dengan perkembangansepsis dalam tikus. PerencatanNa+ -K + -Aktiviti ATPase, edema sel, dan kematian yang membawa kepada kegagalan organ berganda mungkin merupakan perkembangan pesat sepsis. Salah satu mekanisme penting. Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, terdapat banyak laporan mengenaiNa + -K + -ATPasedan banyak penyakit, yang telah menarik perhatian pekerja klinikal dan asas. Adalah sangat penting untuk mengkaji undang-undang perubahan dalam aktivitiNa + -K + -ATPasedan peraturannya [6]. Sedikit yang diketahui mengenai mekanisme khususNa + -K+-ATPasedalam pembangunan dan hasilSepsisdan penyelidikan lanjut diperlukan.

Kestabilan kalsium intraselular dan magnesium adalah asas bahan yang diperlukan untuk mengekalkan tindak balas pelepasan intraselular dan penghantaran maklumat [7]. Dalam percubaan, penurunanCa2 + -Aktiviti ATPasedalam kumpulan kawalan secara langsung mempengaruhi aktiviti pam kalsium, dan penurunan aktiviti pam kalsium melemahkan perananmitokondriapam kalsium untuk mengeluarkan Ca2 + keluar dari sel, dan Ca2 + beban berlebihan dimitokondria. Beban kalsium dalam mitokondria adalah punca pentingmitokondriagangguan fosforilasi oksidatif, kerosakan struktur, dan nekrosis sel [8, 9]. Ca2 + beban berlebihan mengurangkan potensi membran mitokondria dan kandungan ATP tisu [10], dan penggunaan tenaga sel tisu terjejas. Ca2+ boleh mengaktifkan phospholipase pada mitokondria, menyebabkan kerosakan padamembran mitokondria, memusnahkan fungsi sintesis ATP biasa mitokondria, dan menghalang pengeluaran tenaga mitokondria [11]. Gangguanmetabolisme kalsium mitokondriaboleh menjejaskan secara langsungfungsi pernafasan mitokondriaMenyebabkanoksigen mitokondriagangguan pengambilan dan pengoksidaan proton dalam rantaian pengangkutan elektron [12]. Pada masa yang sama, peningkatan Ca2+ boleh memburukkan lagi kerosakan ester peroksidasi kepada mitokondria [13]. Ini semua secara langsung atau tidak langsung membawa kepada kegagalan bekalan tenaga sel dan kematian tisu dan organ dan mempercepatkan perkembangan perubahan patologi dalam sepsis. Dalam eksperimen, kami juga mendapati bahawa aktiviti-aktivitiM g2 + -ATPase dan Ca2 +-M g2 + -ATPase dalam tikus septikjuga menurun dengan ketara.Mg2 + -ATPase dan Ca2 + -M g2 + -ATPaseadalah bahan penting untuk mengekalkan keseimbangan kalsium dan magnesium intraselular. Widner melaporkan bahawa penurunan ion magnesium intraselular adalah faktor penyebab kerosakan sel yang tidak dapat dipulihkan, dan nisbah Mg 2 +/Ca2 + adalah Penunjuk penting yang mencerminkan kerosakan sel yang tidak dapat dipulihkan [14]. TheMg2 + -ATPase dan Ca2 + -M g2 +-ATPaseaktivitiCistanche-kumpulan yang ditadbir telah dipertingkatkan, TPase adalah sulfhydrylase, danCistanchemempunyai kesan peroksidasi anti-membrane ester, yang mungkin disebabkan oleh peningkatanATPaseaktiviti oleh Cistanche Basis of Chemistry and Basis of Pharmacology [15].

Dalam sepsis, mitokondriagangguan metabolisme tenaga, menurunAktiviti enzim ATP, edema mitokondria, beban kalsium intraselular, dan gangguan keseimbangan kalsium-magnesium adalah punca langsung kematian sel sepsis dan kegagalan organ berganda.Cistancheantagonizes membran ester peroksidasi, meningkatkan aktiviti ATPase, mengekalkan kalsium intraselular dan magnesium homeostasis, dan melindungi operasi normal fungsi sel.Cistancheadalah mekanisme penting untuk mengurangkan kematiantikus septik. Ia menunjukkan prospek yang baikCistanche dalam rawatan sepsis