Profil Kimia, Aktiviti Sitotoksik Dan Pengurangan Tekanan Oksidatif Ekstrak Syringa Vulgaris L. Berbeza Bahagian 2

Sila hubungioscar.xiao@wecistanche.comuntuk maklumat lanjut

2.5. Ujian Aktiviti Antioksidan

Kapasiti antioksidan in vitro ekstrak S.wulgaris telah dinilai melalui tiga kaedah berbeza:2,2-ujian penghapusan diphenyl-picrylhydrazil(DPPH●), kuasa antioksidan penurun ferik(FRAP) dan kapasiti antioksidan pengurangan ion cupric( CUPRAC)(Jadual 9). Tiga kaedah yang digunakan telah dipilih untuk membawa hujah yang membuktikan kapasiti antioksidan sampel yang diuji oleh tiga mekanisme berbeza [31-33].

Aktiviti antioksidan untuk bunga dan buah S.vulgaris dilaporkan oleh Toth et al. menggunakan ujian pelunturan DPPH dan mendedahkan aktiviti antioksidan yang berkesan bagi ekstrak metanol ini dengan IC50 =65.25 ug/mL dan IC50 =67.39 ug/mL, masing-masing [10]. Ujian yang sama digunakan oleh Varga et al. dan menunjukkan seorang yang unggulantioksidanaktiviti ekstrak daun dan kulit kayu （IC0=25.25ug/mL, IC0 =40.61 ug/mL masing-masing）【11】. Kajian kami mendedahkan bahawa ekstrak bunga menunjukkan ketara (hlm<0.001)higher antioxidant="" activity="" （ic50="36.83" μg/ml）="" compared="" to="" the="" other="" analyzed="" extracts="" in="" the="" following="" order:="" flowers="">leaves >kulit > buah (Jadual 9). Keputusan yang sama untuk ekstrak bunga diperolehi oleh ujian CUPRAC dan FRAP (ms<0.001). moreover,="" the="" present="" study="" brings="" originality="" by="" offering,="" for="" the="" first="" time,="" proof="" of="" the="" antioxidant="" capacity="" of="" the="" tested="" samples="" by="" different="" other="" mechanisms="" that="" are="" highlighted="" using="" the="" two="" other="" assays,="" frap,="" and="" cuprac.="" at="" the="" same="" time,="" the="" study="" offers="" for="" the="" first="" time="" a="" comparative="" view="" on="" flowers,="" fruit,="" leaves,="" and="" bark,="" bringing="" evidence="" on="" the="" fact="" that="" flowers="" represent="" the="" most="" important="" antioxidant="">

Sila klik di sini untuk mengetahui lebih lanjut

Selain itu, keaslian yang dibawa oleh ujian yang dilakukan, kajian kapasiti antioksidan sampel yang diuji menjadi lebih penting, kerana ia mewakili asas aktiviti sitotoksik. Kapasiti antioksidan sangat berkaitan dengan komposisi fenolik sampel yang diuji [10,11], kerana ia diketahui dan diterima bahawa fenilpropanoid, flavonoid, dan jugasecoiridoidsmempamerkan kapasiti antioksidan dan antiproliferatif [34-36], tetapi lebih-lebih lagi, kapasiti antioksidan boleh, pada masa yang sama, sangat berkaitan dengan aktiviti sitotoksik sampel ini, kerana aktiviti antioksidan mungkin mewakili salah satu mekanisme terpenting pada asas sitotoksisiti [37].

2.6. Ujian Sitotoksisiti

Untuk menyiasat potensi antiproliferatif in vitro bagi empat ekstrak etanol S.vulgaris pada dua saluran sel kanser manusia, HeLa dan B16F10, ujian MTT telah dijalankan. Keputusan dibentangkan dalam Rajah 3 dan 4.

Rajah 4. Kesan perencatan pada garisan sel B16H10 ekstrak daun, buah, kulit kayu dan bunga S. Vulgaris pada lima kepekatan berbeza C1-C5 dikira mengikut TPC(umol GAE/mL) yang ditentukan untuk setiap ekstrak: daun （11.34-56.7 mmol GAE/mL）, buah（6.66-33.2 μmol GAE/mL）, kulit kayu（9.875-49.37 μmol GAE/mL） dan bunga （11.69-58.475 μmol GAE/mL）; Kawalan negatif—sel yang tidak dirawat, Kawalan dalaman—Ethanol, Kawalan positif—Cisplatin. Nilai mewakili min ± SD bagi tiga penentuan.*p<><><0.0001(differences between="" extract-treated="" cells="" and="" the="" negative="">

Ekstrak etanol bunga menunjukkan aktiviti sitotoksik yang ketara pada kedua-dua sel B16F10 dan HeLa (Rajah 3 dan 4). Daya maju kedua-duanyamelanomadankarsinomasel telah berkurangan dengan ketara (m.s<0.0001) compared="" to="" the="" untreated="" control="" for="" concentrations="" of="" 23.39-58.475="" μmol="" gae/ml="" and="" 11.69-58.475="" μmol="" gae/ml,="" respectively.="" no,="" statistically="" significant="" (p="">0.05) perbezaan antara nilai daya maju yang ditentukan oleh kepekatan ini telah diperhatikan, menunjukkan bahawa aktiviti sitotoksik tidak bergantung kepada dos. Sama seperti ekstrak bunga, ekstrak daun menunjukkan kesan sitotoksik yang ketara pada kedua-dua garisan sel (hlm<0.001). furthermore,="" when="" tested="" against="" the="" hela="" cell="" line,="" these="" two="" extracts'="" inhibitory="" activity="" was="" comparable="" to="" the="" positive="" control—cisplatin="" treated="" cells="" (figure="" 3).on="" the="" b16f10="" cells,="" similar="" efficacy="" was="" displayed="" only="" by="" the="" flower="" extract,="" while="" the="" leaf="" and="" bark="" extracts="" possessed="" a="" lower="" cytotoxic="" effect="" compared="" to="" cisplatin.="" the="" fruit="" extract="" proved="" the="" lowest="" cytotoxic="" effect="" (figure="">

Oleh itu, keputusan kami menunjukkan in vitrositotoksiksifat ekstrak S.vulgaris pada dua garisan sel tumor. Talian sel HeLa terbukti lebih mudah terdedah daripada sel B16F10; sensitiviti in vitro dan in vivo yang berbeza-beza antara jenis sel tumor yang berbeza didokumenkan oleh kesusasteraan [38,39].

Analisis regresi bukan linear bagi keluk tindak balas dos menentukan nilai kepekatan perencatan separuh maksimum (IC0) untuk aktiviti sitotoksik dan keputusannya diterangkan dalam Jadual 10.

Keputusan ini menunjukkan bahawa nilai ICso terendah dalam kes S.vulgarisetanolekstrak diperolehi untuk buah dan kulit kayu, masing-masing. Walau bagaimanapun, nilai ini dikira

mengikut TPC (umol GAE/mL) yang ditentukan untuk setiap ekstrak. Oleh itu, memandangkan komposisi kimia kompleks yang ditubuhkan untuk keempat-empat ekstrak, korelasi antara aktiviti antiproliferatif in vitro dan kumpulan dan/sebatian yang dikenal pasti telah ditentukan. Tiada korelasi ditemui antara daya maju sel dengan TPC（r²{{0}}}.4）. Korelasi yang kuat telah diperhatikan antara kesan perencatan ke atas daya maju sel dan sebatian tertentu yang dikenal pasti dan dikira yang diterangkan dalam Jadual 1. Kuantiti tertinggi bagi sebatian berikut 1, 2, 5, 7, 9, 11, 13, dan 14 telah dikaitkan kepada komposisi kimia ekstrak bunga, manakala sebatian selebihnya adalah yang paling banyak terdapat dalam ekstrak kulit kayu (Jadual 1). Di antara sebatian ini, kuantiti asetonida dan echinakosida kelihatan sangat berkorelasi dengan sitotoksisiti yang ditunjukkan oleh kedua-dua bunga（r²= 0.84-0.97 dan 0.87-0.99, masing-masing. ) dan kulit kayu (r2=0.87-0.94 dan 0.85-0.99, masing-masing) mengekstrak ke arah garisan sel B16H10. Dalam kes garisan sel HeLa, korelasi diperhatikan untukligstroside（r-=0.89-0.99）, syringalactone A （r²=0.90-0.99）, dan oleuropein-aglycone （r²=0.{{ 8}}.98）. Walaupun ketiga-tiga sebatian secoiridoid ini ditemui pada kuantiti tertinggi dalam kes ekstrak kulit kayu, pekali korelasi antara kandungannya dalam ekstrak kulit kayu dan aktiviti antiproliferatif adalah agak rendah（r²=-0.80-0.49 ）.

Cistanche boleh meningkatkan imuniti

Penemuan ini menggariskan fenilpropanoid (acteoside dan echinacoside) dan sec-iridoid (ligstroside, syringalactone A, oleuropein-aglycone) antara sebatian yang bertanggungjawab terhadap keberkesanan antiproliferatif ekstrak bunga etanolik S. Vulgaris terhadap garisan sel B16H10 dan HeLa. Keputusan ini adalah selaras dengan laporan terdahulu yang menunjukkan keberkesanan antiproliferatif in vitro secoiridoids [4].

Kajian terdahulu menunjukkan potensi antioksidan dan antitumor dalam kes beberapa spesies Syringa, mencadangkan sifat ini mungkin berkaitan dengan sebatian utama tertentu yang dikenal pasti, iaitu iridoid dan lignan 4,5]. Ekstrak akueus yang diperoleh daripada bunga dan daun S. pubescens adalah sitotoksik in vitro apabila diuji terhadap garis sel L2215, manakala ekstrak tunas bunga S. patula dan dua sebatian terpencil, syringaresinol dan oleoside 11-metil ester, dapat menghalang HepG2 pembiakan sel [4,5]. Begitu juga, oleuropein dan 3,4-dihidroksifenil etil alkohol 8-O- -D-glucopyranoside, dua sebatian yang diasingkan daripada S.pubescens subsp. patula, menyatakan sitotoksisiti terhadap sel P-388, L-1210, SNU-5 dan HL-60 [5].

Beberapa sebatian yang diasingkan daripada daun S.vulgaris dilaporkan mempamerkan potensi anti-tumor [4,40]. Sitotoksisiti yang agak lemah telah diserlahkan dalam kes isooleoacteoside dan syringopicroside B apabila diuji terhadap garisan sel melanoma LOX-IMVI dan garisan sel kanser paru-paru NCI-H522, masing-masing [4,18]. Selain itu, produk hidrolisis oleuropein menunjukkan aktiviti sitotoksik sederhana terhadap saluran sel kanser paru-paru DMS273 dan DMS114 [4,40].

Dengan semua ini memandangkan dan menyokong keputusan yang diperolehi dalam analisis fitokimia, dalam ujian sitotoksisiti, dan dalam ujian antioksidan, hubungan antara semua ini menjadi jelas dan boleh disimpulkan bahawa aktiviti antiproliferatif sampel yang diuji adalah penting dan mungkin disebabkan oleh mekanisme antioksidan. Untuk pengetahuan terbaik kami, ini adalah kajian pertama yang bertujuan untuk menilai dan membandingkan profil kimia, sifat antioksidan dan antiproliferatif ekstrak etanol yang diperoleh daripada bunga, daun, kulit kayu, dan buah S. Vulgaris.

3. Bahan dan Kaedah 3.1. Bahan Kimia dan Reagen

Acetonitrile untuk analisis HPLC-DAD-MS telah dibeli oleh Merck (Darmstadt, Jerman), manakala air telah disucikan dengan sistem Direct-QUV oleh Millipore (Darmstadt, Jerman). Asid klorogenik, rutin dan oleuropein (ketulenan analisis) dibeli daripada Sigma Aldrich (Darmstadt, Jerman). Semua bahan kimia lain yang digunakan dibeli dari Alfa-Aesar, Karlsruhe, Jerman. Sitotoksisiti telah diuji pada dua garisan sel tumor: sel melanoma murine (sel B16F10) dan sel sel kanser manusia (HeLa). Talian sel yang dipilih diperoleh daripada Koleksi Sel Jenis Amerika (ATCC) (Manassas, VA, Amerika Syarikat). Sel B16F10 dikekalkan dalam medium RPMI 1640 (Sigma Aldrich, Darmstadt, Jerman)

ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (EuroClone, MI, Pero, Itali) dan 1 peratus Antibiotik-Antimvcotic 100×(Sigma Aldrich, Darmstadt, Jerman). Sel Hela dikekalkan dalam medium DMEM/F-12 (Gibco Life Technologies, Paisley, UK) ditambah dengan 10 peratus serum lembu janin (EuroClone, MI, Pero, Itali) dan 1 peratus Antibiotic-Antimycotic 100×(Sigma Aldrich , Darmstadt, Jerman). Kedua-dua garisan sel telah dibiakkan dalam 5 peratus CO, inkubator (Advantage-Lab, Schilde, Belgium) pada 37 darjah dalam suasana lembap. Cisplatin (Ebewe Pharma Ges. mb H.Nfg. KG, Unterach am Attersee, Austria) telah dimasukkan sebagai kawalan positif standard untuk ujian sitotoksisiti.

3.2.Bahan Tumbuhan dan Penyediaan Ekstrak

Bahan tumbuhan dituai dari daerah Cluj, Romania Utara-Barat. Bunga-bunga dan daun dituai pada April-Mei 2020, semasa tempoh berbunga spesies, manakala buah-buahan dan kulit kayu dituai pada September 2020. Spesimen baucar untuk spesies yang dituai disimpan di herbarium Jabatan Farmakognosi Fakulti Farmasi Cluj-Napoca (Baucar no83).

Sampel yang dituai dikeringkan dengan udara. Untuk mendapatkan ekstrak, bahan tumbuh-tumbuhan yang dikisar bagi setiap sampel disejukkan dengan 70 peratus o/v etanol, dalam nisbah 1:10. Penyelesaian itu kemudiannya tertakluk kepada perkolasi, ditapis, dan digunakan untuk analisis fitokimia dan ujian aktiviti biologi kapasiti antioksidan dan aktiviti sitotoksik [41].

3.3. HPLC-DAD-ESI ditambah Analisis Sebatian Polifenol

Penilaian sebatian polifenol telah dilakukan pada kromatografi cecair HP{{0}}, yang dilengkapi dengan pam kuaternari, autosampler, pengesan DAD dan MS-6110 pengesan semburan elektrik API empat kali ganda tunggal (Agilent-Technologies , Santa Clara, CA, Amerika Syarikat). Pengesanan sebatian fenolik telah dijalankan dalam mod pengionan positif. Serpihan yang berbeza, dalam julat 50-100 V, telah digunakan. Pengasingan sebatian telah dilakukan pada Eclipse XDB-C18（5 μm;4.5×150 mm id）lajur（Agilent）, menggunakan sebagai fasa bergerak 0.1 peratus asid asetik dalam air(A )dan 0.1 peratus asid asetik dalam asetonitril (B). kecerunan linear berbilang langkah telah digunakan untuk elusi, dengan komposisi berikut:5 peratus B selama 2 minit; daripada 5 peratus kepada 90 peratus B dalam 20 minit, tahan selama 4 minit pada 90 peratus B, kemudian 6 minit untuk tiba pada 5 peratus B. Kadar aliran dikekalkan pada 0.5 mL/min dan suhu pada 25±0.5 darjah . Sebatian fenolik dalam ekstrak dianalisis dengan membandingkan masa pengekalan, UV boleh dilihat dan spektrum jisim setiap sebatian yang dipisahkan dengan tiga piawai rujukan, seperti berikut: untuk flavonoid, sebatian dikira menggunakan lengkung penentukuran rutin yang diperoleh menggunakan lima kepekatan berbeza, berbeza dari 10 hingga 80ug/mL dan dinyatakan sebagai setara dengan rutin (mg rutin/g bahan tumbuhan (R2=0.9973)), untuk fenilpropanoid, sebatian dikira menggunakan lengkung penentukuran asid klorogenik yang diperoleh menggunakan lima berbeza kepekatan, berbeza dari 10 hingga 50 ug/mL dan dinyatakan sebagai setara dengan asid klorogenik/bahan tumbuhan (R2=0.9937), manakala untuk iridoid sebatian dikira menggunakan lengkung penentukuran oleuropein yang diperoleh menggunakan lima kepekatan berbeza, berbeza daripada 10 hingga 100 ug/mL dan dinyatakan sebagai setara dengan asid klorogenik/g bahan tumbuhan (R-=0.9966). Ion bercas positif dikesan oleh spektrometri jisim, menggunakan mod Imbasan. Keadaan berikut untuk spektrometri jisim digunakan: suhu gas 3500 C, aliran nitrogen 7 L/min, tekanan nebulizer 35 psi, voltan kapilari 3000 V, serpihan 100 V dan m/z 120-1200. Kromatogram telah direkodkan pada λ=280 dan 340 nm. Pemerolehan data dilakukan menggunakan perisian Agilent ChemStation [42,43].

3.4. FT-IR SpectroScopy

Spektroskopi transformasi Inframerah Fourier telah dibuat di makmal Spektroskopi dari Institut Sains Hayat"Raja Michael I dari Romania" dari Cluj-Napoca. Sebelum analisis FT-IR, ekstrak daun, bunga, kulit kayu, dan buah S. Vulgaris telah dikeringkan pada slaid mikroskop bersih selama 12 jam pada suhu bilik. Ekstrak kering kemudian dikeluarkan dari slaid mikroskop dan dicampur dengan serbuk KBr dalam perkadaran 1:100 dan diletakkan di dalam kit keluli ruang penekan pelet spektrum. Untuk membentuk pelet KBr lut sinar kami menggunakan tekanan 10tfor2min. Spektrum FT-IR dikumpulkan dengan spektrometer Jasco FT-IR4100 (Jasco, Jerman), dalam julat spektrum 4000-400 cm, menggunakan 256 imbasan/sampel pada resolusi 4 cm. Tambahan pula, spektrum Ft-IR yang diperoleh telah diperbetulkan untuk CO, dan H2O menggunakan program Pengurus Spektra perisian yang sama digunakan. Akhir sekali, analisis data FT-IR telah dijalankan menggunakan perisian OriginPro Versi 8.5.1 (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

3.5.Kuantiti Jumlah Kandungan Polifenol, Flavonoid dan Asid Fenolik

Jumlah kandungan fenolik (TPC) dinilai dengan kaedah spektrofotometri berdasarkan tindak balas warna polifenol dengan reagen Folin-Ciocalteu, menurut Euro-pean Pharmacopoeia, menggunakan lengkung penentukuran asid gallik (R2= 0.9928 ). Keputusan dinyatakan sebagai mg bersamaan asid gallik (GAE)/g bahan tumbuh-tumbuhan kering. Penentuan jumlah flavonoid (TFC) juga dilakukan dengan spektrofotometri, menggunakan kaedah aluminium klorida, berdasarkan lengkung penentukuran rutin (R-=0.9981) dan menyatakan keputusan sebagai mg setara rutoside (RE)/g bahan tumbuhan kering. Jumlah asid fenolik(TPA) telah dinilai dengan kaedah spektrofotometri, menggunakan reagen Arnow, serupa dengan yang sedia ada dalam Edisi ke-10 Romanian Pharmacopoeia(Cynarae folium mono-graph). Keputusan penentuan TPA dinyatakan sebagai mg bersamaan asid kafeik (CAE)/g bahan tumbuhan kering dan dikira menggunakan graf lengkung penentukuran asid kafeik (R2= 0.9956). Semua eksperimen ini dilakukan dalam tiga kali ganda [31,33,44].

3.6. Analisis GC-MS

Analisis GC-MS telah dijalankan pada Sistem GC-MS Master Dani. Lajur SH-Rxi-5 ms dengan 30 m ×0.25 mm×0.25 μm telah digunakan untuk pengasingan sebatian. Nitrogen digunakan sebagai gas pembawa, dengan kadar alir 10 mL/min. Suhu sistem mengikut kecerunan yang terdapat dalam Jadual 11.

Lima μL setiap sampel, dicairkan 1 hingga 10 dengan etanol mutlak, disuntik. Pengesan EIS-MS mengenal pasti sebatian dengan berat molekul dari 50 hingga 600 dalton. Sumber ion dikendalikan pada 200 darjah . Sebatian telah dikenal pasti secara tentatif berdasarkan faktor padanan, menggunakan pangkalan data spektrum NIST MS 2.2. Skor padanan yang lebih tinggi daripada 80 peratus dianggap boleh diterima untuk pengecaman sebatian. Analisis kuantitatif dilakukan dengan kaedah normalisasi kawasan dan hasilnya dinyatakan sebagai peratusan kawasan ( peratus ) [31,45]. 3.7.Ujian Aktiviti Antioksidan

3.7.1.Aktiviti Penghapusan Radikal DPPH

Untuk menilai kapasiti antioksidan ekstrak S. Vulgaris, ujian pelunturan DPPH telah digunakan. Ia adalah kaedah spektrofotometri, berdasarkan tindak balas reagen DPPHe dan antioksidan yang terdapat dalam ekstrak diuji mL setiap ekstrak kepekatan yang berbeza telah ditambah kepada 2 mL0.1 g/L larutan DPPH·metanolik dan dikekalkan. pada suhu 40 darjah dalam mandian termostat, selama setengah jam. Penyerapan dan variasinya diukur pada 517 nm. Perencatan radikal DPPHe dikira menggunakan formula: peratus keupayaan DPPH mengais =(Kawalan- Kawalan sampel/A)× 100, dengan kawalan A ialah penyerapan kawalan, terdiri daripada larutan radikal DPPH· campur metanol(campuran yang mengandungi semua reagen kecuali tincture) dan Satu sampel ialah penyerapan sampel radikal DPPH tambah. Peratusan penurunan DPPH dinyatakan dalam persamaan Trolox (TE, R2=0.987).

Aktiviti pemusnahan radikal DPPH bagi tincture dinyatakan sebagai IC50(ug/mL). Ujian dilakukan dalam tiga kali ganda [32,33,46].

3.7.2. Ujian Kuasa Antioksidan Pengurang Ferrik (FRAP)

Kaedah FRAP ialah kaedah spektrofotometri berdasarkan perubahan warna 2,4,6-tri(2-piridil)-1,3,5-triazine (TPTZ) radikal kompleks dengan Fe3 plus . Perubahan warna ini dinilai dengan pengurangan ion ferik (Fe3) kepada ion ferus (Fe2 tambah ) dalam kompleks ini[47]. Reagen FRAP terdiri daripada campuran 2.5 mL larutan TPTZ 10 mM dalam 40 mM HCl, dicampur dengan larutan ferik klorida 2.5 mL20 mM dan 25 mL penimbal asetat pada pH=3.6. Daripada setiap sampel yang diuji, 4 mL dicairkan kepada 1.8 mL dengan air dan dicampur dengan 6 mL reagen ini. Penyelesaian kosong disediakan dengan cara yang sama, tetapi menggantikan ekstrak dengan air Kapasiti antioksidan dinilai dalam korelasi dengan perubahan warna, dengan mengukur penyerapan pada 450 nm, menggunakan Trolox sebagai rujukan dan lengkung penentukuran (R2=0. 992). Keputusan dinyatakan sebagai uM Trolox setara/g produk tumbuhan berat kering dan ujian dilakukan dalam tiga kali ganda [48].

3.7.3. Kapasiti Antioksidan Pengurangan panjang cupric (CUPRAC)

Kaedah CUPRAC ialah kaedah spektrofotometri berdasarkan pengurangan ion kuprum (II) kepada besi kuprum (I) dalam neoprena (2,9-dimetil-1,10-fenantrolin) kompleks. Pengurangan ini menentukan perubahan warna daripada hijau muda kepada merah-oren. Perubahan warna telah dikaitkan dengan kapasiti antioksidan dengan mengukur penyerapan pada 45{94}} nm. Keluk penentukuran telah diplot menggunakan kepekatan piawaian Trolox dan keputusan dinyatakan sebagai mM Trolox bersamaan/g produk tumbuhan berat kering [32,49,50]. 3.8. Ujian Sitotoksisiti Kajian sitotoksisiti pada saluran sel tumor dilakukan menggunakan ujian MTT (3-(45-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide; Sigma Aldrich) [51,52]. Untuk kedua-dua garisan sel, sel telah disadur (1 × 10 darjah sel/telaga) dalam 96-plat telaga selama 24 jam dalam media perambatan biasa (200 uL penggantungan sel dalam setiap telaga). Ekstrak telah ditambah ke dalam medium lengkap dalam lima volum berbeza （5 μL, 10 μL, 15 μL, 20 μL, 25 μL）, dengan kepekatan hasil (C1, C2, C3, C4, dan C5) dikira mengikut TPC ditentukan untuk setiap ekstrak dan dinyatakan sebagai umol GAE/mL seperti berikut: bunga(C1—11.69 umol GAE/mL, C2—23.39 μmol GAE/mL, C3—35.08 umol GAE/mL, C4—46.78 μmol GAE/mL, C5—58.475 μmol GAE/mL）, daun（C1-11.34 μmol GAE/mL, C2—22.68 umol GAE/mL, C3—34.02 μmol GAE/mL, C4—45.36 μmol GAE/mL, C5— 56.7 μmol GAE/mL）, kulit kayu （C1—9.875 μmol GAE/mL, C2—19.75 umol GAE/mL, C3—29.625 umol GAE/mL, C4—39.5 umol GAE/mL, C5—49 umol GAE/mL, C5—49. buah （C1—6.66 umol GAE/mL, C2—13.32 μmol GAE/mL, C3—19.98 umol GAE/mL, C4—26.64 umol GAE/mL, C5—33.2 umol GAE/mL). Kawalan negatif diwakili oleh garisan sel yang dikultur dalam medium pengembangan biasa (sel yang tidak dirawat), manakala 70 peratus etanol o/v dan Cisplatin (0.2 uM) dimasukkan sebagai kawalan dalaman dan kawalan positif, masing-masing.

Daya maju sel selepas pengeraman 24 jam pada 37 darjah dalam suasana lembap dengan 5 peratus CO, telah dinilai menggunakan ujian MTT mengikut protokol yang diterbitkan sebelum ini [51,52]. Zarah formazan yang terbentuk dengan menambahkan 0.5 mg MTT pada setiap telaga telah dilarutkan dengan dimetil sulfoksida (DMSO) (Sigma Aldrich, St.Louis, MO, Amerika Syarikat), dan penyerapan dibaca pada 450 nm menggunakan plat mikro. pembaca (Bio-Rad, Hercules, CA, Amerika Syarikat). Peratusan daya maju sel( peratus )dikira berdasarkan nisbah penyerapan antara kultur sel yang dirawat dengan ekstrak dan kawalan negatif (sel yang tidak dirawat) didarab dengan l00. Bagi setiap ekstrak, aktiviti sitotoksik yang dinyatakan sebagai nilai IC5so mewakili kepekatan ekstrak yang diperlukan untuk menghalang 50 peratus percambahan sel telah dikira daripada lengkung tindak balas dos yang diperoleh menggunakan regresi bukan linear. Semua eksperimen dilakukan dalam tiga kali ganda.

3.9. Analisis statistik

Semua analisis statistik telah dijalankan menggunakan perisian ANOVA GraphPad Prism, versi 6.0(GraphPad, San Diego, CA, USA). Hasilnya dinyatakan sebagai sisihan piawai min (SD). Analisis varians sehala (ANOVA) telah digunakan, diikuti dengan ujian post hoc Tukey, untuk menentukan kepentingan statistik. Analisis korelasi Pearson dilakukan untuk menentukan korelasi antara aktiviti sitotoksik ekstrak, jumlah kandungan fenolik, dan sebatian yang dikenal pasti, masing-masing. Nilai p yang lebih rendah daripada 0.05 dianggap signifikan secara statistik.

4. Kesimpulan

Untuk pengetahuan terbaik kami, ini adalah kajian pertama yang bertujuan untuk menilai dan membandingkan profil kimia, sifat antioksidan dan antiproliferatif ekstrak etanol yang diperoleh daripada bunga, daun, kulit kayu, dan buah S. Vulgaris. Kaedah yang dilakukan menyerlahkan bahawa ekstrak S.vulgaris, khususnya yang diperoleh daripada bunga dan daun, adalah sumber sebatian berharga dengan potensi antioksidan dan sitotoksik yang ketara.

Artikel ini diekstrak daripada Molecules 2021, 26, 3104. https://doi.org/10.3390/molecules26113104 https://www.mdpi.com/journal/molecules