Cabaran dan kesukaran yang dihadapi dalam aplikasi Terapi Sel CAR-T
Mar 27, 2022
Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Imunoterapi sel T reseptor antigen chimeric (sel T reseptor antigen chimeric, CAR-T) adalah untuk merekayasa genetik sel T yang diasingkan daripada pesakit atau penderma alogenik untuk mengekspresikan reseptor antigen chimeric (reseptor antigen chimeric). reseptor, CAR), terapi sel angkat yang secara khusus mengenali dan membunuh sel tumor. CAR-T adalah salah satu kejayaan besar dalam bidang imunoterapi kanser dalam beberapa tahun kebelakangan ini. Ia mempunyai kelebihan besar dalam rawatan keganasan hematologi dan mempunyai prospek pembangunan yang luas. Pada masa ini, terapi sel CAR-T juga menghadapi cabaran besar. Kandungan berikut akan membawa anda memahami cabaran yang dihadapi oleh terapi sel CAR-T, mengenal pasti mekanisme yang membawa kepada pengehadan dan mengatasi halangan ini, supaya sel CAR-T boleh menggunakan potensinya dengan lebih baik, Optimumkan strategi rawatan dan meningkatkan hasil pesakit. Beberapa faktor utama yang telah didapati mempengaruhi keberkesanan terapi sel CAR-T termasuk pembuatan sel CAR-T, pengurusan kesan sampingan toksik, dan berulangnya rintangan dadah.
Herba anti tumor:Produk herba cistanche &Sel T reseptor antigen chimeric
1 Masalah dalam Pembuatan Sel CAR-T
Cabaran yang dihadapi oleh pembuatan sel CAR-T melibatkan pelbagai pautan seperti pemerolehan sel T, pengasingan dan penyaringan, transduksi, pengembangan budaya, dan pemilihan fenotip sel T awal. Melalui pengoptimuman kaedah dalam setiap pautan, produk sel CAR-T boleh direalisasikan dengan keberkesanan klinikal yang lebih tinggi dan kesan sampingan yang kurang toksik. Pada masa ini, sel CAR-T yang diluluskan oleh FDA semuanya bersifat autologous, dan tidak ada risiko penolakan alogenik dan penyakit graft-versus-host (GVHD), tetapi ia sukar diperoleh, dan kualiti sel selalunya tidak tersedia. . Yakinkan. Menggunakan sel daripada penderma yang sihat untuk menghasilkan produk CAR-T adalah satu penyelesaian kepada masalah sumber sel CAR-T yang berkualiti rendah. Kajian klinikal awal telah menunjukkan kebolehlaksanaan menggunakan sel CAR-T yang berasal dari penderma pada pesakit dengan penyakit berulang selepas pemindahan alogenik dengan risiko GVHD yang lebih rendah. Di samping itu, sel T yang diperoleh daripada penderma memudahkan pembangunan produk CAR-T sejagat, yang sangat penting untuk mengatasi masalah sedia ada sumber sel CAR-T yang tidak mencukupi, kualiti yang buruk, dan kitaran pengeluaran yang panjang, tetapi pengubahsuaian genetik tambahan diperlukan. untuk mengurangkan risiko penolakan imun dan GVHD. Di samping itu, struktur CAR selalunya mengandungi jujukan eksogen. Disebabkan kesukaran penyediaan, kebanyakan scFvs sel CAR-T adalah asal murine dan bersifat imunogenik. Antibodi anti-tikus manusia terhadap scFv telah dikesan pada pesakit yang dirawat.
Kajian telah menunjukkan bahawa fenotip sel T awal produk sel CAR-T memainkan peranan penting dalam tindak balas klinikal seterusnya. Fenotip sel T tertentu, seperti sel T memori pusat, sel T memori seperti batang dan sel T prekursor, boleh meningkatkan kapasiti pengembangan dan kegigihan sel CAR-T. Kajian mengenai terapi sel CAR-T yang disasarkan CD{3} dalam pesakit CLL mendapati bahawa populasi sel CAR-T responden mempunyai ekspresi gen berkaitan sel T memori yang banyak berbanding dengan bukan responden. Satu lagi pasukan penyelidik mendorong protein CAR untuk memasuki keadaan senyap dengan memaksa turun-regulasi protein CAR melalui sistem pengawalseliaan dadah atau dasatinib, dengan itu memperoleh fenotip seperti ingatan, berjaya membalikkan ciri fenotip dan transkrip sel CAR-T yang telah habis. , dan kemudian memulihkan fungsi Antitumor sel CAR-T.
Di samping itu, masa penyerapan sel CAR-T juga mempunyai kesan penting terhadap tindak balas rawatan. Dengan memendekkan kitaran pengeluaran sel CAR-T melalui pengoptimuman teknologi, ia dijangka mengurangkan kelewatan penyakit pesakit dan memberi manfaat kepada lebih ramai pesakit. Di samping itu, gen pengekodan struktur CAR biasanya ditransduksi ke dalam sel T oleh retrovirus atau lentivirus, tetapi dengan pembangunan sistem transposon, adalah lebih menjimatkan untuk menggunakan transposon dan bukannya vektor virus untuk pengeluaran sel CAR-T. Pada masa ini, sistem transposon Sleeping Beauty telah digunakan untuk pembuatan CD19-sel CAR-T disasarkan.
Anti-tumor: terapi sel CAR-T &cistanche tubulosa
2 Toksik dan kesan sampingan terapi sel CAR-T
Hampir semua pesakit yang dirawat dengan CD19-sel CAR-T yang disasarkan mengalami kesan sampingan toksik yang berbeza-beza tahap, termasuk sindrom pelepasan sitokin (CRS) dan sindrom neurotoksisiti yang berkaitan dengan kesan imun, ICANS), dsb., yang kedua juga dikenali sebagai neurotoksik kesan sampingan. Persatuan Pemindahan dan Terapi Selular Amerika (ASTCT) telah membangunkan dan menerbitkan cadangan penggredan piawai untuk CRS dan ICANS, yang mempunyai kepentingan panduan untuk pengurusan dan rawatan ketoksikan CAR-T.
Gejala klinikal CRS selalunya bermula dengan demam, dan kes yang teruk boleh membawa kepada tindak balas keradangan sistemik, hipotensi, hipoksia, dan kegagalan organ. ICANS terutamanya dimanifestasikan sebagai ensefalopati toksik, kes yang teruk boleh menyebabkan sawan, edema serebrum dan koma. Kebanyakan pesakit dengan ICANS mempunyai sejarah CRS, menunjukkan bahawa CRS mungkin bertindak sebagai faktor permulaan atau faktor penggalak untuk ICANS. Jika simptom awal CRS dan ICANS dapat dikesan dan diintervensi dengan berkesan, perjalanan klinikal kedua-duanya boleh diterbalikkan, tetapi CRS dan ICANS yang teruk boleh membawa maut. Memahami mekanisme patofisiologi CRS dan ICANS berguna untuk pembangunan ubat yang disasarkan untuk menyekat ketoksikan sel CAR-T atas dasar mengekalkan aktiviti anti-tumor sel CAR-T sebanyak mungkin. CRS dikaitkan dengan peningkatan paras pelbagai sitokin, antaranya IL-6 ialah molekul imun penting yang pengantara CRS. Tocilizumab, yang menyekat reseptor IL-6, kini merupakan rawatan utama untuk CRS. Ujian praklinikal telah menunjukkan bahawa CRS dicetuskan oleh rangkaian multiselular sel CAR-T dan sel hos, dengan sistem makrofaj monosit memainkan peranan penting dalam proses pengaktifan. IL-1 ialah salah satu produk sitokin utama sistem monosit-makrofaj, dan mungkin terlibat dalam pautan pemacu CRS, dan menyekat sasaran ini berkesan dalam melegakan CRS. TNF, interferon- (IFN-), faktor perangsang koloni granulosit/makrofaj (GM-CSF) dan sitokin pro-radang lain turut terlibat dalam proses CRS, yang mungkin menjadi sasaran potensi. Pada masa ini, CRS gred rendah dirawat terutamanya dengan rawatan antipiretik dan sokongan, dan komplikasi lain yang boleh membawa kepada demam, seperti jangkitan, dicegah secara aktif. Untuk CRS sederhana hingga teruk, tocilizumab biasanya digunakan, dan steroid digunakan secara selektif sebagai terapi adjuvant mengikut keadaan pesakit, dan kesannya lebih ketara. Bagi pesakit CRS yang teruk, steroid biasanya digunakan untuk menghalang percambahan dan rembesan sitokin sel CAR-T dan sel "bystander" lain. Perlu diingatkan bahawa steroid tidak boleh digunakan dalam dos yang besar, dan kesan perencatannya terhadap sistem imun akan menyebabkan penurunan keberkesanan CAR-T. Beberapa perencat molekul kecil seperti ruxolitinib dan ibrutinib boleh menghalang pengeluaran dan transduksi isyarat pelbagai sitokin secara meluas dan boleh mengikat kepada pelbagai sasaran, dengan itu mengawal fungsi imun sel CAR-T dan mengurangkan kesan sampingan.
Mekanisme ICANS mungkin berkaitan dengan pengumpulan sel CAR-T dan sitokin pro-radang dalam sistem saraf pusat. Kajian praklinikal telah memerhatikan korelasi antara bilangan sel CAR-T dalam cecair serebrospinal dan tahap sitokin dan keterukan ICANS. Insiden ICANS dalam terapi CAR-T sasaran19-CD adalah lebih tinggi daripada terapi sel CAR-T sasaran CD22-, yang mungkin disebabkan CD19 dinyatakan dalam sel parietal medial otak manusia. Kaedah rawatan klinikal untuk pesakit ICANS adalah dengan memberi steroid, dan dos hendaklah yang paling rendah untuk mengelakkan kesan ke atas keberkesanan CAR-T dan imunosupresi yang serius. Tocilizumab telah mencapai keputusan yang baik dalam rawatan CRS, tetapi kesannya terhadap ICANS adalah sangat terhad, yang mungkin berkaitan dengan kesukarannya untuk melepasi penghalang darah-otak.
Kesan sampingan toksik pada masa ini merupakan faktor penting yang mengehadkan keberkesanan CAR-T, menghalang peningkatan kesan anti-tumor sel CAR-T dengan meningkatkan dos sel CAR-T atau meningkatkan aktiviti effector. Beban tumor yang tinggi, usia lanjut, dan prakondisi limfodepleting intensiti tinggi dianggap dikaitkan dengan berlakunya kesan sampingan imunotoksik. Dengan peningkatan kes rawatan dan lanjutan masa susulan, lebih banyak toksik dan kesan sampingan muncul, seperti ketoksikan seperti limfohistiositosis hemophagocytic/sindrom pengaktifan makrofaj, disfungsi imun berkaitan anemia aplastik sel B Keadaan rosak rumit oleh jangkitan maut, membawa maut. edema serebrum, dsb. Kajian sedia ada mendapati bahawa menambahkan gen bunuh diri, seperti inducible caspase-9 atau virus herpes simplex thymidine kinase, kepada CAR ialah cara yang mungkin untuk mengurangkan kesan sampingan sitotoksik CAR-T, tetapi ia akan menyebabkan pelepasan tidak boleh balik sel CAR-T dan mengurangkan rintangan. Keberkesanan tumor.
Kesan terapi sel CAR-T & suplemen cistanche: merawat kanser dan tumor
3 Pengulangan rintangan dadah selepas terapi sel CAR-T
Walaupun sel CAR-T telah membuat penemuan hebat dalam rawatan keganasan hematologi, dalam kalangan pesakit yang menerima19-terapi sel CAR-T yang disasarkan CD, kadar pengulangan rintangan dadah adalah setinggi 30 peratus hingga 50 peratus, dan kebanyakannya relaps berlaku 12 tahun selepas rawatan. dalam masa sebulan. Walau bagaimanapun, pengulangan jenis ini bukan hanya untuk sasaran CD19, dan kajian berkaitan mengenai sasaran lain seperti CD22 dan BCMA juga telah membuktikan bahawa kambuh yang tahan dadah adalah cabaran utama yang biasa dihadapi oleh terapi sel CAR-T. Pada masa ini, kejadian kambuh biasanya dibahagikan kepada kambuh antigen-negatif dan kambuh antigen-positif.
Mekanisme utama relaps antigen-negatif adalah kehilangan antigen. Mekanisme kehilangan antigen yang diiktiraf pada masa ini termasuk mutasi penyambungan, epitope cryptic, dan perubahan keturunan sel akibat kehilangan epitop sasaran. Walau bagaimanapun, walaupun antigen tidak hilang sepenuhnya, pengurangan ekspresi atau ketumpatan antigen melalui imunomodulasi adalah mencukupi untuk membolehkan sel tumor melarikan diri. Dalam percubaan klinikal menggunakan CD22-sel CAR-T yang disasarkan untuk merawat pesakit leukemia, didapati pesakit leukemia dengan antigen positif berulang, menunjukkan bahawa pengekalan aktiviti sel CAR-T perlu mencapai ambang ekspresi antigen minimum . Sel CAR-T yang disasarkan multi-molekul kombinatorial dijangka mengatasi pelepasan sel tumor daripada kehilangan antigen atau mekanisme penurunan peraturan. Bagi pesakit yang berulang selepas terapi sel CRA-T19-sasaran CD, CD22 ialah sasaran yang ideal kerana kebanyakan pesakit19-negatif CD kekal positif untuk ekspresi CD22. Dalam ujian klinikal, sel CAR-T yang menyasarkan CD22 berkesan dalam rawatan pesakit dengan CD{14}}limfoma sel B negatif dan leukemia berulang, tetapi dalam proses imunoterapi berurutan, rintangan dadah berulang disebabkan oleh pengawalan rendah Ekspresi CD22 oleh sel tumor juga dijumpai. Oleh itu, pembangunan sel CAR-T yang secara serentak menyasarkan CD19 dan CD22 mungkin mempunyai potensi yang lebih besar dalam mengatasi rintangan dadah. Sebagai tambahan kepada pemilihan antigen sasaran, ia juga perlu memberi perhatian kepada mekanisme tepat CAR-T dalam pembentukan sinaps imun dan pembunuhan sel sasaran. TCR semulajadi boleh mengecam antigen pada tahap ketumpatan rendah, dan spekulasi bahawa perbezaan struktur antara CAR dan TCR semulajadi boleh membawa kepada perbezaan dalam keperluan untuk ketumpatan pengecaman antigen.
Perlu diingat bahawa tidak semua pesakit kambuh adalah negatif CD19, yang juga menunjukkan bahawa sebagai tambahan kepada kehilangan antigen dan pelepasan sel tumor, terdapat faktor lain yang membawa kepada rintangan CAR-T. Penyebab utama relaps antigen-positif ialah keletihan sel CAR-T, yang membawa kepada penurunan fungsi diri akibat pendedahan jangka panjang kepada tahap antigen yang tinggi. Secara amnya dipercayai bahawa transduksi isyarat bebas antigen sel CAR-T berkait rapat dengan keletihan sel, dan beban tumor yang tinggi juga merupakan faktor penting yang membawa kepada keletihan. Teknologi sekatan pusat pemeriksaan imun yang digabungkan dengan sel CAR-T menjanjikan kejayaan dalam mengatasi keletihan dan meningkatkan kesan dan kegigihan sel CAR-T. Ungkapan bersama reseptor IL-7 dengan CAR boleh mengelakkan rangsangan sel "pemerhati" dan meningkatkan kapasiti proliferatif, aktiviti antitumor dan kegigihan sel CAR-T. Struktur CAR sel CAR-T mengandungi komponen bukan diri, yang bersifat imunogenik dan boleh mendorong imuniti anti-CAR humoral dan selular, dengan itu mengehadkan keberkesanan dan menjejaskan kapasiti proliferatif dan kegigihan sel CAR-T. Kajian telah menunjukkan bahawa 5 peratus pesakit DLBCL dan 36.7 peratus pesakit B-ALL telah meningkatkan tahap antibodi anti-CAR selepas infusi sel CAR-T. Cyclophosphamide atau prarawatan fludarabine dianggap sebagai faktor penting dalam mengurangkan tahap imuniti selular anti-CAR. Pembangunan produk CAR-T yang dimanusiakan adalah cara yang berkesan untuk menyelesaikan masalah ini, yang telah menunjukkan keberkesanan tahan lama dalam B-ALL yang berulang/refraktori dalam ujian klinikal. Domain stimulasi bersama dalam struktur CAR juga mempengaruhi kegigihan sel CAR-T. Secara amnya dipercayai bahawa berbanding dengan 4-1domain kostimulasi BB, CAR yang diperolehi28-CD kurang tahan lama dan lebih terdedah kepada keletihan; manakala sel CAR-T yang mengandungi 4-1domain kostimulasi BB mempunyai tahap protein anti-apoptosis BCL-2 dan BCL-XL yang lebih tinggi, dan mungkin terdapat mekanisme untuk menggalakkan pembentukan sel T fenotip memori. Penambahbaikan pada masa ini dalam ujian klinikal termasuk penggunaan sel pembentangan antigen buatan untuk mengaktifkan sel CAR-T, pengawalan fenotip CAR-T, dan perencatan gabungan molekul pusat pemeriksaan imun. Hasilnya patut ditunggu-tunggu.
Cistanche boleh mencegah tumor dan kanser dengan berkesan
