Penggunaan Ekstrak Daun Hibiscus Cannabinus L. (kenaf) Sebagai Agen Pemutih Kulit Dan Anti Penuaan dalam Prototaip Kosmetik Semulajadi

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Yan Yi Sim & Kar Lin Nyam

ABSTRAK

Di Malaysia, sisa industri daripadaHibiscus cannabinusIndustri L. (kenaf), terutamanya cuti, menimbulkan cabaran dalam kelestarian. Aktiviti biologi daun kenaf telah dilaporkan oleh beberapa kajian lepas, oleh itu, dipercayai bahawa ekstrak daun kenaf (KLE) boleh digunakan sebagai bahan berfungsi dalam formulasi kosmetik. Oleh itu, matlamat kajian ini adalah untuk membangunkan formulasi kosmetik semulajadi yang mengandungi KLE dan menilai ciri-ciri fizikokimia, sifat mikrobiologi, kestabilan penyimpanan, aktiviti biologi (antioksidan, antityrosinase, dananti penuaan), sitotoksisiti in vitro (pada fibroblas kulit manusia normal dan sel melanoma B16F10) dan ujian melanogenesis (aktiviti tyrosinase intraselular dan pengurangan pengeluaran melanin). Keputusan menunjukkan bahawa losyen KLE (KLEL) yang disediakan oleh 15 peratus minyak biji kenaf (KSO) (F2) dengan 0.1 peratus w/w KLE menghasilkan kestabilan fizikal dan mikrobiologi terbaik, tanpa ketoksikan pada sel manusia. KLEL juga mempersembahkan kandungan antioksidan sehingga 1.84 ± 0.07 mg bersamaan asid kafeik (CAE)/g dan 21.62 ± 0.76 mg bersamaan hidrat katekin (CHE)/g untuk jumlah kandungan fenolik (TPC) ) dan jumlah kandungan flavonoid (TFC), masing-masing. Di samping itu, KLEL membentangkan kapasiti antitirosinase pada perencatan pembentukan mikofenolat (30.28 ± 3.90 peratus ) dan diphenol (11.40 ± 0.29 peratus), dan mendedahkan, buat kali pertama,anti penuaansifat dengan menghalang aktiviti kolagenase (36.41 ± 0.54 peratus ) dan elastase (23.13 ± 1.56 peratus). Mengenai aktiviti perencatan melanogenesis, KLEL mempamerkan keberkesanan yang tinggi dalam menyekat aktiviti tyrosinase selular dan kandungan melanin pada sel B16F10. Secara keseluruhannya, hasil daripada kajian ini amat menjanjikan ke arah pembangunan prototaip kosmetik semulajadi menggunakan daun kenaf.

desert cistanche dragon herbs: anti-penuaan

1. Pengenalan

Baru-baru ini, model ekonomi pekeliling yang boleh meningkatkan kemampanan pengurusan sisa dengan meminimumkan pengeluaran sisa dan mengekalkan nilai jangka panjang, di samping mengurangkan akibat negatif kekurangan sumber dan kemerosotan alam sekitar telah mendapat minat awam (Morseletto, 2020). Secara umumnya, sejumlah besar produk sampingan dengan nilai ekonomi yang rendah dijana oleh industri tanaman industri setiap tahun.Hibiscus cannabinusIndustri L. KR9 (kenaf), merupakan salah satu sektor pertanian yang menyumbang kepada KDNK (keluaran dalam negara kasar) Malaysia dengan berat pengeluaran batang kering kenaf meningkat daripada 7.1 (000 tan) pada tahun 2013 kepada 7.6 ({{7} } tan) pada 2014, dan pasaran kenaf global mengunjurkan mencecah AS$ 854 juta menjelang 2025 (Abdelrhman et al., 2016). Walau bagaimanapun, kuantiti produk sampingan yang banyak dihasilkan, seperti biji kenaf dan daun, yang menyumbang kepada masalah kelestarian.

Daun Kenaf, merangkumi sejumlah besar jumlah produk sampingan, adalah yang paling kurang dicirikan dan dinilai antara semua produk sampingan yang dihasilkan. Oleh kerana pendekatan pekeliling, adalah penting untuk menggunakan semula atau mendapatkan semula daun kenaf menjadi produk nilai tambah kerana ia menawarkan pelbagai manfaat dalam bidang ekonomi, alam sekitar dan sosial (Coderoni dan Perito, 2019). Daun Kenaf terdiri daripada sumber yang kaya dengan sebatian bioaktif seperti asid klorogenik, bantuan kafein, kaempferol, dan katekin hidrat seperti yang dibuktikan oleh kajian yang dijalankan oleh Kho et al. (2019); Sim dan Nyam (2019), dan Haw et al. (2020). Walau bagaimanapun, ia biasanya ditakdirkan untuk pengeluaran produk bernilai ekonomi rendah: serat makanan dan makanan haiwan (Lim et al., 2020).

Istilah "kembali kepada alam semula jadi" telah digunakan secara meluas dalam penyelidikan dan pembangunan industri kosmetik, kerana penggunaan ekstrak asal botani telah menghasilkan penerimaan yang baik oleh pengguna. Menurut kajian yang dijalankan oleh Sim et al. (2019), ekstrak daun kenaf (KLE) menunjukkan sifat antioksidan dan antitirosinase yang menjanjikan, berpotensi untuk digunakan sebagai bahan nilai tambah dalam pembangunan produk kosmetik. Adalah penting untuk membangunkan formulasi yang stabil dan selamat yang mengandungi KLE kerana ia mengandungi banyak sebatian polifenol yang menunjukkan kulit.pemutihandananti penuaanharta benda. Terdapat beberapa keperluan yang perlu diambil kira semasa membangunkan formulasi kosmetik baharu, seperti jenis formulasi, tujuan penggunaan, dan potensi interaksi antara bahan yang digunakan dalam formulasi, yang secara keseluruhannya, menyumbang kepada keperluan untuk kajian kestabilan dan keselamatan. (Garbossa dan Maia Campos, 2016).

Kajian kestabilan, yang merangkumi kajian ciri fizikal, kimia, dan mikrob, adalah perlu untuk formulasi kosmetik selepas proses pembangunan. Di samping itu, untuk mengelakkan sebarang kesan buruk atau tindak balas alahan, produk kosmetik juga perlu diuji dengan menggunakan ujian sitotoksisiti in vitro pada garisan sel kulit manusia biasa. Justeru, objektif kerja ini adalah untuk membangunkan formulasi kosmetik semulajadi yang mengandungi KLE (losyen KLE- KLEL). Kemudian, KLEL dinilai untuk ciri fizikokimia, sifat mikrobiologi, kestabilan penyimpanan, sitotoksisiti in vitro (pada fibroblas dermal manusia normal dan sel melanoma B16F10), dan ujian melanogenesis (aktiviti tyrosinase intraselular dan pengurangan pengeluaran melanin). Kajian ini juga membenarkan kami untuk menentukan, buat kali pertama, bukan sahaja aktiviti antioksidan dan anti-tirosinase KLEL tetapi juga aktiviti perencatan mereka pada kolagenase dan elastase.

manfaat cistanche: Anti-penuaan

2. Bahan-bahan dan cara-cara

2.1. Bahan tumbuhan dan bahan kimia

SegarHibiscus cannabinusL. KR9 (kenaf) daun 90 hari selepas disemai dan benih diperoleh daripada Lembaga Kenaf & Tembakau Negara (LKTN, Malaysia). Span 20 dan Tween 80 telah dibeli daripada Sigma Aldrich (Munich, Jerman), Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, dan Emulgade® SE-PF diperoleh daripada BASF (Malaysia), dan gliserin dibeli daripada Croda International Plc. (United Kingdom). Talian sel fibroblast dermal manusia biasa (NHDF) diperoleh daripada Lonza (Basel, Switzerland) dan melanoma tetikus (B16F10) dibeli dari ATCC (Manassas, VA, Amerika Syarikat). Modified Eagle Medium (DMEM) Dulbecco telah dibeli dari Nacalai Tesque (Jepun). Semua bahan kimia lain yang digunakan adalah gred reagen analitik (Belgium, Jerman, Malaysia). Air ultra tulen (Millipore, USA) telah digunakan sepanjang analisis.

2.2. Kaedah

2.2.1. Pengeringan daun kenaf

Daun kenaf dibersihkan dengan air ultra-tulen, dikeringkan, dan kemudian disimpan pada suhu − 80 ◦C semalaman. Kemudian, sampel dikeringkan dalam pengering beku (Christ, Jerman), di bawah 0.0004 bar selama 48 jam, dikisar, dibungkus dengan vakum, dan disimpan pada -20 darjah.

2.2.2. Penyediaan ekstrak daun kenaf tulen separa (KLE)

Pengekstrakan bantuan ultrasonik berdenyut (PUAE) KLE telah dijalankan mengikut Sim et al. (2019). Sampel ditimbang dengan pelarut pengekstrakan (etanol) dalam nisbah 1:10. Kemudian, campuran itu tertakluk kepada pengekstrakan bantuan ultrasonik berdenyut (Sartorius, Jerman) pada amplitud sonikasi 50 peratus, tempoh tempoh nadi 1 min, dan tempoh selang nadi 1 minit dengan suhu dikekalkan pada 18-22 ± 3 darjah (tiga kitaran). ). Kemudian, ekstrak itu ditapis dan ditumpukan dalam penyejat berputar vakum (Buchi, Switzerland). Pembersihan separa KLE telah dijalankan mengikut Seabra et al. (2010) dengan sedikit pengubahsuaian. Ekstrak mentah telah digunakan pada lajur yang diisi dengan gel silika dan dicairkan dengan pelarut kecerunan n-heksana-etil asetat (100:00, 90:10, 80:20, 50:50 , 20:80, 10:90, 00:100) dan metanol etil asetat (100:00, 90:10, 80:20, 50:50, 20:80, 10:90 , 00:100). KLE yang telah dimurnikan sebahagiannya ditumpukan kepada kekeringan dengan menggunakan penyejat berputar dan disimpan pada -20 darjah untuk kegunaan masa hadapan.

2.2.3. Pengekstrakan pelarut minyak biji kenaf (KSO)

KSO diekstrak mengikut Chew et al. (2015). Biji Kenaf dikisar menjadi serbuk halus menggunakan mesin pengisar (Panasonic, Jepun) dan ditambah dengan heksana dalam nisbah 1:5. Minyak diekstrak dengan menggunakan pengekstrak Soxhlet pada 60 ◦C selama 3 jam, dan heksana dikeluarkan dengan menggunakan penyejat berputar. Selepas disiram dengan nitrogen, KSO disimpan pada -20 darjah untuk kegunaan masa hadapan (Chew et al., 2015).

2.2.4. Eksperimen pembangunan formulasi losyen yang mengandungi KLE

Pada mulanya, formulasi asas losyen (tanpa KLE) telah dioptimumkan dengan menggunakan 4 kepekatan minyak biji kenaf (KSO) yang berbeza (10 peratus , 15 peratus , 20 peratus dan 25 peratus ). Asas losyen kemudiannya dinilai secara perbandingan untuk pelbagai parameter: rupa fizikal, bau, homogeniti, pH, kelikatan, sentrifugasi, dan penilaian beku-cair, untuk memilih formulasi asas losyen terbaik untuk kajian lanjut. Mengenai keputusan daripada parameter di atas, formulasi asas losyen yang paling sesuai (15 peratus KSO) telah dipilih untuk digabungkan dengan KLE (0.1 peratus b/b) (KLEL). Secara ringkas, bahan fasa bukan kutub (Emulgade® SE PF, Span 20, dan KSO) dan fasa kutub (air, Tween 80, dan gliserin) telah dipanaskan sehingga 75 ± 2 darjah . Kemudian, fasa bukan kutub ditambah setitik demi setitik ke fasa kutub dengan kacau pantas menggunakan pengacau magnet (Thermo Fisher Scientific, USA) pada 350 rpm untuk membentuk emulsi primer, diikuti dengan homogenisasi ricih tinggi menggunakan IKA T25 digital ULTRA -TURRAX® (Peralatan Makmal IKA, Jerman) pada 3200 rpm selama 3 minit dan homogenisasi ultrasonik pada amplitud 40 peratus selama 3 minit. Cosmedia® ACE, Iscaguard® PEG, dan KLE telah ditambah dan dicampur pada emulsi O/W pada suhu bilik. Pangkalan losyen KSO tanpa KLE berfungsi sebagai kawalan (KSOL). Manakala asas losyen yang ditambah dengan asid kojik (0.1 peratus b/b) (KAL) berfungsi sebagai kawalan positif untuk aktiviti anti-tirosinase dan ujian melanogenesis. Asas losyen ditambah dengan catechin hydrate (0.1 peratus b/b) (CHL) berfungsi sebagai kawalan positif untuk aktiviti anti kolagenase dan antielastase

2.2.5. Analisis fizikokimia

2.2.5.1. Penampilan, bau, dan kehomogenan.

Menurut Hanifah dan Jufri (2018), formulasi losyen diperiksa untuk warna, bau dan kehomogenan, dan pemisahan fasa.

2.2.5.2. pH. Penyelesaian piawai digunakan untuk menentukur elektrod meter pH sebelum pengukuran.

pH sampel ditentukan dengan meter pH (Mettler Toledo, Switzerland) pada suhu bilik.

2.2.5.3. Warna.

Warna akan dinilai dengan menggunakan colorimeter (Hunter Lab, Amerika Syarikat). Keputusan akan dinyatakan mengikut ruang warna L* (lightness), a* (hijau), b*(kuning), dan jumlah pembezaan warna (ΔE). Jumlah perbezaan warna (ΔE) untuk semua sampel dikira dengan menggunakan persamaan seperti berikut: ΔE = ̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅̅ (l * - l * 0) 2 ditambah (a * - a * 0) 2 ditambah (b * - b * 0) 2√

2.2.5.4. Kelikatan.

Kelikatan sampel telah dinilai dalam viskometer medan Brook menggunakan gelendong LV-64 mengikut Gyawali et al. (2016) dengan sedikit pengubahsuaian. Sampel direndam terus ke dalam gelendong dengan kadar putaran 100 rpm dan kelikatan (cP) diukur.

2.2.5.5. Kebolehtebaran.

Kebolehtebaran sampel ditentukan oleh kaedah plat selari (Gyawali et al., 2016). Sampel ditimbang dengan tepat (1 g) dan diletakkan di atas salah satu slaid kaca (20 × 20 cm2). Kemudian, slaid yang lain diletakkan di atas sampel dan berat 100 g diletakkan di atas slaid atas, untuk memastikan sampel ditekan sama rata. Selepas 1 minit, berat dikeluarkan, dan diameter hamparan (cm) diukur.

2.2.5.6. Penilaian sentrifugasi.

Sampel telah dimuatkan ke dalam tiub sentrifugasi dan kemudian disentrifugasi pada 3750 rpm selama 30 minit (Eppendorf 5417R, USA). Ujian sentrifugasi ini (sama dengan 1-graviti tahun) menentukan kestabilan sampel (Hiola et al., 2018).

2.2.5.7. Penilaian beku-cair.

Kajian beku-cair telah dijalankan mengikut kaedah sebelumnya dengan sedikit pengubahsuaian (Krongrawa et al., 2018). Setiap sampel disimpan secara bergilir-gilir pada suhu sejuk, 4 ± 1 ◦C (24 jam) dan suhu panas, 45 ± 1 ◦C (24 jam) dengan 75 peratus ± 2 peratus RH (kelembapan relatif) selama 6 kitaran dalam bekas kaca kedap udara. Kelikatan sampel ditentukan selepas kitaran tegasan suhu.

2.2.6. Penentu kandungan antioksidan

2.2.6.1. Jumlah kandungan fenolik (TPC).

Jumlah kandungan fenolik ditentukan mengikut Lim et al. (2007). Sampel (10 mg/mL) dicampur dengan 10 peratus reagen Folin-Ciocalteu dan 7.5 peratus (b/b) Na2CO3, diikuti dengan pengeraman selama 30 minit dalam gelap. Penyerapan diambil pada 765 nm dengan menggunakan spektrofotometer UV-vis (Secoman, Perancis). Persamaan penentukuran untuk asid kafeik ialah y=0.0269 ditambah 9.69x ( r2=0.999) (Sim et al., 2019). Keputusan dinyatakan sebagai mg sampel setara asid kafeik (CAE)/g.

2.2.6.2. Jumlah kandungan flavonoid (TFC).

Jumlah kandungan flavonoid dinilai mengikut Ogbunugafo et al. (2011). Secara umum, sampel (10 mg/mL) dicampur dengan 15 peratus NaNO2, 10 peratus larutan AlCl3, air ultra-tulen dan 1 M NaOH. Penyerapan diukur serta-merta pada 510 nm berbanding dengan piawaian yang disediakan menggunakan catechin hydrate (0.02− 0.1 mg/mL). Persamaan penentukuran untuk hidrat katekin ialah y=0.004 tambah 3.1x ( r2=0.999) (Sim et al., 2019). Jumlah kandungan flavonoid (TFC) dinyatakan sebagai miligram catechin hydrate equivalents (CHE)/g sampel.

faedah ekstrak cistanche: anti-penuaan

2.2.7. Aktiviti antikolagenase

Aktiviti anti kolagenase berdasarkan degradasi proteolitik antara kolagenase dan substrat sintetik (FALGPA- N-(3-[2-Furyl]- acrylyl)-Leu-Gly-Pro-Ala) pada 345 nm dalam kehadiran perencat kolagenase telah dijalankan mengikut Barrantes dan Guinea (2003) dengan beberapa pengubahsuaian. 0.25 unit/mL kolagenase (40 μL) yang diperolehi daripada Clostridium histolyticum dibenarkan bertindak balas dengan 10 μL sampel ujian dan 20 μL 50 mM penimbal trisin (pH 7.5, dengan 100 mM CaCl2 dan 5 mM NaCl) dalam gelap selama 1 minit. Selepas pra-pengeraman, sejumlah 40 μL larutan 2 mM FALGPA telah ditambah kepada setiap telaga. Setiap sampel disertakan dengan kosong yang mempunyai semua komponen kecuali FALGPA dan penyerapan ditentukan selepas diinkubasi selama 20 minit.

2.2.8. Analisis jangka hayat bakteria KLEL

Kaedah yang digunakan untuk jumlah kiraan mikrob aerobik (TAMC) dan jumlah kiraan yis dan acuan (TYMC) KLEL telah diubah suai daripada manual analisis bakteriologi FDA (BAM) (Huang et al., 2017). Sampel (1 g) dicampur dengan 1 mL steril Tween 80 dan isipadu diselaraskan dengan air pepton steril untuk mendapatkan siri pencairan lengkap dari 10− 1 hingga 10− 3. Untuk TAMC, sampel telah diinokulasi pada agar nutrien menggunakan kaedah spread plate, dan kemudian plat diinkubasi pada 30 ± 2 ◦C selama 48 jam. Dalam kes TYMC, sampel telah diinokulasi pada plat agar dextrose kentang menggunakan kaedah spread plate, dan plat kemudiannya diinkubasi pada suhu 30 ± 2 ◦C selama 7 hari. Plat telah diperiksa untuk pertumbuhan mikrob selepas tempoh inkubasi.

2.3. Analisis statistik

Semua keputusan dianalisis menggunakan pakej statistik Minitab 16.2.1 (Minitab Inc., Pennsylvania, Amerika Syarikat), Analisis varians Sehala (ANOVA) telah dilakukan, diikuti dengan ujian Tukey untuk menentukan perbezaan ketara (p < 0="" .05).="" min="" ±="" sisihan="" piawai="" (sd)="" (n="3)" telah="" dibentangkan="" untuk="" analisis="">

3. Keputusan dan perbincangan

3.1. Pengoptimuman formulasi asas losyen

Menurut Hiola et al. (2018), pengoptimuman asas losyen (pra-formulasi) mempunyai peranan penting untuk mendapatkan formulasi yang baik dan stabil. Oleh itu, asas losyen telah dioptimumkan dengan menggunakan 4 peratusan KSO yang berbeza seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 1. Mereka dinilai oleh rupa, bau, homogeniti, kestabilan fizikal, pH, kebolehtebaran, kelikatan, dan analisis beku-cair (bahan tambahan- S1 dan S2). Semua formulasi asas losyen yang disediakan menggunakan KSO mempunyai warna kuning susu muda hingga kuning susu, dengan bau yang harum (Chu dan Nyam, 2020). Berdasarkan keputusan yang diperoleh, semua nilai pH formulasi asas losyen berada dalam julat pH kulit (4–6), dan ini penting untuk meminimumkan tindak balas alahan dan memastikan kestabilan formulasi kosmetik sepanjang masa penyimpanan (Chu dan Nyam , 2020). Semua formulasi asas losyen menunjukkan penurunan kelikatan selepas analisis beku-cair, tetapi masih dalam julat untuk losyen yang baik (500–5000 cP) (Kusuma et al., 2017). Untuk kebolehsebaran, semakin tinggi kepekatan KSO, semakin kecil diameter kebolehsebaran kerana kelikatan yang tinggi. Lebih besar kebolehsebaran, lebih mudah formulasi kosmetik boleh digunakan pada permukaan kulit. Untuk ujian kestabilan dengan rintangan kepada sentrifugasi, F2 dan F3 tidak menunjukkan pemisahan fasa, menunjukkan bahawa kedua-dua rumusan adalah stabil selama 1 tahun. Walau bagaimanapun, F3 tidak boleh dituangkan dengan mudah dan memberikan penampilan yang menyerupai penyediaan krim kerana ia mempunyai kelikatan yang lebih tinggi daripada F2. Oleh itu, F2 dipilih sebagai asas losyen yang dioptimumkan untuk digabungkan dengan KLE.

apakah cistanche digunakan untuk: anti-penuaan

3.2. Penilaian formulasi losyen KLE (KLEL).

3.2.1. Analisis fizikokimia

Berdasarkan keputusan dalam Jadual 2, asas losyen yang ditambah dengan KLE menunjukkan warna susu cerah dengan bau yang menyenangkan dan tiada pemisahan fasa diperhatikan. KLEL menunjukkan nilai pH yang lebih tinggi daripada kawalan, menunjukkan penambahan KLE ke dalam formulasi kosmetik boleh mengakibatkan peningkatan nilai pH. Nilai pH sampel semuanya serasi dengan julat pH kulit dan selamat untuk kulit. Tiada perbezaan ketara dalam kelikatan dan kebolehtebaran antara KLEL dan kawalan, yang menunjukkan penambahan KLE ke dalam emulsi tidak menjejaskan kelikatan dan kebolehtebaran. Perubahan ketara diperhatikan pada nilai L*, a*, dan b* KLEL berbanding kawalan, yang membuktikan bahawa warna losyen dipengaruhi oleh warna hijau semulajadi daun kenaf. KLEL mempunyai nilai paling hijau untuk a* (-2.24 ± 0.03) dan paling kuning untuk nilai b* (15.54 ± 0.{{13} }1). Jumlah perbezaan warna (ΔE) KLEL berbanding dengan kawalan adalah signifikan secara statistik p＜0.05, dengan nilai 6.82 ± 0.04 untuk KLEL. Kajian terdahulu menganggap ΔE=2 sebagai ambang untuk diskriminasi visual (Zhou et al., 2009). Oleh itu, keputusan ΔE membuktikan bahawa penambahan KLE boleh menjejaskan warna formulasi kosmetik.

3.2.2. Analisis kandungan antioksidan

Jadual 3 menunjukkan jumlah kandungan fenolik (TPC) dan flavonoid (TFC). Keputusan yang diperoleh menunjukkan asas losyen yang diformulasikan dengan KLE mengandungi TPC yang jauh lebih tinggi (1.84 ± 0.07 mgCAE/g) berbanding kawalan (1.64 ± 0.0 6 mgCAE/g). Manakala, bagi TFC, KLEL juga menunjukkan lebih tinggi ketara dalam TFC (21.62 ± 0.76 mgCHE/g) berbanding kawalan (19.42 ± 0.27 mgCHE/g). Dalam julat yang sama beberapa produk sampingan tumbuhan, kemasukan KLE pada asas dermatologi masih memberikan kandungan antioksidan yang tinggi, menonjolkan potensi sumber sebatian polifenol dalam industri kosmetik (Adhikari et al., 2019; Rodrigues et al., 2014). ). Menurut kajian oleh Haw et al. (2020), daun kenaf kaya dengan pelbagai jenis sebatian polifenol seperti asid kafeik, asid tannic, katekin, dan asid klorogenik.

3.2.3. Analisis aktiviti antioksidan

Keupayaan penghapusan radikal bebas losyen telah disiasat dengan menggunakan ujian DPPH dan ABTS. Jadual 3 menunjukkan bahawa KLEL menunjukkan DPPH yang lebih tinggi (1.16 ± 0.18 mgTEAC/g) dan ABTS (0.50 ± 0.0 4 mgTEAC/g) aktiviti penghapusan radikal berbanding dengan kawalan. Penemuan ujian DPPH dan ABTS telah menunjukkan corak yang sama seperti dalam TPC dan TFC, di mana ia boleh meningkatkan aktiviti antioksidan dengan menambahkan KLE ke dalam asas losyen, penemuan ini telah mencadangkan bahawa KLE mengandungi penghapus radikal bebas yang apabila digunakan dalam formulasi kosmetik, boleh memainkan peranan penting sebagai antioksidan utama dalam menekan radikal bebas yang menyebabkan penuaan kulit. Selain itu, KLEL (0.69 ± 0.20 mgTEAC/g) juga menunjukkan kebolehan pengurangan ion ferik tertinggi yang ketara berbanding kawalan (0.46 ± 0.09 mgTEAC/g), selaras dengan DPPH dan ABTS. Terdapat keperluan untuk bekalan berterusan sebatian antioksidan dari sumber luar seperti kosmetik untuk memulihkan sistem pertahanan antioksidan kulit individu terhadap ROS yang menyebabkan penuaan kulit (Działo et al., 2016). Selain itu, formulasi losyen dengan aktiviti penghapusan radikal dan mengurangkan kuasa boleh digunakan sebagai kulitpemutihanagen oleh pengeluaran melanin yang disebabkan oleh UV yang dikawal (Działo et al., 2016).

3.2.4. Aktiviti perencatan enzim

Losyen telah diuji terhadap tyrosinase, enzim metalloprotein yang mengandungi tembaga yang terlibat dalam biosintesis melanin, untuk penilaian aktiviti antityrosinase in vitro. Jadual 5 menunjukkan bahawa KLEL (30.28 ± 3.90 peratus ) tidak menunjukkan perbezaan yang ketara dalam aktiviti anti-tirosinase dengan kawalan positif (34.05 ± 4.60 peratus ) apabila menggunakan L-tirosin sebagai substrat . Walau bagaimanapun, SEMUA (11.40 ± 0.29 peratus ) menunjukkan aktiviti antitirosinase yang lebih rendah daripada kawalan positif (15.01 ± 0.84 peratus), apabila menggunakan L-DOPA sebagai substrat. Ini menunjukkan bahawa KLEL terutamanya menghalang mikofenolat dan bukannya diphenol. Dalam vitroanti penuaansifat dinilai melalui aktiviti perencatan kolagenase dan elastase. Enzim seperti kolagenase dan elastase boleh merendahkan kolagen dan elastin, yang bertanggungjawab untuk keutuhan dan keanjalan kulit (Jesumani et al., 2019). Jadi, perencatan aktiviti elastase dan kolagenase akan mengurangkan degradasi elastin dan kolagen sekali gus menghalang pembentukan kedutan, salah satu tanda utama penuaan. Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 5, KLEL menunjukkan aktiviti anti kolagenase yang luar biasa (36.41 ± 0.54 peratus ) dan antielastase (23.13 ± 1.56 peratus ) berbanding dengan kawalan positif (CHL). KSOL juga menunjukkan antityrosinase (18.82 ± 0.17 peratus (L-tirosin sebagai substrat); 8.48 ± 0.29 peratus (L-DOPA sebagai substrat), anti kolagenase (18.84 ± {{26 }}.63 peratus ) dan aktiviti antielastase (5.78 ± 0.59 peratus), tetapi lebih rendah daripada SEMUA. Ini mungkin menunjukkan bahawa gabungan KLE dan KSO menunjukkan kesan sinergistik dengan aktiviti perencatan enzim yang lebih baik. Ini disokong oleh kajian yang dijalankan oleh Pascoal et al. (2015) dan Chew et al. (2016), di mana KSO kaya dengan tokoferol, manakala KLE kaya dengan derivatif quercetin dan kaempferol. Sebatian ini menunjukkan kulitpemutihandananti penuaansifat, dengan minat dalam pengurangan hiperpigmentasi kulit dan pengeluaran kedutan (Lin et al., 2007; Keen dan Hassan, 2016).

3.2.5. Ujian melanogenesis in vitro

Untuk meneroka lebih lanjut kulitpemutihansifat KLEL, model sel melanoma B16F10 digunakan untuk mengkaji kesan perencatan pada melanogenesis. Untuk aktiviti tyrosinase selular, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 5a, KLEL (32.35 peratus) pada 500 ug/mL menunjukkan perencatan yang ketara lebih kuat pada aktiviti tyrosinase selular daripada KAL (14.85 peratus) dan KSOL (13.64 peratus), jika dibandingkan dengan a-MSH. sel kawalan yang dirawat. Untuk kandungan melanin ekstrasel dan intrasel, KLEL bergantung kepada dos mengurangkan kandungan melanin sel B16F10 (Rajah 5b dan c). ALL (500 ug/mL) didapati mempunyai kesan perencatan yang setanding pada kandungan melanin ekstraselular (56.13 peratus ) (berbanding dengan sel kawalan yang dirawat MSH) dengan KAL (54.53 peratus). Di samping itu, KLEL (36.52 peratus ) juga menunjukkan kesan perencatan yang lebih kuat pada kandungan melanin intrasel berbanding KAL (7.98 peratus). Manakala, KSOL juga menunjukkan kesan perencatan ke atas kandungan melanin ekstraselular (17.73 peratus ), tetapi tiada kesan ke atas kandungan melanin intraselular. Berbanding dengan KAL, kesan perencatan KLEL yang lebih kuat terhadap perencatan melanogenesis boleh dijelaskan oleh aktiviti sinergi antara KSO dan KLE, yang boleh meningkatkan sifat pemutihan kulit KLE dalam asas losyen. Keputusan ini seterusnya membuktikan bahawa KLE boleh digunakan sebagai agen pemutih kulit yang berkesan dalam prototaip kosmetik semula jadi.

3.2.6. Ujian sitotoksisiti in vitro

Dengan menilai biokompatibiliti KLEL (analisis MTT), daya maju sel NHEF (selepas 24, 48, 72 jam) ditanam dengan kehadiran kepekatan KLEL yang berbeza (0.125− 2 mg/mL) dikekalkan di atas 95 peratus (Rajah 4a). Ini menunjukkan bahawa KLEL tidak akan menyebabkan keracunan kepada manusia. Manakala sel melanoma B1610 digunakan secara meluas dalam kajian untuk kulitpemutihanejen (Chahatikun et al., 2019; Lee et al., 2019). Sebelum pengukuran keupayaan KLEL untuk menyekat melanogenesis dalam sel melanoma B16F10, sitotoksisiti KLEL telah dinilai. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4b, telah disahkan bahawa KLEL tidak toksik kepada sel melanoma B16F10 pada kepekatan yang lebih rendah daripada 500 ug/mL. Oleh itu, 32.5− 500 ug/mL KLEL telah digunakan untuk eksperimen berikut.

4. Kesimpulan

Kajian ini terbukti sangat penting dalam model ekonomi pekeliling yang dipenuhi, kerana ia memperkenalkan aplikasi baru yang mungkin untuk daun kenaf sebagai bahan bernilai tambah tinggi dengan sifat penjagaan kulit untuk industri kosmetik, iaitu antioksidan,anti penuaan, dan aktiviti anti melanogenik. Penemuan yang dibentangkan dalam kajian juga menunjukkan bahawa formulasi losyen yang disediakan oleh 15 peratus KSO (F2) dengan 0.1 peratus KLE menghasilkan kestabilan fizikal dan mikrobiologi yang terbaik, tanpa ketoksikan pada sel manusia. Sebagai kesinambungan, kajian lanjut juga harus ditumpukan kepada ujian cabaran mikrob KLEL dan keberkesanan klinikal.

suplemen cistanche