Kesan Antioksidatif Phenylethanoid Daripada Cistanche Deserticola

Hubungi: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mel:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 dan Tsuneo Namba"

Ekstrak aseton-H2O (9:1) daripada batang Cistanche deserticola menunjukkan aktiviti penghapusan radikal bebas yang kuat. Sembilan sebatian fenilethanoid utama telah diasingkan daripada ekstrak ini. Mereka telah dikenal pasti oleh NMR sebagai acteoside, isoacteoside, l^acetylacteoside, tubuloside B, echinacoside, tubuloside A, syringalide A 3z-a-rhamno-pyranoside, cistanoside A dan cistanoside F. Kesemua sebatian ini menunjukkan aktiviti penghapusan radikal bebas yang lebih kuat daripada a -tokoferol pada 1,1 -diphenyI-2-radikal picrylhydrazy 1 (DPPH) dan xanthine/xanthine oxidase (XOD) menjana radikal anion superoksida (Oj). Antara sembilan sebatian, isoacteoside dan tubuloside B, yang bahagian caffeoylnya berada pada d'-kedudukan glukosa, menunjukkan kesan perencatan pada XOD. Kami selanjutnya mengkaji kesan feniletanoid ini pada peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus yang disebabkan oleh od meth enzimatik dan bukan enzim. Seperti yang dijangkakan, setiap daripada mereka mempamerkan perencatan yang ketara pada kedua-dua asid askorbik/Fe2 plus dan ADP/NADPH/Fe3 ditambah yang disebabkan oleh peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus, yang lebih kuat daripada a-tokoferol atau asid kafeik. EflFect antioksida telah didapati diperkuatkan oleh peningkatan bilangan kumpulan hidroksil fenolik dalam molekul.

Kata kunci: Cistanche deserticola; feniletanoid;antioksidan; DPPH (1 ,1 -diphenyl-2-picrylhydrazyl) radikal; radikal anion superoksida; peroksidasi lipid

batang Cistanche deserticola

Batang Cistanche spp. (Cistanche Herba, keluarga Orobanchaceae) ialah tonik dalam perubatan tradisional Cina yang digunakan untuk kekurangan buah pinggang yang dicirikan oleh mati pucuk, rasa sejuk di pinggang dan lutut, kemandulan wanita, dan sembelit akibat kekeringan usus pada nyanyuk.Sebilangan juzuk termasuk fenil- etmoid (kadangkala dipanggil fenilpropanoid),2) idoid3* dan polisakarida4) telah diasingkan daripada tumbuhan ini. Sato et al5} melaporkan bahawa beberapa phenylethanoid daripada ubat mentah ini menunjukkan kesan perlindungan terhadap penurunan kedua-dua tingkah laku seksual dan pembelajaran dalam mengantung tikus yang penuh tekanan. Phenylethanoid adalah juzuk utama tumbuhan ini dan dianggap menyumbang kepada pelbagai tindakan ubat ini.6)

Phenylethanoid diedarkan secara meluas dalam kerajaan tumbuhan dan ada yang didapati mempunyai aktiviti anti-anoksia,7) anti-neoplasma,8) perencatan enzim, 9* anti-keradangan,10) antinefritis,1 n anti-mikroorganisma, dan imunomodulasi.12) Kajian tentang aktiviti antioksidan beberapa phenylethanoid daripada Pedicularis juga dilaporkan,13 -15) tetapi tiada laporan ditemui berkaitan dengan aktiviti antioksidan phenylethanoids daripada spesies Cistanche.

Sememangnya diakui bahawa radikal bebas terlibat secara kritikal dalam pelbagai patogen seperti kanser, gangguan kardiovaskular, arthritis, keradangan, serta dalam proses degeneratif yang berkaitan dengan penuaan.16™18) Dalam pemeriksaan kami untuk agen anti-penuaan daripada sumber semula jadi. , kami mendapati bahawa setiap ekstrak CHC13 (C), EtOAc (E), aseton (A), aseton-H2O (9:1) (AH), dan air (H) daripada batang Cistanche deserticola menunjukkan DPPH yang kuat. aktiviti penghapusan radikal (Rajah 1), antaranya, yang paling kuat ditunjukkan oleh aseton—H?.(9:1) ekstrak (AH). Ekstrak aseton-H2O (9:1) mengandungi nisbah feniletanoid yang tinggi, yang mungkin merupakan juzuk aktif kesan penghapusan radikal bebas. Kami mengasingkan feniletanoid utama daripada ekstrak ini dan mengkaji kesan antioksida melalui pemusnahannya terhadap radikal DPPH dan xanthine/XOD yang menjana radikal anion superoksida, dan perencatan asid askorbik/Fe2 plus dan ADP/NADPH/Fe3 ditambah yang disebabkan oleh peroksidasi lipid dalam hati tikus. mikrosom.

Cistanche deserticola

BAHAN DAN KAEDAH

Reagen Poliamida C-200 (75一150/zm) dan gel silika (Wakogel C-200, serbuk 75—150^m) untuk kromatografi lajur, DPPH (1,1 -difenil{{ 8}}picrylhydrazyl), xanthine, XOD (xanthine oxidase), NBT (nitroblue tetrazolium), ADP, g-NADPH, asid caffeic dan a-tocopherol telah dibeli daripada Wako Pure Chemicals, Osaka, Jepun. Malonaldehyde bis(dimethylacetal) berasal dari Tokyo Kasei, Tokyo, Jepun. BSA (albumin serum lembu) dan allopurinol adalah dari sigma, St. Louis, Amerika Syarikat Bahan kimia lain adalah gred analitik.

Serapan UV instrumen diukur pada aSpektrofotometer rakaman Shimadzu UV-2200, spektrum NMR dibawa pada JEOL GX-400 atau sistem JEOL JNM-LA 400WB FT NMR.

Bahan Tumbuhan Ubat mentah komersial (dihasilkan di Nei Monggol, dibeli di Pasar Ubat Mentah Bozhou, wilayah Anhui, China, 1995; baucar spesi men, TMPW No. 15479 disimpan di Muzium Materia Medica, Pusat Penyelidikan Analitik untuk Etnoperubatan, Penyelidikan Institut Wakan-Yaku, Universiti Perubatan dan Farmaseutikal Toyama) telah dikenal pasti sebagai batang Cistanche deserticola YC Ma dengan membandingkan watak morfologi dan anatominya dengan sampel sahih yang disediakan oleh Profesor Dawen Shi, Jabatan Farmakognosi, Shanghai Medical Uni versity, China.

Pengekstrakan dan Pengasingan Ubat mentah serbuk (5.87 kg) diekstrak berturut-turut dengan CHC13 (12, 9 1x2) dan EtOAc (9 1 x 3) pada suhu bilik dan refluks dengan aseton (9 1 x 3), aseton-玦0 (9:1,91x3) dan H2O (7.5 1x4) untuk memberikan ekstrak CHC13 (C) (28.7g), EtOAc (E) ( 13.4g), aseton (A) (95g), aseton- H2O (9:1) (AH) (175 g) dan H2O (H) (2.51kg), masing-masing. Sebahagian daripada lOOg ekstrak aseton-H2O (9:1) tertakluk kepada lajur poliamida C-200 (4{{5{0}}}0 g) dan dicairkan dengan H2O ({{41 }}) dan kemudian MeOH (5 1). Eluen MeOH (20 g) telah dicas pada lajur gel silika (600 g) dan dielusi dengan CHCl3-MeOH-H2O (8: 3:0.3) (5 1) untuk memberikan 10 pecahan. Setiap pecahan tertakluk kepada lajur Sephadex LH-20 dan dielusikan dengan pelbagai nisbah MeOH-H2O (0一50 peratus ); sembilan feniletanoid utama 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1.1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , 9 (75 mg) diperolehi.

Haiwan Jantan Std: Tikus Wistar (8 minggu, 230一 250 g) telah digunakan. Haiwan itu dibeli dari Pusat Haiwan Makmal Shizuoka dan diberi makan dengan pellet chow makmal (Clea Japan) dan diberi air ad libitum.

Penyediaan Suspensi Mikrosomal Hati Tikus Pecahan mikrosomal hati tikus telah disediakan dengan kaedah Kiso et al.l9) tetapi tanpa prarawatan fenobarbital. Selepas haiwan berpuasa selama 24 jam, hati telah diperas dengan larutan ais sejuk 0.9 peratus larutan NaCl in situ, kemudian dipotong menjadi kepingan nipis dan dihomogenkan dalam larutan KC1 1.15 peratus sejuk (1.{{9} } ml/g berat hati basah). Homogenat dicairkan empat kali dengan larutan KC1 1.15 peratus dan disentrifugasi pada 8000 g selama 20 minit pada 4 darjah. Pecahan supernatan kemudiannya dikumpul dan ultracentrifuge pada 105000 g selama 60 minit. Pelet yang diperoleh telah digantung semula dalam jumlah yang sama iaitu 1.15 peratus larutan KC1. Kandungan protein ditentukan dengan kaedah Lowry et menggunakan albumin sebagai piawai.

Penyediaan Sampel Sampel yang diuji telah dilarutkan dalam air atau etanol dan dicairkan dengan air kepada pelbagai kepekatan. Kepekatan akhir etanol adalah di bawah 1 peratus dalam semua sistem ujian kecuali ujian scavenging radikal DPPH. Etanol pada kepekatan akhir di bawah 1 peratus tidak menunjukkan kesan ke atas sistem ujian ini.

DPPH Radical Scavenging Effect Kesan scavenging sepadan dengan intensiti pelindapkejutan DPPH radikal, seperti yang diterangkan oleh Hatano et al.21) Lima ratus /A daripada 60 卩m DPPH dalam EtOH telah ditambah kepada 500 /zl larutan sampel dan dibenarkan untuk bertindak balas selama 30 minit pada suhu bilik, kemudian ketumpatan optik diukur pada 520 nm. Untuk kosong, EtOH digunakan sebagai ganti larutan DPPH, dan untuk kawalan, H2O digunakan sebagai ganti larutan sampel. Nilai IC50 dikira dari garis regresi di mana absis mewakili kepekatan sebatian yang diuji dan ordinat purata peratus pengurangan radikal DPPH daripada empat ujian berasingan.

Kesan ke atas Penjanaan Radikal Anion Superoksida Pengeluaran anion superoksida dalam sistem xanthine/XOD ditentukan menggunakan saiz separuh kaedah Imanari et al.22) Campuran yang terdiri daripada 900/zl daripada 0.05m Na2CO3 (pH 10.2), 50 /il setiap satu daripada 3mM xanthine, 3mM EDTA, 1.5mg/ml BSA, 0.75 mM NBT dan sampel yang diuji telah ditambah dengan 50 daripada 0.1 mg/ml XOD untuk memulakan tindak balas. Selepas pengeraman selama 30 minit, tindak balas dihentikan dengan 50 /il 6 mM CuCl2 dan penyerapan diukur pada 560 nm. Penyelesaian kawalan disediakan dengan cara yang sama, tetapi 50 /il H2O digunakan sebagai ganti larutan sampel. Dalam larutan kosong, 50 /il H2O digunakan sebagai ganti larutan XOD. Nilai IC50 dikira daripada garis regresi di mana absis mewakili kepekatan log sebatian yang diuji dan ordinat peratusan min perencatan pengurangan NBT empat dalam ujian bergantung.

Kesan Perencatan terhadap Aktiviti XOD Kesan perencatan pada aktiviti XOD dianggarkan dengan kaedah Hatano et al.* dengan beberapa pengubahsuaian. Campuran yang terdiri daripada 600/11 penimbal (0.1 m larutan fosfat, pH 7.5), 50 以 larutan XOD (0.068 U/ml dalam penimbal) dan 50 卩 1 larutan sampel telah diinkubasi terlebih dahulu selama 10 minit pada suhu 25 darjah . Kemudian, 300 pl larutan xanthine (0.1 mM dalam penimbal) telah ditambah kepada campuran, dan larutan yang terhasil diinkubasi selama 30 minit pada 25 darjah. Tindak balas enzim telah ditamatkan dengan menambah 1 n HC1 (100 /zl), dan penyerapan campuran tindak balas diukur pada 295 nm. Kepekatan asid urik yang terbentuk dalam campuran dikira daripada penyerapan, selepas menolak penyerapan larutan kosong yang disediakan seperti yang diterangkan di atas, kecuali larutan XOD digantikan dengan 50 /zl penimbal. Kesan perencatan pada XOD dinyatakan oleh peratus perencatan ( peratus ) pembentukan asid urik berbanding yang dalam kawalan, di mana air digunakan dan bukannya larutan sampel. Perencat XOD yang terkenal, allopurinol, digunakan sebagai kawalan positif.

Kesan Perencatan ke atas Pengoksidaan Lipid dalam Mikrosom Hati Tikus Pengoksidaan lipid dalam mikrosom hati tikus tidak disebabkan secara enzimatik oleh askorbik/Fe2 plus dan enzim secara matik disebabkan oleh ADP/NADPH/Fe3 plus diukur dengan kaedah Kiso et al.l9) dengan beberapa pengubahsuaian .

a) Asid Askorbik/Fe2 ditambah Pengoksidaan Lipid Teraruh dalam Mikrosom Hati Tikus: Campuran tindak balas terdiri daripada 390/11 daripada 100mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50pl daripada pecahan mikrosomal dalam 1.15 peratus KC1 (20mg protein/ml) dan 50 以 larutan sampel. Selepas menambah 10/11 daripada 10 mM asid askorbik/0.5mM FeSO4 dan kemudian mengeram pada 37 darjah selama 20 minit, campuran tindak balas telah disejukkan dalam ais untuk menghentikan tindak balas. Pengoksidaan lipid diukur dengan kaedah asid thiobarbituric24) dan dinyatakan sebagai pengeluaran MDA (malondialdehyde). Itu

b) ADP/NADPH/Fe3 ditambah Pengoksidaan Lipid Teraruh dalam Mikrosom Hati Tikus: Campuran tindak balas mengandungi 290贝 100mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8.0), 50/il ampaian mikrosomal dalam 1.15 peratus KC1 (20mg protein/ml) dan 50 以 sampel dalam air. Lima puluh ADP 20 mM yang baru disediakan, 50//I daripada 1 mM NADPH dan 10 daripada 2mM FeCl3 telah ditambah dan kemudian diinkubasi pada 37 darjah selama 30 minit. Pengoksidaan lipid diukur dan IC50 dikira dengan kaedah di atas.

faedah cistanche: melindungi hati

KEPUTUSAN

Penentuan Struktur Dengan perbandingan langsung data ^H-NMR dan 13C-NMR mereka dengan literatur,2* sembilan phenylethanoids telah dikenal pasti sebagai 2,-acetylacteoside (1), cistanoside A (2), tubuloside A (3), echinacoside ( 4), acteoside (5), syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6), tubuloside B (7), isoacteoside (8) dan cistanoside F (9), masing-masing (Rajah 2). Walau bagaimanapun, untuk acteoside, sebatian representatif feniletanoid, penetapan isyarat 13C-NMR C-3 dan C-4 dalam bahagian aglikon, C-3, C-4 , C-5 dan C-6 dalam bahagian kafein dalam laporan sebelumnya25) mengelirukan. Dengan kaedah 2D-NMR seperti HMBC dan HMQC, kami memperuntukkan dengan jelas data 13C-NMR acteoside sebagai bahagian aglikon Cl: 131.49, C-2: 117.14, C-3: 146.07, C{ {41}}: 144.62, C-5: 116.34, C-6: 121.29, Ca: 72.33, C# 36.54; bahagian caffeoyl Cl: 127.63, C-2: 115.26, C-3: 146.79, C-4: 149.78, C-5: 116.55, C-6: 123.24 , Ca: 168.33, Cg: 114.68, Cy: 148.04; bahagian glukosa C-l': 104.16, C-2': 75.97, C-3': 81.66, C4: 70.39, C-5': 76.16, C-6' : 62.35; dan bahagian rhamnose: Cl: 102.99, C-2: 72.22, C-3: 72.05, C-4: 73.79, C-5: 70.58, C-6 : 18.46.

Hubungan struktur-aktiviti telah dikaji untuk sembilan phenylethanoids ini oleh radikal DPPH dan xanthine/XOD yang menjana aktiviti penghapusan radikal anion superoksida, asid askorbik/Fe2 tambah dan ADP/NADPH/ Fe3 ditambah peroksidasi lipid teraruh dalam mikrosom hati tikus. Asid kafeik dan a-tokoferol yang merupakan pemusnah radikal bebas dan antioksidan yang terkenal telah digunakan sebagai bahan kawalan positif.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>syringalide A S'-a-rhamnopyranoside (6) (IC5O=5.52 /zm) > cistanoside F (9) (IC50=6.29 /im) > a-tocopherol (IC{{10 }}.2/m). Tubuloside B ⑺,echinacoside (4), 2/-acetylacetoside (1), tubuloside A (3), acteoside (5) dan isoacteoside (8) (IC5O=2.99一3.49 /im), setiap satunya mempunyai empat kumpulan hidroksil fenolik dalam molekul yang sama menunjukkan aktiviti yang lebih kuat daripada cistanoside A (2) yang 3-OH bagi bahagian aglikon telah dimetilasi. Syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) yang mempunyai hanya satu kumpulan OH dalam bahagian aglikon menunjukkan aktiviti yang agak lemah. Cistanoside F (9), yang mempunyai hanya dua kumpulan hidroksil yang terletak di bahagian caffeoyl tetapi tidak mempunyai phenylethanol aglycone, menunjukkan aktiviti yang paling lemah.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanoside A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tokoferol (IC50 > 10 〃m).

Kesan Perencatan pada Aktiviti XOD Hanya isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang bahagian caffeoylnya berada pada kedudukan 6z bagi glukosa, mempunyai kesan perencatan ke atas aktiviti XOD, dan feniletanoid lain, yang mempunyai bahagian caffeoyl pada ^- kedudukan glukosa, tidak menunjukkan kesan pada kepekatan yang diuji (25一200 m) (Jadual 1). mengasingkan sembilan sebatian fenilethanoid utama daripada ekstrak ini dan menentukan strukturnya dengan NMR. sistem sebagai tubuloside B (7)M2'-acetylacteoside (1) iso-acteoside (8) echinacoside (4) tubuloside A (3) M acteo side (5) > syringalide A 3'-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9); dalam sistem ADP/NADPH/Fe3 tambah sebagai tubuloside B (7)2,-acetylacteoside (^^iso acteoside (8) acteoside (5) > tubuloside A (3) > echinaco side (4) > syringalide A 3z-a-rhamnopyranoside (6) > cistanoside A (2) > cistanoside F (9). Kedua-dua pesanan ini adalah sama seperti dalam ujian penghapusan radikal bebas di atas, terutamanya dalam ujian penghapusan radikal DPPH. Namun, bilangan kumpulan hidroksil fenolik dalam molekul memainkan peranan yang paling penting dalam perencatan peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus.

kesan cistanche

PERBINCANGAN

Kami menguji aktiviti penghapusan radikal bebas pelbagai ekstrak pelarut batang Cistanche deserticola pada radikal DPPH dan mendapati bahawa ekstrak aseton-H2O (9:1) mempamerkan aktiviti terkuat. Untuk mencari konstituen aktif aktiviti penghapusan radikal bebas, kami mengasingkan sembilan sebatian fenilethanoid utama daripada ekstrak ini dan menentukan strukturnya dengan NMR.

Kesan antioksidatif feniletanoid ini dinilai oleh aktiviti penghapusan radikal bebas dan aktiviti peroksidasi anti-lipid. A-tokoferol yang terkenal digunakan sebagai bahan kawalan positif. Sebagailipofilisiti a-tokoferol boleh menjejaskan aktivitinya dalam sistem ujian sekarang kecuali dalam ujian penghapusan radikal DPPH, kami mengambil asid kafeik sebagai bahan kawalan positif yang lain.

Pertama, kami menjalankan ujian ke atas aktiviti penghapusan radikal bebas. Kesemua 9 phenylethanoid yang diuji sudah pasti mempamerkan aktiviti penghapusan radikal DPPH dan anion superoksida yang lebih kuat daripada a-tokoferol, tetapi ada yang lebih kuat dan yang lain lebih lemah daripada asid kafeik. Aktiviti scavenging radikal meningkat dengan peningkatan bilangan kumpulan hidroksil fenolik. Keselarian yang tidak lengkap bagi aktiviti penghapusan anion radikal dan superoksida DPPH dipercayai disebabkan oleh watak yang berbeza antara spesies radikal dan beberapa faktor lain yang terlibat dalam kedua-dua sistem tindak balas ini,21,26) untuk radikal DPPH adalah radikal yang disebabkan oleh kimia yang bertindak balas. dengan pemusnah radikal dalam cara kimia yang mudah, manakala radikal anion superoksida dihasilkan oleh xanthin/XOD, tindak balas enzim.

Jika feniletanoid menghalang radikal anion superoksida gen xanthine/XOD, perencatan itu mungkin dianggap sebagai hasil daripada aktiviti penghapusan radikal anion superoksida atau (dan) perencatan enzim XOD,23) jadi kami menjalankan ujian ke atasnya. kesan perencatan xanthine oxidase. Adalah menarik bahawa, secara selektif, hanya isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang bahagian caffeoylnya berada pada 6/-kedudukan glukosa, menunjukkan perencatan. Mereka mempamerkan kesan pada kepekatan 25—200jtiM pada 3.4xlO^3U/ml (10jug/ml) XOD, walaupun aktivitinya lebih lemah daripada allopurinol; sebatian lain, yang bahagian caffeoylnya berada pada《-kedudukan glukosa, tidak menunjukkan kesan perencatan. Keputusan ini memberikan laporan pertama tentang kesan perencatan feniletanoid pada enzim XOD. Chan et al21) melaporkan bahawa asid kafeik dan beberapa analognya mempunyai kesan perencatan pada aktiviti XOD, walau bagaimanapun, kami mendapati tiada kesan asid kafeik sedemikian di bawah keadaan tindak balas semasa. Dalam ujian ini, kepekatan XOD adalah serupa dengan ujian kesan ke atas penjanaan radikal anion superoksida (4.3 /zg/ml), tetapi kepekatan sebatian adalah lebih tinggi daripada yang terakhir. Oleh itu, perencatan penjanaan Oj oleh feniletanoid ini adalah disebabkan oleh aktiviti penghapusan radikal mereka, tetapi bukan oleh aktiviti perencatan enzim XOD mereka.

Tindak balas rantai radikal bebas akhirnya membawa kepada peroksidasi lipid diketahui umum.28,29) Oleh itu, kami mengkaji sebatian phenylethanoid ini untuk kesannya terhadap peroksidasi lipid dalam mikrosom hati tikus yang disebabkan oleh sistem enzim ADP/NADPH/Fe3 plus dan yang disebabkan oleh sistem bukan enzim asid askorbik/Fe2 plus . Kesemua sebatian ini menunjukkan kesan peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat daripada asid kafeik dan a-tokoferol dalam kedua-dua sistem. Secara amnya diterima bahawa kedua-dua sistem dimangkinkan oleh ion besi, sama ada Fe2 tambah atau Fe3 tambah, terlibat dengan radikal peroksil lipid,30,31) dan radikal hidroksil OH memainkan peranan paling penting dalam peroksidasi lipid,32 _34) walaupun permulaan OH telah dipersoalkan dalam beberapa laporan.35祁6) Sebaliknya, OJ radikal anion superoksida, yang merupakan produk utama serangan e_ terhadap O2 dalam rantai radikal, adalah agak buruk. radikal reaktif dan tidak mengakibatkan peroksidasi lipid itu sendiri. Walaupun feniletanoid ini menunjukkan aktiviti penghapusan yang lebih lemah pada radikal anion superoksida daripada asid kafeik, ia menunjukkan tindakan peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat daripada yang terakhir. Oleh itu, kami percaya bahawa mereka, seperti beberapa polifenol pemecah rantai aromatik yang lain, boleh menghalang peroksidasi lipid di atas dalam mikrosom hati tikus dengan mengelat ion Fe2 plus atau Fe3 plus, dan juga dengan membuang Oj radikal superoksida untuk memecahkan tindak balas rantai radikal. .37,38) Selain itu, mereka juga boleh mengais lebih banyak spesies radikal toksik seperti radikal hidroksil dan radikal peroksil lipid untuk secara langsung mengganggu peroksidasi lipid pada potensi yang lebih tinggi daripada asid kafeik.38,39)

Li et al. mengkaji beberapa glikosida phenylethanoid termasuk acteoside (verbascoside) (5), isoacteoside (iso-verbascoside) (1), dan echinacoside (4) daripada Pedicularis untuk menghalang pengautoksidaan asid linoleik dalam misel, sistem bukan biologi,13) untuk perlindungan mereka terhadap hemolisis oksidatif in vitro,14''1 dan juga untuk kesan penghapusan mereka pada NBT/PMS/NADH menghasilkan superoksida dan perencatan peroksidasi lipid yang disebabkan oleh asid askorbik/Fe2 ditambah dalam mikrosom hati tikus.15) Aktiviti yang serupa -hubungan struktur diperhatikan dalam laporan Li et al. dan keputusan kami. Iaitu, aktiviti feniletanoid untuk menghalang peroksidasi lipid bergantung terutamanya kepada bilangan dan kedudukan sterik kumpulan hidroksil fenolik.15) Berdasarkan kimia stereo mereka, kumpulan hidroksil fenolik bagi bahagian caffeoyl pada acteoside (5), tubuloside A ( 3), dan echinacoside (4), yang mempunyai caffeoyl pada kedudukan 4z glukosa, akan lebih mudah membentuk ikatan hidrogen dengan kumpulan hidroksil rhamnosyl daripada yang terdapat pada isoacteoside (8) dan tubuloside B (7), yang mempunyai caffeoyl pada kedudukan 6'- glukosa. Oleh itu, kumpulan hidroksil fenolik bebas lebih banyak daripada kumpulan pertama dan oleh itu menunjukkan aktiviti peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat. Kami juga mendapati bahawa 2z-asetilasi feniletanoid ini, walaupun sedikit, meningkatkan kesan antioksidannya. Sebagai contoh, acteoside (5) dan isoacteoside (8), apabila 2'- asetilasi masing-masing menjadi 2/-asetilakteosida (1) dan tubuloside B (7), menunjukkan aktiviti yang lebih kuat dalam keempat-empat sistem ujian. Kerana keunggulan kimia stereo dan 2'-asetilasi, tubuloside B (7) mempamerkan aktiviti antioksidan terkuat di kalangan sampel yang diuji. Mungkin disebabkan oleh penggantian bahagian gula ketiga pada kedudukan 6'~, korelasi ini tidak sesuai dengan baik dalam kes tubuloside A (3) atau echinacoside (4); walau bagaimanapun, dalam sistem tambah ADP/NADPH/Fe3, tubuloside A ⑶ masih mempamerkan aktiviti peroksidasi anti-lipid yang lebih kuat daripada echinacoside (4).

Di samping itu, susunan aktiviti penghapusan radikal DPPH menunjukkan keselarian yang lebih baik dengan peroksidasi anti-lipid daripada urutan aktiviti penghapusan radikal anion superoksida. Ini membuktikan sekali lagi bahawa ujian penghapusan radikal DPPH adalah kaedah yang mudah dan boleh dipercayai untuk ujian antioksidan,26) walaupun radikal DPPH adalah radikal yang disebabkan secara kimia manakala radikal anion superoksida boleh menjadi radikal endogen secara biologi.

Kesimpulannya, kesemua sembilan phenylethanoid mempamerkan aktiviti penghapusan radikal bebas yang ketara dan kesan peroksidasi anti-lipid dalam kajian ini. Kesan antioksidan telah diperkuatkan oleh peningkatan bilangan kumpulan hidroksil fenolik dalam molekul. Seperti yang boleh dibayangkan, kesan antioksida noid phenyletha yang dibuktikan di sini mungkin memainkan peranan penting dalam tindakan ubat Cistanchis Herba dan mungkin sebahagiannya menerangkan mekanisme aktiviti beberapa etanoid fenil terhadap neoplasma, 8* keradangan10) dan nefritis, 1 n di mana radikal bebas terlibat secara serius.

Cistsanche Echinacoside: Anti-pengoksidaan

RUJUKAN

1) Namba T., "Ensiklopedia Wakan-Yaku (Ubat Tradisional Sino-Jepun) dengan Gambar Berwarna,5, Jilid II, Hoikusha, Tokyo, 1994, hlm. 16—17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. BullL, 32, 3009—3014 (1984); b) Idem, ibid., 32, 3880—3885 (1984); c) Idem, ibid., 33, 1452—1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562—566 (1986); e) Idem, ibid., 106, 721—724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Lembu jantan., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Lembu jantan., 32, 1729—1734 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709-715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131—1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695—697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932—935 (1990).

8) a) Pettit G. R・,Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456— 58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396—1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ ed. oleh Scalbert A., Fenomena Polifenolik, Edisi INRA, Paris, 1993, hlm. 237—245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315—317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Fizik. Lipid. 65, 151—154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, Farmasi Amerika. 34, 26一35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949—956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298—302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265—275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496—497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T, Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Pharm. Lembu jantan., 38, 1224—1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Dubur. Biochem., 95, 351一358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481— 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Fitokimia. 30, 965—969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid,, 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Alam (London), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Antikanser Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biokim. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289—303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Kaedah Enzymol., 186, 457—463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biophys. Res, Commun., 108, 1025一1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 945一951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Sel. 75, 241—251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biophys. Res, Commun., Ill, 777—784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Pharm. Lembu jantan.. 19, 779—782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837—841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・,Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695一702 (1995)