Nanoribbon Graphene Oxide Antioksidan Sebagai Ejen Pemutih Novel Menghalang Mekanisme Melanogenesis Berkaitan Faktor Transkripsi Mikroftalmia

Hubungi:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ABSTRAK:Di dalammelaninproses sintesis, tindak balas oksidatif memainkan peranan penting, dan ia adalah strategi yang baik untuk menghalang pengeluaran melanin dengan mengurangkan tekanan oksidatif. Fullerene dan derivatifnya, atau kompleks, dianggap sebagai penghapus radikal bebas yang kuat, dan kami selanjutnya menggunakan sp2nanocarbon berbilang lapisan untuk menemuimelaninmekanisme perencatan sintesis. Dalam kajian ini, kami menggunakan bahan nano baru, seperti tiub karbon berbilang dinding (MWCNTs), MWCNT jenis pendek, nanoribbon graphene oxide (GONRs), dan GONR jenis pendek, agen asanti-oksidatif untuk mengawal selia.melaninpengeluaran. Keputusan menunjukkan bahawa GONR mempunyai keupayaan anti-oksidatif yang lebih baik dalam platform analisis tekanan oksidatif intrasel dan ekstraselular daripada yang lain. Kami mencadangkan bahawa GONR mempunyai kumpulan berfungsi yang mengandungi oksigen. Dalam ujian diacetate 2', 7'-dichlorodihydrofluorescein, kami mendapati GONR boleh mengelat ion logam kepada spesies oksigen aktif. Dalam pandangan pandangan molekul, kami mendapati bahawa bahan nano ini menurunkan sintesis melanin dengan mengurangkan ekspresi gen berkaitan faktor transkripsi yang berkaitan dengan mikroftalmia, dan terdapat akibat yang sama dalam ekspresi protein. Kesimpulannya, GONRs adalah ejen yang berpotensi sebagai novelantioksidandan bahan kosmetologi pemutihan kulit.

cistanchemenghalang pembentukan melanin

1. PENGENALAN

Kulit adalah organ yang menutupi permukaan luar tubuh manusia. Oleh kerana antara muka bersentuhan dengan alam sekitar, lapisan kulit memainkan peranan penting dalam melindungi badan daripada patogen, mengelakkan kehilangan air yang berlebihan, mengawal suhu badan, dan sebagainya. Melanosit tumbuh dalam membran basal epidermis kulit dan menyumbang 5 peratus hingga 10 peratus daripada kandungan selular. Mereka telah dicirikan sebagai "kelenjar" asuniselular yang mempunyai dendrit yang nipis, panjang, seperti pita dan bercabang. Melanosit bergerak melalui sel epidermis di sekitaran terdekatnya, mewujudkan buruj sel epidermis di sekeliling setiap melanosit. Terdapat banyak punca penuaan kulit dalaman dan luaran, dan satu faktor tersebut ialah sinaran ultraungu (UV) daripada cahaya matahari.1 Semasa pendedahan UV, paras spesies oksigen reaktif (ROS) dalam kulit meningkat secara mendadak, yang dikenali sebagai tekanan oksidatif. Beberapa faktor ketoksikan persekitaran juga meningkatkan tekanan oksidatif pada kulit, seperti racun perosak, karbon tetraklorida, logam berat, amina aromatik, dan bahan zarahan 2.5(PM2.5).2 Dalam mekanisme biokimia, oksidan intrasel dijana daripada sistem bukan enzim, mengubahnya menjadi ROS untuk mencetuskan laluan melanogenesis.

Selain ROS, terdapat banyak faktor yang mempengaruhi pengeluaran melanin, termasuk ekspresi gen, keradangan, perubahan endokrin, dan pengambilan pigmen.1 Dalam langkah pertama pengeluaran melanin, tyrosinase memainkan peranan dalam memangkinkan tirosin kepada pheomelanin dan eumelanin. Mekanisme pembuatan kedua-dua pigmen adalah serupa, yang termasuk hidroksilasi L tyrosine kepada 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) dan pengoksidaan L-DOPA kepada dopaquinone. Dalam langkah seterusnya, dopamin dioksidakan oleh inmelanosom berkaitan tyrosinase-related protein 1(TRP-1) dan tyrosinase-related protein 2 (TRP-2), yang dikawal oleh microphthalmia-associated transcription factor (MITF) untuk membentukmelanin.Akhir sekali, melanin matang dan memendakan dalam stratumcorneum.4,5 Ini menembusi keratinosit jiran lapisan basal dan melindungi DNA mereka daripada sebarang mutasi atau pengubahsuaian akibat UV. Yang matangmelanindalam melanosom dipindahkan ke keratinosit6−9 dan akhirnya membawa kepada pigmentasi yang tahan lama. Lentigin, jeragat, dan bintik coklat/hitam menyebabkan masalah sosial pada lelaki dan wanita kadangkala. Menyekat tekanan oksidatif atau menyekat aktiviti thetyrosinase adalah satu strategi untuk mengecilkan sindrom hiperpigmentasi dan gangguan dermatologi.Antioksidanmenyembuhkan hiperpigmentasi dan kerosakan selular yang disebabkan oleh ROS.10,11 Oleh itu, sebatian anti-oksidatif tersintesis mempunyai banyak aplikasi biofungsi dalam aplikasi penjagaan kulit.

Fullerene (C60), carbon nanotube (CNT), graphene, andgraphene nanoribbon (GNR) ialah empat jenis sp2 nanokarbon yang dikaji secara meluas di seluruh dunia.12 Fullerene dan derivatif atau kompleksnya telah dianggap sebagai penghapus radikal bebas yang kuat sejak sekian lama. Yodoh et al. menggunakan C60 larut air sebagai agen pelindung terhadap degenerasi akibat tekanan katabolik. Injac et al. membuat kesimpulan bahawa C60(OH)24 adalah kuatantioksidansebatian apabila tegasan oksidatif terlalu tinggi. Okuda et al. mencadangkan bahawa kompleks C60 boleh mencegah kecederaan sel pengantara NO.13,14 Tong et al. menunjukkan bahawa C60complexes mungkin menjadi calon yang menjanjikan untuk merawat penyakit berkaitan otak yang disebabkan oleh peningkatan paras superoksida. Sebenarnya, sebuah syarikat Jepun mengenal pasti fullerenes dengan aktiviti antioksidan yang kuat untuk kegunaan kosmetik pada tahun 2006. Lucente Schultz et al. menunjukkan bahawa kebolehcapaian radikal oksigen bagi CNT berdinding tunggal yang difungsikan (SWCNTs) adalah hampir 40 kali lebih besar daripada dendritik C60.15-19Fenoglio et al. memerhatikan bahawa CNT berdinding berbilang (MWCNTs)mempunyai kapasiti penghapusan radikal yang luar biasa dalam hubungan dengan sumber luaran radikal hidroksil atau superoksida.20Pengiraan teori fungsi ketumpatan juga mendedahkan model SWCNT sebagai penghapus radikal bebas. Pada tahun 2004, Novoselov et al.pertama menunjukkan bahawa graphene mempamerkan kesan ambipolarelektrik yang kuat dan boleh menjanjikan untuk aplikasi elektronik.21 Selepas itu, mereka terus menunjukkan bahawa graphene mempunyai sifat elektronik yang tersendiri untuk 2Dgas zarah yang diterangkan oleh persamaan Dirac. 22,23 Sejak dua kertas pecah tanah ini, semakin banyak perhatian telah diberikan kepada penyelidikan berasaskan graphene.24−30 Contoh, Qiu et al. pada tahun 2014 menunjukkan bahawa graphene oksida dan beberapa lapisan graphene mempamerkan ketaraantioksidanaktiviti dan boleh melindungi pelbagai molekul biomolekul daripada pengoksidaan.31Han et al. eksperimen menunjukkan pada tahun 2007 bahawa jurang tenaga GNR boleh dikawal semasa proses litografi dengan menukar lebar reben.32 Antara empat nanokarbon, GNR telah mendapat perhatian paling sedikit. Untuk pengetahuan kami, terdapat sedikit penyelidikan tentang sifat antioksidan nanoribbon graphene oxide (GONRs).31,33 Oleh itu, dalam kajian ini, kami menyediakan MWCNT, MWCNT pendek, GONR dan GONR pendek dengan teliti dan bertujuan untuk membandingkan sifat antioksidan mereka dan keputusan berkaitan secara sistematik. .

2. KEPUTUSAN DAN PERBINCANGAN

2.1. Morfologi MWCNTs dan GONRs.

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >10 μm hingga 2−3 μm. Pada masa yang sama, diperhatikan bahawa rawatan asid nitrik menyebabkan permukaan tiub licin menjadi kasar. Beberapa takuk dan bentuk tidak sekata dipaparkan dalam gambar pembesaran tinggi. Selanjutnya, menggunakan MWCNTs dan MWCNTs pendek melalui tindak balas gelombang mikro memperoleh GONR dan shortGONR, masing-masing. Kami juga menggambarkan gambar TEM pembesaran rendah dan tinggi bagi GONR dan GONR pendek. Disebabkan penyahzip membujur utama dan pemotongan mendatar kecil, nampaknya GONR adalah lebih pendek daripada MWCNT. Sebaliknya, gambar pembesaran tinggi menunjukkan diameter yang lebih besar, iaitu, 0.11−0.18 μm, GONR berbanding MWCNT, menunjukkan bahawa proses nyahzip telah berjaya. Begitu juga, GONR pendek mempamerkan diameter yang lebih pendek dan lebih besar daripada MWCNT pendek. Dalam pemampat udara proses unzip baharu kami, struktur lapisan nipis GONR adalah kurang daripada apa yang kami perolehi dalam laporan awal untuk kuasa gelombang mikro yang sama iaitu 250 W sambil mengekalkan MWCNT pusat yang lebih tebal.12 Ini bermakna heterostruktur MWCNT/GONR acore−shell berkemungkinan besar. muncul dan bukannya struktur reben nano yang dibuka sepenuhnya melalui semua kuasa gelombang mikro dalam proses baharu. Untuk membandingkan dengan GONR pendek dalam kajian kami sebelum ini,34kuasa gelombang mikro yang lebih tinggi menghasilkan lebih banyak takuk pada sisi reben dan tidak membentuk reben licin yang bagus. Ambil perhatian bahawa kami menggunakan dua jenis grid Cu yang berbeza dalam Rajah 1a. Untuk MWCNT dan GONR dengan panjang yang mencukupi, grid Gu dengan bentuk lacey yang distabilkan dengan karbon (productno. 01881-F, Ted Pella, Inc., USA) telah digunakan. Lubang terbuka dalam filem karbon berenda menghalang imej penghantaran bertindih antara karbon nano dan filem karbon. Rangkaian kelabu gelap tergolong dalam filem karbon lacey. Walau bagaimanapun, grid Gu dengan formvar yang distabilkan dengan karbon(nombor produk 01800-F, Ted Pella, Inc., USA) diperlukan untuk MWCNT pendek dan GONR pendek. Ini kerana lubang besar dalam filem karbon berenda menyebabkan masalah untuk memegang MWCNT pendek dan GONR pendek dengan cekap. Seperti yang digambarkan dalam Rajah 1, kontras kelabu muda di bawah MWCNT pendek dan GONR pendek ialah lapisan karbon ringan. Lapisan karbon ini menstabilkan filem formvar yang terdedah kepada pancaran elektron melalui sifat pengalir haba dan elektriknya.

2.2. Konfigurasi Ikatan MWCNT dan GONR.

Spektrum Raman bagi empat nanokarbon ditunjukkan dalam Rajah 1b; jalur D GONR adalah lebih tinggi daripada MWCNT selepas proses unzip. Ini disebabkan oleh tahap pengoksidaan yang lebih tinggi dan bilangan struktur pinggir GONR yang lebih besar berbanding dengan MWCNT. Fenomena ini juga serupa dengan apa yang kami perhatikan dalam 2011.12 Disebabkan tahap grafitasi yang tinggi, jalur G MWCNT mempunyai bilangan lebar penuh pada separuh maksimum paling rendah. Nisbah ID/IG bagi empat nanokarbon ialah 0.076, 0.502, 0.483 dan 0.700, masing-masing. Secara ringkas, pengurangan panjang dan pengoksidaan permukaan meningkatkan tahap kecacatan dan dengan itu menjadikan nisbah ID/IG lebih tinggi. Puncak D' terdapat dalam semua graphene yang rosak dan dilihat sebagai ukuran kualiti.35 Seperti yang digambarkan dalam Rajah 1b, puncak D' dalam empat spektrum menjadi lebih ketara selepas proses pemotongan atau unzip, menunjukkan bahawa ia adalah proses yang merosakkan yang memperkenalkan banyak kecacatan. Rajah 1c, dmenunjukkan spektroskopi fotoelektron sinar-X bagi empat nanokarbon. Nampaknya, puncak D' adalah yang paling jelas untuk GONR pendek. Seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 1c, paras O meningkat dengan ketara daripada 7.6 peratus (MWCNTs) kepada 19.9 peratus (GONRs) disebabkan oleh keupayaan pengoksidaan kuat KMnO4 dalam persekitaran berasid. Sebaliknya, paras O meningkat sedikit sebanyak 0.8 peratus daripada MWCNT kepada MWCNT pendek. Yang penting, tahap O tertinggi ialah 38.3 peratus untuk GONR pendek, membayangkan bahawa hujung reben nano akan lebih mudah untuk melekatkan kumpulan berfungsi oksigen daripada permukaan sp2 satah. Nombor maksimum lebar penuh yang lebih besar pada separuh maksimum dan peralihan kepada tenaga pengikat tinggi C 1s memuncak selepas proses unzip kedua-dua MWCNT dan MWCNT pendek digambarkan dalam Rajah 1d. Untuk oksida graphene, puncak yang dinyahbelit dalam tenaga pengikat tinggi sebelah boleh diberikan kepada ikatan C−C(CC), C−O,CO, dan COOH.36 Kami mencirikan GONR (200W) pada tahun 2013,37 dan keputusannya adalah serupa dengan keputusan kajian ini. Kajian ini membuat kesimpulan fenomena spektrum Raman, yang bermaksud bahawa lebih banyak kumpulan berfungsi yang mengandungi oksigen telah dijana semasa transformasi tiub ke reben (Rajah 2).

2.3. Sifat Anti-oksidatif MWCNTs dan GONRs.

2.3.1. Penentuan 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl Free Radical Scavenging Activity Assays.

1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) aktiviti penghapusan radikal bebas ialahantioksidanplatform digunakan untuk mengesan kapasiti antioksida; keputusan untuk empat nanokarbon diterangkan dalam Jadual 2. Dalam ujian DPPH, vitamin C pada kepekatan 100 μM telah digunakan sebagai kawalan positif. Uji aktiviti anti-oksidatif MWCNT, MWCNT pendek, GONR dan GONR pendek, dos 1, 5 dan 1{17}} mg/L telah diinkubasi ke dalam larutan tindak balas untuk mengukur sifat. MWCNT, MWCNT pendek, GONR dan GONR pendek mempunyai kebolehan menghalang sederhana pada 1{{20}} mg/L (19.2 ±0.3, 12.1 ± 0.3, 26.8 ± 0.3 dan 30.0 ± 0.4 peratus ), manakala vitamin Chad mempunyai keadaan yang sama pada 100 μM (93.4 ± 0.1 peratus) untuk penindasan.

2.3.2. Ujian Aktiviti Ion-Chelating.

Dalam keadaan tekanan oksidatif, ferrozine boleh membentuk kompleks dengan Fe2 plus untuk diukur secara kuantitatif. Dengan kehadiran pengantara pengkelat, kompleks itu rosak, menyebabkan ion ferus terkoyak daripada warna merah gelap kompleks Fe2 tambah. Kami menggunakanEDTA sebagai kawalan positif. Jadual 2 menunjukkan bahawa MWCNT, MWCNT pendek, GONR dan GONR pendek mempunyai aktiviti kelat pada 10 mg/L (29.2 ± {{10}}.8, 28.7 ± 0. 7, 69.7 ± 0.6, dan68.9 ± 0.3 peratus ), manakala kawalan positif mempunyai keadaan yang serupa pada 100 μM (93.4 ± 0.1 peratus ).

2.3.3. Pengukuran Kuasa Antioksidan Pengurang Ferrik.

Ujian potensi pengurangan ferik ialah ujian yang mudah dan boleh dipercayai untuk mengukur sintesis kompleks Fe(III)−ferricyanide. Dalam ujian ini, kuasa pengurangan empat nano karbon yang menghasilkan kompleks ferus Fe(III)−TPTZ telah dikesan melalui perubahan warna larutan daripada kuning kepada hijau dan biru. Jadual 2 menunjukkan bahawa kuasa pengurangan MWCNT, MWCNT pendek, GONR, dan GONR pendek adalah ketumpatan optik (OD) 1.11, 1.13, 1.15, dan 1.11 pada 10 mg/L.

2.3.4. MWCNTs dan GONRs Menghalang Pengumpulan ROSA Intraselular.

Banyak laporan telah menunjukkan bahawa ROS memusnahkan integriti struktur membran sel, termasuk membran sel dan membran nuklear untuk membawa kepada kerosakan sel dan kehilangan fungsi normal.38−40 Selain itu, ROS juga merupakan salah satu faktor penting untuk memangkinkan tyrosinase membentuk melanin, dan perencatan pengeluaran ROS adalah strategi yang baik untuk mengurangkan kawalanmelanin synthesis. In this study, we used the 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) staining assay to analyze the intracellular oxidative stress level in MWCNT and GONR treatment cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) induced oxidative stimulations in MWCNT and GONR groups and was used as a negative control.41 When the concentration of PMA was 20 ng/mL, it induced oxidative stress, increasing the value to 38%; after treating GONRs and MWCNTs, the levels of ROS were downregulated to the normal level. The data showed that both materials inhibited oxidative stress levels, and the anti-oxidative effect of GONRs was higher than that of MWCNTs (Figure 3). Table 1 shows a similar consequence list. We contended that there are three reasons for our new findings: first, the order of solubility of these materials was as follows: short GONRs > GONRs >MWCNT pendek > MWCNT, bermakna bahawa kawasan sentuhan GONR pendek adalah yang terbesar, jadi ia adalah lebih baik untuk ROSscavenging. Kedua, GONR dan MWCNT ialah struktur karbon2-yang boleh memusnahkan elektrik ROS melalui pembentukan tambah atau pemindahan elektron.42 Kami mendapati bahawakesan antioksidandaripada struktur reben nano adalah lebih baik daripada struktur tiub nano, jadi reben nano menjadikannya lebih mudah untuk memindahkan elektron daripada tiub nano. Akhir sekali, dalam Rajah 1b, kami perhatikan bahawa tapak karbon GONR sp2-mengandungi lebih banyak kumpulan berfungsi oksigen berbanding MWCNT, kumpulan asid karboksilik boleh mengelat ion logam dan kumpulan hidroksil boleh menjadi penderma-H untuk menghilangkan ROS dan menghalang pengeluaran melanin.

2.4. Sitotoksisiti MWCNT dan GONR yang Dirawat dalam Sel Fibroblast Dermal Manusia.

Kaedah {{0}}(4,5-Dimethylth-triazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) telah digunakan untuk menilai sitotoksik sifat GONR pada sel Hs68 (Rajah 3), dan sel telah dibiakkan pada dos yang berbeza bagi 1, 5, dan 10 ug/mL. Kami meneliti bahawa daya maju sel MWCNT ialah 100.7 ± 3.7, 99.8 ± 4.9, dan 94.1 ± 4.7 peratus pada kepekatan 1, 5, dan 10 mg/L, masing-masing; daya maju untuk MWCNT pendek dikira dalam susunan yang sama dan didapati 93.9 ± 2.2, 86.4 ± 3.0 dan 98.9 ± 2.1 peratus . Kami mendapati bahawa sel B16−F10 telah diinkubasi dalam kepekatan tinggi, dan kemandirian sel sel Hs68 adalah lebih daripada 80 peratus, menunjukkan bahawa MWCNT dan MWCNT pendek tidak mempunyai kesan toksik pada sel fibroblas kulit manusia. Kebolehdayaan sel GONR dan GONR pendek ialah 86.24 ± 2.1, 90.87± 3.5, 88.58 ± 2.5, 89.03 ± 3.6, 90.71 ± 2.8 dan 90.64 ±2.5 peratus . Ia juga ditunjukkan dalam Rajah 4a bahawa GONR dan shortGONR tidak mempunyai kesan sitotoksik yang boleh dilihat pada sel HS68. Dalam laporan sebelum ini, penggunaan bahan nano yang belum diuji untuk tujuan kosmetik boleh dianggap boleh dipersoalkan, 43,44 dan ia biasanya disebabkan oleh serangan DNA selepas nanopartikel memasuki sel. Selepas ujian sitotoksisiti, kami mendapati bahawa bahan kami tidak menyebabkan ketoksikan kepada sel kulit normal. Kami membuat kesimpulan bahawa selepas bahan nano memasuki sel, bahan nano hanya menghalang pengeluaran melanin dengan mengurangkan tekanan oksidatif dan ion logam pengkelat dan tidak merosakkan mitokondria atau DNA, yang bermaksud bahawa MWCNT dan GONR adalah selamat untuk digunakan.

2.5. Dua Jenis MWCNTs dan GONRs dalam B16−F10Cellular Tyrosinase Activity dan Kandungan Melanin.

Di dalammelaninlaluan sintesis, tyrosinase memainkan peranan penting. Tirosinase mengoksida dan membentuk eumelanin dan pheomelanin melalui satu siri tindak balas biokimia. Untuk menentukan sama ada GONR dan MWCNT menghalang aktiviti tyrosinase dan menyebabkan penurunan dalam pengeluaran melanin, kami menganalisis aktiviti tyrosinase dalam sel B16-F10. Kami mendapati bahawa MWCNT dan MWCNT pendek menghalang aktiviti tyrosinase sebanyak kira-kira 17.1 peratus dan 23 peratus pada 10mg/L. GONR dan GONR pendek mempunyai kesan yang lebih baik yang menghalang aktiviti tyrosinase pada kepekatan yang sama berbanding dengan GONR yang lain. Mereka juga dalam cara yang bergantung kepada dos dan menghalang 49.8 peratus dan 44.7 peratus aktiviti thetyrosinase, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4b.

Melaninadalah pigmen yang sangat diperlukan dalam tubuh manusia, tetapi ekspresi berlebihan melanin sering mencetuskan beberapa siri penyakit. Dalam kajian terdahulu, Xiao et al. menggunakan bahan yang serupa, Radical Sponge, nanopartikel fullerene, sebagai anti-melaninagent.45 Terdapat beberapa keputusan yang baik; kira-kira 20 peratus daripadamelaninpengeluaran boleh dihalang. Untuk meningkatkan kecekapannya, kami menambah baik lagi bahan ujian untuk mengukur kadar perencatan melanin dan mekanisme molekulnya, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 4c dan 5. MWCNT dan MWCNT pendek mengurangkan kandungan melanin sebanyak 17.6 ± 5.5 dan 13.2 ± 0. 2 peratus pada 10 mg/L dan dalam cara yang bergantung kepada dos. GONR dan GONR pendek dengan kuat menurunkan nilai kepada 32.0 ±2.3 dan 35.3 ± 3.4 peratus pada 10 mg/L. Keputusan eksperimen mencadangkan bahawa keempat-empat jenis boleh menghalang sintesis melanin dan GONR mempunyai kesan yang lebih kuat. Sebaliknya, kami juga mendapati bahawa GONR pendek mempunyai kesan yang lebih baik dalam menghalang pengeluaran melanin. Kami menyimpulkan bahawa GONR pendek mempunyai lebih banyak kumpulan berfungsi dan berkesan boleh menghalang tirosinase bermangkin ion logam, seterusnya menghalang pengeluaran melanin (Rajah 2). Dalam Jadual 1, kita melihat bahawa usaha jenis pendek pengkelat ion logam adalah lebih tinggi daripada jenis biasa; Ini bermakna bahawa GONR pendek ini boleh digunakan secara berpotensi dalam bidang kosmetik sebagai ejen penjagaan kulit.

2.6. Mekanisme MWCNT dan GONR Menghalang Kandungan Melanin Sel B16−F10.

Sel bertindak balas kepada tekanan oksidatif luaran dengan mengawal ekspresi protein. Sel B16−F10 meningkatkan ekspresi gen c-myc dan AMPK terkawal untuk mengurangkan tahap oksidatif,46 dan dalam kerja ini, MITF ialah faktor transkripsi khusus tyrosinaseto mengawal laluan isyarat sintesis melanin molekul.47−49 Dalam Rajah 5a, MWCNTs dan GONRs menurunkan kawal selia faktor transkripsi yang berkaitan dengan mikroftalmia dengan mengurangkan tekanan oksidatif, dan kemudian, gen hiliran TRP-1 dan TRP-2 turut diturunkan. Untuk tahap protein, fenomena yang serupa ditemui, di mana MWCNTs dan GONRs menurunkan selia laluan melanogenesis berkaitan MITF dan kemudian akhirnya mengurangkanmelaninkandungan (Rajah 5b).

bina badan cistanche

3. BAHAN DAN KAEDAH EKSPERIMEN

3.1. Penyediaan MWCNT dan GONR.

Proses yang berkaitan untuk membuat GONR telah dilaporkan dalam kertas sebelumnya.12MWCNT (0.05 g) telah digantung dalam 9:1 H2SO4/H3PO4 dan dirawat dengan reaktor gelombang mikro (CEM-Discover) dengan set kuasa pada 250 W selama 2 min. Selepas penambahan KMnO4 (0.25 g) kepada larutan, penyelesaian telah dirawat dengan kuasa gelombang mikro yang sama pada 65 darjah selama 4 min12 Kami kemudiannya mengubahsuai proses ini menggunakan masa gelombang mikro peringkat kedua yang lebih pendek iaitu 8 minit dengan menggunakan pemampat udara. Di sini, pemampat udara digunakan untuk mengawal suhu reaktor gelombang mikro semasa proses. Kuasa gelombang mikro ditetapkan pada 250 W dalam ujian awal.

3.2. Penyediaan MWCNT Pendek dan GONR Pendek.

Proses yang berkaitan untuk membuat GONR pendek telah dilaporkan dalam kertas kerja terdahulu kami.34 Masa rawatan berasid dipilih sebagai 8 jam. Kuasa gelombang mikro ditetapkan pada 250 W, yang sama dengan untuk mendapatkan GONR.

3.3. Aktiviti Pemusnahan Radikal DPPH.

DPPH sering digunakan untuk menentukan kapasiti penghapusan sampel dan sifat antioksida.50 DPPH ialah reagen ungu yang menukar warna daripada ungu kepada kuning jika radikal bebas dipindahkan ke analit. Sampel anti-oksidatif positif dengan kepekatan yang sesuai telah ditambah kepada larutan, dan sampel dianalisis pada 517 nm selama 30 minit. Kami menggunakan peratusan baki DPPH selain sampel ujian untuk mengukur bilanganantioksidandiperlukan untuk mengurangkan radikal DPPH sebelumnya. Vitamin C pada 100 μM digunakan sebagai kawalan positif. Aktiviti mengais ( peratus ) diukur sebagai

3.4. Aktiviti Kelat Logam.

Ion logam ialah faktor yang menyebabkan pengoksidaan berlebihan lipid, dan Fe2 plus ialah salah satu ion yang paling mempengaruhi.50 Kepekatan biobahan nano yang berbeza (1 μL) telah dimuatkan ke dalam plat telaga 96-, yang mengandungi 2mM FeCl2·4H2O ( 10 μL), dan kemudian dimuatkan ke dalam ferrozine (5mM, 20 μL). Bahan tambahan telah diadun sepenuhnya dengan 69 μLmenthol dan disimpan pada suhu bilik selama 10 minit. Kemudian, larutan tindak balas sampel diperhatikan pada 562 nm. EDTA digunakan sebagai kawalan positif pada 100 μM, dan formula pengiraan aktiviti pengkelat logam adalah berdasarkan persamaan 1.

3.5. Mengurangkan Kuasa.

Pengiraan pengurangan kuasa adalah berdasarkan kajian lepas.50 Pertama, 2.5 μL bahan graphene dicampur dengan penimbal PBS (67 mM, pH 6.8) dan K3Fe(CN)6(2.5 μL, 20 peratus ) dan kemudian diinkubasi pada 50 darjah selama 20 min. Kemudian, 10 peratus asid trikloroasettik (160 μL) telah diadun dengan bahan-bahan tersebut pada 300g disentrifugasi selama 20 minit. Panjang penyerapan ditentukan pada 700 nm selepas dicampur dengan 25 μL FeCl3(2 peratus). Butylated hydroxyanisole (BHA) digunakan pada 100 μM.

3.6. Pemeriksaan Pembiakan Sel.

Talian sel dermalfibroblas manusia HS68 digunakan untuk menganalisis nisbah percambahan sel. HS68 telah diinkubasi dalam medium Eagle diubahsuai (DMEM) Dulbecco yang mengandungi 10 peratus seruman lembu janin 1 peratus penisilin dan streptomisin bercampur.50,51 Selepas dirawat dengan kepekatan sampel yang berbeza, kami menggunakan MTT untuk mengesan nisbah percambahan sel. 8000 sel telah disemai dalam 96-plat perigi dan dirawat dengan sampel selama 24 jam. Larutan supernatan telah dikeluarkan, dan kami menggunakan MTTsolution untuk kultur selama 2 jam pada 37 darjah. Selepas pengeraman, media yang mengandungi MTT dipindahkan dan dilarutkan dengan dimetil sulfoksida (DMSO). Penyelesaian dibaca pada OD 590nm dan kadarnya dikira oleh persamaan 1.

3.7. Penilaian Kandungan Melanin Selular.

Kami menggunakan kaedah dengan pengubahsuaian kecil berdasarkan ujian sebelumnya.52,53 Pelet sel B16−F10 daripada Pusat Pengumpulan dan Penyelidikan Sumber Bio (BCRC, CRL 6323, Hsinchu,Taiwan) telah dilarutkan dalam campuran 2.0 N NaOH dan 10 peratus DMSO. Sampel kemudiannya dipanaskan selama 1 jam pada 90 darjah dan disentrifugasi pada 10,000g selama 10 minit lagi untuk mendapatkan supernatan yang telah dijelaskan. Themelaninkiraan ditentukan dengan memantau OD supernatan pada 475 nm.

3.8. B16−F10 Aktiviti Tirosinase Selular.

Untuk aktiviti tyrosinase selular B16−F10, kami merujuk kepada kerja terdahulu dengan beberapa pengubahsuaian.50 Sel telah dikultur dalam 12-plat perigi pada 105 sel setiap telaga. Selepas rawatan dengan sampel, sel telah dilisiskan dalam 1 peratus Triton X-100/PBS dan 2 mML-tirosin (50 μL) selama 3 jam. Selepas pengeraman, kami mengeluarkan media dan membaca penyerapan pada OD 590 nm. Formula aktiviti thetyrosinase telah dikira dengan persamaan 1.

3.9. Pengesanan ROS oleh Pewarnaan DCFDA.

Merujuk kepada kajian lepas,54 1.2 1.105 sel B16−F10 telah disemai dalam6-plat perigi dan dirawat dengan pelbagai kepekatan sampel. Sel telah digantung dalam PBS dan kemudian dimuatkan dengan DCFDA (5 μM) dalam DMEM merah bukan fenol selama 30 minit pada 37 darjah . Sitometer aliran (Guava, Merck, Jerman) digunakan untuk mengesan isyarat pendarfluor DCFDA. Panjang gelombang pengujaan dan pancaran DCFDA ialah 488 dan 535 nm, masing-masing.

3.10. Reaksi Rantaian Polimerase Masa Nyata Kuantitatif.

Kami mengikuti kaedah Lin et al. (2018).1Tindak balas rantai transkripsi-polimerase kuantitatif kuantitatif masa nyata (qRT-PCR) terdiri daripada kuar primer eksklusif untuk menjana pendarfluor. Ia menggunakan teknik pengesanan pendarfluor yang mengesan setiap kitaran menggunakan 7500 qRT-PCRSystem (Applied Biosystems, USA). Ia mengesan kitaran berdasarkan jumlah pendarfluor yang dikeluarkan, dan kemudian produk bagi setiap kitaran dikira untuk kandungan yang dijana, yang mengakibatkan mencapai tujuan kuantitatif masa nyata. Trizol(Invitrogen, USA) digunakan untuk mengekstrak RNA lengkap tisu paru-paru, mengikut arahan yang diberikan oleh pengilang. Selepas itu, kit transkripsi terbalik (Takara, Jepun) digunakan untuk menjana DNA. Dalam qRT-PCR menggunakan primer, disenaraikan dalam Jadual 1, pertama, sampel dipanaskan untuk membentuk untaian DNA tunggal; maka pengikatan primer berlaku untuk membentuk DNA beruntai dua (dsDNA), selepas itu dsDNA Hijau SYBR digabungkan, yang mana kit reagen tambah hijau SYBR (Roche, Basel, Swiss) telah digunakan, yang menghasilkan pelepasan pendarfluor. Hasilnya telah diluluskan melalui sistem pengesanan pendarfluor. Pengesanan isyarat pendarfluor berlaku semasa fasa pemanjangan atau penyepuhlindapan setiap kitaran; selepas pengesanan, kandungan sampel ditolak ke belakang oleh keamatan pendarfluor yang dikesan.55 Tahap ekspresi gen sasaran telah dinormalisasi kepada paras -tubulin menggunakan kaedah 2−ΔΔCt. .

kesan pemutihan cistanche pada kulit kepada anti-pengoksidaan

3.11. Ujian Western Blot.

Sel B16−F10 dilisiskan pada 4 darjah semalaman dengan penimbal ujian radioimmunoprecipitation (Thermo Scientific Co., USA), yang mengandungi perencat protease. Kit ujian protein asid bicinchoninic (BCA, Sigma-Aldrich Corp., USA) telah digunakan untuk mengukur jumlah protein. Protein sampel diasingkan pada 10 peratus gel sodiumdodecyl sulfate-polyacrylamide dan dipindahkan ke membran apolyvinylidene difluoride (PVDF) (Pall LifeScience, Ann Arbor, MI, USA). Membran PVDF telah disekat dengan penimbal penyekat (Thermo Scientific) selama 1 jam dan diinkubasi dengan antibodi primer khusus semalaman pada 4 darjah .Seterusnya, membran itu dibasuh dengan penimbal Tris-buffered Tween 20 buffer dua kali dan diinkubasi dengan antibodi sekunder selama 1.5 jam. Selepas itu, membran itu dicelup ke dalam reagen pengesan chemiluminescence (Thermo Scientific) dan dianalisis oleh MiniChemi Chemiluminescenceimager (Sains Penciptaan Sage Beijing, China). Sumber antibodi termasuk arnab anti-MITF, arnab anti-TRP-1, arnab anti-TRP-2 dan -actin (Thermo Scientific).

3.12. Analisis Bahan.

TEM (JEOL JEM-1230, 100 kV) telah digunakan untuk memerhati morfologi nanokarbon. Spektrometer Amicro Raman (PTT, RAMaker) digunakan untuk menyemak mod resonans nanokarbon. Pengukuran spektroskopi fotoelektron sinar-X (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) juga dilakukan untuk menentukan analisis komposisi.

3.13. Analisis statistik.

Semua sampel dan eksperimen standard diulang sekurang-kurangnya tiga kali. Kami menggunakan ujian-tPelajar untuk membandingkan dan menyatakan purata nilai min ± sisihan piawai secara statistik.

4. KESIMPULAN

Sebagai kesimpulan, kami mendapati bahawa GONR pendek adalah bahan yang berpotensi untuk pengeluaran penjagaan kulit kerana sifat multibiofungsinya (Rajah 6). Keputusan menunjukkan bahawa nanokarbon memainkan peranan sebagai antioksidan ekstrasel dan intrasel. Sementara itu, nanokarbon menghalang aktiviti tyrosinase danmelaninkandungan dan tidak menyebabkan sebarang kecederaan serius pada sel pigmen. Kerja ini mewujudkan fungsi anti-melanogenesis bagi empat jenis nanokarbon; kajian masa depan akan mengkaji mekanisme sebatian ini pada ekspresi gen dan protein tertentu yang berkaitan dengan pematangan, pengangkutan dan pengumpulan melanin.

cistanche bienfaits

RUJUKAN

(1) Lin, L.-C.; Chen, C.-Y.; Kuo, C.-H.; Lin, Y.-S.; Hwang, BH;Wang, TK; Kuo, Y.-H.; Wang, H.-MD 36H: Perencat Ampuh Novel untuk Antimelanogenesis. Oksida. Med. sel. Panjang umur 2018,2018, 6354972.

(2) Li, R.; Qiu, X.; Xu, F.; Lin, Y.; Fang, Y.; Zhu, T. Kesan Pengantaraan Makrofaj Bahan Zarah Halus Bawaan Udara (PM2.5) pada Rintangan Insulin Hepatosit dalam Vitro. ACS Omega 2016, 1, 736−743.

(3) Awak, Y.-J.; Wu, P.-Y.; Liu, Y.-J.; Hou, C.-W.; Wu, C.-S.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Sesamol Menghalang Hiperpigmentasi dan Kerosakan Akibat Sinaran Ultraviolet dalam Kulit Tikus C57BL/6. Antioksidan 2019, 8, 207.

(4) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.;Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Kesan Sinergis Linderanolide B Digabungkan dengan Arbutin, PTU, atau Asid Kojic pada Perencatan Tirosinase. Curr. Pharm. Bioteknol. 2015, 16, 1120−1126.

(5) Bae-Harboe, Y.-SC; Park, H.-Y. Tyrosinase: protein pengawal selia pusat untuk pigmentasi kulit. J. Melabur. Dermatol. 2012, 132,2678−2680.

(6) Rezapour-Laktosa, A.; Yeganeh, H.; Ostad, SN; Gharibi, R.;Mazaheri, Z.; Ai, J. Poliuretana/siloxanemembrane termoresponsif untuk pembalut luka dan pemindahan helaian sel: Kajian in vitro dan in-vivo. Mater. Sci. Eng., C 2016, 69, 804−814.

(7) Boo, YC p-Coumaric Acid sebagai Bahan Aktif dalam Kosmetik: Kajian yang Memfokuskan pada Kesan Antimelanogeniknya. Antioksidan 2019, 8, 275.

(8) Awan, F.; Islam, MS; Mungkin.; Yang, C.; Shi, Z.; Berry, RM;Tam, KC Cellulose Nanocrystal-ZnO Nanohibrid untuk Mengawal Aktiviti Fotokatalitik dan Perlindungan UV dalam Formulasi Kosmetik.ACS Omega 2018, 3, 12403−12411.

(9) Cristina Negritto, M.; Valdez, C.; Sharma, J.; Rosenberg, C.;Selassie, Perencatan Pertumbuhan CR dan Kerosakan DNA yang Dicetuskan oleh X Phenols dalam Yis: Kajian Hubungan Struktur-Aktiviti Kuantitatif. ACS Omega 2017, 2, 8568−8579.

(10) Hamelin, M.; Hemmati, S.; Varma, K.; Veisi, H. Greensynthesis, antibakteria, kesan antioksidan dan sitotoksik bagi zarah emas menggunakan ekstrak Pistacia Atlantica. J. Taiwan Inst. Chem.Eng. 2018, 93, 21−30.

(11) Meneses-Gutierrez, CL; Herna ́ ndez-Damia ́ n, J.; Pedraza- ́Chaverri, J.; Guerrero-Legarreta, I.; Tellez, DI; Jaramillo-Flores, M. ́E. Kapasiti Antioksidan dan Kesan Sitotoksik Catechins dan Resveratrol Oligomer Dihasilkan oleh Pengoksidaan Enzimatik terhadap T24Sel Kanser Pundi Kencing Manusia. Antioksidan 2019, 8, 214.

(12) Matahari, C.-L.; Chang, C.-T.; Lee, H.-H.; Zhou, J.; Wang, J.; Sham,T.-K.; Pong, W.-F. Sintesis berbantukan gelombang mikro bagi heterostruktur cangkang teras MWCNT/GONR untuk pengesanan elektrokimia asid askorbik, dopamin dan asid urik. ACS Nano 2011, 5, 7788−7795.

(13) Lin, T.-E.; Lu, Y.-J.; Matahari, C.-L.; Pilih, H.; Chen, J.-P.; Lesch, A.;Girault, HH Probe Elektrokimia Lembut untuk Memetakan Taburan Penanda Bio dan Bahan Nano yang Disuntik dalam Tisu Haiwan dan Manusia. Angew. Chem., Int. Ed. Inggeris. 2017, 56, 16498−16502.

(14) Okuda, K.; Hirota, T.; Hirobe, M.; Nagano, T.; Mochizuki, M.; Nishino, T. Sintesis pelbagai derivatif G60 larut air dan aktiviti pelindapkejutan superoksidanya. Fullerene Sci. Technol. 2000, 8,127−142.

(15) Lucente-Schultz, RM; Moore, VC; Leonard, AD; Harga, BK; Kosynkin, DV; Lu, M.; Partha, R.; Conyers, JL; Lawatan, tiub nano karbon berdinding tunggal JMAantioksidan. J. Am. Kimia. Soc. 2009,131, 3934−3941.

(16) Injac, R.; Perse, M.; Obermajer, N.; Djordjevic-Milic, V.;Prijatelj, M.; Djordjevic, A.; Cerar, A.; Strukelj, B. Potensi kesan hepatoprotektif fullerene C60(OH)24 dalam hepatotoksisiti akibat doxorubicin dalam tikus dengan karsinoma susu. Biobahan 2008, 29, 3451−3460.

(17) Tong, J.; Zimmerman, MC; Li, S.; Yi, X.; Luxenhofer, R.;Jordan, R.; Kabanov, AV Neuronal pengambilan dan penyusutan superoksida intraselular fullerene (C60)-poli(2-oxazoline)snanoformulation. Biobahan 2011, 32, 3654−3665.

(18) Yugioh, K.; Shishido, K.; Murayama, H.; Yano, M.;Matsubayashi, K.; Takada, H.; Nakamura, H.; Masuko, K.; Kato, T.;Nishioka, K. Fullerene C60 larut air menghalang degenerasi rawan artikular dalam osteoartritis melalui pengawalan menurun aktiviti chondrocytecatabolic dan perencatan degenerasi rawan semasa perkembangan penyakit. Arthritis Rheum. 2007, 56, 3307−3318.

(19) Takada, H.; Mimura, H.; Xiao, L.; Islam, RM; Matsubayashi,K.; Ito, S.; Miwa, N. Innovative Anti-Oxidant: Fullerene (INCI #:7587) adalah sebagai "Span Radikal" pada Kulit. Tahap Keselamatan, Kestabilan dan Potensinya yang Tinggi sebagai Ramuan Kosmetik Anti-Penuaan dan Pemutihan Utama. Fullerene, Nanotiub, Karbon Nanostruct.2006, 14, 335−341.

(20) Fenoglio, I.; Greco, G.; Tomatis, M.; Muller, J.; Raymundo Piñero, E.; Beguin, F.; Fonseca, A.; Nagy, JB; Lison, D.; Fubini, B. ́Kecacatan struktur memainkan peranan utama dalam ketoksikan paru-paru akut tiub nano karbon berbilang dinding: aspek fizikokimia. Kimia. Res.Toxicol. 2008, 21, 1690−1697.

(21) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.;Zhang, Y.; Dubonos, SV; Grigorieva, IV; Firsov, AA Kesan medan elektrik dalam filem karbon nipis atom. Sains 2004, 306, 666−669.

(22) Novoselov, KS; Geim, AK; Morozov, SV; Jiang, D.;Katsnelson, MI; Grigorieva, IV; Dubonos, SV; Firsov, AA Gas dua dimensi fermion Dirac tak berjisim dalam graphene. Alam 2005,438, 197−200.

(23) Zhou, X.; Wei, Y.; Dia, Q.; Boey, F.; Zhang, Q.; Zhang, H. Filem graphene oxide terkurang digunakan sebagai matriks MALDI-TOF-MS untuk pengesanan oktaklorodibenzo-p-dioxin. Kimia. Commun. 2010, 46,6974−6976.

(24) Zhao, W.; Fan, S.; Xiao, N.; Liu, D.; Tay, YY; Yu, C.; Sim, D.;Huang, HH; Zhang, Q.; Boey, F.; Ma, X.; Zhang, H.; Yan, Q. Kertas nanotube karbon fleksibel dengan sifat termoelektrik yang dipertingkatkan. Persekitaran Tenaga. Sci. 2012, 5, 5364−5369.

(25) Wang, Z.; Wu, S.; Zhang, J.; Chen, P.; Yang, G.; Zhou, X.;Zhang, Q.; Yan, Q.; Zhang, H. Kajian perbandingan pada filem graphene oksida terkurang satu lapisan yang diperoleh melalui pengurangan elektrokimia dan pengurangan wap hidrazin. Skala Nano Res. Lett. 2012, 7, 161.

(26) Liang, X.; Fu, Z.; Chou, SY Transistor Graphene dibuat melalui pencetakan pindahan di kawasan aktif peranti pada wafer besar. Nano Lett.2007, 7, 3840−3844.

(27) Matahari, X.; Liu, Z.; Welsher, K.; Robinson, JT; Goodwin, A.;Zaric, S.; Dai, H. Nano-graphene oxide untuk pengimejan selular dan penghantaran ubat. Nano Res. 2008, 1, 203−212.

(28) Chen, W.; Xiao, P.; Chen, H.; Zhang, H.; Zhang, Q.; Chen, Y. Bahan Pukal Graphene Polimer dengan Rangkaian Graphene Monolitik Berpaut Silang 3D. Adv. Mater. 2019, 31, 1802403.

(29) Chen, D.; Feng, H.; Li, J. Graphene oxide: penyediaan, kefungsian, dan aplikasi elektrokimia. Kimia. Rev. 2012,112, 6027−6053.

(30) Ranjan, P.; Agrawal, S.; Sinha, A.; Rao, TR; Balakrishnan, J.;Thakur, AD Sintesis Tidak Meletup Kos Rendah bagi GrapheneOxide untuk Aplikasi Boleh Skala. Sci. Rep. 2018, 8, 12007.

(31) Qiu, Y.; Wang, Z.; Owens, ACE; Kulaots, I.; Chen, Y.; Kane,AB; Hurt, RH Antioksidan kimia bahan berasaskan graphene dan peranannya dalam teknologi perlindungan pengoksidaan. Skala nano 2014, 6,11744−11755.

(32) Han, SAYA; Ozyilmaz, B.; Zhang, Y.; Kim, P. Energy band-gapengineering of graphene nanoribbons. Fizik. Rev. Lett. 2007, 98,206805.

(33) Souza, JP; Mansano, AS; Venturini, FP; Santos, F.; Zucolotto, V. Metabolisme antioksidan ikan zebra selepas pendedahan sub-maut kepada graphene oksida dan pemulihan. Fisiol Ikan. Biokim. 2019,45, 1289−1297.

(34) Matahari, C.-L.; Su, C.-H.; Wu, J.-J. Sintesis nanoribbon grapheneoxide pendek untuk pengesanan biomarker yang lebih baik bagi penyakit Parkinson. Biosens. Bioelektron. 2015, 67, 327−333.

(35) Raja, AAK; Davies, BR; Noorbehesht, N.; Newman, P.;Gereja, TL; Harris, AT; Razal, JM; Minett, AI RamanMetrik Baharu untuk Pencirian Graphene oxide dan Derivatifnya.Sci. Rep. 2016, 6, 19491.

(36) Hsu, H.-C.; Ditunjukkan, I.; Wei, H.-Y.; Chang, Y.-C.; Du, H.-Y.; Lin,Y.-G.; Tseng, C.-A.; Wang, C.-H.; Chen, L.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, K.-H. Graphene oxide sebagai fotomangkin yang menjanjikan untuk penukaran CO2 kepada metanol. Skala nano 2013, 5, 262−268.

(37) Lin, L.-Y.; Yeh, M.-H.; Tsai, J.-T.; Huang, Y.-H.; Matahari, C.-L.;Ho, K.-C. Heterostruktur nanoribbon nanoribbon@grapheneoxide dengan cangkang teras berbilang dinding sebagai bahan superkapasitor yang berpotensi. J. Mater. Kimia. 2013, 1, 11237−11245.

(38) Yin, H.; Xu, L.; Porter, NA Pengoksidaan lipid radikal bebas: mekanisme dan analisis. Kimia. Rev. 2011, 111, 5944−5972.

(39) Tung, C.-H.; Chang, J.-H.; Hsieh, Y.-H.; Hsu, J.-C.; Ellis, AV;Liu, W.-C.; Yan, R.-H. Perbandingan hasil radikal hidroksil antara rawatan air bermangkin foto dan elektro. J. Taiwan Inst. Chem.Eng. 2014, 45, 1649−1654.

(40) Ohshima, H.; Yoshie, Y.; Auriol, S.; Gilbert, I. Tindakan antioksidan dan pro-oksidan flavonoid: kesan ke atas kerosakan DNA yang disebabkan oleh oksida nitrik, peroksinitrit, dan anion nitroksil. Biol Radikal Bebas. Med.1998, 25, 1057−1065.

(41) Chou, H.-Y.; Lee, C.; Pan, J.-L.; Wen, Z.-H.; Huang, S.-H.; Lan,C.-W.; Liu, W.-T.; Jam, T.-C.; Hseu, Y.-C.; Hwang, B.; Cheng, K.-C.; Wang, H.-M. Ekstrak Astaxanthin yang Diperkaya daripada HaematococcusPluvialis Menambah Rembesan Faktor Pertumbuhan untuk Meningkatkan Percambahan Sel dan Mendorong Degradasi MMP1 untuk Meningkatkan Pengeluaran Kolagen dalam Fibroblas Dermal Manusia. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17,955.

(42) Bitner, BR; Marcano, DC; Berlin, JM; Fabian, RH;Cherian, L.; Culver, JC; Dickinson, SAYA; Robertson, CS; Pauller,RG; Kent, TA; Tour, JM Zarah karbon Antioksidan memperbaiki disfungsi serebrovaskular berikutan kecederaan otak traumatik. ACSNano 2012, 6, 8007−8014.

(43) Liao, C.; Li, Y.; Tjong, S. Graphene Nanomaterials: Sintesis, Biokompatibiliti dan Sitotoksisiti. Int. J. Mol. Sci. 2018, 19, 3564.

(44) Kong, H.; Wang, L.; Zhu, Y.; Huang, Q.; Fan, C. Culture Cerapan fizikokimia berkaitan sederhana tentang sitotoksisiti bahan nano karbon. Kimia. Res. Toksik. 2015, 28, 290−295.

(45) Xiao, L.; Matsubayashi, K.; Miwa, N. Kesan perencatan derivatif fullerene yang dibalut polimer larut air pada melanogenesis yang disebabkan oleh UVA melalui downregulation ekspresi tyrosinase melanosit dan tisu kulit tidak manusia. Gerbang. Dermatol. Res. 2007, 299,245−257.

(46) Kfoury, A.; Amaro, M.; Collet, C.; Sordet-Dessimoz, J.;Giner, MP; Christen, S.; Moco, S.; Leleu, M.; Leval, L.; Koch, U.;Trumpp, K.; Sakamoto, K.; Beermann, F.; Radtke, F. AMPK menggalakkan kemandirian sel melanoma c-Myc-positif dengan menekan tekanan oksidatif. EMBO J. 2018, 37, No e97673.

(47) Hseu, Y.-C.; Cheng, K.-C.; Lin, Y.-C.; Chen, C.-Y.; Chou, H.-Y.; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Wen, Z.-H.; Wang, H.-M. Kesan Sinergis Linderanolide B Digabungkan dengan Arbutin, PTU, atau KojicAcid pada Perencatan Tyrosinase. Curr. Pharm. Bioteknol. 2015, 16,1120−1126.

(48) Lee, S.; Kim, J.; Lagu, H.; Seok, J.; Hong, S.; Boo, Y. Luteolin7-Sulfate Melemahkan Sintesis Melanin melalui Perencatan Ekspresi Tyrosinase Pengantaraan CREB dan MITF. Antioksidan 2019, 8, 87.

(49) Duval, C.; Cohen, C.; Chagnoleau, C.; Flouret, V.; Bourreau,E.; Bernard, F. Peranan pengawalseliaan utama inpigmentasi fibroblas dermal seperti yang ditunjukkan menggunakan model kulit yang dibina semula: kesan penuaan foto. PLoS One 2014, 9, No. e114182.

(50) Li, P.-H.; Chiu, Y.-P.; Shih, C.-C.; Wen, Z.-H.; Ibeto, LK;Huang, S.-H.; Chiu, CC; Ma, D.-L.; Leung, C.-H.; Chang, Y.-N.;Wang, H.-MD Biofungsional Aktiviti Equisetum ramosissimumEkstrak: Kesan Perlindungan terhadap Pengoksidaan, Melanoma dan Melanogenesis. Oksida. Med. sel. Panjang umur 2016, 2016, 2853543.

(51) Liang, C.-H.; Chan, L.-P.; Ding, H.-Y.; Jadi, SPR; Lin, R.-J.;Wang, H.-M.; Chen, Y.-G.; Chou, T.-H. Aktiviti Penghapusan Radikal Bebas 4-(3,4-Dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -d-glucopyranoside daripada Origanum vulgare dan Perlindungannya terhadap Kerosakan Oksidatif. J. Agric. Kimia Makanan. 2012, 60, 7690−7696.

(52) Wang, H.-M.; Chen, C.-Y.; Wen, Z.-H. Mengenal pasti perencat melanogenesis daripada Cinnamomum SubGenius dengan sistem pemeriksaan in vitro dan in vivo dengan menyasarkan tyrosinase manusia. Exp.Dermatol. 2011, 20, 242−248.

(53) Wang, Y.-C.; Huang, X.-Y.; Chiu, C.-C.; Lin, M.-Y.; Lin, W.-H.;Chang, W.-T.; Tseng, C.-C.; Wang, H.-MD Perencatan melanogenesis melalui serbuk ekstrak buah Phyllanthus Emblica dalam sel B16F10. Biosci Makanan. 2019, 28, 177−182.

(54) Panchuk, RR; Skorokhyd, NR; Kozak, YS; Lehka, LV;Moiseenok, AG; Stoica, RS Aktiviti pelindung tisu bagi selenomethionine dan D-pantherine dalam B16 melanoma-bearing miceunder rawatan doxorubicin tidak berkaitan dengan potensi ROSscavenging mereka. Croat. Med. J. 2017, 58, 171.

(55) Wang, H.-MD; Chen, C.-C.; Huynh, P.; Chang, J.-S. Meneroka potensi menggunakan alga dalam kosmetik. Bioresour. Technol.2015, 184, 355−362