Kesan Antioksidan Dan Antikoagulan Glikosida Phenylpropanoid
Mar 18, 2022
untuk maklumat lanjut:ali.ma@wecistanche.com
Bartosz Skalski, et al
Abstrak
Tumbuhan Holoparasit dari Orobanchaceae, termasuk Cistanche, Orobanche, dan Pelipanche spp, terkenal dengan kekayaannyafenilpropanoidglikosida(PPG). Banyak sebatian PPG didapati mempunyai spektrum aktiviti yang luas, seperti antimikrob, anti-radang, antioksidan, dan meningkatkan daya ingatan. Untuk meneroka lebih baik potensi bioaktiviti penyapu Eropah (O. Caryophyllaceae - OC, P. Arenaria - PA, P. ramosa - PR) dan sepuluh konstituen fenilpropanoid terpencil tunggal, kami menyiasat tindakan antiradikalnya, kesan perlindungan terhadap pengoksidaan dalam sistem in vitro plasma. , dan pengaruh ke atas parameter pembekuan. Ekstrak yang diuji menunjukkan aktiviti mengais 50–70 peratus daripada kuasa Trolox. Ekstrak OC, kaya dengan acteoside, mempunyai potensi antiradikal lebih 20 peratus lebih baik daripada ekstrak PR yang merupakan satu-satunya yang mengandungi PPG yang tidak mempunyai bahagian katekol cincin B dalam unit asil. Selain itu, didapati hanya lapan PPG yang diuji(phenilpropanoidglikosida)menunjukkan potensi antioksidan dalam plasma manusia yang dirawat dengan H2O2/Fe; bagaimanapun, ketiga-tiga PPG yang diuji(phenilpropanoidglikosida)mempunyai potensi antikoagulan sebagai tambahan kepada sifat antioksidan. Nampaknya struktur PPG, terutamanya kehadiran acyl dan catechol moieties, terutamanya berkaitan dengan sifat antioksidannya. Potensi antikoagulan sebatian ini juga berkaitan dengan struktur kimianya. PPG terpilih mempamerkan potensi untuk merawat penyakit kardiovaskular yang berkaitan denganoksidatiftekanan.
Kata kunci:Penyapu, Glikosida Phenylpropanoid, Tekanan oksidatif, Hemostasis Plasma
CistanchemempunyaiPhenylpropanoidglikosida
1. Pengenalan
Oksidatiftekanandikenali secara meluas kerana kesan negatifnya terhadap kesihatan organisma hidup, termasuk penuaan dipercepatkan dan beberapa kanser. Kejadianoksidatiftekanandikaitkan dengan keseimbangan yang terganggu antara mekanisme oksidatif dan antioksida (termasuk enzimatik (katalase, glutathione peroksidase) dan pertahanan bukan enzim (glutation) dalam sel badan [1]. Pengeluaran berlebihan spesies oksigen reaktif (ROS), termasuk radikal pengoksidaan dan spesies cangkerang tertutup, adalah salah satu mekanisme utama di sebalik pembentukan tegasan oksidatif. Walau bagaimanapun, kesan biologi yang disebabkan oleh ROS bergantung pada kepekatan, masa pendedahan dan lokasi. Dalam keadaan normal (kepekatan rendah), radikal oksigen/nitrogen boleh memainkan peranan sebagai utusan sekunder, tetapi pada tahap yang lebih tinggi, mereka mungkin mula bertindak balas dengan struktur biologi, seperti membran sel [2]. Di antara semua spesies ROS, radikal hidroksil (H O.) menyebabkanOksidatiftekanandiketahui memainkan peranan penting dalam pelbagai penyakit, termasuk kardiovaskular. Gangguan sistem darah telah dikaitkan dan/atau didahului oleh perubahan dalam pelbagai parameter hemostasis dan biomarker plasma [1,3].
Sebaliknya, banyak bahan semula jadi, seperti polifenol dan asid lemak tak tepu, telah dikenal pasti sebagai antioksidan kuat yang mampu menghalang pembentukan dan/atau mengurangkan spesies oksigen reaktif. Sebatian dengan sifat sedemikian terdapat dalam banyak produk makanan dan persediaan farmaseutikal yang berasal dari tumbuhan. Diet yang diperkaya dengan sayur-sayuran dan buah-buahan segar, dan terapi antioksida berdasarkan antioksidan semulajadi, adalah disyorkan secara meluas kerana ia boleh mengurangkan tahapoksidatiftekanandan menghalang pelbagai proses patofisiologi [4,5]. Polifenol tumbuhan ialah kumpulan metabolit sekunder yang pelbagai, antaranya asid fenolik menduduki tempat yang penting, kerana ia diedarkan secara meluas dan mempamerkan pelbagai kesan biologi, seperti antimikrob, antioksidan, dan anti-radang.Phenylpropanoidglikosida(PPG) ialah terbitan ester asid hidroksisinamik dan ia merupakan kelas utama/satu-satunya metabolit sekunder yang terdapat dalam tumbuhan Orobanchaceae holoparasit, termasuk Cistanche, Orobanche, dan Phelipanche spp. Beberapa spesies keluarga ini adalah perosak tanaman yang serius yang ingin disingkirkan oleh petani di ladang (contoh Phelipanche ramosa), hanya sedikit digunakan dalam farmakologi, manakala kebanyakannya tidak begitu penting kepada manusia. Herba Cistanche digunakan secara meluas dalam perubatan tradisional Asia dalam rawatan kekurangan buah pinggang dan sebagai agen imuniti dan peningkatan ingatan, anti-penuaan, dan antikeletihan [6]. Analisis fitokimia pelbagai kumpulan penyelidikan telah menunjukkannyafenilpropanoidglikosida, seperti acteoside, echinacoside, dan podium side, adalah salah satu bahan aktif utama Herba Cistanche [7]. Kajian terbaru tentang beberapa spesies penyapu yang ditemui di Poland oleh Jedrejek et al. [8] telah menunjukkan bahawa bahan tumbuhan ini mempunyai komposisi kualitatif yang serupa (penguasaan PPG)(phenilpropanoidglikosida), lebih-lebih lagi, ia menyamai atau bahkan melebihi Cistanche spp. dari segi kandungan bahan aktif [8]
Kajian ini bertujuan untuk menilai potensi antiradikal dan antioksidan, serta pengaruh ke atas parameter hemostasis bagi tiga ekstrak penyapu (Orobanche caryophyllacea - OC, Phelipanche Arenaria - PA, dan P. ramosa - PR) yang kaya dengan pelbagai fenilpropanoid, sebagai serta konstituen PPG tunggal mereka. Kapasiti antiradikal diukur menggunakan 2,2′-azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6-asid sulfonik/Trolox Equivalent (ABTS/TE) dan 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH ) ujian. Theoksidatiftekanandalam sistem ujian plasma diinduksi menggunakan radikal hidroksil (H2O2/Fe), kemudian peroksidasi lipid (ujian spesies asid-reaktif thiobarbituric (TBARS)), dan tahap kumpulan karbonil dan tiol protein diukur. Antara parameter hemostasis yang ditentukan ialah: masa tromboplastin separa diaktifkan (APTT), masa protrombin (PT), dan masa trombin (TT).
CistanchemempunyaiPhenylpropanoidglikosida
2. Bahan-bahan dan cara-cara
2.1. Bahan kimia
2,2-difenil-1-radikal picrylhydrazyl (DPPH), 2,2′-azinobis-3-ethylbenzthiazoline-6-asid sulfonik (ABTS), kalium persulfat, 6- hidroksi-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-asid karboksilik (Trolox), dimetilsulfoksida (DMSO), asid tiobarbiturik (TBA), asid formik (gred LC-MS) dan H2O2 telah dibeli daripada Sigma-Aldrich (St. Louis, MO., USA). Metanol (gred kecerunan HPLC) dan asetonitril (gred LC-MS) diperoleh daripada Merck (Darmstadt, Jerman). Sepuluh sebatian fenilpropanoid diuji dalam kerja ini, termasuk 2'-O-asetilakteosida (97 peratus ), 2'-O-acetylpoliumoside (98 peratus ), 3-O-methylpoliumoside (96 peratus ), acteoside (99 peratus ), arena di dalam (97 peratus), krenatosida (98 peratus), teniposide (99 peratus), poliumoside (99 peratus), tubuloside A (96 peratus), dan wiede mannioside D (96 peratus) sebelum ini diasingkan oleh kami daripada tumbuhan yang diberikan di bawah. bahan [8]. Ketulenan sebatian dinilai menggunakan analisis UHPLC-PDA-MS. Air ultratulen disediakan secara dalaman menggunakan sistem penulenan air Milli-Q (Millipore Co.). Reagen lain adalah gred analitik dan disediakan oleh pembekal komersial domestik.
2.2. Bahan tumbuhan
Tumbuhan berbunga tiga spesies penyapu, termasuk Orobanche Caryophyllaceae Sm., Pelipanche Arenaria Pomel, dan P. ramosa (L.) Pomel telah dikenal pasti oleh prof. Renata Piwowarczyk (Jan Kochanowski Uni versity, Kielce, Poland) dan dikumpulkan daripada sumber semula jadi di Poland. Spesimen baucar (O. Caryophyllaceae – Chomentowek ´ (50.3349◦N, 20.4000◦E), padang rumput xerotermik, berparasit Galium boreale, Mei 2014; P. Arenaria – Zwierzyniec (50.3652◦N, 22.5801◦N, p.mophilis) Artemisia campestris, Jun 2014; P. ramosa - Szewce (50.3553◦N, 22.3038◦E), field, parasitize Solanum Lycopersicum, September 2014) disimpan di Herbarium Universiti Jan Kochanowski di Kielce (KTC). Bahan tumbuhan telah diliofilkan dan dikisar halus sebelum diekstrak.
2.3. Penyediaan ekstrak penyapu
Bahan tumbuhan serbuk (O. Caryophyllaceae (OC) – 2 g, P. Arenaria (PA) – 3 g dan P. ramosa (PR) – 3 g) diekstrak dengan 80 peratus MeOH pada 40 ◦C dan 1500 psi (tekanan pelarut ) menggunakan pengekstrak pelarut dipercepatkan ASE 200 (Dionex, Sunnyvale, CA, USA). Ekstrak telah disejat dan dikeringkan beku (pengering beku Gamma 2–16 LSC, Christ, Jerman). Kecekapan pengekstrakan untuk OC, PA dan PR masing-masing ialah 55 peratus , 37 peratus dan 43 peratus mengikut berat bahan tumbuhan. Oleh kerana kandungan karbohidrat yang tinggi (data tidak ditunjukkan), ekstrak mentah telah disucikan lagi dengan pengekstrakan fasa pepejal (SPE) pada lajur mikro Oasis HLB (500 mg; Waters, Milford, MA, USA). Gula dikeluarkan dengan 1 peratus MeOH, kemudian sebatian faedah dielusikan dengan 80 peratus MeOH. Selepas mengeluarkan pelarut, ekstrak OC, PA, dan PR telah diliofilkan (pengering beku Gamma 2–16 LSC), dan hasil penulenan SPE ialah 53 peratus (OC), 67 peratus (PA), dan 51 peratus (PR) .
2.4. Ciri-ciri fitokimia ekstrak penyapu
Analisis kualitatif dan kuantitatif bagi ekstrak penyapu telah dilakukan menggunakan sistem ACQUITY UPLC (Waters) yang disambungkan kepada pengesan tatasusunan fotodiod (PDA) dan spektrometer jisim quadrupole tandem (TQD-MS/MS). Ekstrak OC, PA dan PR yang dikeringkan beku telah dilarutkan dalam 50 peratus metanol pada kepekatan 0.50 mg/mL dan kemudian dikromatografi pada lajur BEH C18 (1{ {21}}0 × 2.1 mm, 1.7 µm, Perairan). Keadaan kromatografi adalah seperti berikut: suhu ketuhar – 25 ◦C, kecerunan linear 10→25 peratus fasa mudah alih B (0.1 peratus asid formik dalam asetonitril) dalam fasa mudah alih A (0.1 peratus asid formik dalam H2O) lebih 12 minit, kadar aliran – 0.4 mL/min, isipadu suntikan – 2 μL, julat UV – 190–490 nm (resolusi 3.6 nm). Analisis MS dilakukan dalam mod ion negatif dengan pengionan elektrospray (ESI), menggunakan tetapan berikut: julat imbasan 100–1200 m/z; voltan kapilari 2.8 kV; voltan kon 35 V; suhu sumber 150 ◦C; suhu pelarutan 450 ◦C; aliran gas pelarutan 900 L/j, dan aliran gas kon 100 L/j. Pemerolehan dan pemprosesan data dilakukan menggunakan perisian Waters MassLynx 4.1.
Puncak fenilpropanoid glikosida (PPG) dikenal pasti melalui perbandingan data LC-MS yang diperolehi dengan sebatian yang telah diasingkan sebelum ini [8]. Kuantiti PPG(phenilpropanoidglikosida)dalam ekstrak penyapu adalah berdasarkan kaedah UPLC-UV dengan pengesanan pada 330 nm dan penentukuran standard luaran menggunakan acteoside (Sigma-Aldrich, Lebih besar daripada atau sama dengan 99 peratus , HPLC) sebagai standard kumpulan. Keluk penentukuran linear telah disediakan dalam enam kepekatan dalam julat 1–200 ug/mL dan menunjukkan kelinearan yang baik (R2 Lebih besar daripada atau sama dengan 0.999). Keputusan kuantitatif mewakili nilai min ± SD bagi tiga suntikan dan dinyatakan sebagai miligram setara acteoside (eq) setiap gram ekstrak (mg acteoside eq/g).
CistanchemempunyaiPhenylpropanoidglikosida
2.5. Aktiviti antiradikal secara in vitro
2.5.1. Ujian penghapusan radikal ABTS
Ujian antiradikal ABTS telah dijalankan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Kontek et al. [9], dengan sedikit pengubahsuaian seperti berikut: 20 peratus MeOH digunakan untuk menyediakan reagen (7 mM ABTS dan 4.9 mM kalium persulfat); larutan ekstrak OC, PA, dan PR, pada empat tahap kepekatan dalam julat 100− 400 ug/mL, dan larutan Trolox, pada enam tahap kepekatan dalam julat 10− 250 ug/mL, disediakan dengan 50 peratus MeOH. Perkadaran sampel kepada penyelesaian kerja ABTS campur ialah 1:25 (v/v). Penyerapan pada 734 nm diukur selepas 30 minit pengeraman dalam gelap menggunakan spektrofotometer UV-vis (Evolution 260 Bio, Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA).
Perencatan penyerapan ( peratus ) dikira seperti berikut: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] ×100.
Kesetaraan Trolox (TE) bagi ekstrak penyapu dikira menggunakan formula TE {{0}} sampel/piawai, dengan m ialah cerun lengkung garis lurus (perencatan penyerapan vs. kepekatan). Nilai TE sampel menerangkan aktiviti normalnya terhadap Trolox (TEstandard =1.0). Nilai IC50 untuk ekstrak OC, PA, dan PR serta Trolox dicapai secara eksperimen, kemudian dikira daripada lengkung garis lurusnya (perencatan penyerapan vs. kepekatan) dan dinyatakan dalam ug/mL.
Ujian dilakukan dalam tiga kali ganda, dan hasilnya dibentangkan sebagai min ± sisihan piawai (SD).
2.5.2. Ujian penghapusan radikal DPPH
Ujian antiradikal DPPH telah dijalankan menggunakan kaedah yang diterangkan oleh Jedrejek et al. [8] dan Brand-Williams et al. [10], dengan sedikit pengubahsuaian seperti berikut: larutan ekstrak OC, PA, dan PR, pada empat tahap kepekatan dalam julat 50− 250 ug/mL, dan larutan Trolox, pada enam tahap kepekatan dalam julat 10− 250 ug/mL, telah disediakan dengan 50 peratus MeOH. Perkadaran sampel kepada DPPH ialah 1:19 (v/v). Penyerapan pada 517 nm diukur selepas 30 minit pengeraman dalam gelap menggunakan spektrofotometer UV-vis (Evolution 260 Bio).
Perencatan penyerapan ( peratus ) dikira seperti berikut: [(Abscontrol–Abssample)/Abscontrol] ×100.
Nilai Trolox Equivalent (TE) dan IC50 sampel ujian dikira dengan cara yang sama seperti dalam ujian ABTS (Bahagian 2.5.1). Ujian dilakukan dalam tiga kali ganda, dan hasilnya dibentangkan sebagai min ± SD.
2.6. Penyelesaian stok sebatian dan ekstrak tumbuhan yang diuji untuk eksperimen dengan plasma manusia
Penyelesaian stok sebatian dan ekstrak tumbuhan yang diuji telah disediakan dalam 50 peratus DMSO. Kepekatan akhir DMSO dalam sampel yang diuji adalah lebih rendah daripada 0.05 peratus dan kesannya ditentukan dalam semua eksperimen.
2.7. Pengasingan plasma manusia
Darah manusia, atau plasma, diperoleh daripada enam penderma tetap (lelaki dan wanita yang tidak merokok) ke bank darah (Lodz, Poland) dan pusat perubatan (Lodz, Poland). Darah dikumpulkan sebagai larutan CPD (sitrat/fosfat/dekstrosa; 9:1; v/v darah/CPD) atau larutan CPDA (sitrat/fosfat/dekstrosa/adenina; 8.5:1; v/v; darah/CPDA). Penderma tidak mengambil sebarang ubat atau bahan ketagihan (termasuk tembakau, alkohol, dan suplemen antioksidan) selama sekurang-kurangnya dua minggu sebelum menderma. Analisis sampel darah kami telah dilakukan di bawah garis panduan Deklarasi Helsinki untuk Penyelidikan Manusia dan diluluskan oleh Jawatankuasa Etika Penyelidikan dalam Eksperimen Manusia di Universiti Lodz. Plasma disediakan melalui sentrifugasi darah manusia segar pada 4500x g selama 25 minit pada suhu bilik. Kepekatan protein dikira dengan mengukur penyerapan sampel yang diuji pada 280 nm, mengikut prosedur Whitaker dan Granum [11].
CistanchemempunyaiPhenylpropanoidglikosida
2.8. Penanda tekanan oksidatif dalam plasma manusia
2.8.1. Pengukuran peroksidasi lipid
Pengoksidaan lipid plasma dikira dengan mengukur kepekatan bahan reaktif asid thiobarbituric (TBARS). Kepekatan TBARS dikira menggunakan pekali kepupusan molar (ε =156,000 M− 1cm− 1). Kaedah ini diterangkan dengan lebih teliti di tempat lain [12,13].
2.8.2. Pengukuran kumpulan karbonil
Tahap kumpulan karbonil dikira menggunakan pekali kepupusan molar (ε=22,000 M− 1 cm− 1) dan dinyatakan sebagai kumpulan karbonil nmol/mg protein plasma, menurut Bartosz [13]. ] dan Levine et al. [14].
2.8.3. Penentuan kumpulan tiol
Kandungan kumpulan tiol dalam protein plasma diukur secara spektrofotometri menggunakan Pembaca Mikroplat Nano SPECTROstar (BMG LABTECH, Jerman) dengan penyerapan pada 412 nm dengan 5,5′-dithiol-bis-(2- asid nitrobenzoik). Kaedah ini diterangkan dengan lebih terperinci di tempat lain [15–17].
2.9. Parameter hemostasis
2.9.1. Pengukuran masa protrombin (PT)
PT ditentukan secara koagulometrik menggunakan Penganalisis Pembekuan Optik (model K-3002, Kselmed, Grudziadz, Poland) menurut Malinowska et al. [18].
2.9.2. Pengukuran masa trombin (TT)
TT ditentukan secara koagulometrik menggunakan Penganalisis Pembekuan Optik (model K-3002, Kselmed, Grudziadz, Poland), mengikut kaedah yang diterangkan oleh Malinowska et al. [18].
2.9.3. Pengukuran masa tromboplastin separa diaktifkan (APTT)
APTT ditentukan secara koagulometrik menggunakan K-3002 Penganalisis Pembekuan Optik (Kselmed, Grudziadz, Poland) menurut Malinowska et al. [18].
2.10. Analisis data
Ujian Q-Dixon dilakukan untuk menghapuskan data yang tidak pasti. Data telah diuji untuk taburan normal dengan ujian Shapiro-Wilk dan kesamaan varians dengan ujian Levene. Perbezaan ketara secara statistik dikenal pasti menggunakan ANOVA, diikuti dengan ujian perbandingan berganda Tukey atau ujian Kruskal-Wallis. Perbandingan dianggap penting pada p < 0.05.="" nilai="" dibentangkan="" sebagai="" min="">
3. Keputusan dan perbincangan
Sepuluh sebelum ini diasingkan oleh kamifenilpropanoidglikosida[8], termasuk 2′-O-acetylacteoside, 2′-O-acetylpoliumoside, 3-O-methylpoliumoside, acteoside, arena dalam, crenatoside, pheliposide, podium side, tubuloside A, dan wiedemannioside D, bersama-sama dengan tiga ekstrak penyapu (Orobanche Caryophyllaceae (OC), Pelipanche adalah naria (PA), dan P. ramosa (PR)) kini dikaji untuk mengurangkanoksidatiftekanandan sifat antikoagulan dalam sistem plasma manusia. Struktur kimia fenilpropanoid yang diuji dibentangkan dalam Rajah 1, dan, seperti yang dapat dilihat, semuanya dibina mengikut corak yang sama, dengan sub-unit yang sama/serupa: hydroxytyrosol, monosakarida (glukosa, rhamnose, dan/atau xylose), dan asid hydroxycinnamic. Kebanyakan sebatian PPG yang diperiksa digantikan dengan asid kafeik, tetapi ini boleh digantikan dengan asid kuumarik atau ferulik.
Selain daripada sebatian PPG individu, tiga ekstrak penyapu - OC, PA, dan PR, yang merupakan campuran beberapa PPG(phenilpropanoidglikosida)dan berkhidmat sebelum ini sebagai bahan permulaan untuk pengasingan kompaun, juga dimasukkan dalam kajian biologi. Satu lagi sebab untuk memilih tiga spesies berbeza ialah perbezaan besar dalam profil fitokimia di kalangan mereka, seperti yang boleh dilihat dalam Rajah 2. Perbandingan yang lebih terperinci bagi ekstrak OC, PA, dan PR, termasuk data kuantitatif, dibentangkan dalam Jadual. 1. Acteoside adalah konstituen utama ekstrak O. Caryophyllaceae (690 mg/g), teniposide, dan arena di dalamnya didominasi dalam P. Arenaria (bersama-sama 550 mg/g), manakala poliumoside dan derivatif asetilasinya adalah metabolit terpenting dalam Ekstrak P. ramosa (bersama 640 mg/g). Ekstrak yang diperiksa juga berbeza dalam kandungan keseluruhan fenilpropanoid, jumlah tertinggi ditemui dalam OC (810 mg/g), rendah sedikit dalam PR (795 mg/g), dan lebih rendah dalam PA (685 mg/g). Lebih-lebih lagi, adalah wajar untuk diperhatikan bahawa kehadiran PPG dengan selain daripada gugusan caffeoyl, seperti coumaroyl atau feruloyl, dikesan hanya dalam ekstrak P. ramosa, di mana sebatian ini membentuk kira-kira satu perenam daripada jumlah PPG (kira-kira 120 mg/ g) (Jadual 1).
Kajian terdahulu mengenai aktiviti antiradikalfenilpropanoidglikosidaoleh Heilmann et al. [19] dan Jedrejek et al. [8], termasuk kira-kira 30 PPG berbeza(phenilpropanoidglikosida)seperti acteoside, isoacteoside, dan crenatoside, telah mendedahkan perkaitannya yang kuat dengan struktur acyl moieties (asid fenolik dan tyrosol). Secara amnya, pengubahsuaian atau penggantian bahagian katekol unit asil menghasilkan penurunan yang ketara dalam aktiviti penghapusan terhadap spesies oksigen reaktif (ROS) dan radikal DPPH. Dalam kajian semasa, potensi in vitro antiradikal bagi tiga ekstrak penyapu (OC, PA, dan PR) telah diperiksa dengan ujian ABTS dan DPPH, dan keputusan dibandingkan antara satu sama lain serta dengan aktiviti komponen fenilpropanoid individu yang diukur dalam kajian terdahulu kami [8]. Hasilnya dinyatakan sebagai nilai Trolox Equivalents (TE) dan IC50 (Jadual 2). Secara amnya, ketiga-tiga ekstrak adalah penghapus yang baik bagi kedua-dua radikal ABTS dan DPPH tetapi perbezaan juga diperhatikan di antara sampel yang diuji (anggaran TE berada dalam julat 0.5–0.7; 1.0 ialah bersamaan dengan Trolox). Aktiviti penghapusan antiradikal sampel adalah dalam susunan berikut: Trolox > OC > PA > PR. Ekstrak Orobanche Caryophyllaceae (IC50=155–275 µg/mL) mempunyai lebih 20 peratus aktiviti lebih besar daripada ekstrak Pelipanche ramosa (IC50=200–320 µg/mL).
Aktiviti pemusnahan radikal tertinggi yang dilaporkan dari ekstrak OC boleh dijelaskan oleh PPG tertinggi(phenilpropanoidglikosida)kandungan dalam sampel ini, serta input acteoside, bahan dominannya, yang menurut penyelidikan terdahulu [8,19] merupakan salah satu penghapus radikal bebas terkuat di kalangan metabolit daripada kumpulan ini (TEDPPH=0 .87; [4]). Walau bagaimanapun, memandangkan hubungan bersama aktiviti antiradikal dan kandungan fenilpropanoid dalam ekstrak OC, PA, dan PR, tiada korelasi mudah ditemui antara kedua-dua faktor ini (r < 0.5),="" menunjukkan="" input="" yang="" ketara="" bagi="" profil="" kualitatif.="" ini="" terutamanya="" berkaitan="" dengan="" ekstrak="" p.="" ramosa,="" yang="" walaupun="" tahap="" ppg="" yang="">(phenilpropanoidglikosida)({{0}}}.8 g/g) dicirikan oleh aktiviti biologi yang paling rendah antara sampel yang diuji (TE ~ 0.5). Ekstrak PR, seperti yang dinyatakan di atas, adalah satu-satunya sampel yang memiliki fenilpropanoid dengan asid kuumarik atau ferulik, bahan yang tidak mempunyai bahagian katekol cincin B, yang telah dilaporkan telah menurunkan potensi anti-oksidatif. Empat sebatian PPG mempunyai asid kafeik yang diubah suai, termasuk 3-O-methylpoliumoside, ramose A, dan wiedemannioside D, yang diuji oleh kami sebelum ini mempunyai TEDPPH sekitar 0.3 [8]. Oleh itu, keputusan semasa adalah mengikut dan mengesahkan penemuan eksperimen in vitro antiradikal sebelumnya pada fenilpropanoid.
Seperti yang Chen et al. [20] diterangkan, ia dikaitkan dengan keupayaan pendermaan H yang lebih besar atau penstabilan radikal oleh pelbagai kumpulan berfungsi bagi campuran sebatian. Beberapa elemen struktur telah dikenal pasti sebagai meningkatkan aktiviti antioksidan langsung polifenol, terutamanya yang berkaitan dengan bilangan dan kedudukan kumpulan hidroksil. Adalah dipercayai bahawa aktiviti penghapusan radikal bebas meningkat dengan peningkatan bilangan kumpulan –OH. Walau bagaimanapun, kedudukan kumpulan ini, dalam molekul, mempunyai kesan yang lebih besar terhadap aktiviti yang dilakukan. Sebatian kuat yang agak stabil ialah yang mempunyai 3,4-bahagian dihidroksi dalam strukturnya, serta yang mempunyai lebih daripada dua kumpulan hidroksil [21]. Struktur kimia bahan antioksidan membolehkan pemahaman tentang mekanisme tindak balas antioksidan. Lopez-Munguía et al. [22] berdasarkan pengiraan teori fungsi ketumpatan (DFT) menentukan bahawa PPG(phenilpropanoidglikosida)mekanisme antioksidan diteruskan melalui pemindahan elektron tunggal kehilangan proton berurutan (SPLET). Walau bagaimanapun, Li et al. [23] percubaan untuk meneroka mekanisme antioksidan fenilpropanoid fenolik, membuat kesimpulan, bahawa PPG (acteoside, forsythoside B, dan poliumoside) mungkin terlibat dalam pelbagai laluan untuk melaksanakan tindakan antioksidan, meningkatkan peranan sisa gula.
Kajian telah menunjukkan bahawa antioksidan yang berasal dari tumbuhan adalah modulator berkesan hemostasis dalam penyakit kardiovaskular [24-26]. Pelbagai tumbuhan yang digunakan dalam perubatan tradisional mengandungi tahap PPG yang ketara [27,28]. Selain itu, PPG(phenilpropanoidglikosida)diketahui mempunyai pelbagai aktiviti biologi, termasuk sifat anti-radang, anti-nefritik, dan anti-hepatoksik [29-33].
Dalam kajian terbaru mereka, Jedrejek et al. [8] menerangkan pengasingan PPG(phenilpropanoidglikosida)daripada tiga penyapu Poland dan menilai aktiviti antioksidannya dengan ujian DPPH. Berdasarkan itu, kajian ini menilai sama ada sepuluh PPG terpilih yang diasingkan daripada tumbuhan ini boleh mengurangkanoksidatiftekanandalam plasma manusia dirawat dengan oksida biologi yang kuat, iaitu penderma radikal hidroksil H2O2/Fe, dan memodulasi sifat pembekuan plasma secara in vitro. Sifat antioksidan sepuluh PPG terpencil ditentukan mengikut parameter terpilih bagioksidatiftekanan: Tahap TBARS sebagai penanda peroksidasi lipid, bersama dengan kumpulan karbonil dan tahap kumpulan tiol, sebagai penanda kerosakan protein oksidatif.
Kedua-dua tahap pengoksidaan lipid plasma dan karbonilasi protein dalam plasma yang disebabkan oleh H2O2/Fe telah dikurangkan dengan ketara dengan kehadiran lapan sebatian yang diuji, iaitu. acteoside, crenatoside, 2'-O-acetylacteoside, pheliposide, arena dalam, tubuloside A, poliumoside dan 3- O-methylpolimuoside, pada semua kepekatan yang diuji (1, 5 dan 50 µg/mL); bagaimanapun, tiada kesan yang diperhatikan untuk dua sebatian yang diuji, iaitu. 2'-O-acetylpoliumoside dan wiedemannioside D, atau mana-mana ekstrak yang diuji pada sebarang kepekatan (1, 5, dan 50 µg/mL). Di samping itu, tiada satu pun sebatian yang diuji atau ekstrak yang diuji didapati melindungi plasma daripada pengoksidaan kumpulan tiol teraruh H2O2/Fe dalam protein (Gamb. 3–5). Walau bagaimanapun, ekstrak yang diuji mungkin merupakan sumber sebatian dengan pelbagai sifat biologi.
Buat pertama kalinya, keputusan kajian ini menunjukkan bahawa lapan daripada PPG yang diuji(phenilpropanoidglikosida)menunjukkan potensi antioksidan dalam plasma manusia dengan kehadiran spesies oksigen reaktif eksogen dengan menghalang peroksidasi lipid dan karbonilasi protein dalam plasma yang dirawat dengan H2O2/Fe. Di samping itu, 2'-O-acetylpoliumoside dan wiedemannioside D tidak menunjukkan sebarang kesan sedemikian. Secara umum, penemuan kami konsisten dengan eksperimen in vitro sebelumnya pada PPG. Heilmann et al. [19] dan Jedrejek et al. [8] melaporkan korelasi antara struktur kimia PPG dan aktivitinya. Sifat antioksidan PPG(phenilpropanoidglikosida)nampaknya berkaitan terutamanya dengan struktur bahagian asil mereka, iaitu asid fenolik dan unit fenilpropanoid, termasuk kehadiran dan/atau pengubahsuaian bahagian katekol. Sebagai contoh, wiedemannioside D didapati kehilangan potensi antioksidannya terhadap plasma yang dirawat dengan H2O2/Fe berikutan penggantian bahagian caffeoylnya dengan bahagian feruloyl.
Perubahan dalam proses pembekuan selalunya terhasil daripadaoksidatiftekanan; perubahan ini boleh memodulasi fungsi sistem kardiovaskular dan boleh membawa kepada perkembangan penyakit kardiovaskular [1]. Daripada sepuluh sebatian tumbuhan dan tiga ekstrak tumbuhan yang diuji dalam kajian ini, tubuloside, sisi podium dan 3-O-methylpoliumoside dan semua ekstrak yang diuji ditunjukkan untuk memanjangkan masa trombin dengan ketara pada semua kepekatan yang diuji, iaitu. 1, 5 dan 50 µg/mL (Rajah 6B). Walau bagaimanapun, tiada satu pun daripada ekstrak ini, mahupun mana-mana sebatian yang diuji, mengubah PT atau APTT (Rajah 6A dan C).
Rajah 6. Kesan sebatian yang diuji (acteoside, crenatoside, 2'-O-acetylacteoside, pheliposide, arenarioside, tubuloside A, poliumoside, 3-O-methylpoliumoside, 2'-O-cetylpolimuoside, wiedemannioside D) dan tumbuhan ekstrak (ekstrak P. arenaria - PA, ekstrak P. ramosa – PR dan ekstrak O. caryophyllacea - OC) (1–50 µg/mL) pada parameter hemostatik plasma terpilih: PT (A), TTn (B) dan APTT (C). Data mewakili min ± SEM daripada enam eksperimen bebas.n* p < 0.05="" (vs.="" kawalan),="" ns="" –="" p=""> 0.05 (vs. kawalan).
Jadual 3 membandingkan kesan PPG (5 µg/mL) pada biomarkeroksidatiftekanandalam plasma dirawat dengan H2O2/Fe dan pengaruhnya terhadap pembekuan. Lapan daripada PPG yang diuji(phenilpropanoidglikosida)menunjukkan potensi antioksidan hanya dalam plasma manusia yang dirawat; bagaimanapun, tiga PPG yang diuji didapati mempunyai kedua-dua sifat antioksidan dan potensi antikoagulan. Menariknya, keputusan ujian DPPH tidak bertepatan dengan yang diperoleh dalam model biologi menggunakan plasma manusia yang dirawat dengan H2O2/Fe: potensi antioksidan ekstrak yang diuji mungkin disekat oleh sebatian tertentu yang terdapat dalam plasma.
Kesimpulannya, penemuan kami sekarang memberi penerangan baharu tentang potensi antioksidan dan sifat antikoagulan PPG(phenilpropanoidglikosida). Nampaknya struktur PPG(phenilpropanoidglikosida), terutamanya kehadiran gugus asil dan katekol, terutamanya berkaitan dengan sifat antioksidan dan antikoagulan mereka. PPG terpilih mungkin mempunyai potensi untuk rawatan penyakit kardiovaskular yang berkaitan dengannyaoksidatiftekanan. Walau bagaimanapun, eksperimen lanjut diperlukan untuk menentukan kepekatan sebatian ini yang diperlukan untuk model in vivo.
Penyata konflik kepentingan
Penulis mengisytiharkan bahawa mereka tidak mempunyai kepentingan kewangan yang bersaing atau hubungan peribadi yang mungkin kelihatan mempengaruhi kerja yang dilaporkan dalam kertas kerja ini.
Rujukan
[1] A. Daiber, S. Chlopicki, Meninjau semula farmakologioksidatiftekanandan disfungsi endothelial dalam penyakit kardiovaskular: bukti untuk terapi berasaskan redoks, Free Radic. biol. Med. 157 (2020) 15–37.
[2] J.-J. Sauvain, A. Setyan, P. Wild, P. Tacchini, G. Lagger, F. Storti, S. Deslarzes, MJ Guillemin, M. Rossi, M. Riediker, Biomarkers ofoksidatiftekanandan kaitannya dengan kapasiti mengurangkan kencing dalam pekerja penyelenggaraan bas, J. Occupat. Med. Toksik. 6 (2011) 18–23.
[3] P. Nowak, B. Olas, B. Wachowicz,Oksidatiftekanandan hemostasis, Post. Biokim. 56 (2010) 239–247.
[4] M. Martinez-Huelamo, J. Rodriguez-Morato, A. Boronat, R. de la Torre, Modulasi Nrf2 oleh polifenol dan neuroprotection minyak zaitun dan wain, Antioksidan 6 (2017) 73.
[5] S. Amor, P. Chalons, V. Aires, D. Delmas, Ekstrak polifenol daripada wain merah dan anggur: kesan berpotensi pada kanser, Penyakit 6 (2018) 1–12.
[6] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): salah satu hadiah farmaseutikal terbaik perubatan tradisional Cina, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41–49.
[7] Y. Jiang, P.-F. Tu, Kajian: analisis juzuk kimia dalam spesies Cistanche, J. Chromatogr. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] D. Jedrejek, S. Pawelec, R. Piwowarczyk, L. Precio, A. Stochmal, Pengenalpastian dan kejadian phenylethanoid dan glikosida iridoid dalam enam rogol penyapu Poland (Orobanche spp. dan Phelipanche spp., Orobanchaceae), Phytochemistry 170 ( 2020), 112189.
[9] B. Kontek, D. Jedrejek, W. Oleszek, B. Olas, Aktiviti antiradikal dan antioksidan secara in vitro ekstrak terbitan hop yang kaya dengan asid pahit dan xanthohumol, Ind. Crops Prod. 161 (2021) 1–9.
[10] W. Brand-Williams, ME Cuvelier, C. Berset, Penggunaan kaedah radikal bebas untuk menilai aktiviti antioksidan, Lebensm. Wiss. Technol. 28 (1995) 25–30.
[11] JR Whitaker, PE Granum, Kaedah mutlak untuk penentuan protein berdasarkan perbezaan penyerapan pada 235 dan 280 nm, Dubur. Biokim. 109 (1980) 156–159.
[12] B. Wachowicz, Adenine nukleotida dalam trombosit burung, Cell Biochem. Fungsi. 2 (1984) 167–170.
[13] G. Bartosz, Druga twarz tlenu, Warsz. PWN 1 (2008) 7.
[14] RL Levine, D. Garland, CN Oliver, A. Amici, I. Climent, AG Lenz, BW Ahu, S. Shaltier, ER Stadtman, Penentuan kandungan karbonil dalam protein diubah suai secara oksidatif, Enzim Kaedah. 186 (1990) 464–478.
[15] DM Joel, J. Gressel, LJ (Eds.), Musselman, Parasitic Orobanchaceae: Mekanisme Parasit dan Strategi Kawalan, Springer, Heidelberg, Jerman, 2013, ms 1–10.
[16] Y. Ando, M. Steiner, Sulphydryl dan kumpulan disulfida membran platelet: penentuan kumpulan disulfida, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 26–37.
[17] Y. Ando, M. Steiner, Sulphydryl dan kumpulan disulfida membran platelet: penentuan kumpulan sulfidril, Biochim. Biophys. Acta 311 (1973) 38–44.
[18] J. Malinowska, J. Kołodziejczyk-Czepas, M. Moniuszko-Szajwaj, I. Kowalska, W. Oleszek, A. Stochmal, B. Olas, Pecahan fenolik daripada bahagian udara Trifolium pallidum dan Trifolium scabrum dalam plasma manusia melindungi daripada perubahan yang disebabkan oleh hyperhomocysteinemia, Food Chem. Toksik. 50 (2012) 4023–4027.
[19] J. Heilmann, I. Calis, H. Kirmizibekmez, W. Schuhly, S. Harput, O. Stiher, Aktiviti pemusnah radikalfenilpropanoidglikosidadalam FMLP merangsang leukosit polimorfonuklear: hubungan struktur-aktiviti, Planta Med. 66 (2000) 746–748.
[20] H. Chen, Y. Zhou, Y. Shao, F. Chen, Asid fenolik percuma dalam cuka tua Shanxi: perubahan semasa penuaan dan aktiviti antioksidan sinergistik, Int. J. Food Prop. 19 (2015) 1183–1193.
[21] CA Rice-Evans, NJ Miller, G. Paganga, Hubungan aktiviti struktur-antioksidan flavonoid dan asid fenolik, Free Radic. biol. Med. 20 (1996) 933–956.
[22] A. Lopez-Munguía, ´ Y. Hernandez-Romero, ´ J. Pedraza-Chaverri, A. MirandaMolina, I. Regla, A. Martínez, E. Castillo, Phenylpropanoid glycoside analogs: sintesis enzimatik, aktiviti antioksidan dan teori mengkaji mekanisme pemusnah radikal bebas mereka, PloS One 6 (2011) 20115.
[23] X. Li, Y. Xie, K. Li, A. Wu, H. Xie, Q. Guo, P. Xue, Y. Maleshibek, W. Zhao, J. Guo, D. Chen, Antioksidasi dan cytoprotection acteoside dan derivatifnya: perbandingan dan kimia mekanistik, Molecules 23 (2018) 498.
[24] SE Kulling, HM Rawel, Chokeberry (Aronia melanocarpa) – ulasan tentang komponen ciri dan kesan kesihatan yang berpotensi, Planta Med. 74 (2008) 1625–1634.
[25] BJ Mc Even, Pengaruh diet dan nutrien ke atas fungsi platelet, Semin. debaran. Hemost. 40 (2008) 214–226.
[26] B. Olas, Kepelbagaian fungsi beri terhadap platelet darah dan peranan fenolik beri dalam gangguan kardiovaskular, Platelet 5 (2016) 1–10.
[27] UB Ismailoglu, I. Saracoglu, US Harput, I. Sahin-Eredemli, Kesan fenilpropanoid dan glikosida iridoid pada kerosakan akibat radikal bebas kelonggaran yang bergantung kepada endothelium dalam cincin aorta tikus, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 193–197.
[28] ZF Bai, Y. Liu, XQ Wang, Penyiasatan tumbuhan ubatan etnik Orobanche, Cistanche dan Boschniakia, Zhongguo Zhong Yao Zhi 93 (2014) 4548–4552.
[29] K. Hayashi, T. Nagamatsu, M. Ito, H. Yagita, Y. Suzuki, Acteoside, komponen Stachys sieboldii MIQ, mungkin merupakan agen antinephritic yang menjanjikan (3): kesan asetonida pada ekspresi pada intercellular molekul lekatan-1 dalam glomeruli nefritik eksperimen dalam tikus dan sel endothelial terkultur, Jpn. J. Pharmacol. 70 (1996) 157–168.
[30] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, S. Kadota, Aktiviti hepatoprotektif fenilpropanoid daripada Cistanche deserticola, Planta Med. 64 (1998) 120–125.
[31] WF Chiou, LC Lin, CF Chen, Acteoside melindungi sel endothelial daripada yang disebabkan oleh radikal bebasoksidatiftekanan, J. Pharm. Pharm. 56 (2004) 743–748.
[32] S. Sahpaz, N. Garbacki, M. Tits, F. Bailleul, Pengasingan dan aktiviti farmakologi ester fenilpropanoid daripada Marrubium vulgare, J. Ethnopharmacol. 79 (2002) 389–392.
[33] L. Lie-Chwen, W. Yea-Hwey, H. Yu-Chang, Ch Shiou, L. Kuo-Tong, Ch Yueh-Ching, W. Wen-Yen, S. Yoh-Chiang, Kesan perencatan daripadafenilpropanoidglikosidadan glukosida iridoid pada pengeluaran radikal bebas dan ekspresi 2 integrin dalam leukosit manusia, J. Pharm. Pharmacol. 58 (2006) 129–135.
