Kaedah Berkesan Untuk Merawat Fibrosis Buah Pinggang
Mar 17, 2022
untuk lebih banyak information:ali.ma@wecistanche.com
Bahagian I.:Protein reticulum Endoplasmic TXNDC5 menggalakkan fibrosis buah pinggang dengan menguatkuasakan isyarat β TGF-β dalam fibroblas buah pinggang
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jhao & et al.
Pengenalan
Fibrosis buah pinggang, dicirikan oleh tubulointerstitialfibrosisdan sklerosis glomerular, adalah manifestasi patologi biasa kebanyakan, jika tidak semua, jenisKronikBuah pinggangPenyakit(CKD) (1). PerkembanganBuah pinggangfibrosispada pesakit dengan CKD membawa kepada kehilangan secara beransur-ansurBuah pinggangFungsi, yang akhirnya boleh mengakibatkan penyakit buah pinggang peringkat akhir (ESRD) yang memerlukan dialisis atauBuah pinggangpemindahan (2). Walaupun pelbagai penentu molekul dan laluan telah ditunjukkan untuk menyumbang kepada prosesfibrosis buah pinggang, mengubah faktor pertumbuhan-beta (TGF-β) secara amnya dianggap sebagai pengawal selia induk fibrogenesis buah pinggang (3). Berikutan kecederaan padaBuah pinggang, sel epitel tiub tiub (TEC) berumur empangan ditangkap dalam fasa G2 / M dan merembeskan sejumlah besar TGF-β, mencetuskan pengaktifan dan transformasi fibroblas buah pinggang bersebelahan menjadi myofibroblasts (4-6). Myofibroblasts yang diaktifkan, yang dipaparkan oleh ungkapan aktin otot yang licin ( SMA), sangat proliferatif dan menghasilkan matriks ekstraselular (ECM)protein seperti kolagen fibrillar, elastin, fibronectin, dan CCN2 (biasanya dikenali sebagai fac-tor pertumbuhan tisu penghubung, CTGF)(7,8). Semasa peringkat awal kecederaan buah pinggang,fibrosistelah dimulakan sebagai tindak balas fisiologi adaptif dan terhad diri yang membantu membaiki tisu dan mengekalkan integriti struktur (9). Walau bagaimanapun, berikutan kecederaan buah pinggang kronik, berulang, pengaktifan, dan percambahan myofibroblasts berterusan, mengakibatkan pengeluaran dan pengumpulan ECM yang berlebihan, yang membawa kepada kehilangan parenchyma buah pinggang berfungsi dan akhirnya, kegagalan buah pinggang (1O,11).
Klik ke Cistanche para que sirve for penyakit buah pinggang
Walaupun kemajuan dalam perubatan moden, beberapa terapi klinikal terbukti berkesan terhadapfibrosis buah pinggang. Perencat enzim penukaran angiotensin (ACEIs) dan penyekat reseptor angiotensin (ARB), sebagai contoh, telah ditunjukkan untuk mengurangkan proteinuria, ameliorateBuah pinggangfibrosis, dan melambatkan perkembangan CKD (12,13). Pentoxifylline, perencat phosphodiesterase yang tidak spesifik, sebaliknya, telah terbukti menghalang ekspresi ECM dan CCN2 yang disebabkan oleh TGF-β1, yang membawa kepada tubulointerstitial yang lemahfibrosis(14). Penggunaan ACEIs dan ARB, bagaimanapun, adalah terhad oleh kesan hipotensi mereka dan kesan buruk yang berpotensi seperti hiperkalemia. Di samping itu, rawatan ACEls/ARB atau pentoxifylline tidak dapat menghentikan perkembanganBuah pinggangfibrosisdan CKD(15,16). Oleh itu, adalah penting untuk mengenal pasti pengantara baru atau laluan yang kritikal untuk patogenesisBuah pinggangfibrosisuntuk membangunkan terapeutik yang berkesan terhadap CKD(penyakit buah pinggang kronik).
Baru-baru ini, kami mengenal pasti domain thioredoxin yang mengandungi 5 (TXNDC5), protein ER-pemastautin, fibroblast-enriched dengan aktiviti enzim protein disulfide isomerase (PDI), sebagai pengantara kritikal jantungfibrosis(17). Kami menunjukkan bahawa TXNDC5 yang berlebihan menggalakkan perkembangan jantungfibrosismelalui pengaktifan fibroblas jantung yang bergantung kepada redoks dan pengeluaran ECM. Penghapusan genetik Txndc5 ameliorates jantungfibrosisdan disfungsi kontraksi yang disebabkan oleh agonist pada tikus (17). Berdasarkan peranan penting TXNDC5 dalam fibrogenesis miokardium, kami membuat hipotesis bahawa TXNDC5could juga menyumbang secara kritikal kepada perkembangan tisufibrosisdalam organ bukan psikologi, terutamanyafibrosis buah pinggang.
Dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa TXNDC5 sangat dikawal selia dalam kedua-dua buah pinggang fibrotik manusia dan tetikus, khususnya dalam fibroblas buah pinggang yang merembeskan kolagen. Penghapusan global Txndc5 dengan ketara mengurangkan tahapBuah pinggangfibrosisdalam pelbagai model tetikus kecederaan buah pinggang. Secara mekanikal, kami menunjukkan bahawa TXNDC5 yang berlebihan, yang disebabkan oleh TGF-β1 melalui laluan tekanan ER yang bergantung kepada ATF6, augmentsBuah pinggangfibrosisdengan mempromosikan-kidney fibroblast pengaktifan/ percambahan dan pengeluaran ECM melalui penstabilan selepas terjemahan dan upregulasi jenis TGF-βreceptor I(TGFBR1). Yang penting, kami menunjukkan bahawa mendorong penghapusan khusus fibroblast Txndc5 berkesan ameliorated pembangunan dan perkembanganfibrosis buah pinggangdisebabkan oleh pelbagai jenis kecederaan pada tikus, menunjukkan bahawa menyasarkan TXNDC5 boleh menjadi pendekatan baru dan kuat untuk merawatBuah pinggangfibrosisdan memeliharaBuah pinggangFungsi.
Rajah 1. TXNDC5 telah dikawal dengan ketara dalam buah pinggang fibrotik tetikus dan spesimen buah pinggang daripada pesakit dengan CKD(penyakit buah pinggang kronik).
(A) Pewarnaan IHC (n = 3) dan (B) immunoblots (n = 6) menunjukkan ekspresi protein TXNDC5 telah dikawal selia dalam buah pinggang fibrotik tetikus yang disebabkan oleh UUO atau uIRI, berbanding dengan buah pinggang kontralateral (CL). Bar skala: 50 μm.
(C) RT-PCR kuantitatif menunjukkan transkrip Txndc5 dikawal selia dalam buah pinggang fibrotik tetikus yang disebabkan oleh UUO dan uIRI (n = 4-7).
(D) Analisis semula data microarray pada spesimen buah pinggang manusia daripada pesakit dengan CKD (GSE66494) menunjukkan bahawa TXNDC5, COL3A1, dan FN1 telah dikawal dengan ketara dalam tisu buah pinggang daripada pesakit CKD (kawalan sihat n = 8, CKD n = 51). Untuk A-C, data adalah wakil daripada 3 atau lebih replika eksperimen bebas.
Untuk semua panel, data dibentangkan sebagai min ± SEM. *P< 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p="">< 0.001="" by="" 2-sided="" t-test="" (a–c)="" or="" mann-whitney="" test="">
Keputusan
TXNDC5 dikawal dengan ketara dalam buah pinggang fibrotik manusia dan tetikus. Untuk menyiasat potensi penglibatan TXNDC5 dalam patogenesisfibrosis buah pinggang, kami mula-mula menentukan tahap ekspresi proteinnya dalam tisu buah pinggang tetikus fibrotik yang disebabkan oleh halangan ureteral unilateral (UUO), kecederaan iskemia-reperfusi unilateral (uIRI), atau oleh pentadbiran asid folik (FA). Kajian Immunohistokimia mendedahkan peningkatan ketara dalam keamatan pewarnaan TXNDC5 di bahagian buah pinggang dari semua 3 model tetikus tetikusBuah pinggangfibrosis(Rajah 1A dan Rajah Tambahan 1A; bahan tambahan yang tersedia dalam talian dengan artikel ini;https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Immunoblotting dan transkripsi terbalik kuantitatif PCR (RT-PCR) juga menunjukkan peningkatan ketara protein (Rajah 1B) dan transkrip (Rajah 1C dan Rajah Tambahan 1B) tahap ungkapanTXNDC5 dalam buah pinggang tetikus fibrotik. Selaras dengan keputusan ini, analisis semula data microarray yang diperolehi daripada spesimen biopsi buah pinggang pesakit dengan CKD(GSE66494)(18) menunjukkan bahawa tahap ekspresi TXNDC5 (sebanyak 2.24 lipatan, P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">fibrosis buah pinggangseperti COL3A1 dan FN, juga meningkat dengan ketara dalam sampel buah pinggang daripada pesakit dengan CKD berbanding dengan mereka dari kawalan yang sihat (Rajah 1D dan Rajah Tambahan 1C). Diambil bersama-sama, peningkatan yang diperhatikan ungkapan TXNDC5/Txndc5 dalam buah pinggang manusia/tetikus fibrotik dan korelasi positifnya dengan gen protein ECM fibrogenik mencadangkan potensi peranan TXNDC5 dalam patogenesisfibrosis buah pinggang.
Rajah 2. TXNDC5 sangat dikawal selia dalam fibroblas buah pinggang, tetapi tidak dalam TRC, sel endothelial, atau podocytes, buah pinggang fibrotik.
(A dan C) JIKA pewarnaan TXNDC5 (merah) pada bahagian buah pinggang fibrotik yang disebabkan oleh UUO dalam tikus Col1a1-GFPTg menunjukkan TXNDC5 terutamanya dinyatakan dalam fibroblas buah pinggang yang merembeskan kolagen (hijau), kedua-duanya dalam korteks buah pinggang dan medulla (n = 6). Nukleus sel diwarnai dengan DAPI (biru). Bar skala: 100 μm.
(B) JIKA pewarnaan TXNDC5 (hijau) pada bahagian buah pinggang fibrotik yang disebabkan oleh UUO dalam Cdh16-Cre, NPHS2-Cre, dan Tie2-Cre/ERT2 tdTomato tikus. Nukleus sel diwarnai dengan DAPI (biru). Bar skala: 100 μm.
(D) Carta pai untuk menggambarkan perkadaran sel TXNDC5+ dalam pelbagai jenis sel buah pinggang dalam buah pinggang fibrotik yang disebabkan oleh UUO.
Data adalah wakil daripada 3 atau lebih replika eksperimen bebas. Data dalam C dibentangkan sebagai min ± SEM.
TXNDC5 sangat diperkaya dalam fibroblas buah pinggang yang merembeskan kolagen di buah pinggang fibrotik. Pelbagai jenis sel buah pinggang telah terlibat dalam proses fibrogenesis buah pinggang. Berikutan kecederaan buah pinggang, fibroblas buah pinggang pemastautin (19) dan perivaskular (20) ditunjukkan untuk membezakan ke dalam myofibroblasts aktif dan mengakibatkan pengumpulan ECM. TIC dan sel endothelial juga dilaporkan menyumbang kepada pembangunanfibrosis buah pinggangmelalui peralihan epitel- dan endothelial-to-mesenchymal, masing-masing (10,21). Untuk menentukan jenis sel di mana TXNDC5 dinyatakan semasa proses buah pinggangfibrosis, berbilang garis tetikus wartawan yang membenarkan pelabelan pendarfluor fibroblas buah pinggang (Colla1-GFP', GFP didorong oleh penambah/promoter Collal, ref.22), TIC(Cdh16-Cre ROSA26-tdTomato), sel endothelial (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato), dan podocytes (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) tertakluk kepada rawatan UUO, uIRI, atau FA untuk mendorongfibrosis buah pinggang. Immunofluorescence (IF)mengotorkan bahagian buah pinggang dari haiwan ini mendedahkan bahawa TXNDC5 telah dikawal dengan ketara dan sangat colocalized dengan fibroblas buah pinggang buah pinggang yang dirembeskan oleh GFP-positif, kolagen dalam buah pinggang tetikus fibrotik yang disebabkan oleh UUO(81%)(Rajah 2, A dan C), uIRI (76.8%), dan rawatan FA (73.4%)(Rajah Tambahan2, A dan B). Dalam buah pinggang fibrotik yang disebabkan oleh UUO,TXNDC5 hanya dinyatakan secara sporadis dalam TRC (5.94%),podocytes(0.63%), dan sel endothelial (2.05%)(Rajah 2,B dan D). Analisis flowcytometry fibroblasts diasingkan dari buah pinggang tetikus yang tertakluk kepada UUO mendedahkan pengembangan yang ketara dalam fibroblas buah pinggang TXNDC5* serta peningkatan ketaraTXNDC5 dalam sel-sel ini, berbanding dengan mereka dari buah pinggang kawalan kontralateral (Rajah Tambahan 2C). Pengayaan kuat TXNDC5 yang diperhatikan dalam fibroblas buah pinggang dalam fibrotik menunjukkan bahawa TXNDC5 boleh menyumbang kepadafibrosis buah pinggangdengan mengawal selia aktiviti/kelakuan sel-sel fibrogenik yang merembeskan kolagen ini.
TXNDC5 adalah penting dan mencukupi untuk mendorong pengaktifan, percambahan, dan pengeluaran ECM fibroblas buah pinggang. Seterusnya, kami menentukan peranan fungsi TXNDC5 dalam fibroblas buah pinggang. Fibroblas buah pinggang manusia primer (HKF)dirangsang dengan TGF-β1(10 ng/mL) menunjukkan peningkatan yang kuat dalam protein (Rajah 3A) dan transkrip (Rajah 3B) tahap ekspresi TXNDC5, serta penanda pengaktifan fibroblast periostin dan protein ECM (COL1Al, fibronectin, dan CCN2). Knockdown TXNDC5 dengan shRNA dengan ketara mengurangkan protein/mRNA yang disebabkan oleh TGF-β1 protein/mRNA periostin dan pelbagai protein ECM dalam HKFs (Rajah 3, A dan B). Di samping itu, rawatan TGF1 meningkatkan aktiviti proliferatif HKF, yang telah dibatalkan sepenuhnya oleh TXNDC5 knockdown (Rajah 3D). Keputusan ini menunjukkan bahawa TXNDC5 adalah penting untuk pengaktifan, percambahan, dan pengeluaran HKM yang disebabkan oleh TGF-β1. Overexpression TXNDC5, sebaliknya, mengakibatkan peningkatan ketara periostin, COL1A1, dan fibronectin (Rajah 3C), serta peningkatan aktiviti proliferatif (Rajah 3E) dalam HKFs. Secara kolektif, keputusan ini menunjukkan bahawa TXNDC5, hiliran TGF-β1, adalah penting dan mencukupi untuk menggalakkan pengaktifan, percambahan, dan pengeluaran ECM fibroblas buah pinggang.
Rajah 3. Kejatuhan TXNDC5 melemahkan pengaktifan HKF yang disebabkan oleh TGF-β1 dan pengeluaran ECM; overexpression TXNDC5 adalah mencukupi untuk mencetuskan pengaktifan HKF dan pengeluaran ECM.
(A) Protein dan (B) tahap ekspresi transkrip penanda pengaktifan fibroblast (periostin) dan protein ECM (COL1A1, fibronectin, dan CCN2) telah meningkat dalam kawalan (Scramble) HKF berikutan rawatan TGF-β1 (10 ng/mL). Kejatuhan TXNDC5 melemahkan peraturan penanda fibrogenik ini yang disebabkan oleh TGF-β1 dalam HKF (n = 5-10).
(C) Overexpression TXNDC5 adalah mencukupi untuk mendorong peningkatan penanda pengaktifan fibroblas (Periostin) dan protein ECM (COL1A1, fibronectin) dalam HKF (n = 3-10).
(D) Rawatan TGF-β1 (10 ng/ mL) meningkatkan aktiviti percambahan selular HKF, yang telah dibatalkan oleh TXNDC5 knockdown.
(E) Overexpression TXNDC5 meningkatkan aktiviti percambahan selular HKF. Dalam D dan E, n = 10. Data adalah wakil daripada 3 atau lebih replika eksperimen bebas.
Untuk semua panel, data dibentangkan sebagai min ± SEM. Kepentingan statistik perbezaan untuk 2 kumpulan ditentukan oleh ujian t 2 sisi dan di antara 3 atau lebih kumpulan ia ditentukan menggunakan ANOVA 1 hala, diikuti oleh ujian pasca hoc Sidak. *P< 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>
Penghapusan global Txndc5 dilindungi daripada buah pinggang b. Untuk menentukan keperluan TXNDC5 dalam pembangunanfibrosis buah pinggangin vivo, WT dan Tndc5-/mice tertakluk kepada rawatan UUO, uIRI, dan FA. Picrosirius merah dan Masson's trichrome mengotorkan pada bahagian buah pinggang menunjukkan luasBuah pinggangfibrosisdalam tikus WT mengikuti UUO(Rajah 4A),uIRI (Rajah 5A), dan pentadbiran FA (Rajah Tambahan 3A). Penghapusan global Txndc5 dengan ketara mengurangkan tahapBuah pinggangfibrosisdalam semua 3 model kecederaan buah pinggang (Rajah 4A, Rajah 5A, dan Rajah Tambahan 3A).
Rajah 4. Penghapusan fibrosis buah pinggang Txndc5 yang dikurangkan disebabkan oleh UUO.
(A) Pewarnaan merah Picrosirius (2 panel teratas) dan pewarnaan trikrom Masson (2 panel bawah) bahagian buah pinggang dari WT dan Txndc5-7mice 10 hari selepas UUO. Graf bar hasil kuantitatif kawasan pewarnaan trikrom Picrosirius merah dan Masson ditunjukkan di sebelah kanan (n = 5-10). Skala bar∶ 100 μm.
(B) Imej SHG bahagian buah pinggang dari WT dan Txndc5-/mice 10 hari selepas UUO. Keputusan kuantitatif kawasan positif SHG menunjukkan peningkatan pengumpulan kolagen fibrillar (hijau) dalam WT tetapi tidak dalam buah pinggang Txndc5mice berikutan kecederaan.
Bagi setiap bahagian buah pinggang yang diimejkan untuk SHG, pengimejan TPEF diperolehi untuk menunjukkan profil tisu yang diimbas (warna merah dalam panel bawah)(n= 3). Bar skala: 50 um. (C) Immunoblots menunjukkan tahap ekspresi protein penanda pengaktifan fibroblast (Periostin)dan ECM(COL1A1) dalam ekstrak keseluruhan buah pinggang dari WT dan Txndc5-/mice 10 hari selepas UUO (n= 3-6). Data adalah wakil 3atau lebih bebas replika eksperimen.
Untuk semua panel, data dibentangkan sebagai min± SEM. Kepentingan statistik perbezaan antara 3 atau lebih kumpulan ditentukan menggunakan ANOVA 1 hala, diikuti dengan ujian pasca hoc Sidak.**P<><>
Untuk mengukur kolagen fibrillar patogen (jenis I dan II) secara khusus dan untuk mengelakkan terlalu banyak kawasan fibrotik dengan kaedah pewarnaan tradisional, mikroskopi generasi harmonik kedua (SHG), sistem pengimejan tisu optik baru yang membolehkan visualisasi fibrillar, tetapi bukan bukan fibrillar, kolagen dalam organ fibrotik (23,24), telah digunakan untuk menilai sejauh manafibrosisdalam WT dan Tndc5+tetikus buah pinggang berikutan kecederaan. Selaras dengan keputusan yang disebutkan di atas, mikroskopi SHG menunjukkan peningkatan ketara dalam pemendapan kolagen fibrillar dalam WTkidneys berikutan UUO(Rajah 4B),uIRI (Rajah 5B), dan rawatan FA (Rajah Tambahan 3B), sejauh mana ia telah dikurangkan dengan ketara dalam Txndc5-/ tikus (Rajah 4B, Rajah 5B, dan Rajah Tambahan 3B).
Selaras dengan tindak balas fibrotik postinjury yang lemah dalam buah pinggang Txndc5mouse yang diperhatikan oleh kajian pengimejan, penghapusan Tendc5 juga mengurangkan peningkatan gen protein ECM, termasuk Collar, Eln, Fnl, dan Ccn2 dalam buah pinggang tetikus berikutan kecederaan (Rajah Tambahan 3, C-E). Immunoblots lysates tisu keseluruhan buah pinggang juga menunjukkan penurunan tahap protein ECM(COLIA1)dan penanda pengaktifan fibroblast (periostin)dalam Txndc5-/mice berbanding dengan tikus WT berikutan UUO dan uIRI (Rajah 4C dan Rajah 5C).
Rajah 5. Penghapusan fibrosis buah pinggang Txndc5 ameliorated yang disebabkan oleh ulRI.
(A) Pewarnaan merah Picrosirius (2 panel teratas) dan pewarnaan trikrom Masson (2 panel bawah) bahagian buah pinggang dari WT dan Txndc5-7mice 28 hari selepas ulRI.Bar graf hasil kuantitatif kawasan pewarnaan trikrom Picrosirius merah dan Masson ditunjukkan di sebelah kanan (n = 6). Skala bar∶ 100 μm.
(B) Imej SHG bahagian buah pinggang dari WT dan Txndc5-mice 28 hari selepas ulRI. Keputusan kuantitatif kawasan positif SHG menunjukkan peningkatan pengumpulan kolagen fibrillar (hijau) dalam WT tetapi tidak dalam buah pinggang Txndc5mice berikutan kecederaan. Bagi setiap bahagian buah pinggang yang diimejkan untuk SHG, pengimejan TPEF diperolehi untuk menunjukkan profil tisu yang diimbas (warna merah dalam panel bawah)(n=3). Skala bar∶50 μm.
(C) Immunoblots menunjukkan tahap ekspresi protein penanda pengaktifan fibroblas (Periostin) dan ECM(COL1A1) dalam ekstrak keseluruhan buah pinggang dari WT dan Txndc5/mice 28 hari selepas ulRI (n=5-9). Data adalah wakil daripada 3 atau lebih replika eksperimen bebas.
Untuk semua panel, data dibentangkan sebagai min ± SEM. Kepentingan statistik perbezaan antara 3atau lebih banyak kumpulan ditentukan menggunakan ANOVA sehala, diikuti dengan ujian pasca hoc Sidak.*P<><><>
Untuk mengecualikan kemungkinan TXNDC5 dinyatakan dalam jenis sel buah pinggang lain seperti TRC, podocytes dan sel endothelial mungkin masih menyumbang kepada perkembanganBuah pinggangfibrosis, kami menjana tetikus kalah mati bersyarat Txndc5 khusus untuk TEC (Cdh16-cre*Txcndc5i, atau Txndc5Epeko), podocytes (NPHS2-cre*Txndc5/n, atau Tendc5Podxko), dan sel endothelial(Tie2-cre/ERT2*Tendc5/, atau Txndc5Endo.eko). Dalam eksperimen menggunakan tikus Txndc5Pieko dan Txndc5 Poio-cko, Txndc5Wmicewereused sebagai kawalan; dalam eksperimen pada tikus Txndc5EMio-eko, penghapusan Txndc5 disebabkan menggunakan tamoxifen seperti yang diterangkan dalam Rajah 9A, di mana tikus Tie2-Cre/Cre/ERT2 yang dirawat tamoxifen digunakan sebagai kawalan. Penghapusan Txndc5 yang disasarkan dalam TRC, podocytes, atau sel endothelial, bagaimanapun, tidak memberi kesan kepada tahapfibrosis buah pinggangyang disebabkan oleh UUO atau FA (Rajah Tambahan 6, B-E). Keputusan ini menunjukkan bahawa TXNDC5 dinyatakan dalam TRC, podocytes, dan sel endothelial menyumbang sedikit, jika ada, kepada patogenesisBuah pinggangfibrosis.
Penghapusan Txndc5 dalam fibroblas buah pinggang melindungi daripada apoptosis TEC sebagai tindak balas kepada kecederaan buah pinggang. Dalam prosesBuah pinggangfibrosis, TIC yang cedera kehilangan fungsi mitokondria dan polariti apicobasal, diikuti oleh apoptosis dan kematian sel (30). Untuk menyiasat jika penghapusan Txndc5 memberi kesan kepada apoptosis TPC sebagai tindak balas kepada kecederaan, kami menjalankan pewarnaan TUNEL pada bahagian buah pinggang WT dan Txndc5-tetikus 10 hari selepas UUO. Bilangan TEC apoptotik meningkat dengan ketara dalam buah pinggang fibrotik yang disebabkan oleh UUO tikus WT, manakala penghapusan Txndc5 melemahkan tahap TECapoptosis. Telah dilaporkan bahawa fibroblas buah pinggang yang diaktifkan boleh menyebabkan apoptosis TEC melalui kesan paracrine (31). Oleh kerana Tendc5 hampir tidak dinyatakan dalam TRC, kemungkinan apoptosis TEC yang dikurangkan yang diperhatikan dalam Txndc5-7mice berikutan UUO bukanlah kesan autonomi sel tetapi lebih menengah untuk mengurangkan interstisialfibrosisdan oleh itu beberapa isyarat proapoptotik dari fibroblas buah pinggang di sekeliling. Selaras dengan hipotesis ini, penghapusan khusus fibroblast Txndc5 (Tendc5kO) mengurangkan apoptosis TEC setakat yang serupa dengan yang diperhatikan dalam Txndc5-/mice 10 hari selepas UUO (Supplemental). Berbeza dengan pengurangan yang diperhatikan dalam TECapoptosis, bilangan makrofaj positifF4/80 dan sel endothelial positif CD31 adalah setanding dengan buah pinggang WT dan Txndc5-tetikus, dengan atau tanpa UUO, menunjukkan bahawa penghapusan Txndc5 tidak memberi kesan penyusupan makrophage atau ketumpatan kapilari peritubular dalam buah pinggang tetikus. Diambil bersama-sama, data ini menunjukkan bahawa kesan perlindungan reno dari penghapusan Txndc5 hasil daripada pengurangan interstisial tiubfibrosisdan apoptosis TEC, tanpa menjejaskan ketumpatan kapilari buah pinggang atau makrofaj.
Penghapusan yang disebabkan oleh Tendc5 dalam fibroblas buah pinggang mengurangkan perkembangan yang ditubuhkanfibrosis buah pinggang. Untuk menentukan sama ada penyasaran Txndc5 dalam buah pinggang boleh memberi manfaat dalam ditubuhkanBuah pinggangfibrosis, Penghapusan Txndc5 dalam fibroblas buah pinggang disebabkan oleh tikus Txndc5eko 10 hari selepas UUO, titik masa apabila luasBuah pinggangfibrosisboleh diperhatikan. Dalam eksperimen ini, tikus Colla2-Cre yang dirawat tamoxifen digunakan sebagai kawalan. Seperti yang ditunjukkan, tikus Colla2-Cre dan Tcndc5eko mempunyai tahap yang samaBuah pinggangfibrosis10 hari selepas UUO sebelum rawatan tamoxifen. Sebelas hari selepas suntikan tamoxifen, bagaimanapun, tahap fibrosis buah pinggang terus berkembang dalam tikus kawalan (kawasan fibrotik meningkat daripada 5.1%kepada 10.6%), manakala perkembanganBuah pinggangfibrosishampir dihentikan (kawasan fibrotik berubah daripada 5.3% kepada 6.9%) pada tikus Txndc5eko. Immunoblotting juga menunjukkan peningkatan ketara CCN2, periostin, dan TGFBR1 dalam tikus Txndc5eko berbanding dengan tikus kawalan antara D10 dan D21 selepas UUO. Keputusan ini menunjukkan bahawa penghapusan intervensi Txndc5 dalam fibroblas buah pinggang dengan ketara mengurangkan perkembanganfibrosis buah pinggang, mencadangkan bahawa dalam vivo penyasaran TXNDC5 boleh menjadi pendekatan terapeutik yang baru dan kuat untuk ameliorateBuah pinggangfibrosisdan untuk melambatkan perkembangan CKD.