Meneroka Kesan Terapeutik Dan Mekanisme Rebusan Yishen Tonglong Pada Hiperplasia Prostatik Benigna pada Tikus Melalui Laluan Isyarat IL-6/STAT3

 

Abstrak

Objektif:Untuk menyiasat, melalui laluan isyarat interleukin (IL)-6/transduser isyarat dan pengaktif transkripsi (STAT)3, kesan dan mekanisme pemulihan Yiqi Wenshen Tonglong Decoction (disingkatkan di sini sebagai Yishen Tonglong Decoction) ke atas hiperplasia prostat jinak (BPH) pada tikus.

Kaedah:Tikus jantan Sprague-Dawley (SD) dikebiri dan kemudian disuntik secara subkutan dengan propionat testosteron untuk membentuk model BPH. Tikus telah diperuntukkan secara rawak kepada kumpulan berikut (n=12/kumpulan): model; Yishen Tonglong Decoction kumpulan dos rendah dan tinggi (15 dan 30 g/kg); Kumpulan pengaktif STAT3 (Colivelin, 1 mg/kg); dan gabungan kumpulan Yishen Tonglong Decoction (30 g/kg) + Colivelin (1 mg/kg) dos tinggi. Tambahan 12 tikus SD jantan berkhidmat sebagai kumpulan yang dikendalikan secara palsu. Selepas rawatan khusus kumpulan dengan Yishen Tonglong Decoction dan/atau Colivelin, kami menilai nisbah indeks prostat (PI) dan estradiol (E2)/testosteron (T); histomorfologi prostat dinilai dan fibrosis dengan hematoxylin–eosin (HE) dan pewarnaan trichrome Masson; diukur ekspresi Ki-67 oleh imunohistokimia; tahap IL-6 dan IL-1 dikira dalam tisu prostat dan serum oleh ELISA; dan mengesan protein berkaitan laluan kolagen I/III dan IL-6/STAT3 oleh Western blotting.

Keputusan:Berbanding dengan sham, kumpulan model menunjukkan hiperplasia prostat dan fibrosis yang ketara, dengan peningkatan ketara dalam PI, ketumpatan optik Ki-67, tisu/serum IL-6 dan IL-1 , kolagen I/III, IL-6 protein, dan p-STAT3/STAT3, di samping penurunan ketara dalam E2/T (semua P < 0.). Berbanding kumpulan model, kedua-dua dos rendah dan tinggi Yishen Tonglong Decoction mengurangkan hiperplasia dan fibrosis, mengurangkan PI, Ki-67, IL-6, IL-1 , kolagen I/III, IL-6 protein, dan p-STAT3/STAT3, dan meningkatkan E2/T (semua P < 0.05). Rebusan berdos tinggi memberikan peningkatan yang lebih besar daripada dos rendah (P <0.05). Colivelin sahaja memburukkan lagi hiperplasia dan fibrosis dan seterusnya meningkatkan PI, Ki-67, IL-6, IL-1 , kolagen I/III, IL-6, dan p-STAT3/STAT3 sambil mengurangkan E2/T (P <0.05). Pentadbiran bersama Colivelin melemahkan faedah merebus dos tinggi, dengan ketara memburukkan semua indeks di atas berbanding dengan merebus dos tinggi sahaja (P <0.05).

Kesimpulan:Yishen Tonglong Decoction mengurangkan keradangan dan memperbaiki patologi BPH pada tikus, sekurang-kurangnya sebahagiannya dengan menyekat pengaktifan laluan isyarat IL-6/STAT3.

Kata kunci:IL-6/STAT3 isyarat; Air Rebusan Yishen Tonglong; hiperplasia prostat jinak; herba untuk menyembuhkan masalah prostatitis

 

Suplemen Herba Cistanche

 

 

 

Butiran lanjut herba tcm baru untuk kesihatan prostat

 

 

 

pengenalan

Hiperplasia prostatik benigna (BPH) ialah keadaan saluran kencing bawah obstruktif biasa di kalangan lelaki pertengahan umur dan lebih tua, yang dicirikan oleh proliferasi epitelium dan stromal dan pembesaran prostat, yang membawa kepada keragu-raguan, kekerapan dan kecemasan kencing yang menjejaskan kualiti hidup dengan ketara [1,2]. Keradangan adalah pemacu utama patogenesis BPH; ia menggalakkan percambahan otot licin epitelium dan stromal dan pembentukan semula fibrotik. Oleh itu, strategi anti-infektif dan anti-radang adalah berkesan untuk pencegahan dan pengurusan BPH [3,4].

IL-6 ialah sitokin proinflamasi pleiotropik yang dinyatakan secara meluas dalam sel tisu. Ia mengaktifkan STAT3 untuk mencetuskan program keradangan [5]. Menghalang pengaktifan IL-6/STAT3 mengurangkan mediator proinflamasi hiliran, mengganggu lata keradangan, mengurangkan penyusupan imun dan fibrosis yang berkaitan dengan hipertrofi, dan akhirnya melambatkan perkembangan BPH [6,7]. Oleh itu, IL-6/STAT3 ialah sasaran terapeutik yang rasional dalam BPH.

Yishen Tonglong Decoction ialah formula herba Cina klasik dengan fungsi tradisional menyuburkan Yin dan menyokong Yang, menguatkan Qi dan Buah Pinggang, dan menggalakkan peredaran darah dengan melegakan kelembapan. Secara klinikal, ia digunakan untuk disuria akibat haba lembap dan stasis darah dengan kekurangan Qi Buah Pinggang, dan ia telah dilaporkan melemahkan keradangan prostat dan perubahan hiperplastik dalam BPH [8]. Di luar BPH, ia menghalang percambahan sel kanser prostat manusia, menggalakkan apoptosis, dan menyekat pencerobohan dan penghijrahan [9]. Farmakologi rangkaian dan dok molekul mencadangkan sasaran utama yang berkaitan dengan modulasi penyakit prostat termasuk AKT1, IL-6 dan VEGFA, antara lain [10]. Berdasarkan rasional teori dan bukti terdahulu ini, kami membuat hipotesis bahawa Yishen Tonglong Decoction meningkatkan BPH melalui penindasan isyarat IL-6/STAT3. Kami menguji hipotesis ini dalam model BPH tikus.

Bahan dan Kaedah

Haiwan

Tikus SD jantan, gred SPF, 200–230 g, berumur 6–7 minggu, diperoleh daripada Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd. (SCXK [Yue] 2022-0060). Tikus ditempatkan di Kurang daripada atau sama dengan 4 setiap sangkar di bawah 12 jam kitaran terang/gelap, kelembapan 50–60%, dan 23–25 darjah .

 

Reagen dan Instrumen

 

Herba mentah Yishen Tonglong Decoction: Anemarrhena asphodeloides (Zhi Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), akar yang disediakan Rehmannia glutinosa (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Zhu Yu), Dioscorea opposita (F Shan cocosonia), Dioscorea opposita (Shan cocosonia), Dioscorea opposita (Shan cocosonia). kulit kayu (Mu Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli diproses akar lateral (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), biji Prunus persica (Tao Ren), benih Vaccaria segetalis (Wang Bu Liu Xing-Ziqua plane) Bersumber dari Beijing Tongrentang (Anguo) Chinese Herbal Slices Co., Ltd.

Colivelin (HY-P1061), MCE (AS).

Testosteron propionat (ketulenan 98%, T7260); Kit ELISA untuk tikus IL‑1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.

Kit pewarnaan HE (ab245880), anti-p‑STAT3 (ab76315), kit Masson (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-kolagen I (ab270993), anti-Ki‑67 (ab16667), anti-Ki‑67 (ab16667) anti-IL‑6 (ab259341), keldai HRP anti-arnab menengah (ab205722), tikus IL‑6 ELISA (ab234570), Abcam (AS).

Anti-aktin (AF5003), Beyotime (Shanghai).

Mikrotom parafin HS‑2205 (Olabao, Jinan), mikroskop KP‑PH100S (Shenzhen KEPUS), pembaca plat mikro UMR‑9600 (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 dan bekalan kuasa PROTEAN (Bio‑Rad, USA).

Model dan Pengelompokan BPH

Tikus telah dibius dengan natrium pentobarbital (45 mg/kg, 3% w/v, intraperitoneal), testis dieksterior dan dikeluarkan melalui pembedahan. Selepas 3 hari pemulihan, tikus menerima suntikan subkutaneus harian testosteron propionat (5 mg/kg dalam minyak zaitun) selama 21 hari. Pembesaran kasar dan hiperplasia histopatologi mengesahkan kejayaan pemodelan BPH [11]. Tikus Sham menjalani hirisan skrotum tanpa orkidktomi dan menerima minyak zaitun kenderaan.

 

Penyediaan dan Pentadbiran

Satu preskripsi Rebusan Yishen Tonglong mengandungi: Zhi Mu, Huang Bai, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Wang Bu Liu Xing, Ze Xie (setiap 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (setiap 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (setiap 10 g). Herba direbus dua kali dengan air, turasan digabungkan dan pekat kepada 1.5 atau 3.0 g/mL. Colivelin telah dibubarkan dalam garam kepada 0.1 mg/mL.

Kumpulan merebus dos rendah dan tinggi: gavage 15 atau 30 g/kg (10 mL/kg pada 1.5 atau 3.0 g/mL), ditambah garam intraperitoneal (10 mL/kg).

Kumpulan Colivelin: garam gavage (10 mL/kg) ditambah Colivelin intraperitoneal 1 mg/kg (10 mL/kg 0.1 mg/mL).

Dos tinggi + kumpulan Colivelin: gavage 30 g/kg rebusan ditambah Colivelin 1 mg/kg ip

Sham dan kumpulan model: garam gavage dan garam ip (10 mL/kg).
Semua rawatan adalah sekali sehari selama 21 hari.

 

Indeks Prostat dan E2/T; Koleksi Contoh

Dua puluh empat jam selepas rawatan terakhir, tikus telah dibius (seperti di atas). Jisim badan dan berat basah prostat direkodkan untuk mengira PI=berat basah prostat/jisim badan. Darah aorta abdomen dikumpul, disentrifugasi (2000 rpm, 15 min) untuk mendapatkan serum. E2 dan T diukur dengan ELISA dan E2/T dikira; baki serum disimpan pada suhu -80 darjah . Kira-kira 0.7 g tisu prostat dibekukan dalam nitrogen cecair untuk ujian protein; selebihnya telah ditetapkan, dehidrasi, tertanam parafin, dan dipotong pada ~ 5 μm.

HE dan Pewarnaan Masson

Penyahparafinan dalam xilena dan etanol gred (100%, 90%, 80%, 75%) diikuti oleh penghidratan. Bahagian telah diwarnai dengan kit HE dan Masson mengikut arahan pengilang (3 slaid setiap satu), kemudian dibasuh, dehidrasi, dibersihkan dan dipasang untuk mikroskop.

 

Imunohistokimia untuk Percambahan Sel

Selepas deparafinisasi/penghidratan, bahagian dirawat dengan 3% H2O2, disekat dengan serum kambing, dan diinkubasi semalaman dengan anti-Ki-67 (1:150). Pengesanan menggunakan kit SP dengan kromogen DAB. Imej telah diperoleh dan ketumpatan optik Ki‑67 dikira oleh ImageJ.

 

ELISA untuk IL‑6 dan IL‑1 dalam Prostat dan Serum

Tisu prostat beku dicincang, dihomogenkan dalam penimbal RIPA, dan disentrifugasi (3000 rpm, 20 min) untuk mendapatkan jumlah lisat protein. Kepekatan protein ditentukan oleh BCA. Aliquots (0.2 mL) lisat tisu dan serum yang dicairkan telah dianalisis untuk IL-6 dan IL-1 oleh ELISA.

Western Blot untuk Protein Laluan Kolagen I/III dan IL‑6/STAT3
Sampel denaturasi (100 darjah ) dipisahkan oleh SDS-PAGE dan dipindahkan ke nitroselulosa. Membran dipecah mengikut berat molekul untuk kolagen I, kolagen III, ‑aktin, IL‑6, STAT3 dan p‑STAT3. Selepas penyekatan 3% BSA, antibodi primer digunakan, diikuti oleh antibodi sekunder terkonjugasi HRP. Band telah divisualisasikan oleh chemiluminescence dan dikira dengan ImageJ.

 

Perangkaan

Data dianalisis menggunakan SPSS 26.0 dengan ujian post hoc ANOVA dan SNK‑q sehala.

 

Keputusan

 

Kejayaan pemodelan BPH: Berbanding dengan palsu, kumpulan model menunjukkan peningkatan yang jelas dalam saiz prostat dan hiperplasia histologi dan fibrosis. Ketumpatan optik PI, Ki‑67, prostat/serum IL‑6 dan IL‑1 , kolagen I/III, IL‑6, dan p‑STAT3/STAT3 semuanya meningkat dengan ketara, manakala E2/T dikurangkan (P <0.05).

Kesan terapeutik Rebusan Yishen Tonglong: Kedua-dua dos 15 dan 30 g/kg mengurangkan pembesaran prostat dan fibrosis. Rawatan ini menurunkan PI, Ki‑67, IL‑6, IL‑1 dengan ketara, kolagen I/III, IL‑6 protein dan p‑STAT3/STAT3, dan meningkatkan E2/T (P <0.05). Dos yang tinggi menghasilkan kesan yang lebih baik berbanding dos yang rendah (P <0.05).

Kesan pengaktifan STAT3: Colivelin memburukkan lagi hiperplasia prostat dan fibrosis dan meningkatkan lagi penanda keradangan dan fibrotik sambil mengurangkan E2/T berbanding model (P <0.05).

Antagonisme oleh Colivelin: Rawatan bersama dengan Colivelin melemahkan faedah merebus dos tinggi, meningkatkan indeks keradangan/fibrotik dan mengurangkan E2/T berbanding dengan merebus dos tinggi sahaja (P <0.05).

 

Perbincangan

Rasional mekanistik: Paksi IL‑6/STAT3 ialah laluan keradangan pusat yang terlibat dalam pembentukan semula tisu prostat. Pengikatan IL‑6 mengaktifkan isyarat JAK/STAT3, memacu transkripsi gen proinflamasi dan profibrotik, memupuk percambahan epitelium/stromal, penyusupan sel imun dan pemendapan matriks ekstraselular. Penemuan kami-penambahbaikan dengan formula herba dan kemerosotan dengan pengaktif STAT3-menyokong pautan mekanistik kausal di mana Yishen Tonglong Decoction mengurangkan BPH dengan melembapkan pengaktifan IL‑6/STAT3.

 

Perspektif formula herba (herba untuk menyembuhkan masalah prostatitis): Herba komponen menyediakan tindakan pelengkap yang berkaitan dengan BPH dan keradangan seperti prostatitis:

Pembersihan haba lembap dan anti-radang: Zhi Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (kulit Paeonia), Ze Xie (Alisma).

Tonifikasi Qi/Buah pinggang dan modulasi endokrin: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Cornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).

Pengaktifan darah dan potensi antifibrotik: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (Inti pic), Wang Bu Liu Xing (Vaccaria).

Memanaskan Yang dan meningkatkan peredaran mikro: Rou Gui (Cinnamon), Fu Zi (Aconite, diproses).

Sokongan tendon/tulang dan peredaran pelvis: Niu Xi (Achyranthes).

Sinergi ini secara kolektif boleh mengurangkan sitokin radang (IL-6, IL-1), percambahan (Ki-67), dan fibrosis (kolagen I/III), selaras dengan penindasan isyarat IL-6/STAT3 yang diperhatikan dalam tompok Barat. Peningkatan E2/T mencadangkan pengimbangan semula separa persekitaran steroid seks, yang mungkin juga mempengaruhi dinamik pertumbuhan prostat.

Terjemahan dan pengehadan klinikal: Walaupun data praklinikal ini menjanjikan untuk BPH dan berpotensi untuk keradangan seperti prostatitis, ekstrapolasi kepada manusia memerlukan berhati-hati. Penukaran dos, kawalan kualiti penyediaan pelbagai herba, dan interaksi herba-ubat memerlukan kajian lanjut. Walau bagaimanapun, bukti berpusatkan laluan (manfaat dengan merebus, bahaya dengan pengaktifan STAT3, dan bacaan laluan) mengukuhkan asas teori untuk penerokaan klinikal pendekatan berasaskan herba ini untuk menyembuhkan masalah prostatitis dan BPH.

 

Kesimpulan

Yishen Tonglong Decoction mengurangkan hiperplasia prostat dan fibrosis dalam tikus BPH dengan menghalang pengaktifan IL‑6/STAT3 dan mengurangkan isyarat radang dan profibrotik, dengan keberkesanan bergantung kepada dos. Penemuan ini memberikan sokongan mekanistik untuk penggunaan tradisionalnya dan rasional berasaskan laluan moden untuk pembangunan selanjutnya sebagai terapi berasaskan herba untuk BPH dan keadaan berkaitan prostatitis.

 

Rujukan

[1–13] Seperti yang dipetik dalam teks asal.