Pengoptimuman Dan Kesan Penambahbaikan Tidur Ekstrak Minuman Congrong–Zaoren–Wumei dalam Tikus
Jan 30, 2026
2 Keputusan dan Analisis
2.1 Pengoptimuman Proses Penyediaan untuk Ekstrak Minuman Congrong–Zaoren–Wumei
Daripada Rajah 1, kaedah HPLC yang telah ditetapkan mencapai pemisahan berkesan antara puncak kromatografi empat sebatian rujukan-asid sitrik, echinacoside, verbascoside, dan spinosin-dan puncak bersebelahan. Masa pengekalan masing-masing ialah tR1=9.0 min, tR2=21.6 min, tR3=24.3 min dan tR4=25.9 min. Regresi linear kawasan puncak berbanding kepekatan analit menghasilkan julat linear 12.12–2016, 0.14–110, 0.18–112.50, dan 2.44–18.30 µg·mL–1, dengan nilai R2 0.1, .indicating, dan cemerlang 0.9998, dan Di bawah keadaan ini, had pengesanan (LOD) untuk asid sitrik, echinacoside, verbascoside dan spinosin ialah 3.636, 0.045144, 0.058, dan 0.7564 µg·mL–1, dan had kuantifikasi (LOQ) ialah 12.12, 0.14, dan 0.14. µg·mL–1, masing-masing. Ujian ketepatan menunjukkan RSD sebanyak 0.10%, 0.07%, 0.06%, dan 0.33% untuk empat analit, menunjukkan ketepatan instrumen yang baik. Kestabilan sepanjang 0–12 jam adalah baik, dengan RSD 0.78%, 0.16%, 0.20% dan 1.46%. Ujian kebolehulangan menghasilkan RSD sebanyak 0.51%, 0.42%, 0.37%, dan 0.38% untuk analit, menunjukkan kebolehulangan yang baik. Ujian pemulihan pancang menunjukkan purata pemulihan sebanyak 97.42%, 103.32%, 98.90% dan 99.71%, dengan RSD masing-masing sebanyak 0.70%, 0.52%, 1.05% dan 0.63%. Oleh itu, kaedah HPLC yang ditubuhkan untuk penentuan serentak empat komponen utama ini adalah tepat dan boleh dipercayai, sesuai untuk ujian pengoptimuman proses seterusnya.
Rajah.1 Kromatogram HPLC rujukan dan penyelesaian pada panjang gelombang 210 nm (A) dan panjang gelombang 330 nm (B dan C)
Dalam penilaian metodologi polisakarida mentah, LOD ialah 0.098 µg·mL–1. Nilai OD bagi kawalan kosong dan kosong pelarut pada 485 nm tidak menunjukkan perubahan yang jelas, menunjukkan kekhususan yang baik. Regresi linear OD berbanding kepekatan menghasilkan R2=0.9997, menunjukkan kelinearan yang sangat baik. RSD untuk enam pengukuran berturut-turut ialah 0.47%, menunjukkan ketepatan yang baik. RSD untuk kandungan polisakarida dalam masa 12 jam ialah 0.44%, menunjukkan kestabilan yang baik. RSD merentas enam sampel yang disediakan secara bebas ialah 2.51%, menunjukkan kebolehulangan yang baik. Oleh itu, kaedah ini sesuai untuk mengukur polisakarida mentah semasa pengoptimuman proses.
Faedah Cistanche Roucongrong dalam Buku Kuno
Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-Untuk butiran lanjut tentang kerjasama
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
2.1.2 Keputusan Penyiasatan Faktor Tunggal
Menggunakan kaedah HPLC yang ditetapkan digabungkan dengan ujian polisakarida, dan mengambil kandungan asid sitrik, echinakosida, verbascoside, spinosin, dan polisakarida dalam ekstrak sebagai indeks penilaian, penyiasatan faktor tunggal telah dijalankan pada suhu pengekstrakan, nisbah pepejal-cecair, dan masa pengekstrakan untuk menyokong reka bentuk ortogon.
Pada suhu pengekstrakan 60, 80, dan 100 darjah, kandungan asid sitrik, echinacoside, verbascoside, spinosin, dan polisakarida mentah dalam ekstrak meningkat dengan suhu.
Pada nisbah pepejal-cecair 1:3, 1:5, 1:7, 1:10, dan 1:12 (g·mL–1), kandungan asid sitrik, spinosin dan polisakarida mentah meningkat dengan nisbah yang lebih tinggi; echinacoside dan verbascoside memuncak pada 1:10 (g·mL–1) dan menurun pada 1:12 (g·mL–1). Walau bagaimanapun, jumlah kandungan semua komponen penanda meningkat dengan nisbah pepejal-cecair.
Pada masa pengekstrakan 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, dan 3.0 h, kandungan analit individu berbeza-beza, tetapi jumlah kandungan komponen penanda meningkat mengikut masa.
Data terperinci disediakan dalam Bahan Tambahan. Memandangkan kepraktisan industri (mengelakkan pengekstrakan yang terlalu lama), faktor dan tahap untuk reka bentuk ortogon telah ditetapkan seperti dalam Jadual 2, dan skema ortogon ditunjukkan dalam Jadual 3.
Jadual 2. Tahap faktor reka bentuk eksperimen ortogon bagi kaedah pengekstrakan Minuman Congrong–Zaoren–Wumei
Faktor:
A: Suhu pengekstrakan (darjah)
B: Nisbah pepejal-cecair (g mL–1)
C: Masa pengekstrakan (h)
| Tahap | A: Suhu (darjah) | B: Nisbah (g mL–1) | C: Masa (h) |
|---|---|---|---|
| 1 | 60 | 1:7 | 1.0 |
| 2 | 80 | 1:10 | 1.5 |
| 3 | 100 | 1:12 | 2.0 |
2.1.3 Keputusan Reka Bentuk Ortogon
Pengekstrakan dilakukan mengikut tatasusunan ortogon. Kandungan asid sitrik, echinacoside, verbascoside, spinosin, dan polisakarida mentah ditunjukkan dalam Jadual 3. Berdasarkan analisis julat (R), susunan pengaruh faktor ke atas jumlah kandungan penanda ialah A > B > C, iaitu suhu pengekstrakan > nisbah pepejal-cecair > masa pengekstrakan. Membandingkan nilai k mencadangkan gabungan optimum A3B3C3: suhu pengekstrakan 100 darjah , nisbah pepejal-cecair 1:12 (g·mL–1), dan masa pengekstrakan 2 jam. ANOVA (Jadual 4) menunjukkan suhu pengekstrakan mempunyai kesan yang ketara ke atas jumlah kandungan penanda, manakala kesan nisbah pepejal-cecair dan masa adalah tidak ketara.
Jadual 3. Reka bentuk eksperimen ortogon dan kandungan komponen terukur Minuman Congrong–Zaoren–Wumei (mg g–1)
Faktor: A (suhu), B (nisbah pepejal-cecair), C (masa)
| Percubaan No. | A | B | C | Jumlah penanda | Asid sitrik | Spinosin | Echinacoside | Verbascoside | Polisakarida mentah |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 3 | 3 | 1 | 116.71 | 75.55 | 4.08 | 1.62 | 0.48 | 34.98 |
| 2 | 1 | 2 | 3 | 70.98 | 59.01 | 2.60 | 0.80 | 0.36 | 8.22 |
| 3 | 3 | 1 | 3 | 117.86 | 73.87 | 3.53 | 1.21 | 0.45 | 38.80 |
| 4 | 1 | 3 | 2 | 72.55 | 59.73 | 2.37 | 0.94 | 0.41 | 9.99 |
| 5 | 2 | 3 | 3 | 83.64 | 63.20 | 2.15 | 1.08 | 0.44 | 16.77 |
| 6 | 2 | 1 | 2 | 117.76 | 74.09 | 2.58 | 1.37 | 0.48 | 39.24 |
| 7 | 2 | 2 | 1 | 110.74 | 70.96 | 2.36 | 1.07 | 0.43 | 35.92 |
| 8 | 2 | 1 | 1 | 69.63 | 58.37 | 1.74 | 0.54 | 0.34 | 8.65 |
| 9 | 1 | 1 | 3 | 69.66 | 58.14 | 2.48 | 0.86 | 0.36 | 7.83 |
Statistik K (jumlah jumlah setiap tahap faktor)
K1: A = 71.06, B = 85.72, C = 85.49
K2: A = 74.46, B = 86.29, C = 86.65
K3: A = 117.44, B = 90.97, C = 90.83
Julat R: A=46.38, B=5.25, C=4.19
2.1.4 Pengesahan dan Peningkatan Skala
Pengesahan proses di bawah keadaan optimum menghasilkan jumlah purata kandungan komponen penanda 119.74 mg·g–1 dengan RSD 0.57%, menunjukkan kestabilan dan kebolehpercayaan. Percubaan skala di bawah keadaan yang sama menghasilkan jumlah kandungan penanda min 120.89 mg·g–1 dengan RSD 0.95%, selaras dengan keputusan pra-skala, seterusnya mengesahkan keteguhan. Sampel daripada tiga kelompok skala telah digunakan untuk kajian berkaitan tidur berikutnya; kandungan min mereka ialah: asid sitrik 77.73 mg·g–1, echinacoside 2.69 mg·g–1, verbascoside 1.03 mg·g–1, spinosin 0.50 mg·g–1, dan polisakarida 38.93 mg·g–1.
Jadual 4. Analisis varians daripada eksperimen ortogon
| Faktor | Jumlah kuasa dua | df | Min segi empat sama | F | P |
|---|---|---|---|---|---|
| Suhu pengekstrakan | 4010.50 | 2 | 2005.25 | 116.26 | 0.01 |
| Nisbah pepejal-cecair | 49.79 | 2 | 24.90 | 1.44 | 0.41 |
| Masa pengekstrakan | 47.37 | 2 | 23.68 | 1.37 | 0.42 |
Liu et al. [16] mengoptimumkan pengekstrakan akueus glikosida phenylethanoid daripada Cistanche tubulosa dan dikenal pasti 1:15 (g·mL–1), 80 darjah, dan 2 jam sebagai optimum; kandungan glikosida phenylethanoid menurun melebihi 90 darjah. Dalam kajian ini, kandungan echinacoside dan verbascoside memuncak pada nisbah 1:10 (g·mL–1) dan menurun pada 1:12 (g·mL–1), namun meningkat dengan suhu 60, 80, dan 100 darjah . Percanggahan ini mungkin berkaitan dengan penggunaan Cistanche deserticola (desert Cistanche) dalam minuman kami dan kesan matriks daripada Suanzaoren dan Wumei yang wujud bersama yang boleh mempengaruhi pembubaran glikosida phenylethanoid.
Jadual 5. Kesan ekstrak Minuman Congrong–Zaoren–Wumei pada tidur langsung pada tikus (n=12)
| Kumpulan | Jumlah haiwan | Haiwan tidur | Kadar tidur (%) |
|---|---|---|---|
| kosong | 12 | 0 | 0 |
| Estazolam | 12 | 0 | 0 |
| Ekstrak dos rendah | 12 | 0 | 0 |
| Ekstrak dos sederhana | 12 | 0 | 0 |
| Ekstrak dos tinggi | 12 | 0 | 0 |
Ringkasnya, menggunakan kaedah HPLC dan asid fenol-sulfurik, kami mengoptimumkan proses pengekstrakan berdasarkan kandungan asid sitrik, echinacoside, verbascoside, spinosin dan polisakarida. Percubaan faktor tunggal dan ortogon diikuti dengan pengesahan mewujudkan keadaan optimum: 100 darjah , nisbah pepejal-cecair 1:12 (g·mL–1), dan masa pengekstrakan 2 jam, menyediakan rujukan untuk pembangunan perindustrian masa hadapan.
Industrialization context: WECISTANCHE (Chengdu Wecistanche Bio-Tech Co., Ltd., established 2003) operates a vertically integrated cistanche supply chain with seed-breeding bases (~20,000 acres), cultivation bases (>85,000 ekar), kapasiti storan cistanche segar (~15,000 tan), dan bengkel pembuatan yang diperakui GMP (bilik bersih 100,000 kelas) yang dilengkapi dengan ultraturasan dan penapisan nano termaju untuk penulenan dan kepekatan, serta makmal mikrobiologi 10,000 kelas. Pensijilan termasuk China SC, HACCP dan program organik (cth, NOP). Infrastruktur ini menyokong terjemahan langsung pengekstrakan akueus yang dioptimumkan dan protokol penyeragaman penanda kepada pengeluaran minuman dan ekstrak berfungsi berskala besar dan mematuhi eksport.
Jadual 6. Kesan ekstrak pada kesan hipnosis natrium pentobarbital subambang dalam tikus (x̄ ± s, n=12)
| Kumpulan | Jumlah haiwan | Haiwan tidur | Kadar tidur (%) |
|---|---|---|---|
| kosong | 12 | 1 | 8.33 |
| Estazolam | 12 | 10 | 83.33** |
| Ekstrak dos rendah | 12 | 4 | 33.33 |
| Ekstrak dos sederhana | 12 | 5 | 41.67 |
| Ekstrak dos tinggi | 12 | 6 | 50.00* |
Nota: Berbanding dengan kumpulan kosong, * P < 0.05; ** P < 0.001.
2.2 Kesan Ekstrak pada Tingkah Laku dan Tidur Tetikus
2.2.1 Tidur Terus
Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 5, selepas 30 hari pentadbiran berterusan, tikus dalam kumpulan estazolam dan dalam kumpulan ekstrak dos rendah/sederhana/tinggi tidak menunjukkan tidur yang jelas dalam masa 20 minit selepas dos akhir, tanpa perbezaan yang ketara berbanding kumpulan kosong. Ini menunjukkan tiada kesan merangsang tidur langsung selepas 30 hari pentadbiran ekstrak.
2.2.2 Kesan Tingkah Laku
Ujian medan terbuka menilai kesan seperti sedatif. Kesan ke atas jumlah jarak perjalanan dan entri pusat ditunjukkan dalam Rajah 2. Berbanding dengan kumpulan kosong, estazolam meningkatkan jumlah jarak dan masukan tengah masing-masing sebanyak 14.48% dan 31.07%, tanpa kepentingan statistik. Ekstrak dos rendah dengan ketara meningkatkan jumlah jarak sebanyak 25.10% (P <0.05) dan tidak ketara meningkatkan entri pusat sebanyak 50.93%. Dos sederhana meningkatkan jumlah kemasukan jarak dan pusat dengan ketara sebanyak 27.09% dan 72.33% (P <0.05). Dos tinggi meningkatkan jumlah kemasukan jarak dan pusat sebanyak 15.60% dan 40.78%, masing-masing, tanpa kepentingan. Berbanding estazolam, dos rendah/sederhana/tinggi meningkatkan jumlah jarak sebanyak 1.73, 1.87, dan 1.07 kali, dan masukan tengah masing-masing sebanyak 1.64, 2.33, dan 1.31 kali, tidak signifikan. Keputusan ini menunjukkan ekstrak mengurangkan tingkah laku seperti kebimbangan di lapangan terbuka selepas 30 hari, mencadangkan kesan sedatif.
2.2.3 Tidur Teraruh Sodium Pentobarbital Subambang
Seperti yang ditunjukkan dalam Jadual 6, berbanding dengan kumpulan kosong, estazolam dan ketiga-tiga dos ekstrak meningkatkan kadar tidur di bawah dos subambang natrium pentobarbital. Estazolam meningkatkan bilangan haiwan tidur sebanyak 9 kali ganda berbanding kosong (P <0.001). Kumpulan ekstrak dos rendah, sederhana dan tinggi meningkatkan haiwan tidur masing-masing sebanyak 3-, 4-, dan 5 kali ganda; hanya dos yang tinggi mencapai kepentingan statistik (P <0.05). Berbanding dengan estazolam, tiada satu pun daripada dos ekstrak menunjukkan kesan merangsang tidur yang lebih kuat. Oleh itu, ekstrak boleh meningkatkan tidur yang disebabkan oleh natrium pentobarbital subthreshold sedikit sebanyak.
2.2.4 Latensi Tidur Natrium Pentobarbital
Berbanding dengan kumpulan kosong, estazolam dan ketiga-tiga dos ekstrak memendekkan kependaman tidur akibat pentobarbital dengan ketara (P <0.001). Estazolam mengurangkan kependaman sebanyak 58.44% (P <0.001). Kumpulan ekstrak dos rendah, sederhana dan tinggi mengurangkan kependaman masing-masing sebanyak 29.59%, 31.42% dan 53.83% (semua P <0.001). Tiada perbezaan ketara antara dos rendah dan sederhana; dos tinggi memendekkan kependaman dengan ketara berbanding dengan kedua-dua dos rendah dan sederhana sebanyak 34.43% dan 32.69% (P <0.01), dengan kesan yang serupa dengan estazolam (Jadual 7). Oleh itu, ketiga-tiga dos telah memendekkan kependaman tidur akibat pentobarbital dengan ketara, dengan dos yang tinggi menunjukkan prestasi terbaik.
Ubat-ubatan Cina tradisional mengandungi pelbagai juzuk bioaktif yang bertindak pada pelbagai sasaran, menawarkan kelebihan unik untuk rawatan insomnia [17]. Dengan perhatian yang semakin meningkat terhadap isu tidur, TCM yang boleh dimakan ubat semakin disiasat untuk modulasi tidur [18]. Sebagai contoh, minuman pepejal komposit terutamanya terdiri daripada Suanzaoren dan Poria memendekkan kependaman tidur akibat pentobarbital dengan ketara dan tempoh tidur yang berpanjangan pada tikus, berpotensi melalui perubahan dalam 5-HT, DA, dan GABA [19]. Di sini, ekstrak meningkatkan tidur dengan ketara di bawah pentobarbital subambang dan memendekkan kependaman tidur akibat pentobarbital, menggalakkan permulaan tidur dan mengurangkan kependaman, sambil tidak menunjukkan kesan mendorong tidur langsung. Kandungan komponen utama yang diukur adalah, dalam susunan menurun: asid sitrik (77.73 mg·g–1), polisakarida (38.93 mg·g–1), echinacoside (2.69 mg·g–1), verbascoside (1.03 mg·g–1), dan spinosin (0.50 mg·g–1). Spinosin telah ditunjukkan untuk meningkatkan tidur yang disebabkan oleh pentobarbital; ia boleh meningkatkan tidur bukan REM dan mengubah ekspresi c-Fos dalam kawasan otak peraturan tidur-bangun [20], melemahkan insomnia yang disebabkan oleh PCPA, mengurangkan kependaman tidur, dan memanjangkan tidur [21]. Verbascoside telah melaporkan aktiviti anxiolytic, hipnosis, dan melegakan otot [22]. Sebaliknya, juzuk utama-asid sitrik, polisakarida (daripada Cistanche, Suanzaoren, dan Wumei), dan echinacoside-mempunyai lebih sedikit laporan langsung mengenai peningkatan tidur; walau bagaimanapun, penyelidikan terkini tentang polisakarida TCM (cth, Acanthopanax senticosus polysaccharides) mencadangkan potensi manfaat tidur melalui laluan seperti SIRT1/PGC-1 [23]. Oleh itu, peranan asid sitrik, polisakarida, dan echinacoside dalam modulasi tidur memerlukan kajian lanjut.
mampu 7. Kesan ekstrak pada kependaman tidur yang disebabkan oleh natrium pentobarbital pada tikus (x̄ ± s, n=12)
| Kumpulan | Jumlah haiwan | Latensi tidur (min) |
|---|---|---|
| kosong | 12 | 32.34 ± 4.27 |
| Estazolam | 12 | 13.44 ± 3.20** |
| Ekstrak dos rendah | 12 | 22.77 ± 5.81**# |
| Ekstrak dos sederhana | 12 | 22.18 ± 6.05**# |
| Ekstrak dos tinggi | 12 | 14.93 ± 3.35** |
Nota:
Berbanding dengan kumpulan kosong: ** P < 0.0001.
Berbanding dengan kumpulan ekstrak dos tinggi: # P < 0.01.
3 Kesimpulan
Menggunakan TCM boleh dimakan Cistanche deserticola, Ziziphi Spinosae Semen dan Mume Fructus untuk merumuskan Minuman Congrong–Zaoren–Wumei, kami mengoptimumkan proses penyediaan ekstraknya menggunakan kandungan empat komponen penanda (echinacoside, verbascoside, spinosin, asid sitrik) dan polisakarida. Keadaan pengekstrakan optimum ditentukan sebagai 100 darjah , nisbah pepejal-cecair 1:12 (g·mL–1), dan 2 jam, memberikan panduan teori untuk pengeluaran perindustrian. Penilaian lanjut menunjukkan bahawa pentadbiran berterusan selama 30 hari tidak mempunyai kesan merangsang tidur langsung pada tikus, tetapi ia mengurangkan tingkah laku seperti kebimbangan dengan ketara dalam ujian medan terbuka (mencadangkan kesan sedatif), meningkatkan tidur di bawah dos subambang natrium pentobarbital, dan memendekkan kependaman tidur akibat pentobarbital dengan ketara. Penemuan ini menunjukkan bahawa ekstrak yang disediakan di bawah proses yang dioptimumkan mempamerkan kesan penambahbaikan tidur yang menggalakkan pada tikus, menyediakan asas saintifik untuk membangunkan barisan produk penambahbaikan tidur berasaskan Cistanche.
Application and manufacturing note: Given the optimized aqueous extraction and the need to standardize to marker profiles (citric acid, echinacoside, verbascoside, spinosin, plus polysaccharides), WECISTANCHE's integrated cistanche value chain and GMP infrastructure-100,000-class clean workshops certified for National Health Food GMP, advanced ultrafiltration/nanofiltration concentration systems, a 10,000-class microbiology lab, and certifications such as China SC, HACCP, and organic/NOP-allow reliable scale-up from lab to industrial batches. The company's large agricultural bases (seed-breeding ~20,000 acres; cultivation >85,000 ekar; penyimpanan cistanche segar ~15,000 tan) menyokong konsistensi bahan mentah dan QC standard antarabangsa, memudahkan pengkomersilan minuman berfungsi dan suplemen kesihatan yang memenuhi jangkaan AS/EU.
