Perbandingan Perbezaan Kandungan Lapan Komponen Kimia dalam Produk Mentah Dan Diproses Wain Dua Jenis Cistanche Deserticola Berdasarkan UPLC Ⅱ

2. Kaedah dan Keputusan

2.1 Keadaan Kromatografi

Analisis UPLC dilakukan menggunakan aLajur Waters ACQUITY UPLC™ BEH C18 (100 mm × 2.1 mm, saiz zarah 1.7 μm). Fasa bergerak terdiri daripadametanol (A)dan0.1% larutan akueus asid format (B)dengan elusi kecerunan berikut:

0–4 min: 10% → 26% A

4–18 min: 26% → 40% A

18–20 min: 40% → 50% A

Kadar aliran:0.3 mL/min
Jumlah suntikan:3 μL
Suhu lajur:35°C
Panjang gelombang pengesanan:330 nm

2.2 Penyediaan Penyelesaian

2.2.1 Penyelesaian Rujukan Campuran

Timbang dengan tepat sebatian piawai berikut:cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A, isoverbascoside, 2'-acetylverbascoside, dantubuloside B. Larutkan dalam 50% metanol untuk menyediakan campuran rujukan dengan kepekatan berikut (µg·mL⁻¹):

Cistanoside F: 32.7

Echinacoside: 102.4

Cistanoside A: 50.2

Verbascoside: 80.6

Tubuloside A: 25.6

Isoverbascoside: 86.3

2'-Acetylverbascoside: 77.3

Tubuloside B: 60.8

2.2.2 Contoh Penyelesaian

Hirisan Cistanche mentahtelah disediakan dengan melembutkan herba, menghiris, dan mengeringkan.
Cistanche kukus waintelah disediakan dengan merendam kepingan mentah dalam wain beras 30%, mengukus campuran selama 12 jam, menyejukkan, dan mengeringkan semula.

lebih kurang0.2 gserbuk kering (dilalui ayak 65-mesh) ditimbang ke dalam kelalang volumetrik ambar 50 mL, diekstrak dengan 25 mL metanol 50%, disonikasi selama 40 minit (250 W, 35 kHz), dan dibawa semula ke berat. Larutan itu ditapis melalui amembran 0.22 μm, dan turasan digunakan untuk analisis.

Nota: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola hirisan mentah; RG. hirisan mentah cistanche tubulosa; WH. Cistanche deserticola direbus dengan wain; WG. Cistanche tubulosa direbus dengan wain; Rajah 4 hingga 7 adalah sama.
Rajah 1 Gambar bahan ubatan Cistanche deserticola dan Cistanche tubulosa, hirisan mentah dan rebus dengan wain

wain cistanche terkenal yang dijual di China

Beli Sekarang

Perkhidmatan Sokongan Wecistanche-The Hubungi Kami Untuk Mendapatkan Sampel Atau Butiran Borong
E-mel:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

2.3 Analisis Kuantitatif 8 Sebatian Utama dalam Cistanche Mentah dan Diproses Wain

2.3.1 Kesesuaian Sistem

Di bawah keadaan kromatografi yang diterangkan, nombor plat teori untukechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1.5). Kromatogram bagi standard campuran, Cistanche padang pasir mentah dan sampel yang diproses wain ditunjukkan dalam Rajah 2.

Pengenalan Puncak:

Cistanoside F

Echinacoside

Cistanoside A

Verbascoside

Tubuloside A

Isoverbascoside

2'-Acetylverbascoside

Tubuloside B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Had Lineariti dan Pengesanan

Keluk penentukuran piawai telah diwujudkan menggunakan pencairan bersiri campuran rujukan pada kepekatan 0.1 hingga 5.0 mL. Keluk penentukuran dijana dengan memplotkepekatan (X)berbandingkawasan puncak (Y). Had pengesanan (LOD, S/N=3) dan had kuantifikasi (LOQ, S/N=10) telah ditentukan dan disahkan kelinearan yang baik merentas julat yang diuji.

2.3.3 Ketepatan

Enam replika suntikan larutan rujukan campuran menunjukkansisihan piawai relatif (RSD)kawasan puncak bermula dari0.48% hingga 2.14%, menunjukkan ketepatan instrumen yang sangat baik.

2.3.4 Kestabilan

Contoh penyelesaian daripadaserbuk Cistanche mentah (No Kumpulan. 160901)dianalisis pada 0, 2, 4, 8, 12, dan 24 jam. RSD kawasan puncak untuk kesemua 8 sebatian adalah berjulat dari0.71% hingga 1.93%, mengesahkankestabilan penyelesaian dalam masa 24 jam.

Jadual 1. Maklumat Contoh Bahan Cistanche

2.3.5 Kebolehulangan

Enam replika yang disediakan secara bebas bagi kumpulan Cistanche yang sama menunjukkan kebolehulangan yang baik. Purata kandungan (mg·g⁻¹) dan RSD adalah seperti berikut:

2.3.6 Ujian Pemulihan

Pemulihan telah diuji dengan spikingenam ulangan serbuk Cistanche (0.1 g)dengan kepekatan yang diketahui bagi 8 sebatian rujukan. Purata pemulihan adalah dari95.56% hingga 102.71%, dengan RSD antara1.44% dan 2.97%, menunjukkankebolehpercayaan pengekstrakan dan kuantifikasi yang sangat baik.

Nota: A. Rujukan campuran; B. Cistanche deserticola mentah; C. Cistanche deserticola rebus dalam wain; 1. Cistancheside F; 2. Echinacoside; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubuloside A; 6. Isoverbascoside; 7. 2΄-acetylverbascoside; 8. Tubuloside B.

2.3.7 Kuantifikasi Sebatian Aktif dalam Cistanche Mentah vs. Wain Diproses

Setiap sampel telah diuji dalam pendua. 8 sebatian sasaran dikira dalam10 kelompok Cistanche deserticola(mentah dan diproses wain) dan10 kelompok Cistanche tubulosa. Keputusan diringkaskan dalam Jadual 3, menawarkan pandangan tentang:

Perbezaan spesifik spesies dalam komposisi

Perubahan dalam kandungan fitokimia selepas pemprosesan wain

Cap jari analitikal untuk kawalan kualiti Cistanche

Jadual 2. Lengkung Kalibrasi, Pekali Korelasi (r), Julat Linear, LOD dan LOQ untuk Lapan Sebatian

2.4 Analisis Perbandingan Komposisi Kimia Antara Spesies Cistanche

Untuk menyiasatperbezaan fitokimiaantaraCistanche deserticoladanCistanche tubulosa, kepekatan lapan kunciglikosida fenilethanoiddaripada10 kelompok sampel mentah dan diproses wainsetiap spesies telah divisualisasikan menggunakanplot kotak (Rajah 3). Analisis statistik mendedahkan bahawa, kecuali untuk2'-acetylverbascosidedantubuloside B, kebanyakan sebatian lain menunjukkanperbezaan ketara (P < 0.05)antara kedua-dua spesies dalam kedua-dua bentuk mentah dan diproses.

Secara khusus:

DalamCistanche mentah, kandungancistanoside F, echinacoside, isoverbascoside, tubuloside A, dan verbascosideadalahjauh lebih rendahdalamC. deserticolaberbanding denganC. tubulosa(P <0.05).

Thesampel yang diproses wainmencerminkan trend yang serupa.

Terutamanya,cistanoside Aditemui ditahap yang lebih tinggi dalamC. deserticoladan adalahtidak dapat dikesandalamC. tubulosa, mencadangkan ia boleh berfungsi sebagai asebatian penanda berpotensiuntuk pembezaan spesies.

Analisis Kemometrik PLS-DA Spesies Cistanche

A Analisis Diskriminasi Separa Kuasa Dua Terkecil (PLS-DA)dilakukan menggunakan data kepekatan lapan sebatian. Yang terhasilplot skor (Rajah 4A)menunjukkan bahawa sampel mentah dan diproses daripada kedua-dua spesies itutidak berkelompok ke dalam kumpulan yang dipisahkan dengan jelas.

Walau bagaimanapun,ujian pilih atur rawak (Rajah 4B)mendedahkan bahawa model itutidak terlalu dipasang, sebagai nilai sebenarR²Y dan Q²adalah lebih tinggi daripada model yang diubah suai. Secara relatifnyanilai Q² yang rendahcadangkankebolehramalan terhad, berkemungkinan disebabkan olehkebolehubahan dalam kumpulandanjulat kompaun bertindihantara bentuk mentah dan diproses.

Pemodelan PLS-DA lanjut dan Analisis VIP

Model PLS-DA yang berasingan telah dibina untuk sampel mentah dan wain yang diproses bagi kedua-dua spesies untuk diterokaiperbezaan kimia spesifik spesies. Perkara berikut diperhatikan:

Plot skor (Rajah 5A dan 5C)menunjukkanpengelompokan yang berbezaantaraC. deserticoladanC. tubulosadalam kedua-dua bentuk mentah dan diproses.

Pengesahan model (Rajah 5B dan 5D)mengesahkan kuasa ramalan yang baik tanpa overfitting.

Kepentingan Pembolehubah dalam plot Unjuran (VIP) (Rajah 6A dan 6B)mengenal pasti sebatian utama yang menyumbang kepada diskriminasi spesies:

Untuksampel mentah: Cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, danverbascosideadalah paling bermaklumat.

Untuksampel yang diproses wain: Cistanoside Adantubuloside Bmemainkan peranan dominan.

2.5 Kesan Pemprosesan Wain terhadap Fitokimia Cistanche

Disebabkan oleh variasi yang besar dalam kandungan kompaun merentas kelompok,perbandingan berpasangantelah dibuat antara sampel mentah dan wain yang diprosesbatch yang sama. Hasilnya, divisualisasikan menggunakanplot biola (Rajah 7), mendedahkan perkara berikut:

DalamC. deserticola, peringkat2'-acetylverbascoside, cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, tubuloside A, dan verbascoside menurun dengan ketarapasca pemprosesan (P < 0.05), manakalatubuloside B meningkat.

DalamC. tubulosa, peringkat2'-acetylverbascoside, echinacoside, dan verbascosidejugamenurun, manakalaisoverbascoside dan tubuloside B meningkatketara (P <0.05).

Penemuan ini mencadangkan pemprosesan wain boleh menyebabkanhidrolisis, pengisomeran, atautransformasi kimiadaripada bahan aktif.

3. Perbincangan

MenurutFarmakope Cina edisi 2020, Cistanche deserticolamesti mengandungi tidak kurang daripada0.3%daripada gabungan kandunganechinacoside dan verbascoside, sedangkanCistanche tubulosamesti mengandungi tidak kurang daripada1.5%daripada dua sebatian ini. Dalam kajian ini, semua sampel mentah dan diproses-kecuali satu kelompok (180710)-memenuhi piawaian ini.

Walaupunkebolehubahan batch-to-batchdalam setiap spesies (beberapa sebatian berbeza sehingga 10 kali ganda, seperti tubuloside A dan isoverbascoside), perbezaan ketara secara statistik dalam kandungan sebatian diperhatikan secara konsisten antara kedua-dua spesies. Ini mengesahkan bahawaasal spesies adalah faktor utamamempengaruhi komposisi fitokimia.

Selain itu,cistanoside Aadalahhanya dikesan masukC. deserticoladan tidak hadirC. tubulosa, menjadikannya apenanda berharga untuk pengesahan spesies, terutamanya dalam tetapan farmakognostik atau kawalan kualiti.

🔬 Kesan Pemprosesan Wain terhadap Komposisi Kimia

Selepas pemprosesan wain, kedua-dua spesies menunjukkan trend yang konsisten:

Tahap menurundaripada:
Cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubuloside A, dan 2'-acetylverbascoside

Peningkatan tahapdaripada:
Tubuloside B dan isoverbascoside

Trend ini mungkin terhasil daripadahidrolisis kimia, kemerosotan, ataupenyusunan semula struktursemasa proses mengukus. Menariknya,magnitud dan arah perubahan berbeza-beza merentas kelompok, berkemungkinan disebabkan oleh perbezaan dalam:

Kepekatan kompaun awal

Morfologi herba (saiz, ketebalan)

Kepekaan terhadap keadaan pemprosesan

Ini menyerlahkan kepentinganmenyeragamkan parameter pemprosesandan menjalankanpenilaian kualiti khusus kelompoksemasa penyediaan herba.